Rubella-IgM-ELA Test PKS medac. Svenska

Transkript

1 RubellaIgMELA Test PKS medac Enzym immunoassay med PipetteringsKontrollSystem (PKS) för detektion av IgMantikroppar mot rubellavirus (röda hund) Svenska PKSVPSW/111104

2 TILLVERKARE medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Fehlandstraße 3 D20354 Hamburg DISTRIBUTION medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Geschäftseinheit Diagnostika Theaterstraße 6 D22880 Wedel Tel./Phone: ++49 / 4103 / Fax: ++49 / 4103 / BESTÄLLNINGAR Tel.: ++49 / 4103 / Fax: ++49 / 4103 / PKSVPSW/111104

3 RubellaIgMELA Test PKS medac Enzym immunoassay med PipetteringsKontrollSystem (PKS) för detektion av IgMantikroppar mot rubellavirus (röda hund) Katalog nr.: 135/PKS ENDAST FÖR IN VITRO DIAGNOSTIK INTRODUKTION Rubellavirus, som orsakar röda hund, tillhör familjen Togaviridae och släktet Rubivirus. Rubellavirus är ett enkelsträngat RNAvirus och representeras av endast en serotyp. Röda hund är en sjukdom som framför allt förekommer i barndomen oftast med ett milt förlopp. Infektionen kännetecknas av ett småfläckigt utslag, följt av svullna lymfkörtlar. Primär virusinfektion under graviditetens första trimester kan leda till infektion av fostret, vilket i sin tur kan ge allvarliga fosterskador (embryopati). Rubellavirus specifika IgMantikroppar kan detekteras redan 4 till 30 dagar efter uppkomsten av utslagen och påvisas därefter under 1 till 4 månader. Därför är RubellaIgMELA test PKS medac en lämplig metod för att ställa diagnosen akut rubellainfektion. I enstaka fall kan IgMsvaret påvisas upp till ett år respektive helt utebliva. Därför ska varje enstaka IgMresultat tolkas tillsammans med anamnes och eventuellt ytterligare undersökningar. Förutom RubellaIgMELA Test PKS medac Kat.nr.: 135/PKS för 96 analyser för vi bland annat följande produkt: RubellaIgGELISA Test PKS medac Kat.nr.: 136/PKS för 96 analyser PKSVPSW/111104

4 TESTPRINCIP Mikrotiterplatta klädd med antihumanigm. IgM från patientens serum binder till plattan. makperoxidaskonjugat kopplat till rubellaantigen binder specifikt till antirubellavirusigmantikropparna (AG = antigen, P = peroxidas). Inkubation med TMBsubstrat (*). Reaktionen stoppas med svavelsyra. Fotometrisk utvärdering. Fördelar med testen Inga ospecifika reaktioner och falskt positiva resultat med reumafaktorer. Ingen blockad av IgMantikroppar med hög IgGtiter. PipetteringsKontrollSystemet kan visuellt kontrollera varje pipetteringssteg med hjälp av färgförändringar. De brytbara stripsen möjliggör ett optimalt utnyttjande av testen. Kan automatiseras med öppna spektrofotometersystem. 135PKSVPSW/

