Eluering av transglutaminasantikroppar från tarmbiopsier. En pilotstudie från Örebro

Transkript

1 Eluering av transglutaminasantikroppar från tarmbiopsier En pilotstudie från Örebro

2 BAKGRUND - CELIAKIPROJEKT Forskningsprojekt/Kvalitetsarbete under ST. Celiakidiagnostik (Per Olcén, Anna-Karin Åberg). Antikroppsdepositioner i duodenalslemhinna från patienter med misstänkt celiaki. Etablerad metod i Finland (Mäki) Borderlinepatienter / Potential CD potentiellt användningsområde.

3 STUDIEUPPLÄGG Patienter positiva (>6.0 U/mL) för IgA-antikroppar mot transglutaminas (anti-ttg IgA) i serum. Samtliga även positiva för EmA. Klinik talande för celiaki. Patienter negativa (<6.0 U/mL) för anti-ttg i serum. Biopseras med annan huvudfrågeställning än celiaki. Direktfrysta tarmbiopsier samarbete Mag/Tarmmottagningen. Biopsier snittas, färgas med konjugat, avläsning i fluorescensmikroskop. Förväntat utfall: antikroppsdepositioner sammanfaller med känd distribution av transglutaminas.

4 RESULTAT Sisådär Svårtolkat, diskrepans mellan avläsare. Kliniskt användbart??

5 KORSBEFRUKTNING Eluering av antikroppar från erytrocyter: rutinmetod på Blodcentralen. Antikroppar som deponerats på erytrocyter extraheras med hjälp av ph-sänkning, deras specificitet fastställs sedan. T.ex. vid autoimmun hemolytisk anemi vilka blodgruppsantigen på erytrocyten är de deponerade antikropparna riktade mot? Applicerbart på tarmbiopsierna och anti-ttg??

6 FRÅGESTÄLLNING Kan IgA-antikroppar mot transglutaminas elueras från duodenalbiopsier? Kan antikroppar med specificitet för transglutaminas därefter påvisas i eluat med en metod som finns uppsatt på rutinlaboratorium (FEIA)?

7 Eluering - förberedelse Jämförelse med erytrocyter flytande vävnad, separerade celler => stor sammanlagd exponerad cellyta. Finfördelning => större exponerad vävnadsyta. Suspension i NaCl. Centrifugering vävnadspellet + supernatant (kastas).

8 Eluering Vävnadspellet tvättas i NaCl. Elueringslösning med lågt ph. Blanda och inkubera. Centrifugering ca 0,5 ml eluat. Neutralisera ph.

9 Analys av anti-ttg FEIA (Phadia 250, Thermo Fisher Scientific). Spädningsserie Även tvättvätskan analyserades. Analyser: anti-ttg, IgA anti-ttg, IgG Anti-gliadin, IgA Anti-SSA, IgG

10 RESULTAT ELUERING

11 RESULTAT ELUERING Anti-tTG (IgA) > serum-cutoff i eluat från samtliga patienter som sedan erhöll celiakidiagnos. Anti-tTG klart < serum-cutoff (helt negativt hos alla utom en) i eluat från samtliga kontrollpatienter. Ingen reaktivitet för anti-ssa hos varken celiakipatienter eller kontroller, vilket anger frånvaro av ospecifik reaktivitet. Ej mätbart total-iga i eluaten. Således, i denna pilotstudie, hög sensitivitet och specificitet. Av övriga analyserade celiakimarkörer gav AGA (IgA) tydligast utslag, och skulle sannolikt kunna användas som elueringsmarkör efter justering av cutoff-nivå.

12 Patient med oklar diagnos Ospecifika symtom. Måttligt förhöjt anti-ttg (IgA), EmA, antigliadin (IgA) normalt. Lätt ASAT/ALAT (Även aktuell hepatit C). Histologi: ospecifik duodenit. Anti-tTG i eluat > serumcut off i spädning 1/10. Glutenfri diet (GFD) => klar klinisk förbättring, normaliserade celiakimarkörer inom 4 månader efter start av GFD.

13 Fördelar med eluering Antikroppar analyseras på plats för den inflammation man vill verifiera/utesluta. Antikroppar analyseras på platsen för produktion. (Marzari R et al, J Immunolog Mar 15;166(6):4170-6) risk falskt negativt biopsiresultat p.g.a. patchy lesions? Potential CD ökat stöd för celiakidiagnos, alt. hjälp att utesluta celiaki.

14 Sammanfattning eluering Eluering med syrateknik och påföljande analys med FEIA är en ny metod för att påvisa transglutaminasantikroppar i duodenalslemhinna. Hög sensitivitet och specificitet i vår pilotstudie. Enkel metod, lätt att genomföra i rutinlaboratorium. Nytt tillskott i arsenalen av diagnosverktyg för celiaki?

15 SLUT!