NeuMoDx HBV Quant Test Strip BRUKSANVISNING

REF 201300 Rx only VAR FÖRSIKTIG! Inte tillgänglig för kommersiell försäljning i USA För in vitro-diagnostisk användning med NeuMoDx 288 och NeuMoDx 96 Molecular Systems Se operatörshandboken till NeuMoDx 288 Molecular System för utförliga anvisningar, art.nr 40600108 Se operatörshandboken till NeuMoDx 96 Molecular System för utförliga anvisningar, art.nr 40600317 AVSEDD ANVÄNDNING NeuMoDx HBV Quant Assay är en automatisk metod för nukleinsyreamplifiering in vitro för kvantifiering av Hepatit B-virus (HBV) DNA från humana plasmaprover. NeuMoDx HBV Quant Assay som tillämpats för NeuMoDx 288 Molecular System och NeuMoDx 96 Molecular System (NeuMoDx System(s)) innebär automatisk DNA-extraktion för att isolera målnukleinsyran från provet samt en polymeraskedjereaktion (Polymerase Chain Reaction, PCR) i realtid som riktar in sig på de i hög grad bevarade områdena som kodar för X-protein och pre-c-protein i genomet för hepatit B-virus. NeuMoDx HBV Quant Assay är avsett att användas som hjälpmedel för att hitta en lämplig behandling för patienter med HBV-infektion. NeuMoDx HBV Quant Assay ska användas tillsammans med andra kliniska fynd och laboratoriefynd för att vägleda behandlingen. Den ska inte användas ensam vid diagnos eller blodscreening. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING Humant helblod samlas in i sterila blodprovtagningsrör innehållandes antingen Etylendiamintetraättiksyra (Ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA) eller syracitratdextros (acid citrate dextrose, ACD) som antikoagulant för förberedande av plasma. När testet förbereds laddas plasma i ett provrör kompatibelt med NeuMoDx System i NeuMoDx System i därför avsedda provbärare för körningen. För varje prov blandas en 550 µlalikvot av plasmaprovet med NeuMoDx Lysis Buffer 1 och NeuMoDx System utför automatiskt alla steg som krävs för extraktion av målnukleinsyran, preparering av den isolerade DNA:n för realtids-pcr-amplifiering och, i förekommande fall, amplifiering och detektering av amplifieringsprodukterna. (sektioner av HBV-genommålet i den höggradigt bevarade regionen som kodar för X-proteinet och pre C-proteinet). NeuMoDx HBV Quant Assay inkluderar en DNA-provprocesskontroll (Sample Process Control 1, SPC1) för att underlätta övervaka närvaron av potentiellt hämmande substanser samt NeuMoDx System- eller reagensfel som kan påträffas under extraktions- och amplifieringsprocesserna. Hepatit B-virus (HBV) är orsaken till hepatit B-leverinfektion som är ett globalt hälsoproblem. Hepatit B kan orsaka akut hepatit eller också utvecklas till ett kroniskt tillstånd som leder till cirrhos eller levercancer. Risken för att ett kroniskt tillstånd utvecklas är huvudsakligen åldersberoende. Om viruset överförs vid födseln är risken för utveckling av ett kroniskt tillstånd över 90 %, medan vuxna som infekteras löper en risk på 2 6 % att ett kroniskt tillstånd utvecklas 1. HBV överförs antingen vid blodsmitta från en infekterad person, vid sexuellt umgänge, vid delning av sprutor med infekterade personer som injicerar droger eller vertikalt från mor till barn under förlossningen. I USA lever ca 850 000 personer med HBV-infektion. Majoriteten av dem är nya infektioner som överförts genom sexuellt umgänge eller injicering av droger 2. I Afrika och västra Stillahavsområdet är upp till 5 % av befolkningen kända smittbärare. 2015 dog 885 000 i hela världen till följd av HBV-infektion, vanligen från cirrhos eller hepatocellulär cancer 4. Det finns ett vaccin som förebygger HBV-infektioner med 95 % och leder till ett minskat antal diagnostiserade fall varje år 3. Nuvarande standardbehandling av HBV-infektion är antivirusbehandling, som kräver ständig övervakning för att se till att behandlingen går som planerat. Övervakning av behandlingen med NeuMoDx HBV Quant Assay kan ge läkarna information som behövs för att förbättra vården av HBVinfekterade patienter. PRINCIPER FÖR RUTINEN NeuMoDx HBV Quant Assay kombinerar automatisk DNA-extraktion, amplifiering och detektering med realtids-pcr. Helblodsprover samlas in i EDTA- eller ACD-provrör för preparering av plasma. Plasmaprovet i ett NeuMoDx System-kompatibelt provrör läggs i en provrörs-carrier som sedan laddas i NeuMoDx System för bearbetning. Inga andra användaråtgärder behövs. NeuMoDx System använder en kombination av värme, lytiskt enzym och extraktionsreagenser för automatisk cellysering, DNA-extraktion och avlägsnande av hämmare. De frigjorda nukleinsyrorna fångas upp av magnetiska affinitetsmikrosfärer. Mikrosfärerna med de bundna nukleinsyrorna, laddas i NeuMoDx Cartridge där obundna, icke-dna-komponenter tvättas bort ytterligare med NeuMoDx Wash Reagent och den bundna DNA elueras med hjälp av NeuMoDx Release Reagent. NeuMoDx System använder sedan den eluerade DNA:n för att rehydrera patenterad NeuDry amplifieringsreagenser som innehåller alla komponenter som behövs för amplifiering av de HBV- och SPC1-specifika målen. Efter rekonstituering av de NeuDry PCR-reagenserna dispenserar NeuMoDx System den beredda PCR-klara blandningen i en NeuMoDx Cartridge. Amplifiering och detektion av kontroll- och mål-dna-sekvenser (i förekommande fall) i PCR-kammaren i NeuMoDx Cartridge. NeuMoDx Cartridge är konstruerad för att rymma amplikon efter realtids-pcr och eliminerar risken för kontaminering efter amplifiering. Sida 1 av 18

