3. PRODUKTINFORMATION Den tillhandahållna mängden reagens är beräknad för 96 test. Alla reagenser är enbart avsedda för in vitro-diagnostik.

Transkript

1 Anti-EBV EA IgG ELISA Enzymimmunoassay för in-vitro-påvisning av IgG-antikroppar mot Earlyantigenerna (EA) p54/p138 hos Epstein-Barr virus (EBV) i humant serum eller plasma 1. ANVÄNDNINGSOMRÅDE Anti-EBV EA IgG ELISA är ett in vitro-diagnostikum för påvisning av IgG-antikroppar mot Early-antigenerna (EA) p54 och p138 hos EBV. De resultat som uppnås med Anti-EA IgG-testen är tillsammans med patientens kliniska bild och ytterligare undersökningar som t ex Anti-EA IgM, Anti-EBNA-1 IgG eller Anti-viralkapsidantigen (VCA) IgM/IgG av stor betydelse för serologisk diagnos av EBV-infektioner. En primärinfektion med EBV kan leda till infektiös mononukleos (IM = körtelfeber) (1,2). Denna sjukdom drabbar framför allt äldre tonåringar och unga vuxna. Den akuta sjukdomen yttrar sig bl a genom följande symtom: feber, faryngit, tonsillit, lymfadenopati, illamående, huvudvärk, myalgier, splenooch hepatomegali, hudutslag och leukocytos (2). Liknande symtom kan även orsakas av andra patogener som t ex cytomegalovirus, toxoplasma gondii, rubellavirus, hepatitvirus och HIV. Anti-EBV EA IgG ELISA är lämpad för identifiering av en EBV-infektion. 2. PRINCIP Anti-EBV EA IgG ELISA är en högkänslig indirekt enzyme immuno sorbent assay (ELISA) för påvisning av EBV-specifika antikroppar i serum eller plasma. Om EBV IgG-antikroppar förekommer i provet interagerar dessa med de rekombinanta (rec.) antigenerna p54 och p138 (3-5) på mikroplatta ans fasta fas. Ospecifikt bundet material avlägsnas genom en tvättprocedur. Under det andra inkubationssteget påvisas de bundna antikropparna klassspecifikt (IgG). Detta sker genom tillsättning av en enzymmärkt monoklonal antikropp riktad mot humant IgG (peroxidas). Ospecifikt bundet konjugat avlägsnas i ett nytt tvättsteg. För den sista inkubationen fylls substratlösning (TMB, 3,3 5,5 - tetrametylbensidin) i brunnarna. Denna enzymreaktion stoppas genom tillsättning av svavelsyra och den optiska densiteten (OD) mäts i en spektrofotometer vid 450 nm vid en referensvåglängd på nm. 3. PRODUKTINFORMATION Den tillhandahållna mängden reagens är beräknad för 96 test. Alla reagenser är enbart avsedda för in vitro-diagnostik. TYP AV REAGENS Märkning Typ av reagens Innehåll R1 Microplate Mikrotiterplatta 12 separata strips med vardera 8 brunnar, belagda med rec. EBV EA p54/p138 (koncentration 0,4 μg/ml) 1 R2 R3 R4 R5 EBV Concentrated Washing Solution (x500) EBV EA IgG Negative Control EBV EA IgG Standard EBV EA IgG Positive Control Koncentrerad Tvättlösning (500x) Konserveringsmedel: 0,01% 2-bromo-2-nitro-1,3-propanediol EBV EA IgG-Negativ Kontroll Humant serum negativt för IgG-antikroppar mot EBV-EA samt negativt för HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 och anti-hcv Konserveringsmedel: 0,005% gentamycin, 0,05% streptomycin, 0,05% penicillin V EBV EA IgG Standard Humant serum reaktivt för IgG-antikroppar mot EBV-EA samt negativt för HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 och anti-hcv Konserveringsmedel: 0,005% gentamycin, 0,05% streptomycin, 0,05% penicillin V EBV EA IgG-Positiv Kontroll Humant serum reaktivt för IgG-antikroppar mot EBV-EA samt negativt för HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 och anti-hcv Konserveringsmedel: 0,005% gentamycin, 0,05% streptomycin, 0,05% penicillin V R6 Conjugate Anti-Human IgG-Konjugat Monoklonal antikropp, peroxidasmärkt Konserveringsmedel: 0,025% penicillin V, 0,025% streptomycinsulfat, < 1,5% ProClin x 6 ml En utspädd 1 x 1,2 ml 1 x 1,2 ml 1 x 1,2 ml 1 x 15 ml 1

