Screening av blodburna infektioner. HIV-screening, gammal och ny metodik

Transkript

1 Screening av blodburna infektioner HIV-screening, gammal och ny metodik

2 Historik Syfilis VDRL-test Hepatit B HBsAg 1985 HIV-antikroppar 1991 Hepatit B, anti-hbc

3 Hepatit B Hepatitis B Diagnostic Profile Duration Incubation (4-12 weeks) Acute Infection (2 weeks 3 months) Early Recovery (3-6 months) Recovery (6-12 months) (Years) Anti-HBc Total Relative Concentration HBsAg HBeAg Symptoms Anti-HBc IgM Anti-HBs Anti-HBe Time

4 Historik 1991 HIV 1 och HIV 2 antikroppar 1992 Hepatit C antikroppar 1994 HTLV 1+2 antikroppar 2010 HIV antigen/antikroppstest NAT-tester?

5 HIV / AIDS Första fallen av AIDS beskrivs HIV-1 upptäcktes , retrovirus HIV-2 virus upptäcktes Infekterar celler med CD4 protein, till exempel T4- lymfocyter, monocyter och makrofager. Virus integrerar sin genetiska information i värdcellen, och kan när som helst börja replikera igen

6 HIV / AIDS i världen 37 miljoner människor i världen lever med HIV C:a 3 miljoner dödsfall årligen Totalt har c:a 30 miljoner dött av AIDS sedan första fallet diagnosticerades 1981.

7

8 A global view of HIV infection 33 million people [30 36 million] living with HIV, Report on the global AIDS epidemic

9 HIV / AIDS i Sverige T.o.m dec har 7500 patienter rapporterats med HIV. C:a 2050 har insjuknat i AIDS. C:a 1930 har avlidit. C:a 5000 patienter inskrivna vid HIVkliniker. 70% av dessa behandlas med antiviral terapi. 448 nya fall 2008.

10

11 HIV-infektion HIV RNA HIV antibodies HIV antigen 2w 4w 2-3 mon after infection (11-28d) years

12 HIV Diagnostik Screeningtester som bygger på EIA-teknik Upprepad positivitet Konfirmerande tester Antigentest WB-test RNA-påvisning Flera antikropps- eller kombinationstester B-prov

13 HIV screeningtest gen 2 gen 3 gen 4 gen Helt viruslysat Indirekt rekomb ± syntetiska ag Indirekt, kompetitiv rekomb ± syntetiska ag Sandwich antikroppar + recomb ± synt ag Sandwich + indirekt IgG IgG IgM, IgG antigen, IgM, IgG

14 HIV screening Obligatorisk Blod och plasmagivare IVF-patienter Donatorer (organ, vävnad, modersmjölk) Övriga Gravida Inför operation STI-kliniker Ungdomsmottagningar Stickincidenter

15 HIV-screening i Örebro län År invånare prover från blod- och plasma-givare kliniska prover 13 HIV positiva individer, nyupptäckta.

16 HIV screening vid USÖ Fr.o.m 1999 tredje generationens EIA-test (Abbott Murex HIV 1.2.O) Fr.o.m maj 2003 Kombotest (Abbott AxSYM HIV Ag/Ak Kombo) Fr.o.m januari 2005 Kombotest (Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ak Kombo

17 Murex 1.2.O Tredje generationens antikroppstest Syntetisk peptid HIV-1 (O), rekombinant protein från höljet hos HIV-1 och HIV-2 samt HIV Coreprotein Serum och diluenttillsats med en pipetteringsrobot. Tillsats av reagens manuellt, tvätt med separat tvättapparat, avläsning med Multiscan spektrofotometer Hög manuell arbetsinsats Carry-over effekter vid starkt positiva prover Ingen random access

18 Automatiserade analyser PRISM ARCHITECT AxSYM

19 Abbott AxSYM HIV Ag/Ak Kombo 2002 Microparticle Enzyme Immunoassay (MEIA) Rekombinant HIV antigen (transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O och HIV-2) och HIV p24 monoklonala antikroppar. Flourescensproduktens bildningshastighet jämförs med ett fastställt cut-offvärde Första resultat efter 30 minuter, 50 test/timme.

20 Abbott ARCHITECT HIV Ag/ Kombo 2005 Chemiluminescent Microparticle Immunoassay (CMIA) Recombinant HIV-1 and HIV-2 antigen (transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O och HIV-2) och monoklonala antikroppar mot HIV p24 antigen. Energi frigörs som en ljusblixt, vilken mäts av instrumentets optiska system. Första resultat efter 30 minuter, 130 test/timme.