Fluoroforen Forward PCR-primer Polymerisering Fluorescens PCR-produkter TaqManprob Bild 1. TaqMan -kemikaliens verkningssätt Quencher Reverse PCR-primer Amplifieringsanalys Resultat Förflyttning av prob och klyvning Fluorescens Klyvningsprodukter De amplifierade målen detekteras i realtid med hjälp av hydrolysprobkemi (kallas allmänt för TaqMan -kemi) med hjälp av fluorogen oligonukleotid-probmolekyler som är specifika för amplikon för respektive mål. TaqMan-prober består av en fluoroforen som är kovalent bunden till 5 -änden av oligonukleotidproben och en quencher vid 3 -änden (Bild 1). När proben är intakt är fluoroforenen och quenchern nära varandra, vilket leder till att quenchermolekylen binder den fluorescens som fluoroforenen emitterar via FRET (Förster resonansenergiöverföring). TaqMan-prober är konstruerade så att de hybridiseras inom en DNA-region som är amplifierad av en viss uppsättning primrar. Allteftersom Taq-polymeraset förlänger primern och syntetiserar den nya strängen så degraderar 5' till 3' exonukleas aktiviteten för Taq DNApolymeraset proben som har fäst till mallen. Försämring av proben frigör fluoroforenen från den och bryter den nära bindningen till quenchern och övervinner dämpningseffekten genom FRET och gör det möjligt att detektera fluoroforenens fluorescens. Den resulterande fluorescenssignalen som detekteras under de kvantitativa PCR- termocyklerna i NeuMoDx System är direkt proportionerlig med frigjord fluoroforen och kan korreleras med mängden mål-dna i PCR. En TaqMan -prob märkt med fluoroforen (excitering: 490 nm och emission: 521 nm) vid 5 änden och en mörk quencher vid 3 änden används för detektion av HBV DNA. För detektion av SPC1 är TaqMan -proben märkt med alternativ fluorescent färg (excitering: 535 nm och emission: 556 nm) vid 5 änden och en mörk quencher vid 3 änden. NeuMoDx Systemprogramvaran övervakar den fluorescenta signal som TaqMan-proberna emitterar i slutet av varje amplifieringscykel. Efter avslutad amplifiering analyserar NeuMoDx Systemprogramvaran data och rapporterar ett slutgiltigt resultat (POSITIVE (Positivt) /NEGATIVE (Negativt)/ INDETERMINATE (Obestämt) / UNRESOLVED (Olöst)). Om ett resultat är POSITIVE (positivt) genererar NeuMoDx System-programvaran också ett kvantitativt värde för provet eller rapporterar om den beräknade koncentrationen är inom kvantifieringsgränserna. REAGENSER/FÖRBRUKNINGSVAROR Material som medföljer REF 201300 Innehåll Torkad PCR-reagenser med HBV-specifik TaqMan -prob och -primrar samt SPC1-specifik TaqMan -prob och -primrar. Tester per enhet Tester per förpackning 16 96 NeuMoDx -reagenser och förbrukningsartiklar som behövs men som inte medföljer REF 100200 800100 900101 Innehåll NeuMoDx Extraction Plate Torkade magnetiska affinitetsmikrosfärer, lytiska enzymer och provprocesskontroller NeuMoDx HBV Calibrators HBV High Calibrator och Low Calibrator för engångsbruk, för fastställning av kalibreringskurvans giltighet NeuMoDx HBV External Controls Positiva och negativa kontroller för engångsbruk, för daglig fastställning av validiteten hos NeuMoDx HBV Quant Assay 400400 NeuMoDx Lysis Buffer 1 400100 NeuMoDx Wash Reagent 400200 NeuMoDx Release Reagent 100100 NeuMoDx Cartridge 235903 Hamilton CO-RE spetsar (300 µl) med filter (tillgängliga från NeuMoDx eller Hamilton) 235905 Hamilton CO-RE spetsar (1 000 µl) med filter (tillgängliga från NeuMoDx eller Hamilton) Sida 2 av 18

Annan utrustning och material som krävs men som inte medföljer NeuMoDx 288 Molecular System [REF 500100] eller NeuMoDx 96 Molecular System [REF 500200] VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER NeuMoDx HBV Quant Test Strip är enbart avsedd för in vitro-diagnostisk användning tillsammans med NeuMoDx System. Använd inte reagenser eller förbrukningsartiklar efter det angivna utgångsdatumet. Använd inte reagenser om förseglingen är bruten eller om förpackningen är skadad vid leverans. Använd inte förbrukningsartiklar eller reagenser om skyddspåsen är öppen eller trasig vid leverans. En giltig testkalibrering (skapas genom bearbetning av höga och låga kalibratorer i NeuMoDx HBV Calibrators) måste finnas tillgänglig innan testresultat kan genereras för kliniska prov. NeuMoDx HBV External Controls [REF 900101] måste bearbetas var 24:e timme. Den minsta provrörsvolymen är 1 ml EDTA-/ACD-plasma. Volymer under 1 ml kan leda till fel i NeuMoDx System. HBV-testning av prover som lagrats i fel temperatur eller längre tid än den föreskrivna kan leda till ogiltiga eller felaktiga resultat om NeuMoDx HBV Quant Test Strip används. Undvik kontaminering med mikrober eller deoxyribonukleas (DNase) av reagenserna eller förbrukningsartiklarna. Sterila DNase-fria överföringspipetter för engångsbruk rekommenderas. Använd en ny pipett för varje prov. Undvik kontaminering av patientprover eller laboratorier genom att aldrig hantera eller öppna NeuMoDx Cartridge när den automatiskt har kasserats i tunnan för biologiskt avfall av NeuMoDx System. Hämta under inga omständigheter NeuMoDx Cartridges ur behållaren för biologiskt avfall. NeuMoDx Cartridge är utformad för att förebygga kontaminering. Om PCR-tester med öppna provrör även utförs av laboratoriet ska åtgärder vidtas för att säkerställa att NeuMoDx HBV Quant Test Strip, ytterligare förbrukningsartiklar och reagenser som behövs för testning, personlig skyddsutrustning som handskar och labbrockar och NeuMoDx System inte är förorenade. Rena, puderfria nitrilhandskar ska bäras vid hantering av NeuMoDx-reagenser och förbrukningsartiklar. Provrör inte vid ovansidan av NeuMoDx Cartridge, folieförseglingen till NeuMoDx HBV Quant Test Strip, NeuMoDx Extraction Plate eller ovansidan av NeuMoDx Lysis Buffer 1; ta endast i sidorna när förbrukningsartiklar och reagenser hanteras. Säkerhetsdatablad (Safety Data Sheets, SDS) följer med varje reagens. Tvätta händerna noga när testet har utförts. Pipettera inte med munnen. Rök, drick eller ät inte i områden där prover eller reagenser hanteras. Hantera alltid prover som om de är infektiösa och i enlighet med säkra laboratorierutiner såsom de som beskrivs i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 och i CLSI-dokument M29-A3. 5 Avfallshantera oanvända reagenser och avfall i enlighet med nationella, federala, regionala och lokala föreskrifter. PRODUKTFÖRVARING, HANTERING OCH STABILITET Alla NeuMoDx-reagenser och förbrukningsartiklar (förutom externa kontroller och kalibratorer) är stabila i den primära förpackningen vid 18 till 28 C till och med det angivna utgångsdatumet på den omedelbara produktetiketten. En NeuMoDx HBV Quant Test Strip som laddats i NeuMoDx System är stabil i 62 dagar. NeuMoDx System-programvaran anmodar användaren att ta bort reagenser som varit i bruk i NeuMoDx System i mer än 62 dagar. Nya NeuMoDx HBV Quant Test Strips måste öppnas och laddas i NeuMoDx System. Kassera externa kontroller och kalibratorer för NeuMoDx när de har använts. INSAMLING, TRANSPORT OCH LAGRING AV PROV 1. Hantera alla prover, kalibratorer och kontrollerar som smittbärare. 2. Frys inte helblod eller prover som förvaras i primärrör. 3. Helblod ska samlas in i sterila provrör med EDTA eller ACD som antikoagulanter. Följ anvisningarna från tillverkaren av provtagningsrören. 4. Helblod som samlats in i behållare enligt ovan kan lagras och/eller transporteras i upp till 24 timmar vid 2 C till 25 C före plasmaberedningen. Plasmaberedningen ska utföras enligt tillverkarens anvisningar. 5. Preparerade plasmaprover ska förvaras vid 2 C till 8 C i högst 7 dagar innan de testas och högst 8 timmar i rumstemperatur. 6. Preparerade plasmaprover får förvaras vid < 20 C i upp till 6 månader före bearbetningen. Frysning/tining får utföras högst 2 gånger innan användningen. a. Om proverna är frusna: Låt dem tina helt till rumstemperatur (15 30 C), blanda i vortexblandare så att de blir homogena. b. När ett fruset prov väl har tinats ska det testas inom 8 timmar eller också förvaras i 2 8 C i högst 24 timmar. Sida 3 av 18