5 FÖRPACKNINGSINNEHÅLL KAT.NR.: 135/PKS 1. MTP Mikrotiterplatta: 12 teststrips à 8 brunnar (med ram och absorberande papper i vakuumförseglad aluminiumpåse), brytbara, rundbottnade, klädda med getantihumanigmantikroppar, BSA och phindikator, bruksfärdig. 2. CONTROL Negativ kontroll (negative control): 2 flaskor à 0,75 ml, humant serum, bruksfärdig, innehåller BSA, phenol, ProClin 300 och gentamycinsulfat. 3. CONTROL + Positiv kontroll (positive control): 2 flaskor à 0,75 ml, humant serum, bruksfärdig, innehåller BSA, phenol, ProClin 300 och gentamycinsulfat 4. WB Tvättbuffert (wash buffer): 1 flaska à 100 ml, PBS/Tween (10x) ph 7,27,4, innehåller ProClin VIRDIL Provspädningsbuffert (sample diluent): 1 flaska à 110 ml, PBS/Tween/BSA, ph 7,27,4, bruksfärdig, innehåller ProClin ANTIGENDIL Antigenspädningsbuffert (antigen diluent): 1 flaska à 14 ml Tris/NaCl, bruksfärdig, innehåller ProClin ANTIGEN Antigen: 4 flaskor à 3,0 ml, rubellavirusantigen/bsa, frystorkat. 8. CON Konjugat (conjugate): 1 flaska 0,3 ml, antirubellavirusiggantikroppar, monoklonala (mus), HRPkonjugerade, röd färg, bruksfärdig, innehåller BSA, phenol, ProClin 300 och gentamycinsulfat. 9. TMB TMBSubstrat: 1 flaska à 10 ml, bruksfärdig. 10. STOP Stopplösning (stop solution): 2 flaskor à 14 ml, 0,5 M svavelsyra (H 2 SO 4 ), bruksfärdig PKSVPSW/111104

6 1. LAGRING OCH HÅLLBARHET Material/Reagens Tillstånd Lagring Hållbarhet Testkit öppnat C utgångsdatum Mikrotiterplatta öppnad C 6 veckor i påsen med absorberande papper Kontroller öppnade C 6 veckor Tvättbuffert spädd C 6 veckor Provspädningsbuffert öppnad C 6 veckor Antigenspädningsbuffert öppnad C 6 veckor AntigenKonjugatblandning bruksfärdig C 1 vecka TMBsubstrat öppnat C 6 veckor Stopplösning öppnad C utgångsdatum Använd inte reagenserna efter utgångsdatum. 2. MATERIAL SOM BEHÖVS MEN INTE MEDFÖLJER FÖRPACKNINGEN 2.1. Dubbelt destillerat vatten (ddh 2 O). Avjoniserat vatten kan leda till störningar i testsystemet Mikroliterpipetter Rena glas och plaströr till spädning av tvättbuffert och prov Utrustning för tvättning av stripsen (multikanalpipett eller en automatisk plattvättare) Inkubator för 37 C Spektrofotometer med filter för våglängderna 450 nm och nm. 3. FÖRBEREDNING AV REAGENSER Ta ur reagensen ur kylskåpet och låt dem rumstempereras före användning. Räkna ut antalet brunnar som behövs Mikrotiterplatta Aluminiumpåsen försluts efter användning tillsammans med det absorberande pappret. För information om lagring och hållbarhet av oanvända brunnar se tabell PKSVPSW/

7 Observera: Brunnarna har en ljusgrön färgton. Eventuellt förekommande grönbruna fläckar i brunnarna beror på produktionen och stör inte analysen Tvättbuffert 1 del tvättbuffert (10 x) spädes med 9 delar destillerat vatten (tex 50 ml tvättbuffert (10 x) spädes med 450 ml destillerat vatten). Till åtta brunnar behövs 10 ml tvättbuffert. Kristaller i tvättbufferten (10 x) kan lösas med hjälp av uppvärmning (max 37 C) och/eller blandning AntigenKonjugatblandning Frystorkat antigen löses med 3,0 ml antigenspädningsbuffert. De förslutna flaskorna skakas försiktigt, för att lösa partiklar som sitter i locket. 60 min innan användning pipetteras 50 µl konjugat till 3,0 ml antigen. Efter att konjugat tillsatts är AntigenKonjugatblandningen röd och färdig för användning. Bruksfärdig AntigenKonjugatblandning är hållbar 1 vecka i kylskåp (2 8 C) (se också 1.)! Varning! Frys ej! Blanda inte testspecifika reagenser (mikrotiterplatta, kontroller, konjugat, antigen, antigen spädning) från olika lotnummer. Dåremot kan provspädningen, tvättbuffert, TMBsubstrat och stopplösning är generellt utbytbara mellan virologiska ELISAtester från medac. Reagenser från andra tillverkare skall inte användas. Endast vid arbete enligt testproceduren och med testkitspecifika reagenser kan tillförlitliga och reproducerbara testresultat uppnås. 4. PROVMATERIAL 4.1. Testen är avsedd för analys av serum Förberedning av serum, såsom inaktivering, är inte nödvändig. Serum ska dock vara fri från mikroorganismer och humanerytrocyter PKSVPSW/111104