2 R7 EBV Sample Diluent Spädningsbuffert Konserveringsmedel: 0,01% neomycinsulfat, 0,03% kloramfenicol R9 EBV Chromogen Substratlösning TMB 3,3,5,5 tetrametylbensidin (TMB)-lösning < 0,05 % i H 2 O Beakta kapitlet "Varningar och Försiktighetsåtgärder" R10 EBV Stopping Stopplösning Solution Svavelsyra < 1N H 2 SO 4 Storage Bag Förvaringspåse Polyetylenpåse för förvaring av återstående mikroteststrips Self-adhesive Folie transparent foils Självhäftande, genomskinlig folie för att täcka över brunnarna under inkubation Konserveringsmedel (KVM): total koncentration < 0,11% 1 x 45 ml 1 x 13 ml 1 x 15 ml 1 4 HÅLLBARHET OCH FÖRVARING Reagenserna kan användas fram till det bäst-före-datum som anges på respektive etikett under förutsättning att de lagras vid 2-8 C. Efter det att komponenterna öppnats är de hållbara 30 dagar. Om reagenserna används för flera tester skall de omedelbart lagras vid 2-8 C efter användning. Mikroplatta är innesluten i en aluminiumpåse som även innehåller ett torkmedel. Se till att förvaringspåse har rumstemperatur innan påsen öppnas. Lägg tillbaka oanvända strips i ziplock-påsen med torkmedlet och förvara vid 2-8 C. Berör inte brunnarnas botten eller övre kant med fingrarna. 4. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Reagenserna får ej förtäras. Undvik kontakt med ögon, hud och slemhinnor. Alla prov, kontroller och material som används för att utföra testen måste betraktas som potentiellt infektiösa. Kontrollerna är av humant ursprung och har visats negativa för anti- HIV-1/-2, anti-hcv, HBsAG, anti-lues och stegrade transaminaser. Pipettera inte med munnen. Använd skyddshandskar, skyddsklädsel och skyddsglasögon i enlighet med god laboratoriesed. Vätskor och icke brännbara material skall dekontamineras med natriumhypoklorit (slutkoncentration: 3%, inverkningstid: minst 30 minuter). Flytande avfall som innehåller syror måste neutraliseras innan det kasseras. Den använda mikroplatta liksom allt laboratoriematerial som skall återanvändas måste autoklaveras vid 121 C under 1 timme. Substratlösning (R9) är ljuskänslig och måste därför skyddas mot ljus. Testen får endast utföras av skolad och auktoriserad laboratoriepersonal. Var noga med att arbeta så sterilt som möjligt. Informera tillverkaren om original-testförpackningen är skadad. VARNING: Vissa av reagenserna innehåller ProClin 300 < 1,5 % För risker och rekommendationer säkerhet hänvisas till tabellen i slutet av bipacksedeln. 5. PROVTAGNING, PROVFÖRVARING OCH TRANSPORT Använd färska serum- eller plasmaprov som inte uppvisar hemolys. Starkt lipemiska, ikteriska eller mikrobiell kontaminerade serum- eller plasmaprov liksom koncentrerade immunglobulinpreparationer kan leda till otillförlitliga testresultat. Undvik upprepad infrysning och upptining av proven. Om proven skall skickas skall de förpackas i enlighet med de lagar och bestämmelser som gäller för transport av infektiöst material. Proven skall inte inaktiveras, eftersom ospecifika reaktioner i så fall kan uppstå. 6. MATERIAL SOM ERFORDRAS MEN EJ MEDFÖLJER Mikropipetter, spektrofotometer (450 nm, referensvåglängd nm), konventionell ELISA-tvättapparat (med bottentvättning) och utrustning för inkubation (37 C) av mikroplatta. 7. TESTFÖRFARANDE REAGENSERNAS FÖRBEREDELSE Späd tvättbuffertkoncentratet (R2) med avjoniserat eller destillerat H 2 O (1:501). Bruksspädningen är hållbar 1 vecka om den lagras vid 2-8 C. Om kristallisation uppträder vid lagring vid 2-8 C kan tvättbuffertkoncentratet lösas upp vid 37 C. Blanda noggrant före spädning. Alla andra testkomponenter är bruksfärdiga. Alla reagenser är lotspecifika och får inte bytas ut mot reagenser från andra loter eller tester. Använd inte reagenser från andra tillverkare tillsammans med reagenserna i detta testkit. TESTUTFÖRANDE Instruktionerna skall följas strikt (se pipetteringsschema). Spädning av prov 1:21 med förspädning i rör: Förspäd Positiv Kontroll (R5), Negativ Kontroll (R3), Standard (R4) och prov i volymförhållandet 1:21 i rör (t ex 25 μl kontrollserum eller prov μl Spädningsbuffert (R7)). Blanda noggrant. 2

