Harmonisering av Fosfatidyletanol (PEth) Expertgruppen Läkemedel/Toxikologi

Transkript

1 Harmonisering av Fosfatidyletanol (PEth) Expertgruppen Läkemedel/Toxikologi PEth 16:0 18:1 EQUALIS användarmöte för Läkemedel/Toxikologi Mars 2013 Stockholm

2 Harmoniseringar 1) Harmonisering av U-Kreatinins nedre gränsvärde 2) Harmonisering av Fosfatidyletanol (PEth) 3) Harmonisering av Missbruksanalyserna i urin

3 Equalis rekommendation S002 v.1 / Gäller från Beslutsgräns för U Kreatinin vid drogtestning Beslutsgränsen för kreatininkoncentration i urin varierar idag mellan 2 mmol/l och 4,5 mmol/l, för att misstänka manipulering av prov i samband med drogtester. Equalis expertgrupp för läkemedel och toxikologi, med flera, har visat det inte finns några metodskillnader som motiverar användningen av olika gränsvärden (Helander et al 2011). Av flera anledningar, inte minst rättssäkerheten, bör resultaten bedömas på samma sätt oavsett var undersökningarna sker. Därför rekommenderar vi alla laboratorier att tillämpa gränsvärdet 2 mmol/l för U Kreatinin Gunnar Nordin VD, leg läk Elisabeth Nilsson, Programkoordinator Referens Helander, A., et al. (2011). "Kreatininkoncentrationen i urin bör mätas vid drogtestning. Riktlinjer för beslutsgräns och tolkning behövs inte minst för rättssäkerheten." Läkartidningen 108(24-25): Therese Hansson

4 Harmoniseringar 1) Harmonisering av U-Kreatinins nedre gränsvärde 2) Harmonisering av Fosfatidyletanol (PEth) 3) Harmonisering av Missbruksanalyserna i urin

5 Vad är Fosfatidyletanol (PEth)? PEth bildas endast i närvaro av etanol kolin Fosfatidylkolin Hydrolys kolin H 2 PLD Fosfolipas D etanol Transfosfatidylering kolin fosfatidsyra etanol PEth (fosfatidyletanol)

6 PEth olika former CH 2 CH o PEth 16:0/18:1 * H 2 C P - CH 2 CH 3 CH 2 CH o CH 2 PEth 18:1/18:1 * H 2 C P - CH 2 CH 3 CH o PEth 16:0/18:2 H 2 C P - CH 2 CH 3 CH 2 CH o CH 2 PEth 16:0/16:0 * H 2 C P - CH 2 CH 3 CH o PEth 16:0/20:4 H 2 C P - CH 2 CH 3

7 PEth blivit en efterfrågad analys - Produktionsstatistik Klinisk kemi, Lund Produktionsstatistik per månad Produktionsstatistik per år PEth CDT Antal analyser Antal patientprover maj 05 feb 06 okt 06 jun 07 feb 08 okt 08 jul 09 mar 10 nov 10 jul 11 apr 12 dec 12 aug 13 CDT PEth Månad

8 PEth - Beställare Intern medicin Psykiatri 19% 16% 11% Övrigt Primärvården 32% 22% Företagshälsovården

9 Varför har B-PEth blivit en efterfrågad analys? Fördelar med B-PEth som alkoholmarkör Specificiteten är hög (teoretiskt 100%). Endast etanol ger upphov till mätbara nivåer av PEth. PEth är en direkt etanol metabolit. Sensitiviteten är hög. Har visat sig i studier vara högre än CDT, MCV och GGT såväl var för sig som i kombination.

10 Varför är en harmonisering av PEth är viktig 2013?

11 Fosfatidyletanol (PEth) 30-åriga resa fram till idag

12 1983 Upptäcktes 1983 av Christer Alling och medarbetare (Lena Gustavsson och Erik Änggård). En helt ny och tidigare okänd molekyl upptäcktes i organ från råttor som exponerats för etanol. Molekylen fanns inte hos kontrolldjuren och molekylen hade egenskaper som skilde den från andra hittills kända fosfolipider. Efter ytterligare något års detektivarbete kunde det fastställas att den abnorma fosfolipiden utgjordes av fosfatidyletanol (PEth) Forskning av PEth som alkoholmarkör och dess kliniska betydelse.