7. Om proverna ska skickas ska de förpackas och märkas i enlighet med gällande nationella och/eller internationella föreskrifter. 8. Märk proverna tydligt och ange att de är avsedda för HBV-testning. 9. Fortsätt till avsnittet Testförberedelser. Den övergripande processen för implementering av NeuMoDx HBV Quant Assay sammanfattas nedan i flödesdiagrammet [Bild 2]. ANVÄNDNING AV NEUMODX HBV QUANT ASSAY Ladda förbrukningsartiklar om NeuMoDxprogramvaran uppmanar till det Ladda testspecifika reagenser NeuMoDx Lysis Buffer 1 NeuMoDx HBV Quant Test Strips Bearbeta NeuMoDx HBV Calibrators Är kalibratorerna giltiga? JA Upprepa med 90 dagars mellanrum eller när en ny lot av NeuMoDx HBV Quant Test Strip används Bearbeta NeuMoDx HBV External Controls Är kontrollerna giltiga? JA Upprepa med 24 timmars mellanrum BEARBETA RUTINPROVER Bild 2: NeuMoDx HBV Quant Assay arbetsflöde för implementering Beredning av test 1. Fäst provstreckkodsetiketten på ett provrör som är kompatibelt med NeuMoDx System. 2. Vortexblanda provet för att få en jämn fördelning. 3. Överför 1 ml plasma till det streckkodsmärkta dotterröret med en överföringspipett. Se till att inga klumpar överförs från plasmaprovet till provröret. Använd en annan överföringspipett för varje prov. Dotterröret måste uppfylla följande rörspecifikationer som är kompatibla med NeuMoDx System på basis av provrörs-carrier som används för behandling. Carrier för 32 provrör: mellan 11 mm och 14 mm diameter och mellan 60 mm och 120 mm höjd Carrier för 24 provrör: mellan 14,5 mm och 18 mm diameter och mellan 60 mm och 120 mm höjd Sida 4 av 18

Användning av NeuMoDx System Detaljerade anvisningar finns i bruksanvisningarna för NeuMoDx 288/96 (art.nr 40600108 och 40600317). 1. Populera en eller flera NeuMoDx System Test Strip carriers med NeuMoDx HBV Quant Test Strip och använd pekskärmen för att ladda testrems-carriern i NeuMoDx System. 2. Om NeuMoDx System-programvaran så anmodar ska nödvändiga förbrukningsartiklar tillsättas i NeuMoDx Systems carriers för förbrukningsartiklar och använd pekskärmen för att ladda carriern i NeuMoDx System. 3. Om NeuMoDx System-programvaran så anmodar ska NeuMoDx Wash Reagent, NeuMoDx Release Reagent bytas, primingsavfallet tömmas eller behållaren för biologiskt avfall tömmas efter behov. 4. Om NeuMoDx System-programvaran så anmodar ska NeuMoDx HBV Calibrators och/eller NeuMoDx HBV External Controls bearbetas. Mer information om kalibratorer och kontrollerar finns i avsnittet Bearbetning av resultat. 5. Ladda provrören med prov/kalibrator/kontroll i en vanlig carrier för 32 provrör. Se till att alla provrörslock är borttagna. 6. Sätt provrörs-carriern på Autoloader-hyllan och använd pekskärmen för att ladda carriern i NeuMoDx System. Då inleds behandlingen av de laddade proverna för de angivna testerna. BEGRÄNSNINGAR 1. NeuMoDx HBV Quant Test Strip kan bara användas i NeuMoDx System. 2. Prestanda hos NeuMoDx HBV Quant Test Strip har fastställts för plasmaprover som preparerats från helblod insamlade med EDTA/ACD som antikoagulerande medel. 3. Användning av NeuMoDx HBV Quant Test Strip med andra kliniska provtyper har inte bedömts, och prestandaegenskaperna för detta test är okända för övriga typer av prover. 4. Eftersom detektion av HBV är beroende av antalet organismer i provet är pålitliga resultat beroende av att provet samlas in, hanteras och lagras på korrekt sätt. 5. NeuMoDx Calibrators och External Controls måste behandlas enligt rekommendationerna i bipacksedlarna och uppmaningarna i NeuMoDx System innan kliniska prover rutinbearbetas. 6. Felaktiga resultat kan uppstå vid felaktig insamling, hantering, lagring, tekniska fel eller förväxling av prover. Dessutom kan felaktigt negativa resultat bli följden eftersom antalet organismer i provet ligger under den analytiska sensitiviteten hos NeuMoDx HBV Quant Assay. 7. NeuMoDx System får bara användas av personal som utbildats inom användning av NeuMoDx System. 8. Om både HBV- och SPC1-målen inte amplifieras rapporteras ett resultat som ogiltigt (Indeterminate (obestämt) eller Unresolved (olöst)). Då ska testet upprepas. 9. Om NeuMoDx HBV Quant Assay är positivt, men kvantifieringsvärdet är utanför kvantifieringsgränserna, så rapporterar NeuMoDx System om detekterad HBV var under LloQ (lägre kvantifieringsgräns) eller över UloQ (övre kvantifieringsgräns). 10. Om detekterad HBV var under LLoQ kan analysen upprepas (om så önskas) med en annan alikvot av provet. 11. Om detekterad HBV var över ULoQ ska analysen upprepas med en utspädd alikvot av provet. Vi rekommenderar en spädning på 1:1 000 i HBV-negativ plasma eller Basematrix 53. 12. Ett positivt resultat indikerar inte nödvändigtvis förekomst av viabla organismer. Men ett positivt resultat tyder på förekomst av Hepatit B-virus DNA. 13. Borttagningar eller mutationer i X-protein- eller pre-c-området kan påverka detekteringen eller ge upphovs till felaktiga resultat med NeuMoDx HBV Quant Test Strip. 14. Resultat från NeuMoDx HBV Quant Assay ska användas som komplement till kliniska observationer och övrig information som är tillgänglig för läkaren. Testet är inte avsett för diagnostisering av infektioner. 15. God laboratoriesed inklusive att byta handskar mellan hantering av patientprover rekommenderas för att undvika kontaminering. BEARBETNING AV RESULTAT Tillgängliga resultat kan visas eller skrivas ut från fliken Resultat i fönstret Results (Resultat) på NeuMoDx Systems pekskärm. Resultatet av NeuMoDx HBV Quant Assay genereras automatiskt av programvaran i NeuMoDx System med beslutsalgoritmen och resultatbearbetningsparametrarna som angetts i analysdefinitionsfilen för NeuMoDx HBV (HBV ADF). Ett NeuMoDx HBV Quant Assay-resultat kan anges som Negative (negativt) Positive with a reported HBV concentration (Positivt med en rapporterad Hbv-koncentration), Positive above ULoQ (Positiv över ULoQ), Positive below LLoQ (Positiv under LLoQ), Indeterminate (Obestämt) eller Unresolved (Olöst) baserat på amplifieringsstatus för målet och provbearbetningskontrollen. Resultat rapporteras på basis av beslutsalgoritmen i Tabell 1. Sida 5 av 18