8 4.3. Serum spädes 1:100 med provspädningsbuffert. För titerbestämning kan proven spädas ytterligare. 5.A. TESTPROCEDUR 5.1. Öppna mikrotiterplattans förpackning och ta ut önskat antal brunnar (se.3.1.). Brunnarna är färdiga för användning och måste inte förtvättas Brunn A1 lämnas tom som blank (se 6.A.). Pipettera 50 µl av vardera utspätt prov, negativ och positiv kontroll sätts i dubbla brunnar. Efter att prov och kontroller pipetterats (phneutrala respektive basiska vätskor) färgas lösningen blå. Vid utebliven färgförändring i en brunn har inte prov eller kontroll tillsatts. I förekommande fall kan mikrotiterplattan i väntan på vidare bearbetning förvaras i en fuktig kammare i 2 8 C under maximalt 60 min Brunnarna inkuberas 60 min (± 5 min) i 37 C (± 1 C) fuktig kammare eller förslutna med folie Förbered AntigenKonjugatblandningen (se 3.3.) Efter inkubationen tvättas brunnarna tre gånger med vardera 200 µl tvättbuffert. Se till att alla brunnar fylls med buffert vid tvättproceduren. Efter tvätten knackas mikrotiterplattan på absorberande papper. Tillåt inte brunnarna att torka ut! Fortsätt direkt! 5.6. Pipettera AntigenKonjugatblandningen (rödfärgad) i alla brunnar (förutom A1). Vid manuellt arbete pipetteras vardera 50 µl AntigenKonjugatblandning i brunnarna. Beakta: Vid arbete med automatiserade system ska 60 µl AntigenKonjugatblandning tillsättas brunnarna pga ökad dunstning i inkibationskammaren Brunnarna inkuberas 60 min (± 5 min) i 37 C (± 1 C) (fuktig kammare eller förslutna med folie). 135PKSVPSW/

9 5.8. Efter inkubationen tvättas brunnarna igen (se 5.5.) Pipettera 50 µl TMBsubstrat till varje brunn (även A1) och inkubera 30 min (± 2 min) i 37 C (± 1 C) i mörker (fuktig kammare eller förslutna med folie). Positiva prov blir blåfärgade Tillsätt 100 µl stopplösning till varje brunn (även A1). Det sker ett färgomslag från blått till gult. Innan absorbansen mäts torkas brunnarna av underifrån. Se dessutom till att inga luftbubblor finns i brunnarna! Avläs absorbansen inom 15 min efter stoppad reaktion! 5.B. TABELL FÖR TESTPROCEDUREN Negativ Kontroll Positiv Kontroll Prov Blank (A1) Negativ kontroll 50 µl Positiv kontroll 50 µl Prov 50 µl Inkubera 60 min i 37 C, tvätta 3 x med 200 µl tvättbuffert AntigenKonjugatblandning 50/60 µl *) 50/60 µl *) 50/60 µl *) Inkubera 60 min i 37 C, tvätta 3 x med 200 µl tvättbuffert TMBsubstrat 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl Inkubera 30 min i 37 C i mörker Stopplösning 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Fotometrisk mätning vid våglängden 450 nm (Ref nm) *) manuell/automatisk bearbetning (se 5.6.) 7 135PKSVPSW/111104