3 Spädning av prov 1:21 med spädning direkt i plattan: Pipettera 200 μl Spädningsbuffert (R7) i varje brunn. Spädning direkt i mikroplattan är framför allt lämpligt när man använder automatisk pipetteringsutrustning. Om direktspädningen i plattan görs manuellt är det viktigt att undvika ospecifika proteinbindningar genom att iaktta följande: Pipettera först 200 μl Spädningsbuffert (R7) i brunnarna och tillsätt först därefter 10 μl av prov eller kontrollserum. Blanda 5 till 7 gånger när prov/kontrollserum tillsätts. TVÄTTPROCEDUR Tvättstegen är kritiska moment under testen. Otillräcklig tvättning resulterar i dålig precision och ospecifika reaktioner. Tvätta 5 gånger med tvättbuffert. För detta ändamål skall vätskan i brunnen sugas bort. Dispensera med 300 μl tvättbuffer. Upprepa denna procedur 5 gånger. Knacka försiktigt ren plattan efter tvätt och fortsätt omedelbart med testen. Låt inte plattan torka ut. PIPETTERINGSSCHEMA FÖR KVALITATIV BESTÄMNING (FÖRSPÄDNING I RÖR) Se till att alla reagenser och prov har rumstemperatur innan testen påbörjas. Kontrollsera och blank skall pipetteras sist. Börja med inkubationen omedelbart efter det att kontroller och prov har pipetterats. Steg 1 A1/B1 C1/D1 E1/F1 G1 Blank 200 µl R Negativ Kontroll (R3) dubblett µl R3 - - Positiv Kontroll (R5) dubblett µl R5 - Prov 1: µl Prov Täck Mikrotiterplatta med folie (bortfaller om ELISA* processor används). Inkubation 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Processor*: 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Tvätta 5 ggr Utspädd Tvättlösning (R2) 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl Steg 2 Konjugat (R6) 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Täck Mikrotiterplatta med folie (bortfaller om ELISA* processor används). Inkubation 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Processor*: 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Tvätta 5 ggr Utspädd Tvättlösning (R2) 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl Steg 3 Substratlösning (R9) 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Inkubation 30 ± 1 min., vid rumstemperatur i mörker Processor*: 15 ± 1 min., vid rumstemperatur i mörker Stopplösning (R10) 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Mät absorbansen vid 450 nm så snabbt som möjligt eller inom 15 min efter teststopp. Referensvåglängd: nm. PIPETTERINGSSCHEMA FÖR KVANTITATIV BESTÄMNING (FÖRSPÄDNING I RÖR) Se till att alla reagenser och prov har rumstemperatur innan testen påbörjas. Kontrollsera och blank skall pipetteras sist. Börja med inkubationen omedelbart efter det att kontroller och prov har pipetterats. Steg 1 A1/B1 C1/D1 E1/F1 G1 Blank 200 µl R Negativ Kontroll (R3) dubblett µl R3 - - Standard (R4), Positiv Kontroll (R5) dubblett µl R4/R5 - Prov 1: µl Prov Täck Mikrotiterplatta med folie (bortfaller om ELISA* processor används). Inkubation 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Processor*: 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Tvätta 5 ggr Utspädd Tvättlösning (R2) 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl Steg 2 Konjugat (R6) 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Täck Mikrotiterplatta med folie (bortfaller om ELISA* processor används). Inkubation 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Processor*: 30 ± 1 min., 37 ± 1 C Tvätta 5 ggr Utspädd Tvättlösning (R2) 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl Steg 3 Substratlösning (R9) 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Inkubation 30 ± 1 min., vid rumstemperatur i mörker Processor*: 15 ± 1 min., vid rumstemperatur i mörker Stopplösning (R10) 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Mät absorbansen vid 450 nm så snabbt som möjligt eller inom 15 min efter teststopp. Referensvåglängd: nm. * Användaren måste validera testen självständigt och under eget ansvar när en ELISAprocessor används. 3