Tabell 1. Beslutsalgoritm för NeuMoDx HBV Quant Assay Testberäkning Resultat HBV Provprocesskontroll (SPC1) Ct Positive (Positivt) Positive, above Upper Limit of Quantitation [ULoQ] (Log10 IU/mL) (Positivt ovanför övre kvantifieringsgränsen [ULoQ] (Log10 IE/mL)) Positive, below Lower Limit of Quantitation [LLoQ] (Log10 IU/mL) (Positivt under lägre kvantifieringsgränsen [LLoQ] (Log10 IE/mL)) Negative (Negativt) [2 Ct < 9 AND (OCH) EPR 2 AND (OCH) EP 1 000] OR (ELLER) [9 Ct 42 AND (OCH) EP 1000] Quant (Kvant) > 9.02 Quant (Kvant) < 0,88 N/A (EJ TILLÄMPLIGT) OR (ELLER) (2 Ct< 9 AND (OCH) EPR < 2) OR (ELLER) [9 Ct 42 AND (OCH) EP 1000] OR (ELLER) Ct > 42 N/A (EJ TILLÄMPLIGT) N/A (EJ TILLÄMPLIGT) N/A (EJ TILLÄMPLIGT) 28 Ct 34 AND (OCH) EP 2000 Indeterminate NOT AMPLIFIED/ System Errors Noted (Obestämt) (inte amplifierat, systemfel upptäcktes) Unresolved NOT AMPLIFIED/ No System Errors Noted (Olöst) (inte amplifierat, inga systemfel upptäcktes) EP = End Point Fluorescence (slutpunktsfluorescens) (efter baslinjekorrigering); EPR = End Point Fluorescence Ratio (slutpunktsfluorescensförhållande); Ct = Cycling Threshold (Tröskelvärdet för cykling); Quant = beräknad kvantitet HBV i provet som Log10 IE/mL. Se testberäkning nedan. 1. För prover inom kvantifieringsområdet för NeuMoDx HBV Quant Assay beräknas koncentrationen av HBV DNA i proverna med en kalibrering baserad på den lagrade standardkurvan/ekvationen. a. En s.k. kalibreringskoefficient beräknas också utifrån resultatet av NeuMoDx HBV Calibrators som bearbetats för att fastställa standardkurvans giltighet för en viss lot av NeuMoDx HBV Quant Test Strip i ett specifikt NeuMoDx System. b. Kalibreringskoefficienten är inkluderad i den slutliga beräkningen av koncentrationen av HBV DNA. 2. Resultatet av NeuMoDx HBV Quant Assay anges i Log10 IE/mL. 3. Det kvantifierade resultatet av de okända proverna är spårbara enligt WHO 4 th HBV International Standard. Testkalibrering En giltig kalibrering baserad på standardkurvan (eller ekvationen) krävs för att kvantifiera HBV DNA i proven. För att resultaten ska bli giltiga måste en testkalibrering utföras med externa kalibratorer från NeuMoDx Molecular, Inc. Externa kalibratorer 1. NeuMoDx HBV Calibrators levereras i en sats [REF 800100] och innehåller intakt HBV-virus utspätt i Basematrix 53. 2. En uppsättning HBV-kalibratorer behöver bearbetas för varje ny lot med NeuMoDx HBV Quant Test Strip, när en ny HBV-analysdefinitionsfil laddas upp i NeuMoDx System eller om utgångsdatum har passerat för den aktuella kalibratoruppsättningen (för närvarande 90 dagar) eller om programvaran i NeuMoDx System förändras. 3. Programvaran i NeuMoDx System meddelar användaren när kalibratorerna behöver bearbetas. Vid normal drift kan inte en ny lot med testremsor användas för rester innan kalibratorerna har bearbetats utan fel. 4. Kalibreringsvaliditeten fastställs så här: a) En uppsättning med två kalibratorer hög och låg behöver bearbetas för att fastställa validiteten. b) För att resultaten ska vara giltiga ska minst 2 av de 3 replikaten ge resultat som ligger inom de förinställda parametrarna. Det nominella målvärdet för låg kalibrator är 3,7 Log10 IE/mL och för hög kalibrator 5,7 Log10 IE/mL. c) En kalibreringskoefficient beräknas för att kompensera för kvantifieringsbias. Koefficienten används för att bestämma den slutliga HBV-koncentrationen. Sida 6 av 18

5. Om en eller bägge kalibratorer inte klarar validitetskontrollen så upprepar du bearbetning av de misslyckade kalibratorerna med en ny ampull. Om en kalibrator misslyckas med validiteten så går det att enbart upprepa den misslyckade kalibratorn eftersom systemet inte kräver att användaren kör bägge kalibratorernaigen. 6. Kontakta NeuMoDx Molecular, Inc. om en eller båda kalibratorer underkänns i valideringen igen. Kvalitetskontroll Lokala föreskrifter anger vanligen att laboratoriet är ansvarigt för kontrollrutiner som övervakar noggrannheten och precisionen i hela den analytiska processen och måste fastställa antalet, typen av och frekvensen för testning av kontrollmaterial med hjälp av prestandaspecifikationer för ett omodifierat, godkänt testsystem. Externa kontroller 1. Externa kontrollmaterial som innehåller intakt HBV-virus i Basematrix 53 för positiva kontroller tillhandahålls av NeuMoDx Molecular, Inc. i en sats som innehåller NeuMoDx HBV External Controls [REF 900101]. 2. Positiva och negativa externa kontroller behöver bearbetas en gång var 24:e timme. Om inga giltiga externa kontrolluppsättningar finns begär NeuMoDx System användaren att tillhandahålla dessa kontroller innan provresultat kan rapporteras. 3. Om externa kontroller krävs, hämta uppsättningen med externa kontroller från frysen och tina provrören i rumstemperatur (15 30 C) tills de har tinat helt. Vortexblanda varsamt så att proven blir homogena. 4. Ladda provrören med de positiva och negativa kontrollerna i NeuMoDx System via pekskärmen och en carrier för provtagningsrör på Autoloader-hyllan. NeuMoDx System identifierar streckkoden och börjar processa provrören, förutsatt att lämpliga reagenser eller förbrukningsartiklar som krävs för testning är tillgängliga. 5. Giltigheten för externa kontroller analyseras av NeuMoDx System baserat på det förväntade resultatet. Den positiva kontrollen ska ge ett HBV-positivt resultat och den negativa kontrollen ett HBV-negativt resultat. 6. Gör så här om resultaten för externa kontroller avviker från varandra: a) Ett positivt testresultat som rapporteras för ett negativt kontrollprov indikerar att provet är förorenat. b) Ett negativt resultat som rapporteras för ett positivt kontrollprov kan indikera att det finns problem med reagenser eller instrumentet. c) I båda fallen ska NeuMoDx HBV External Controls testas igen med nya ampuller om valideringstestet misslyckas. d) Om den positiva NeuMoDx HBV External Control återigen ger ett Negative (negativt) resultat ska du kontakta kundtjänst hos NeuMoDx. e) Om den negativa NeuMoDx HBV External Control återigen ger ett Positive (positivt) resultat: Försök eliminera alla potentiella kontamineringskällor, bland annat genom att byt ALLA reagenser, innan du kontaktar kundtjänst hos NeuMoDx. Provbearbetning av (interna) kontroller En exogen provprocesskontroll (Sample Process Control 1, SPC1) inkluderas i NeuMoDx Extraction Plate och genomgår hela processen med nukleinsyraextraktion och realtids-pcr-amplifiering med varje prov. SPC1-specifika primrar och prob inkluderas också i varje NeuMoDx HBV Quant Test Strip. Därmed kan närvaron av SPC1 detekteras tillsammans med HBV mål-dna (i förekommande fall) via multiplex realtids-pcr. Detektering av SPC1-amplifiering gör att programvaran i NeuMoDx System kan övervaka effektiviteten hos DNA-extraktions och PCRamplifieringsprocesserna. Ogiltiga resultat Om en NeuMoDx HBV Quant Assay som utförs i NeuMoDx System inte producerar ett giltigt resultat rapporteras det som antingen Indeterminate (Obestämt) (IND) eller Unresolved (Olöst) (UNR) baserat på typen av fel som uppstod. Ett IND-resultat rapporteras om ett NeuMoDx System-fel upptäckts under provbearbetningen. Om ett IND-resultat rapporteras rekommenderar vi omtestning. Ett UNR-resultat rapporteras om ingen giltig amplifiering av HBV DNA eller SPC1 identifieras, vilket indikerar ett möjligt reagensfel eller att det finns hämmare. Om ett UNR-resultat rapporteras rekommenderar vi ett omtest som första steg. Om även omtestet misslyckas kan ett utspätt prov användas för att lindra effekterna av eventuell provhämning. PRESTANDAEGENSKAPER Analytisk sensitivitet detektionsgräns enligt WHO-standard Den analytiska sensitiviteten hos NeuMoDx HBV Quant Assay med NeuMoDx HBV Quant Test Strip karakteriserades med fem olika nivåer av WHO 4 th International Standard och negativa prover i screenad negativ human plasma i NeuMoDx 288 Molecular System och en förkortad testpanel i NeuMoDx 96 Molecular System. Studierna utfördes under 3 dagar på flera NeuMoDx Systems där varje system bearbetade 18 och 24 replikat på varje nivå per dag på NeuMoDx 288 respektive 96 Molecular System. En unik lot av var och en av följande: NeuMoDx HBV Quant Test Strip, NeuMoDx Extraction Plate och NeuMoDx Lysis Buffer 1 testades i varje NeuMoDx System varje dag. Detektionsnivåerna visas i Tabell 2. Med en Probit-analys bestämdes detektionsgränsen (Limit of Detection, LoD) för HBV-genotyp A [Bild 3]. LoD för NeuMoDx HBV Assay i NeuMoDx 288 Molecular System fastställdes till 5,2 IE/mL med 95 % KI (konfidensintervall) på 4,1 till 7,6 IE/mL, motsvarande 0,72 Log10 IE/mL Sida 7 av 18