13 år efter PEth s upptäckt introducerades PEth på HPLC som första kliniska rutinmetod vid Klinisk kemi i Lund. Endast 1 lab i Sverige analyserade PEth som klinisk rutinanalys. Mäter summan av alla PEth former (= PEth total) Mätvärden kliniskt: > 0,70 µmol/l

14 200,00 180,00 160,00 140,00 120,00 100,00 mv 80,00 8,822 60,00 40,00 20,00 0,00-20,00 8,35 8,40 8,45 8,50 8,55 8,60 8,65 8,70 8,75 8,80 8,85 8,90 8,95 9,00 9,05 9,10 9,15 9,20 9,25 Minutes 260,00 240,00 220,00 Internstandard PBut 200,00 180,00 160,00 PEth Kalibrator mv 140,00 120,00 100,00 80,00 PEth Patient 60,00 40,00 20,00 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00 6,50 7,00 7,50 8,00 8,50 9,00 9,50 10,00 Minuter (min)

15 Provupparbetning (2006) 1. EDTA-blod + internstandard 2. Extraktion: 1) 2-propanol 2) hexan (2:3) 3. Mixas och centrifugeras 4. Supernatanten hälls över till nytt rör. Röret med pelleten kastas. 5. Supernatanten indunstas och återlöses i en mindre mängd mobilfas anpassat lösningsmedel 6. Överförs till vial och injiceras

16 2009 / 2010 Masspektrometri metoder introducerades i Sverige: 1 lab gjorde metodbyte från HPLC-metod till LCMSMSmetod. 1 lab satte upp en LCMS-metod. 2 lab i klinisk rutindrift i Sverige Mäter de enskilda formerna av PEth Mätning av en form - PEth 16:0/18:1 Mätvärden kliniskt: >0,10 µmol/l

17 Korrelation mellan HPLC och LCMSMS Kliniska data som var publicerade för B-PEth var PEth total (HPLC) och inte PEth 16:0/18:1 (LCMSMS) N= B-PEth 16:0/18:1_281, LCMSMS (µmol/l) mräkningsfakto till PEth (total) B-PEth total, HPLC (µmol/l)

18 Situationen i Sverige idag 6 lab i klinisk rutindrift i Sverige Analysmetod Mäter mräkningsfaktor Svarsutlämning Gränsvärde Lab komponent uträkning total PEth 16:0 18:1 PEth total PEth 16:0 18:1 PEth total 1 LCMSMS PEth 16:0 18:1 X 0,05 2 LCMSMS PEth 16:0 18:1 2,22 (0,45, dividerar) X X 0,32 0,70 3 LCMSMS PEth 16:0 18:1 X 4 LCMSMS PEth 16:0 18:1 2,1 X 0,10 0,10 5 LCMSMS PEth 16:0 18:1 2,13 X 0,05 0,10 6 LCMSMS PEth 16:0 18:1 2,22 X 0,01 0,10

19 Metodernas utveckling HPLC LCMS LCMSMS Antal År - Vecka

20 Harmonisering - Att göra lika Varför är en nationell harmonisering av PEth viktig 2013? Resultat av PEth får många gånger konsekvenser vad gäller körkortsärenden, anställningar etc. och gemensamma riktlinjer är mycket viktiga. Idag 6 lab som analyserar PEth. Alla mäter idag med LCMSMS (PEth 16:0 18:1). Bra med en harmonisering innan ännu fler lab är i rutindrift. Svarar ut olika till beställarna i Sverige. Många beställare förstår inte skillnaden mellan PEth och PEth 16:0 18:1 (lika värden: PEth 16:0 18:1 nästan hälften av värdet för PEth total). Får konsekvenser!! Bör övergå i Sverige till att ge ut det vi mäter (PEth 16:0 18:1) och att detta sker vid en nationell överenskommen tidpunkt + information nationellt att en övergång sker. lika gränsvärde (beslutsgränser)

21 2013 Kvalitetssäkerhetsprogram B-Fosfatidyletanol (B-PEth)