4 8. TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL Alla tillverkade reagenser bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagandet av råmaterial till kommersialiseringen av den slutgiltiga produkten. Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och lanseras på marknaden endast om det överensstämmer med fördefinierade acceptanskriterier. Handlingar som beskriver produktion och kontroller av varje enskilt parti sparas hos Bio- Rad. 9. RESULTATENS TOLKNING Prov med ett extinktionsvärde som ligger under gråzonen skall bedömas som negativa. Om ett prov har ett extinktionsvärde som är lika stort eller större än cut-off-värdet, är provet positivt för EBV EA IgG-antikroppar. Om extinktionsvärdet för ett prov fortfarande ligger inom gråzonen efter upprepad testning, rekommenderas det att testa ett uppföljande prov (osäkert resultat). BERÄKNING AV CUT-OFF-VÄRDET OCH GRÅZONEN Cut-off-värdet beräknas utifrån medelvärdet för den Negativa Kontrollens optiska densitet (R3 X ) plus 0,200: Cut-off-värde = R3 X + 0,200 Gråzonen ligger inom området mellan cutoff-värdet och cut-off-värdet - 10 %. UTVÄRDERING AV KVALITATIV BESTÄMNING Efter det att alla extinktionsvärden uppmätts vid 450 nm (referensfilter: nm), subtraheras medelvärdet för blankprov från extinktionsvärdena för kontroller och prov: Medelextinktionsvärde för blankprov 0,100 OD Efter det att medelvärdet för blankprov subtraherats, måste kontrollerna uppfylla följande krav: OD-medelvärde för R3 0,200 OD-medelvärde för R5 0,800 BERÄKNING AV KVANTITATIV BESTÄMNING Kitet innehåller standard som överensstämmer med det tyska Federal Medical Councils riktlinjer tysk för utförande av kvalitetskontroller inom laboratorie diagnostik (RiliBÄK) för kvantitativ bestämning (7). Efter att extinktionsvärdet i alla brunnar mäts vid 450nm (referensfilter nm), Subtraheras medelvärdet av blankproverna från extinktionsvärderna från kontrollerna och proverna: Medelvärde för blankprover 0,100 OD Efter subtraktion av blankproverna, måste kontrollvärdet möta följande kriterier för att vara giltiga: Medel OD-värde för R3 0,200 Medel OD-värde för R4 0,800 KVANTITATIV BESTÄMNING AV PROV MED POSITIVT EBV EA IgG-RESULTAT Kitet innehåller en standard som följer riktlinjerna från Federal Medical Council det tyska för utförande av kvalitetkontroll inom laboratoriediagnostik (RiliBÄK) för kvatitativ bestämmning (7). Kvantitativ bestämning kräver att resultatet för standarden ligger inom den gräns som anges på etiketten. Testutförandet görs på samma sätt som vid den kvalitativa metoden. Den Negativ Kontroll (R3) och Standard (R4) tjänar som kalibratorer och mäts alltid vid en slutgiltig spädning av 1:21. Negativ Kontroll (R3) och Standard (R4) skall köras som dubblett. Ett okänt prov skall först mätas vid en spädning av 1:21. Den sensitivitet som krävs för att definiera immunstatus är endast garanterad vid denna spädning. Om OD-värdet för provet > OD-värdet för den standarden måste provet testas på nytt med en högre spädning (nästa steg t ex +1:10 förspädning = 1:210 slutgiltig spädning). I en här testad grupp var det vid en spädning av 1:21 respektive 1:210 möjligt att kvantifiera ca 85% av de prov som stammade från individer med en genomgången infektion. Vid högre provreaktivitet måste emellertid ytterligare spädning göras. Följande villkor måste alltid vara uppfyllt för att kvantifieringen skall vara korrekt: Cut-off OD prov OD R4 (1:21) Kvantifieringen är baserad på en tvåpunktskalibrering, där kalibreringskurvan dras mellan gränsvärdena cut-off = 1 RU/ml och OD-värdet för den positiva kontrollen (kalibrator) = RU/ml i enlighet med den lotspecifika informationen. Mätvärdena mellan gränspunkterna intrapoleras grafiskt eller matematiskt. GRAFISK UTVÄRDERING Kalibreringskurvans gränspunkter förs in i ett koordinatsystem (millimeterpapper). X-axeln skaleras från 0,000-2,500 OD och y- axeln från RU/ml. De två gränsvärdena förs in vid följande koordinater [X/Y]: Koordinater för under gränsvärde = [OD Cut off / 1 RU/ml] Koordinater för övre gränsvärde = [OD R4 / RU/ml enligt etikett] 4