SENSITIVITET SENSITIVITY SENSITIVITET SENSITIVITY med 95 % KI på 0,61 till 0,88 Log10 IE/mL. LoD för NeuMoDx HBV Assay på NeuMoDx 96 Molecular System bestämdes till 4,3 IE/mL (0,63 Log10 IE/mL). Uppgiven LoD för NeuMoDx HBV Quant Assay är 6,2 IE/mL baserat på LoD-resultaten som erhållits för HBV-genotyper. Tabell 2. Positiva detektionsnivåer för prover som används för bestämning av LoD i NeuMoDx HBV Quant Assay NeuMoDx 288 Molecular System NeuMoDx 96 Molecular System Log10 IE/mL Antal giltiga Antal Antal giltiga Antal (IE/mL) Detektionsnivå Detektionsnivå tester positiva tester positiva EJ EJ EJ 20 1,3 108 108 100 % TILLÄMPLIGT TILLÄMPLIGT TILLÄMPLIGT 10 1 108 107 99 % 24 24 100 % 5 0,7 108 98 91 % 24 23 96 % 2,5 0,4 108 97 90 % 24 20 83 % EJ EJ EJ 1,25 0,1 108 73 68 % TILLÄMPLIGT TILLÄMPLIGT TILLÄMPLIGT 0 0 108 0 0 % 24 24 0 % 1.2 1,2 1 LoD = 5,2 5.2 IE/mL[med IU/mL [with 9595% % Cl CI på of (4,1,7,6) (4.1,7.6) IE/mL] IU/mL] 1.2 1,2 1 LoD LoD = = 4,3 4.3IE/mL IU/mL 0.8 0,8 0.8 0,8 0.6 0,6 0.4 0,4 0.2 0,2 Trendlinje Curve FIT Experimentell Experimental Beräknad Calculated LoD 0-4 -2 0 2 4 Log10[KONC/mL] 10 [CONC/mL] 0.6 0,6 0.4 0,4 0.2 0,2 Sigmoid FIT Fit Experimentdata Experimental Data Beräknad Calculated LoD 0-2 -1 0 1 2 3 Log10[KONC/mL] [CONC/mL] Bild 3: Probit-analys som används för att fastställa LoD för NeuMoDx HBV Quant Assay i NeuMoDx 288 Molecular System (vänster) och NeuMoDx 96 Molecular System (höger) Kvantifieringsgräns lägre kvantifieringsgräns (Lower Limit of Quantitation, LLoQ) För bestämning av den lägre kvantifieringsgränsen beräknades det totala analysfelet (Total Analytical Error, TAE) för vart och ett av HBVmålvärdena som rapporterade 95 % detektering som en del av LoD-beräkningen. TAE definieras så här: TAE = bias + 2*SD [Westgard Statistic] Bias är absolutvärdet för skillnaden mellan medelvärdet av den beräknade koncentrationen och den förväntade koncentrationen. SD avser standardavvikelsen för det kvantifierade värdet för provet. Sammanställda LLoQ-resultat för HBV-proven i både NeuMoDx System-varianterna finns i Tabell 3. Sida 8 av 18

MÅLKONC IE/mL MÅLKONC Log10 IE/mL Detektionsnivå Tabell 3. Resultat för LLoQ med bias och TAE för varje testad nivå. NeuMoDx 288 Molecular System Snittkonc. Log10 IE/mL SD Bias TAE Detektionsnivå Snittkonc. Log10 IE/mL NeuMoDx 96 Molecular System SD Bias TAE 20 1,30 100 % 1,29 0,23 0,16 0,63 EJ TILLÄMPLIGT EJ TILLÄMPLIGT EJ TILLÄMPLIGT EJ TILLÄMPLIGT EJ TILLÄMPLIGT 10 1,00 99 % 1,07 0,25 0,20 0,71 100 % 0,97 0,28 0,03 0,60 5 0,70 91 % 0,89 0,35 0,34 1,04 96 % 0,86 0,32 0,17 0,81 2,5 0,40 90 % 0,75 0,44 0,51 1,39 93 % 0,85 0,45 0,45 1,34 1,25 0,10 68 % 0,73 0,41 0,68 1,50 EJ TILLÄMPLIGT EJ TILLÄMPLIGT EJ TILLÄMPLIGT EJ TILLÄMPLIGT Den lägsta målnivån vid vilken >95 % detektion uppnås och TAE 1,0 definieras som den lägre kvantifieringsgränsen (Lower Limit of Quantitation, LLoQ). LLoQ fastställdes att vara 5,5 IE/mL (0,74 Log10 IE/mL) och 4,3 IE/mL (0,63 log 10 IE/mL) med den 4:e internationella WHO-standarden för NeuMoDx 288 respektive 96 Molecular System. Baserat på testning med alla genotyper är den uppgivna LLoQ för NeuMoDx HBV Quant Assay 7,6 IE/mL (0,88 Log10 IE/mL). LoD och LLoQ för flera HBV-genotyper LoD fastställdes inledningsvis för Genotyp A (4:e internationella WHO-standarden) och därefter utfördes ytterligare testning runt den fastställda LoD med var och en av de övriga 7 genotyperna. 36 replikat med nivåer motsvarande 2X, 1X och 0,5X av övre LoD-gräns med 95 % KI (ca 7 IE/mL) testades med NeuMoDx HBV Quant Assay. Den positiva procentandelen för varje genotyp vid var och en av de testade nivåerna tabulerades och användes för att beräkna LoD med analys av probittyp. Det totala analysfelet för de testade nivåerna beräknades också. Den lägsta nivån med 95 % positiv detektering och beräknad TAGE på 1,0 betraktades återigen som LLoQ för genotypen. Tabell 4. Testade HBV-genotyper EJ TILLÄMPLIGT GENOTYP LoD [Log10IE/mL] LLoQ [Log10IE/mL] Genotyp A 5,2 5,2 Genotyp B 6,2 6,2 Genotyp C 3,5 6,2 Genotyp D 5,2 5,7 Genotyp E 3,5 3,5 Genotyp F 5,1 6,2 Genotyp G 3,5 3,5 Genotyp H 5,2 7,6 Linjäritet och bestämning av övre kvantifieringsgräns (Upper Limit of Quantitation, ULoQ) Genotyp A användes som representant för andra genotyper i undersökningen. Elva (11) nivåer av HBV-prover [testpanel] bearbetades med 6 replikat på varje nivå i 2 NeuMoDx System-exemplar och 3 loter med kritiska reagenser, så att en detekteringsnivå på 8 Log10 och närområden för kritiska medicinska beslutspunkter omfattades. Testpanelen bestod av ett HBV-positivt kliniskt prov som utspätts i ett förscreenat och poolat HBV-negativt plasmaprov. Spårbarhet enligt WHO 4 th International Standard fastställdes via en parallellinjeanalys innan linjäritetsundersökningen utfördes. Ekvivalensen hos NeuMoDx HBV Quant Assay kunde påvisas med mycket väl korrelerade prestandaresultat i både NeuMoDx 288 Molecular System och NeuMoDx 96 Molecular System. Sida 9 av 18