22 Fosfatidyletanol i blod (B-PEth) Testutskick Analysomgång: A-C A-C A-C A-C Program 2013 Kvalitetssäkringsprogram: Fosfatidyletanol (PEth) Programkoordinator: Jim Andersson (jim.andersson@equalis.se)

23 Fosfatidyletanol i blod (B-PEth( PEth) 3 utskick per år, 3 prover per utskick Autentiskt helblod alt. blank helblod med eller utan tillsats av referenssubstans Provet ska analyseras senast 7 dagar från utskickat datum. Förvaras i kylskåp Komponenterna: B-Fosfatidyletanol och B- Fosfatidyletanol, 16:0 18:1

24 Fosfatidyletanol i blod (B-PEth( PEth) Analysomgång: ng: Analysomgång: PEth /A-C 4,0 3,5 PEth, total PEth, 16:0/18:1 3,0 Koncentration (µmol/l) 2,5 2,0 1,5 1,94 0,91 1,0 0,5 0,33 0,16 0,0 A-PEth,total B-PEth,total C-PEth,total A-PEth 16:0/18:1 B-PEth 16:0/18:1 C-PEth 16:0/18:1 A: Autentiskt helblod B: Helblod från individ som inte dricker alkohol C: Autentiskt helblod

25 B-Fosfatidyletanol, 16:0 18:1 (Equalis utskick) MGÅNG SUBSTANS METD ANTAL TER MEDEL SD CV% ACC% B PEth 16:0 18:1 LCMSMS (1) /LCMS (2) 3 3,00 LCMSMS: PEth 16:0 18:1 - ca 15% variation i Sverige (både vid en låg och en högre konc) C PEth 16:0 18:1 LSMSMS (1) / LCMS (2) 3 0, A PEth 16:0 18:1 LCMSMS (3) / LCMS (2) 5 1,17 0,49 41, C PEth 16:0 18:1 LCMSMS (3) / LCMS (2) 5 0,37 0,14 39, B PEth 16:0 18:1 LCMSMS (4) / LCMS (1) 5 0,37 0,05 13, C PEth 16:0 18:1 LCMSMS (4) / LCMS (1) 5 1,62 0,21 12, A PEth 16:0 18:1 LCMSMS (5) / LCMS (1) 6 0,68 0,18 26, A PEth 16:0 18:1 LCMSMS (5) 5 0,70 0,09 12, B PEth 16:0 18:1 LCMSMS (5) / LCMS (1) 6 0,45 0,11 24, B PEth 16:0 18:1 LCMSMS (5) 5 0,47 0,08 17, A PEth 16:0 18:1 LCMSMS (6) 6 0,91 0,95 0,15 15, C PEth 16:0 18:1 LCMSMS (6) 6 0,16 0,16 0,02 15,2 100

26 B-Fosfatidyletanol (total) (Equalis utskick) MGÅNG SUBSTANS METD ANTAL TER MEDEL SD CV% ACC% B PEth LCMSMS (1) /LCMS (2) / HPLC 4 6,17 0,79 12, C PEth LCMSMS (1) /LCMS (2) / HPLC 4 0,95 0,15 16, A PEth LCMSMS (2) /LCMS (2) / HPLC 5 2,56 1,06 41, C PEth LCMSMS (2) /LCMS (2) / HPLC 5 0,90 0,4 44, B PEth LCMSMS (4) /LCMS (1) 5 0,76 0,09 12, C PEth LCMSMS (4) / LCMS (1) 5 3,47 0,43 12, A PEth LCMSMS (3) / LCMS (1) 4 1,29 0,41 32, A PEth LCMSMS (3) 3 1, B PEth LCMSMS (3) / LCMS (1) 4 0,93 0,18 19, B PEth LCMSMS (3) 3 1, A PEth LCMSMS (4) 4 1,94 1,90 0,24 12, C PEth LCMSMS (4) 4 0,33 0,32 0,04 12,3 97

27 Fortsättning följer. Förslag på nationell harmonisering -Komponent -Namn - Mätmetod/Provupparbetning - Gränsvärde (Beslutsgräns)