5 De båda punkterna förbinds med en rät linje. OD-värdena för proven avläses som RU/ml på kalibreringskurvan (parallellförskjutning till axlarna med linjal). Om proven hade en högre spädning än 1:21 måste det grafiskt fastställda värdet först multipliceras med förspädningsfaktorn (t ex x 10 om provet har mätts vid en spädning av 1:210). MATEMATISK UTVÄRDERING RU/ml-värdet för ett prov som mätts vid en spädning av 1:21 beräknas enligt följande formel:: (OD Prov OD Cut-off) RU/ml Prov = RU/ml R4 1 x + 1 ( ) ( ) (OD R4 (1:21) OD Cut-off) För kvantitativ bestämning av prov som har mätts vid en högre spädning måste det RU/mlvärde som beräknats enligt formeln ovan multipliceras med förspädningsfaktorn (t ex x 10 om provet har mätts vid en spädning av 1:210). Exempel: Om provet har mätts vid en spädning av 1:210 (förspädningsfaktor = 10) beräknas RU/ml-värdet på följande sätt: RU/ml prov (at 1:210) = RU/ml prov (beräknat enligt formeln) x 10 TOLKNING OCH ANMÄRKNINGAR BETRÄFFANDE KVANTIFIERING De kvantitativa värden som räknats fram är testspecifika och kan inte jämföras med värden som härrör från EA IgG-tester från andra tillverkare. Definitionen av RU/ml är baserad på en Bio-Rad-intern, EA IgG-specifik serumstandard som kalibrerar kalibratorserumet som ingår i testkitet. Det kvantitativa värdet motsvarar inte provets slutpunktstiter. Som en grov approximation gäller emellertid att det kvantitativa värdet är proportionellt mot slutpunktstitern. En kvantifiering av Anti-EA IgG kan principiellt användas för bestämning av mängden antikroppar i patientprov. Kvantitativa värden för anti-ea IgG på upp till 600 RU/ml är typiska inom ramen för en EBV-primärinfektion. Dessa värden sjunker sedan snabbt under konvalescensen. Kvantitativa värden på <100 RU/ml tillsammans med anti-ebna IgG-positivitet hos immunkompetenta patienter talar för en så kallad sekundär EBV-reaktivering som i regel har utlösts genom andra infektioner eller autoimmunsjukdomar och som inte kräver fortsatt observation. Ovanligt höga anti-ea IgG-värden på upp till 3100 RU/ml uppmättes vid stark immunsuppression (efter transplantation), vid förvärvad immunbristsjukdom (AIDS) och även inom ramen för EBVassocierade sjukdomar (NPC, XLPS, lymfoproliferativa sjukdomar). I alla dylika fall, där en EBV-associerad symtomatisk sjukdom misstänks, kan den kvantitativa metoden för anti-ea IgG bidra med exakta diagnostiska förloppskontroller liksom en kompletterande terapiövervakning. Frekvensfördelningen av de kvantitativa värdena i en grupp friska vuxna (n=100, blodgivare) med en latent EBV-infektion utföll enligt följande: 82% (0 RU/ml), 15% (0-50 RU/ml) och 3% ( RU/ml). Hos patienter med en EBVprimärinfektion uppmättes värden från 24 till 580 RU/ml. Värden mellan 50 och 2600 RU/ml återfanns hos patienter med reaktiveringar (NPC). Det högsta värdet på 3080 RU/ml uppvisade ett prov från en XLPS-patient (kronisk akut EBV-infektion, CAEBV). 10. TESTETS BEGRÄNSNINGAR Ett negativt resultat i Anti-EBV EA IgG ELISA utesluter inte med absolut säkerhet en EBVinfektion. Testresultaten skall alltid tolkas i samband med kliniska patientdata och andra diagnostiska metoder. Det kan vara svårt att interpretera testresultat för prov från immunsupprimerade patienter. Prov från personer som erhållit blodtransfusioner eller blodprodukter kort tid före testen kan ge falskt positiva resultat. Ingen korsreaktivitet återfanns vid akuta infektioner med herpes simplex typ 1/2 (n=33), varizella zoster (n=42), och cytomegalovirus (n=12). 