21 Assay Design Anti-HIV Antibody Detection Conjugate Microparticle rhiv-1 Group M Envelope Protein,(gp 41) rhiv-2 Envelope Protein, (gp36) rhiv-1 Group O Envelope Protein, (gp41) rhiv-1 Group M Envelope Protein Conjugate HIV-2 Peptide Conjugate HIV-1 Group M Peptide Conjugate rhiv-1 Group O Envelope Protein Conjugate Abbott diagnostic division

22 Assay Design HIV p24 Antigen Detection Microparticle Monoclonal Ab (Conformational) Conjugate Monoclonal Ab (Conformational) Sample Specimen Diluent Microparticle 18 min Incubation 4 min Wash Add 50 µl Conjugate Incubation Wash Pretrigger Trigger Report Result Abbott diagnostic division

23 Abbott Prism HIV Ag/Ab Kombo 2005 Chemiluminescent Immunoassay (ChLIA) Rekombinant HIV-1 and HIV-2 antigen (transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O och HIV-2) och monoklonala antikroppar mot HIV p24 antigen. Energi frigörs som en ljusblixt, vilken mäts av instrumentets optiska system 240 test/timme

24 Utvärdering av analyserna Sensitivitet Utvalda konfirmerat positiva ur prod. 90 HIV-1 och ~40 HIV-2 från SMI 4 serokonversionspaneler (3 köpta 1 egen) 13 patientfall, 27 prover blev tidigare positiva Spädd p24 antigen Specificitet Jämförelser med tredjegenerationstester Murex 1.2.O (USÖ) AxSYM HIV 1/2 go (KS) PRISM HIV O Plus (KS)

25 Konf. positiva och p24 spädning Fourth generation assays AxSYM HIV Ag/Ab Combo ARCHITECT HIV Ag/Ab PRISM HIV Ag/Ab HIV-1 selected HIV-2 selected HIV-1 panel HIV-2 panel HIV p24 antigen pg/ml 32/32 13/13 90/90 26/ /32 16/16 90/90 36/ /18 4/4 83/83 16/16 25

26 Serokonversionspaneler Days since first bleed HIV antigen test HIV-1 RNA Third generation assay Fourth generation assays PRB x10 3 0,41 0,55 0,38 0,21 PRB x10 4 0,4 0,55 0,83 0,44 PRB >8x10 5 0,48 4,96 15,07 8,42 PRB >8x ,53 16,91 11,39 PRB x ,56 5,25 12,8 5,85 PRB x ,52 5,26 20,19 5,36 ORE >8x10 5 0,35 6,24 130,78 NT ORE NT NT 0,4 NT 153,94 NT ORE >8x10 5 5,19 21,16 652,57 NT ORE NT NT 20,01 19,41 196,68 NT ORE NT NT 20 8,91 297,1 NT ORE NT NT 15,71 7,44 211,9 NT ORE NT NT 16,53 9,19 168,5 NT ORE ,68 NT 20 9,67 122,62 NT

27 Diagnostisk sensitivitet 13 patienter med primär HIV-infektion (PHI) inkluderades, 27 prover. Samtliga 27 prover var positiva med kombotest, men samtidigt negativa med antikroppstest (RIBA eller WB).

28 Exempel PHI-patient Man, 56 år. Feber, diarré en vecka efter oskyddad sex med ny partner. Utslag tillkommer fyra dagar senare. Söker primärt på STI-mottagning, där HIV-test rutinmässigt erbjuds. Kombo test utfaller reaktivt, medan antikroppstest var negativt på detta första prov.

29 Diagnostisk sensitivitet, patient 2 Days since symptom debut HIV Ag/Ab Combo S/CO Axs ARC HIV p24 Ag EIA S/CO Anti-HIV EIA S/CO Anti-HIV RIBA HIV RNA 9 Pos Pos Pos Neg Neg Pos Pos Pos 14 Pos >9 Indet gp41 2.3x10 6 copies/ml 25 Pos Pos Pos Pos Gp41,p copies/ml

30 Exempel PHI-patient Man 29 år. Feber och kroppsvärk sedan 2 veckor, varit i Kina Söker på vårdcentral en dag efter symtomdebut Kombotest utfaller positivt, antikroppstest är negativt.

