Kvalitetssäkring och Validering Molekylära Metoder. Susanna Falklind Jerkérus Sektionen för Molekylär Diagnostik Karolinska Universitetslaboratoriet

Transkript

1 Kvalitetssäkring och Validering Molekylära Metoder Susanna Falklind Jerkérus Sektionen för Molekylär Diagnostik Karolinska Universitetslaboratoriet

2 Vem/Vad styr oss? 98/79/EG - IVD direktivet Lagen (1993:584) om medicintekniska produkter Socialstyrelsen Läkemedelsverket SWEDAC SOSFS 2008:1 Socialstyrelsens föreskrifter om användning av medicintekniska produkter i hälso- och sjukvården Läkemedelsverkets föreskrifter (LVFS 2001:7) om medicintekniska produkter för in vitro diagnostik SWEDAC DOC 01:55 Validering/verifiering av kvantitativa och kvalitativa metoder - Vägledning ISO 15189

3 Socialstyrelsen - SOSFS 2008:1 5 kap. Egentillverkade medicintekniska produkter Krav på egentillverkade medicintekniska produkter 1 Egentillverkade medicintekniska produkter ska i tillämpliga delar uppfylla de krav som ställs på CE-märkta medicintekniska produkter i 1. lagen (1993:584) om medicintekniska produkter, 2. Läkemedelsverkets föreskrifter (LVFS 2003:11) om medicintekniska produkter, 3. Läkemedelsverkets föreskrifter (LVFS 2001:7) om medicintekniska produkter för in vitro diagnostik 4 Vårdgivaren ska ansvara för att det inte ställs lägre krav på de egentillverkade medicintekniska produkternas säkerhet och medicinska ändamålsenlighet än på CE-märkta produkter.

4 Läkemedelsverket - LVFS 2001:7 Analytisk och diagnostisk sensitivitet Analytisk och diagnostisk specificitet Noggrannhet och mätosäkerhet Reproducerbarhet Repeterbarhet och precision Spårbarhet genom kända referensmetoder och referensmaterial Livslängd och stabilitet (transport och lagring) Bruksanvisning på svenska Genomförande av riskanalys

5 SWEDAC - ISO DOC 01:55 Vägledning Validering Fastställer att metoden mäter det man har för avsikt att mäta Verifiering Bekräftar att metoden uppför sig på ett specificerat sätt. Om en metod är väldokumenterad t ex. genom publikation i facktidskrift kan valideringen styrkas med en Verifiering.

6 Metodens ursprung påverkar omfattningen av valideringen. Alternativ 1 Metod som är utvecklad och validerad för ett speciellt instrument Leverantörens validering kan accepteras efter bedömning av leverantörens bifogade dokumentation. Även ett annat laboratoriums validering kan accepteras, efter bedömning av valideringsprotokollet. Alternativ 2 Metod som anpassas till ett instrument och som avser vedertagen metod där flera än en leverantör alternativt egna program/moment/komponenter förekommer. Om validerade komponenter från flera leverantörer används åligger det laboratoriet att verifiera att specificerade krav i metoden uppfylls i sin helhet. Om komponenter inte är validerade ska laboratoriet genomföra en tillräckligt omfattande validering. Alternativ 3 Tillämpning av en metod publicerad i vetenskaplig litteratur eller modifiering av tidigare ackrediterad metod. I detta fall måste valideringen/verifieringen vanligen ges en större omfattning än i fall 1 och 2. I de fall där metoden är allmänt etablerad inom professionen kan validering/verifiering ges en mindre omfattning (motsvarande den för Alternativ 1). Alternativ 4 Egenutvecklad metod. För egenutvecklade metoder krävs en utförlig validering.

7 Analytisk Sensitivitet och Specificitet Analytisk Sensitivitet Den minsta mängd mål- DNA/RNA som metoden korrekt kan detektera = detektionsgräns Bakterier: Viable count, Virus: referensmaterial, paneler Analytisk Specificitet Primer/probsekvens, annealingtemp, korsreaktivitet Metodens förmåga att bestämma enbart mål DNA/RNA, och identifiera sant negativa prov

8 Klinisk Sensitivitet och Specificitet Klinisk Sensitivitet Klinisk Specificitet Andelen sanna sjukdomsfall som påvisas med metoden Andelen friska som får negativt testresultat med metoden Referensmetod/jämförelsemetod där fynden korreleras till sjukdom/friskhet Molekylärbiologiska metoder ofta känsligare än referensmetoden vilket ger lägre specificitet, konfirmera m sekvensering eller annan metod.

9 Analytisk vs Klinisk Specificitet 100% Analytisk Specificitet 100% Klinisk Specificitet Friskt bärarskap (ingen sjukdom = falskt positiv) Utsöndrat DNA/RNA efter behandling Kontaminant Bifynd

10 Positivt Prediktivt Värde Sannolikheten att ett positivt utfall i en metod är sant positivt. Positivt prediktivt värde = sant positivt/(sant positivt + falskt positivt) (sensitiviteten)(prevalensen) / ((sensitiviteten)(prevalensen) + (1- specificiteten)(1-prevalensen))

11 Negativt Prediktivt Värde Sannolikheten att ett negativt utfall i en metod är sant negativt. Negativt prediktivt värde = sant negativt/(sant negativt + falskt negativt) (specificiteten)(1-prevalensen) / ((specificiteten)(1-prevalensen) + (1- sensitiviteten)(prevalensen))

12 Prevalensens betydelse Sensitivitet 99,9% Specificitet 99,8% Prevalens 5% PPV= (0.999)(0.05) / ((0.999)(0.05) + ( )(1-0.05))=96% Prevalens 0.2% PPV=50% Lika många sant positiva som falskt positiva

13 Repeterbarhet Reproducerbarhet Robusthet Repeterbarhet %CV Reproducerbarheten %CV Alla faktorer hålls konstanta En eller flera faktorer varieras Robusthet Lotberoende, personberoende osv

14 Kontroller Interna kontroller Driftkontroll Positiv PCR-kontroll Internkontroll /Inhibitionskontroll /extraktionskontroll Negativa kontroller, drift o PCR Standardkurva Externa kontroller Paneler Flerlabsjämförelser

15 Ct-värde Driftkontroller Driftkontroll standardavvikelser HSV 1 blåsor, HSV 1 +3 SD -3 SD + 2SD -2 SD 26 Datum

16 CP-värde Driftkontroll standardavvikelser Parotit, Agens +3 SD + 2SD -2 SD -3 SD Datum

17 Ct-värde PCR kontroll standardavvikelser HSV 1 blåsor, HSV 1 +3 SD -3 SD + 2SD -2 SD Datum

18 Internkontroll Negativt prov Internkontroll måste vara positiv för godkänd analys Positivt prov Internkontroll kan vara positiv eller negativ, pga kompetition

19 Mutationer? Håll koll på amplifieringsplottarna Håll koll på statistiken Håll koll på sekvenser i GenBank Håll koll på omvärlden Kvalitetspaneler

20 TACK!