NeuMoDx HBV Assay koncentration [Log 10 IE/mL] Målkonc. (IE/mL) Tabell 5. Linjäritet hos NeuMoDx HBV Quant Assay (utvärderades med genotyp A) Målkonc. (Log10 IE/mL) Medelkonc. (Log10 IE/mL) Standardavvikelse Bias Förutsedd linjär anpassning Avvikelse från ickelinjär anpassning 1,05E+09 9,02 8,99 0,08 0,06 9,02 0,04 1,05E+08 8,02 8,05 0,07 0,05 8,02 0,03 1,05E+07 7,02 7,05 0,07 0,06 7,02 0,04 1,05E+06* 6,02 6,05 0,05 0,05 6,02 0,03 1,05E+05 5,02 5,04 0,05 0,04 5,02 0,00 2,82E+04* 4,45 4,43 0,07 0,05 4,45 0,01 1,05E+04 4,02 3,99 0,09 0,05 4,02 0,02 2,82E+03* 3,45 3,41 0,07 0,06 3,45 0,03 1,05E+03 3,02 3,00 0,04 0,04 3,02 0,03 1,05E+02 2,02 1,99 0,11 0,09 2,02 0,01 1,05E+01 1,02 1,09 0,29 0,23 1,02 0,06 *Nära medicinska beslutspunkter NeuMoDx HBV Quant Assay visade sig kunna kvantifiera HBV i det linjära intervallet 8 Log10 med en avvikelse på ±0,22 Log10 IE/mL. Den maximala avvikelse från en något bättre anpassad linjär regressionskurva var 0,06 Log10 IE/mL. Den övre kvantifieringsgränsen (Upper Limit of Quantitation, ULoQ) bestämdes också med data från den här undersökningen och fastställdes till 9,02 Log10 IE/mL. Linjäritet för NeuMoDx HBV Assay 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 y = 1x + 1E-06 R² = 0,9977 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Förväntad koncentration [Log 10 IE/mL] Bild 4: Linjärt intervall för NeuMoDx HBV Quant Assay. x = förväntad kvantifiering, y = NeuMoDx-kvantifiering Linjäritet mellan genotyper Linjäriteten hos NeuMoDx HBV Assay i plasmaprover för HBV-genotyperna karaktäriserades genom testning av minst fyra (4) olika koncentrationer av varje HBV-genotyp som preparerats i poolad HBV-negativ plasma. De testade nivåerna av HVB-mål som användes i undersökningen var beroende av källprovets koncentration och varierade därför mellan olika genotyper. Studien genomfördes med 6 replikat på varje nivå per genotyp. Sida 10 av 18

NeuMoDx HBV Assay koncentration [Log 10 IE/mL] Tabell 6: Linjäritet hos NeuMoDx HBV Quant Assay mellan genotyper Genotyp Linjäritetsekvation y = NeuMoDx HBV Assay-kvantifiering R 2 x = förväntad kvantifiering A y = 1x + 1E-06 0,9977 B y = 1,0129x - 0,0964 0,9975 C y = 1,0250x - 0,0898 0,998 D y = 1,0379x - 0,0896 0,9975 E y = 1,0182x - 0,096 0,9956 F y = 0,9736x + 0,276 0,9906 G y = 1,0547x - 0,0835 0,9813 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 Linear Linjär (genotyp (Genotype A) A) Linear Linjär (genotyp (Genotype B) B) Linear Linjär (genotyp (Genotype C) C) Linear Linjär (genotyp (Genotype D) D) Linear Linjär (genotyp (Genotype E) E) Linear Linjär (genotyp (Genotype F) F) Linear Linjär (genotyp (Genotype G) G) 0 2 4 6 8 10 Referens HBV Assay koncentration [Log 10 IE/mL] Bild 5: Linjäritet hos NeuMoDx HBV Quant Assay mellan genotyper Analytisk specificitet och korsreaktivitet Analytisk specificitet demonstrerades genom screening av 32 organismer som är vanliga blod- och plasmaprover och som fylogenetiskt liknar HBV i korsreaktivitetssyfte. Organismer preparerades i pooler om 4 till 6 organismer och testades vid höga koncentrationer. De testade organismerna visas i Tabell 7. Inga korsreaktivitet observerades med någon av organismerna, vilket visar att den analytiska specificiteten är 100 % för NeuMoDx HBV Quant Assay. Sida 11 av 18

Tabell 7. Patogener som används för att påvisa analytisk specificitet korsreaktivitet Adenovirus 2 Dengue V1 Hepatit A HPV 16, Ilheus (ILHV) Gula febern Adenovirus 5 Dengue V2 Hepatit C HPV 18 Influensa A Zikavirus Banzivirus Dengue V3 Humant herpesvirus 6a HSV1 Parvo B19 BK-virus Dengue V4 Humant herpesvirus 8 HSV 2 Rubella, Cytomegalovirus Epstein-Barr-virus HIV 1 HTLV 1 St. Louis-encefalit VZV Vacciniavirus HIV 2 HTLV 2 West Nile-virus Interfererande substanser kommensala organismer NeuMoDx HBV Quant Assay undersöktes med avseende på interferens i närvaro av icke-målorganismer med samma organismpooler som de som preparerades för testning av analytisk specificitet. Organismerna testades antingen enskilt eller poolade i grupper om 4 6 organismer i screenad HBV-negativ plasma som spetsades med HBV-kontroller i koncentrationen 3,7 Log10 IE/mL. Ingen betydande interferens observerades i närvaron av de här kommensala organismerna vilket visas av den minimala avvikelsen i kvantifiering från kontrollproverna utan interfererande agent. Tabell 8. Interferenstestning kommensala organismer Grupp 1 [BK-virus, cytomegalovirus, Epstein-Barrvirus, humant herpesvirus 6a, humant herpesvirus 8] Grupp 2 [Adenovirus 2, adenovirus 5, dengue V2, dengue V3, dengue V4] Grupp 3 [Parvo B19, HTLV 1, HTLV 2, Ilheus (ILHV), gula febern, zika-virus] Grupp 4 [HPV 16, HPV 18, HSV 1, HSV 2, Dengue V1] Grupp 5 [St. Louis-encef., VZV, vacciniavirus, West Nile-virus] Genomsnittskonc. Log10 IE/mL Bias Log10 IE/mL 3,51 0,10 3,38 0,22 3,62 0,06 3,57 0,04 3,57 0,03 HAV 3,58 0,05 Banzivirus 3,41 0,19 HIV-1 3,47 0,15 HIV-2 3,56 0,05 Rubella 3,16 0,44 Influensa A 3,60 0,03 HCV 3,58 0,04 Interfererande substanser endogena och exogena substanser Prestanda hos NeuMoDx HBV Quant Test Strip analyserades i närvaro av typiska exogena och endogena interfererande substanser som förekommer i kliniska HBV-plasmaprover. Bland annat omfattades onormalt höga nivåer blodkomponenter och vanliga antivirala medel, som klassificerades i Tabell 9. Var och en av de endogena och exogena substanserna nedan i Tabell 10 tillsattes till screenad HBV-negativ human plasma som spetsats med 3,7 Log10 IE/mL HBV och dataobserverades för interferens. Dessutom interferenstestades plasma som smittats med vanliga sjukdomar kopplade till infektion med hepatit B. Sida 12 av 18