31 Diagnostisk sensitivitet, patient 5 Days since symptom debut HIV Ag/Ab Combo S/CO Axs ARC HIV p24 Ag EIA S/CO Anti-HIV EIA S/CO Anti-HIV RIBA 1 Pos Pos Pos Neg Neg Pos Pos Pos Pos Indet >9 gp41 26 Pos Pos Pos Pos P24, gp41

32 Exempel PHI patient Man, 23 år, oskyddad sexkontakt Mononukleosliknande bild, lymfopeni, leverpåverkan Axsym HIV-combo positiv ( 4,78 x cut-off), ARCHITECT HIV-combo positiv (30,79x cut-off), 6 dagar efter symtomdebut Antikroppstester negativa (SMI), t.o.m dag 10

33 Specificitet Jämförelse med äldre, tredje generationens EIA-analys; Murex HIV 1.2.O Proverna delades in i fyra grupper; blod- och plasmagivare, nyanmälda givare, gravida kvinnor och övriga kliniska prover. Specificitet räknades ut för varje grupp och totalt för samtliga grupper

34 MUREX HIV Antal testade Antal reaktiva (init/upprep) Specificitet (init/upprep) Konfirmerade Plasmagivare ,58% 99,91% 0 Blodgivare ,65% 99,91% 0 Nyanmälda ,82% 99,47% 0 givare Kliniska, exl ,68% 99,63% 12 (10 ind.) gravida Gravida ,48% 99,39% 0 Totalt ,42% 99,82% 12 (10 ind.)

35 AxSYM HIV Antal Antal reaktiva Specificitet Konfirmerade Combo testade (init/upprep) (init/upprep) Plasmagivare ,88% 99,97% 0 Blodgivare ,84% 99,96% 0 Nyanmälda ,75% 99,75% 0 givare Kliniska, ,55% 99,76% 17 (12ind.) excl. gravida Gravida ,31% 99,43% 0 Totalt ,80% 99,91% 17 (12 ind)

36 Architect HIV Combo Antal testade Antal reaktiva (init/upprep) Specificitet (init/upprep) Konfirmerade Plasmagivare ,85% 99,98% 0 Blodgivare ,86% 99,94% 1 Nyanmälda % 100% 0 givare Kliniska ,69% 99,83% 18 Gravida ,84% 99,92% 0 Totalt ,83% 99,95% 19

37 Specificitet 2 AxSYM HIV 1/2 g O kliniska prover, 38 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys. Prism HIV O Plus blod- och plasmagivare, 116 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys. ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo kliniska prover, 37 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys. Prism HIV Ag/Ab Combo blod- och plasmagivare, 20 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys.

38 Specificitet 2 AxSYM HIV 1/2 g O NA 99,92% PRISM HIV O Plus 99,90% 99,92% ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo NA 99,89% PRISM HIV Ag/Ab Combo 99,86% 99,97%

39 Variationer i specificiet? Assay and Used between Number tested % false reactives reagent lot dates AxSYM HIV Initial Repeat Kombo LU00 (A) May 19-Jun % 0.03% 04090LU00 (B) Jun 05-Jun % a 0.25% b 04276LU00 (C) Jun 24-Sep % 0.11% 07090LU00 (D) Sep 04-Sep % 0.08% 07255LU00 (E) Sep 17-Sep % 0.00% 08017LU00 (F) Oct 01-Oct % 0.04% 08059LU00 (G) Oct 27-Nov % 0.11% 08059LU01 (H) Nov 20-Dec % 0.09% 09235LU00 (I) Dec 15-Dec % 0.10%

40 Variationer i specificiet? Ingen signifikant variation månadsvis Viss batchvariation kunde påvisas Ingen carry-over effekt

41 Sammanfattning Alla tre fjärdegenerations HIV-testerna har hög sensitivitet. Alla tre testerna kan detektera HIV p24-antigen, ner till åtminstone 25 pg/ml Alla tre testerna har hög specificitet (99.97%, 99.98% och 99,97% blod- och plasmagivare, 99,91% resp 99,95% totalt för AxSYM och ARCHITECT). Viss batchvariation kan ses. Inga carry-over effekter observerades, Instrumenten är lätta att arbeta med, och innebär en rationell hantering av stora mängder prover.

42 TACK Sören Andersson, USÖ och SMI Madeleine von Sydow, KS, Solna Lena Jakobsson, Mikrobiologen USÖ Ingmarie Jonsson, Blodcentralen USÖ Monica Ulfström, KS Christina Wallberg, KS Abbott

43