11. FÖRVÄNTADE RESULTAT Totalt undersöktes 99 sera från friska asymtomatiska blodgivare i Anti-EBV EA IgG ELISA. 46 (46,46%) av dessa prov testades som positiva och 53 (53,54%) som negativa. Detta resultat överensstämmer med publicerade uppgifter om prevalensen av EBV-antikroppar hos den vuxna befolkningen (5,6). Prov från patienter som genomgått en cytomegaloinfektion (n=20), toxoplasmainfektion (n=20) och reumatiska sjukdomar (n=20) undersöktes. Härvid kunde EBV-primärinfektioner (n=7), EBVreaktiveringar (n=17) och genomgångna EBV-infektioner (n=29) identifieras med EA IgM, EA IgG och EBNA IgG ELISA (4). 12. PRESTANDA SENSITIVITET OCH SPECIFICITET De resultat som uppnås med Anti-EA IgG-testen är tillsammans med ytterligare undersökningar som Anti-EA IgM ELISA och Anti-EBNA-1 IgG ELISA av stor betydelse för serologisk diagnos av en EBV-infektion (3). Sensitiviteten för testsystemet hos dessa tre tester bestämdes hos patienter med infektiös mononukleos till 99,2%. Specificiteten uppgick till 98,8% (4). PRECISION En testpanel på 10 sera bestående av svagt, medelstarkt och starkt reaktiva sera testades på 10 olika dagar. Interassayvariationen för dessa sera uppgick till 7,6% - 16,6%. Proven i samma testpanel mättes 8 gånger i en testomgång. Intraassay-variationen för dessa sera uppgick till 3,9% - 13,2%. 5

6 13. LITTERATUR 1. Linde, A. (1992). Rev. Med. Microbiol. 3, Straus, S., Cohen, J.I., Tosato, G. and Meier, J. (1993). Ann. Int. Med. 118, Gorgievski-Hrisoho, M., Hinderer, W., Nebel-Schickel, H., Horn, J., Vornhagen, R., Sonneborn, H.-H., H., Wolf, H. and Siegl, G. (1990). J. Clin. Microbiol. 26, Färber, I., Wutzler, P., Wohlrabe, P., Wolf, H., Hinderer, W. and Sonneborn, H. -H. (1993). J. Virol. Meth. 42, Hinderer, W., Nebel-Schickel, H., Horn, J., Vornhagen, R., Wenger-Süss, R. and Sonneborn, H. -H. (1993). Biotest Bulletin 5, Tamir, D., Benderley, A., Levy, J. et al. (1974). Pediatrics 53, Bundesärztekammer: Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung labormedizinischer Untersuchungen, FELSÖKNING 1. Oväntat stort antal positiva resultat: a. Prov och kontroller har tillsatts före Spädningsbuffert (R7). b. Spädningen eller otillräcklig blandning. 2. Blankvärden över börvärdet 0,100 OD: a. Substratlösning (R9) redan blåfärgad genom oxidering/kontaminering. b. Tvättfel: Tvätta 5 ggr per tvättsteg. När manuell tvättutrustning används skall man tvätta 7 ggr. Använd endast Bio-Rad Tvättlösning (R2). c. Inkubationsfel: Temperaturen för hög eller så har föreskriven inkubationstid överskridits eller plattorna inte inkuberats omedelbart efter pipettering av proven. d. Felaktig våglängd: Vid mätning utan referensfilter ligger alla värden ca 0,120 OD högre. 3. Gulfärgning i alla brunnar (se 2a, 2b): a. Tvättlösning (R2) kontaminerad. Bered ny Tvättlösning (R2). b. Spädningsbuffert (R7) eller Konjugat (R6) kontaminerad. Upprepa testen med reagenser från oöppnade flaskor. Hantera reagenserna i så steril miljö som möjligt. 4. Positiv Kontroll (R5) eller Standard (R4) 0,800 OD: a. Kitets bäst-före-datum har överskridits. b. Temperaturen för låg eller så har föreskriven inkubationstid underskridits. c. Tvättfel: För kraftig tvättning eller mekanisk kontakt mellan tvättkammen och brunnarnas botten. d. Positiv Kontroll (R5), Standard (R4) kontaminerad eller 3b. 5. Negativ Kontroll (R3) 0,200 OD (se 1 och 2 a-d): a. Negativ Kontroll (R3) har inte pipetterats efter proven. Pipettera först proven och därefter kontrollsera och blankprov. b. Kontaminering genom locket för Positiv Kontroll (R5) eller Standard (R4). 6

7 7

8 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) /2011 Fax : +33 (0)