Tabell 9. Interferenstestning exogena ämnen (läkemedelsklassificeringar) Pool Läkemedel Klassificering 1 2 3 4 5 Zidovudin (ZDV) Saquinavir Ritonavir Claritromycin Interferon alfa-2a Interferon alfa-2b Abakavirsulfat Amprenavir Ribavirin Entecavir Fluoxetin Valaciklovirhydroklorid Tenofovirdisoproxil Lamivudin Ganciklovir Valganciklovir Nevirapin Efavirenz Lopinavir Enfuvirtid Ciprofloxacin Paroxetin Adefovir (dipivoxil) Azitromycin Indinavirsulfat Sertalin Omvänt transkriptas-hämmare HIV-proteashämmare HIV-proteashämmare Antibiotika Immunmodulerare Immunmodulerare Omvänt transkriptas-hämmare Proteashämmare Immunmodulerare HBV-antivirala medel SSRI-hämmare (antidepressivt medel) Antivirala medel Antiviralt medel mot HBV/HIV Antiviralt medel mot HBV/HIV Antivirala medel mot CMV Antivirala medel mot CMV Omvänt transkriptas-hämmare Omvänt transkriptas-hämmare Proteashämmare HIV-fusionshämmare Antibiotika SSRI-hämmare (antidepressivt medel) Antivirala medel Antibiotika HIV-proteashämmare SSRI-hämmare (antidepressivt medel) Sida 13 av 18

Tabell 10. Interferenstestning exogena och endogena medel Endogena Snittkonc. Log10 IE/mL Bias Log10 IE/mL Hemoglobin 3,50 0,20 Triglycerider 3,51 0,09 Bilirubin 3,56 0,13 Albumin 3,51 0,17 Exogena (läkemedel) Snittkonc. Log10 IE/mL Bias Log10 IE/mL Pool 1: Zidovudin (ZDV), Saquinavir, Ritonavir, Claritromycin, Interferon alfa-2a, Interferon alfa-2b 3,58 0,08 Pool 2: Abakavirsulfat, Amprenavir, Ribavirin, Entekavir, Fluoxetin, Valacyclovirhydroklorid 3,56 0,04 Pool 3: Tenofovirdisoproxil, Lamivudin, Ganciklovir, Valganciklovir, Nevirapin 3,59 0,06 Pool 4: Efavirenz, Lopinavir, Enfuvirtid, Ciprofloxacin, Paroxetin, 3,60 0,07 Pool 5: Adefovir (dipivoxil), Azitromycin, Indinavirsulfat, Sertalin 3,56 0,19 Sjukdomstillstånd Snittkonc. Log10 IE/mL Bias Log10 IE/mL Antinukleär antikropp (ANA) 3,61 0,10 Systemisk lupus erythematosus (SLE) 3,63 0,10 Reumatoid artrit (RA) 3,57 0,09 HCV-antikroppar 3,58 0,07 HBV-antikroppar 3,64 0,11 Alkoholorsakad cirrhos 3,68 0,15 Reumatoid faktor (RF) 3,63 0,10 Ej alkoholorsakad steatohepatit (NASH) 3,49 0,06 Precision inom labbet Precisionen för NeuMoDx HBV Quant Test Strip bestämdes genom testning av en panel med 8 deltagare i form av HBV-prover med genotyp A till C i tre NeuMoDx System under 12 dagar. Precisionerna inom körning, inom dag och inom system karakteriserades och den totala standardavvikelsen fastställdes till 0,22 Log10 IE/mL. Precisionen mellan användare beräknades inte eftersom inte användaren spelar någon tydlig roll i bearbetningen av prover med NeuMoDx System. Tabell 11. Resultat av undersökning av precision inom labbet PANELMEDLEM MÅLKONC. [Log10 IE/mL] MEDELKONC. [Log10 IE/mL] N Bias SD inom körning SD inom dag SD inom system Total SD Genotyp A Genotyp C 7,75 7,89 36 0,14 0,06 0,07 0,07 0,07 5,75 5,83 36 0,11 0,07 0,10 0,10 0,10 3,75 3,70 36 0,11 0,11 0,13 0,15 0,15 1,75 1,54 36 0,23 0,16 0,22 0,22 0,22 6,27 6,23 36 0,10 0,08 0,09 0,10 0,10 4,27 4,18 36 0,08 0,08 0,10 0,10 0,10 3,27 3,14 36 0,09 0,08 0,12 0,12 0,12 2,27 2,08 36 0,12 0,12 0,15 0,16 0,16 Sida 14 av 18

Reproducerbarhet lot till lot Reproducerbarheten från lot till lot för NeuMoDx HBV Quant Test Strip fastställdes med tre olika loter med nyckelreagens NeuMoDx Lysis Buffer 1, NeuMoDx Extraction Plate och NeuMoDx HBV Quant Test Strip. En panel med 8 medlemmar med HBV-genotyp A och C användes för att bedöma prestanda. Testningen genomfördes med de tre reagensloterna på tre NeuMoDx System under 6 dagar. Variationerna inom och mellan loterna analyserades. Maximal total bias var 0,12 Log10IE/mL och maximal total SD var 0,24 Log10 IE/mL. Ingen betydande prestandaskillnad påträffades mellan loterna då kvantifiering av alla panelmedlemmar var inom toleransspecifikationen. Tabell 12. Reproducerbarhet lot till lot undersökningsresultat PANELMEDLEM Genotyp A Genotyp C MÅLKONC. [Log10 IE/mL] MEDELKONC. [Log10 IE/mL] N Bias SD inom lot SD mellan loter Total SD 8,02 7,99 36 0,03 0,15 0,09 0,17 6,02 5,96 36 0,06 0,17 0,06 0,18 4,02 3,90 36 0,12 0,14 0,09 0,17 2,02 1,92 36 0,10 0,21 0,12 0,24 6,27 6,32 36 0,05 0,06 0,08 0,10 4,27 4,31 36 0,04 0,22 0,09 0,24 3,27 3,30 36 0,03 0,20 0,07 0,21 2,27 2,32 36 0,05 0,13 0,13 0,18 Kontrollens effektivitet Effektiviteten hos SPC1 som inkluderades i NeuMoDx HBV Quant Assay för att rapportera eventuella processtegsfel eller hämmarutlöst prestandapåverkan av NeuMoDx HBV Quant Assay undersöktes med två vanliga HBV-genotyper (A och C). Förhållandena som testades är representativa för misslyckade kritiska processteg som potentiellt kan uppstå under körning av provet och som eventuellt inte detekteras av de prestandaövervakande sensorerna i NeuMoDx System. Effektiviteten för SPC1 utvärderades genom att simulera sådana misslyckandeförhållanden. Ineffektiviteter som hade en negativ inverkan på HBV-detektion/-kvantifiering speglades av prestandan för SPC1- målet (närvaro av hämmare och brist på Wash-steg). Vid villkor under vilka SPC1-amplifieringen inte påverkades visades även HBV-målet amplifieras inom en rapporterad kvantifiering på 0,2 Log10 IE/mL i kontrollproverna. Testat processtegfel Presence of Inhibitor (Närvaro av hämmare) No Wash Delivered (ingen sköljning tillförd) No Wash Blowout (Ingen Wash-utblåsning) Tabell 13. Effektivitet hos provprocesskontrollen Status för processkontrollamplifiering för prov Not Amplified (Ej amplifierad) Not Amplified (Ej amplifierad) Amplified (Amplifierad) Status för HBVmålamplifiering Not Amplified (Ej amplifierad) Not Amplified (Ej amplifierad) Amplified (Amplifierad) Analysresultat Unresolved (Olöst) Unresolved (Olöst) Positive with Quantitation within 0.2 Log10 IU/mL of Control (Positiv med kvantifiering inom 0,2 Log10 IE/mL för kontroll) Korskontaminering Korskontamineringsnivån för NeuMoDx HBV Quant Assay fastställdes genom testning av tre uppsättningar HBV-prover med omväxlande höggradigt positiva och höggradigt negativa prover. Totalt testades 144 replikat av ett normalt, HBV-negativt prov av human EDTA-plasma och 144 replikat med högtitrerat HBV-prov på 8,0 Log10 IE/mL. Alla 144 replikat av de negativa proverna var negativa, vilket gav en korskontamineringsnivå på 0 %. Provmatrisekvivalens Testning utfördes för att fastställa ekvivalenta resultat med HBV som både samlats in i insamlingsrör med etylendiamintetraättiksyra (Ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA) och syracitratdextros (acid citrate dextrose, ACD). Dessutom fastställdes ekvivalens mellan färska och frysta prover. Fyrtio individuella donatorer erhölls från BioIVT, en leverantör av biologiska prover. Dessa samlades in i både EDTA- och ACDinsamlingsrör. Dessa matchade prover förvarades i 4 C och fraktades ej frysta till testanläggningen. Vid ankomst så spetsades de med fyra nivåer av HBV och testades för ekvivalens. Proverna spetsades antingen med HBV genotyp A eller HBV genotyp C. Efter inledande spetsning och testning så frystes proverna i minst 24 timmar. Efter att ha förvarats frysta under den här perioden så tinades proverna och testades om. Resultaten från färska kontra frysta och EDTA kontra citrat jämfördes för ekvivalens med regressionsanalys. Data visar en mycket god ekvivalens mellan färska och frusna prover samt mellan EDTA- och ACD-prover. Sida 15 av 18