10 6.A. TESTBEDÖMNING (VALIDITET) Absorbansen läses vid våglängden 450 nm (Ref nm). Blankabsorbansvärdet (brunn A1) subtraheras från övriga absorbansvärden. Negativa kontrollens medelabsorbansvärde ska vara < 0,100. Positiva kontrollens medelabsorbansvärde ska vara > 0,800. Cutoff = Negativa kontrollens medelabsorbansvärde + 0,320 Gränsområde = Cutoff ± 10 % 6.B. TOLKNING AV TESTRESULTATEN/METODENS GRÄNSER Prov med absorbansvärde under gränsområdet svaras NEGATIVA. Prov med absorbansvärde inom gränsområdet svaras GRÄNSVÄRDEN. Gränsvärden kontrolleras med nytt prov efter 14 dagar. Provet analyseras tillsammans med det tidigare provet och titerförändringar undersöks. Prov med absorbansvärde över gränsområdet svaras POSITIVA. Testresultaten ska alltid tolkas i kombination med patientens kliniska bild och vidare diagnostiska kriterier. I sällsynta fall kan serum innehållande ANA leda till falskt positiva resultat. Starkt lipemiska prover ger förhöjda absorbansvärden, vilket kan leda till felaktiga resultat. Höga hemoglobin och bilirubinkoncentrationer har ingen inverkan på testresultaten. 135PKSVPSW/

11 7. PRESTANDA Följande prestanda fastställdes i den diagnostiska utvärderingen. 7.A. SENSITIVITET OCH SPECIFICITET Totalt 466 sera från friska blodgivare, patienter med misstänkt akut rubellavirus infektion, patienter med IgMantikroppar mot andra virus (CMV, HSV, VZV, EBV, Parvo B19) samt sera innehållande ANA resp. reumafaktorer testades. Resultaten jämfördes med en högspecifik ELISA (referensmetod) som används rutinmässigt i diagnostiken. Resultaten visas i tabellen nedan. Referensmetod negativ positiv RubellaIgMELA Test PKS negativ positiv Sensitivitet = 99,03 % Specificitet = 99,17 % Positivt prediktionsvärde: 97,14 % Negativt prediktionsvärde: 99,72 % 7.B. PRECISION Prov Intraassayvariation Prov Interassayvariation MV OD S VK (%) n MV OD S VK (%) n NK 0,025 0, NK 0,024 0, PK 1,235 0, PK 0,962 0, Nr. 1 1,400 0, Nr. 4 0,922 0, Nr. 2 0,930 0, Nr. 5 0,230 0, Nr. 3 0,488 0, Nr. 6 1,159 0, Nr. 7 0,426 0, NK = Negativ kontroll; PK = Positiv kontroll ALLMÄNNA HANTERINGSTIPS Förväxla ej flaskorna och dess korkar för att undvika kontaminationer. Direkt efter användning försluts flaskorna för att undvika dunstning och kontamination med mikroorganismer. 9 Reagenserna ska direkt efter användning lagras enligt föreskrift, för att upprätthålla hållbarheten. 135PKSVPSW/111104

12 FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER De nationella arbetsskyddsföreskrifterna ska beaktas. Reagenser med humant ursprung har testats negativa för HBsAg, antihiv 1/2 och antihcv. Trots detta ska dessa reagenser och reagenser av animaliskt ursprung (se förpackningsinnehåll) hanteras som potentiellt smittsamma för att minimera risken för smitta. AVFALLSHANTERING Kemikalier och lösningar som blir över klassas alltid som riskavfall och ska avfallshanteras enligt lokala föreskrifter. Ansvarig myndighet informerar om avfallshantering av riskavfall. Översättningsdatum: LITTERATUR Enders, G.: Röteln. Fortschr. Klin. Virol. München, , (1986). Hermann, K.L.: Available Rubella serological tests. Rev. Infect. Dis. 7, , (1985). Pustowoit, B., Hofmann, J. und Trauer, H.: Rötelnvirus, in: Diagnostische Bibliothek, Bd. 1, Virusdiagnostik, Porstmann, T. (Hrsg.), Blackwell WissenschaftsVerlag, , (1996). Selb, B.: Rötelnvirus, in: Medizinische Virusdiagnostik, Selb, B. (Hrsg.), Umschau Verlag, , (1992). Thomas, H.I., MorganCapner, P., Roberts, A., Hesketh, L.: Persistent rubellaspecific IgM reacitivity in the absence of recent primary rubella and rubella reinfection. J. Med. Virol. 36, , (1992). Wolinsky, J.: Rubella, in: Virology, 2. Edition, Field, B. N., Kiepe, D. M. et al. (Eds.), Raven Press, Ltd., New York, (1990). 135PKSVPSW/