Sören Andersson. Professor, prefekt, överläkare. Institutionen för medicinska vetenskaper Örebro universitet & Laboratoriemedicin, Region Örebro län

Transkript

1 Konfirmation av HIV och HTLV Sören Andersson Professor, prefekt, överläkare Institutionen för medicinska vetenskaper Örebro universitet & Laboratoriemedicin, Region Örebro län

2 Diagnostiska principer HIV & HTLV Screening Enkel, storskalig, billig [Enzyme Immunoassay (EIA, ELISA etc)] Konfirmation Avancerad, detaljerad, kostsam [Western blot, Line immunoassay, PCR]

3 Screeningmetoder HIV kombination antikropp/antigen HTLV endast antikroppar

4 HIV-1 Western blot

5 Inno-LIA HIV I/II score

6 Resultat Inno-LIA HTLV Synliga band Resultat Inga synliga band Negativt för HTLV-antikroppar Ett synligt band ( +/-) - p19 I/II eller p24 I/II eller gp46 I/II Negativt för HTLV-antikroppar - gp 21 I/II Indeterminant Två synliga band ( +/-) - Exklusive gp21 Indeterminant - Inklusive gp21 Positivt för HTLV-antikroppar Tre eller fler band ( +/-) Positivt för HTLV-antikroppar

7 HIV konfirmering 2015 Av 12 lab knutna till Equalis använder 10 Inno-LIA och 2 Geenius

8 Geenius HIV 1/2 confirmatory system (BIO RAD 2015). 9 HIV-2 (2 dubbelinfektion HIV-1 och HIV-2) alla korrekt detekterade, men relativt hög korsreaktivitet med HIV-1?

9 Geenius HIV-1/2 confirmatory assay Konfirmering och differentiering mellan HIV-1 och HIV-2 Rekomb & syntetiska peptider minuter Serum, plasma, helblod

10 WHO rekommendationer för HIVkonfirmering Prevalens <5% - tre sekventiella tester, helst kombotest (ag/ak) först Prevalens >5% - två sekventiella tester Testerna ska helst ha olika principiell uppbyggnad olika antigener Consolidated Guidelines on HIV Testing Services. WHO 2015

11 WHO rekommenderad HIV-teststrategi för lågprevalenta områden (<5%) WHO 2015

12 HIV kombotest Antigen vs antikroppar måste utredas - Antigentest - PCR (NAT)

13 AmpliSens HCV/HBV/HIV-FRT realtime PCR Multiplex Kvalitativ detektion av blodburna virus Vävnadsdonation, t ex bendonatorer SoS föreskrift om 180 dagars karantän Nationellt initiativ

14 Analysens känslighet (Amplisens multiplex) IU/mL Ct HBV-DNA ,77 Sp 1/ ,04 1/ ,11 1/ ,01 1/ ,3 24,02 1/10 5 2,6 27,71 1/10 6 0,26 29,71 1/10 7 0,026 Neg 1/10 8 0,0026 Neg c/ml ct HIV-RNA Sp 1/ ,4 1/ ,67 1/ ,26 1/ ,07 1/ ,53 1/10 6 1,5 31,45 1/10 7 0,15 Neg IU/mL Ct HCV-RNA 0 Sp 1/ ,92 1/ ,77 1/ ,41 1/ ,33 1/ ,3 27,28 1/10 6 4,53 29,05 1/10 7 0,453 Neg

15 HCV NIBSC 06/102 Dilution Quantity IU/mL Ct 1/ / / / /10 5 2, /10 6 0,26 Negative HBV NIBSC 10/264 Dilution Quantity IU/mL Ct 1/ / / / /10 5 8, /10 6 0, NIBSC WHOstandards HIV NIBSC 10/152 Dilution Quantity IU/mL Ct 1/ / / / , /10 5 1,85 Negative 1/10 6 0,185 Negative

16 Analysen infördes sept 2013 EDTA-plasma, minst 2 ml plasma. Skickas inom 48 timmar, vanlig post. Om provet centrifugeras och plasma avskiljes kan det stå i kyl upp till 5 dygn, skickas med vanlig post. Om längre förvaring fryses plasman i -70 C, skickas fryst. Analys utförs c:a 1 gång per vecka (vanligen onsdag) Svaras Negativ om samtliga agens är ej detekterbara, Positiv, med uppgift om agens om reaktiv. Papperssvar. Remiss finns att hämta: /Remisser/AnabestSpecialus.pdf Rör märkes med personnummer, gärna streckkod.

17 DxN VERIS System (Beckman Coulter) Helautomatisk PCR för kvantitativ bestämning av HIV RNA HCV RNA HBV DNA CMV DNA Kan stå på bana Utvärderas nu i Örebro

18 Hologic Panther Gen-Probe GC HPV Chlamydia HIV

19 Referensdiagnostik för HLTV i Örebro Totalt antal prover 440 Negativa 291 Positiva 72 HTLV-1 60 HTLV-2 8 Ej typbara 4 Ej bedömbara (ID) 136

20 Ej bedömbara (indeterminanta) HTLV som följts upp Minst ett nytt prov 1 mån - > 1 år 27 individer Alla testade serologiskt, 15 med PCR Ingen blev positiv Oförändrat serologiskt PCR 10 negativa Negativa serologiskt Endast serologi 4 PCR + serologi (neg) 5 18 individer 9 individer

21 Prestanda i HTLV-diagnostiken Antal testade per år (ca) Nya blodgivare IVF-utredningar Klinik, övr Totalt

22 Prestanda i HTLV-diagnostiken Ca 100 st ej bedömbara per år av ca testade Specificitet 99,8% Positivt prediktivt värde 17% (andelen sant positiva av de som testats positivt i screening)

23 HTLV ej bedömbara Av prover skickade för konfirmering till Universitetssjukhuset, Örebro End gp21 Alla med gp21 Tot ej bedömbara Totalt

24 Samtliga ej bedömbara HTLV-prover Endast Alla med Ogiltiga gp46 + Gp46 + gp46 + gp21 + p19 + Summa ej gp21 gp21 Buffertband kontrollband gp21 p24 p19 p19 gp46 p24 bedömbara Totalt Utreds vidare i ett studentprojekt vt 2016

25 HTLV PCR Internationellt referenslab: Imperial College at S:t Mary s Hospital, London (Prof Graham Taylor) Filterpapper Kvalitativ och kvantitativ Typning (HTLV-1 resp 2) I Örebro satt upp en PCR på digital droplet PCR plattform 2015 Kvantitativ (och kvalitativ) Typning Kvantifiering utan standardkurva Utbyte London/Örebro för kvalitetssäkring

26 Sammanfattning Enklare robusta metoder Automation Multiplex