Tabell 14. Resultat av regressionsanalys av provekvivalens Parameter[Acceptanskriterier] Färskt vs fryst ACD vs K2EDTA Lutning [0,9 1,1] 1,002 0,996 Intercept [<0,5] 0,031 0,018 Bestämningskoefficient [R 2 >0,95] 0,995 0,993 Provstabilitet HBV-negativa EDTA-plasmaprover spetsades med 3,7 Log10 IE/mL intakt HBV-virus och kontrollerades vid tre olika tidpunkter: omedelbart (tid 0), efter 4 timmar i NeuMoDx System och efter 8 timmar i NeuMoDx System. Inga signifikanta prestandaskillnader observerades, vilket indikerar att upp till 8 timmars lagring i NeuMoDx System är acceptabelt. Samma testning utfördes också med plasma som lagrats i ett laboratoriekylskåp (2 8 C) i upp till 7 dagar före testningen, och inga signifikanta prestandaskillnader kunder observeras. Slutligen testades plasmaprover som förvarats vid -18 C i upp till 6 månader före testningen. Inga signifikanta skillnader kunde observeras jämfört med färska prover. Infrysning och upptining upprepades, och inga prestandaförändringar observerades efter 2 omgångar infrysning och upptining. Metodkorrelation Den kvalitativa och kvantitativa prestandan för NeuMoDx HBV Quant Assay utvärderades mot FDA/CE-godkända komparatormetoder genom att testa ej utspädda kliniska prov från HBV-smittade patienter. Testningen utfördes internt hos NeuMoDx i en enkelblind studie med kliniska prover som erhållits från tre oberoende referenslaboratorier. Resultaten från totalt 308 HBV-positiva och -negativa prover sammanställdes i den kvalitativa analysen för att beräkna klinisk sensitivitet och specificitet för NeuMoDx HBV Quant Assay. Den kvalitativa analysen genomfördes inklusive och exklusive de positiva proverna under LLoQ eftersom klassificering av sådana låga prover kan variera mellan tester. Totalt 97 HBVpositiva kliniska prover inom det linjära intervallet som var samma för båda tester användes för att generera den linjära regressionen för bestämning av kvantitativa prestanda. Förutom att erbjuda utmärkt sensitivitet och specificitet så uppvisade NeuMoDx HBV Quant Test Strip utmärkt kvantitativ korrelation med komparatormetoden. Utifrån de här resultaten så uppskattades sensitiviteten för NeuMoDx HBV Quant Assay till 100 % (KI 96,4 % 100 %) och specificiteten uppskattades till 95,6 % (KI 91,9 % 97,7 %). De här konfidensintervallen på 95 % beräknades med 95 % konfidensintervallmetoden enligt EP12-A2, användarprotokoll för utvärdering av kvalitativ testprestanda, godkända riktlinjer, Vol 28, No 3. 6 Tabell 15. Mätvärden för klinisk sensitivitet och specificitet för NeuMoDx HBV Quant Assay i NeuMoDx 288 Molecular System Referensanalys (POS) Referensanalys (NEG) TOTALT NeuMoDx HBV Quant Assay (POS) 103 9 112 NeuMoDx HBV Quant Assay (NEG) 0 196 196 TOTALT 103 205 308 SENSITIVITET = 100 % 95 % KI (96,4 100 %) SPECIFICITET = 95,6 % 95 % KI (91,9 97,7 %) Tabell 16. Mätvärden för klinisk sensitivitet och specificitet för NeuMoDx HBV Quant Assay i NeuMoDx 288 Molecular System, exklusive prover <LLoQ Referensanalys (POS) Referensanalys (NEG) TOTALT NeuMoDx HBV Quant Assay (POS) 99 5 104 NeuMoDx HBV Quant Assay (NEG) 0 196 196 TOTALT 99 201 300 SENSITIVITET = 100 % 95 % KI (96,3 100 %) SPECIFICITET = 97,5 % 95 % KI (94,3 98,9 %) Sida 16 av 18

NeuMoDx HBV Assay [Log 10 IE/mL] 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 y = 1,02x - 0,20 R² = 0,97 0 2 4 6 8 10 Referens HBV Assay [Log 10 IE/mL] Bild 6: Kvantitativ metodkorrelationsundersökning med NeuMoDx HBV Quant Assay Ytterligare testning utfördes med NeuMoDx 96 Molecular System med 159 återstående kliniska plasmaprover. Precis som med tidigare testning som utfördes på NeuMoDx 288, jämfördes resultaten som erhölls från NeuMoDx 96 med de resultat som rapporterats av FDA- och CE-märkta klara metoder som använts av källaboratorier för vårdkvalitetstestning. Resultaten inklusive sanningstabell med klinisk sensitivitet och specificitet presenteras med 95 % KI i Tabell 17. Tabell 17: Sammanfattning av kliniska prestanda NeuMoDx HBV Quant Assay med NeuMoDx 96 Molecular System Referensanalys (POS) Referensanalys (NEG) TOTALT NeuMoDx HBV Quant Assay (POS) 60 2 62 NeuMoDx HBV Quant Assay (NEG) 1 95 96 TOTALT 61 97 158 SENSITIVITET = 98 % 95 % KI (90 100 %) SPECIFICITET = 98 % 95 % KI (92 100 %) REFERENSER 1. Mother-to-child transmission of hepatitis B virus in sub-saharan Africa: time to act. Andersson, Monique I et al..the Lancet Global Health, Volume 3, Issue 7, e358 - e359 2. Schillie S, Vellozzi C, Reingold A, et al. Prevention of Hepatitis B Virus Infection in the United States: Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices. MMWR Recomm Rep 2018;67(No. RR-1):1 31. DOI: http://dx.doi.org/10.15585/mmwr.rr6701a1. 3. World Health Organization. Hepatitis B: fact sheet. April 2017. http://www.who.int (last accessed 20 November 2017) 4. Centers for Disease Control and Prevention. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5 th edition. HHS Publication No. (CDC) 21-1112, Revised December 2009 5. And Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline Fourth Edition. CLSI document M29-A4; May 2014 6. Clinical And Laboratory Standards Institute (CLSI). User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline Second Edition. CLSI document EP12-A2; 2008 VARUMÄRKEN NeuMoDx är ett varumärke som tillhör NeuMoDx Molecular, Inc. NeuDry är ett varumärke som tillhör NeuMoDx Molecular, Inc. TaqMan är ett registrerat varumärke som tillhör Roche Molecular Systems, Inc. Sida 17 av 18