Endokrinmöte Stockholm

Storlek: px

Starta visningen från sidan:

Download "Endokrinmöte Stockholm"

Alexander Arvidsson
för 5 år sedan
Visningar:

1 Endokrinmöte Stockholm

2 Steroider Lc-Ms/Ms vs Immunkemi? Benny Larsson

3 Kallners diskussionsforum Det är bra att nyttan av ackrediteringen diskuteras. Jag har länge irriterat mig över att inadekvata metoder, speciellt immunologiska metoder för bestämning av steroidhormoner, ackrediteras trots att vi länge känt till att de ofta ger värdelösa och t.o.m. vilseledande resultat. Prof, Ulf-Håkan Stenman, Helsingfors

4 Med risk att sticka ut hakan ännu en gång! Utan att göra anspråk på att vara vare sig endokrinolog eller expert inom den endokrinologiska delen av klinisk kemi, så är jag beredd att hålla med Ulf-Håkan Stenman i sitt inlägg om att immunlogiska metoder har sina klara begränsningar och att LC-MS- MS- (men även GC-MS-MS-) tekniker många gånger är att föredra. Lennart Nilsson Bedömare Swedac

5 Utvecklingstrender Steroidmetoder Äldre metoder: Extraktions RIA, mer specifika, mindre interferenser Arbetskrävande, tar lång tid att upparbeta prover Dagens metoder: Direktimmunoassay, snabb metodik, mer interfenser och korsreaktioner höga CV och Bias, fungerar på vissa Steroider ex Testo män, men ej ner i pmol/l-området LcMsMs, mer arbetskrävande än ovan, men med betydligt högre specificitet och precision pmol/l Framtidens metoder:???

6 Varför analysera Steroider på Lc-Ms/Ms Cortisol Testo Män Testo kvinnor Progesterone >1ng/mL Progesterone <1ng/mL Androstendione DHEA 17-OH-Prog

7 Dagens meny Steroider Testosteron Androstendion 17-OH-Progesteron Östradiol Aldosteron

8 Rackväxlare 12 MTP Autoinjektor Sciex 5500 QTrap ESI + APCI jonisering Tvättpumpar 2 st för online extraktion Gradientpumpar 2 st Kolonnugn 6 pos Online extraktion System-controller HPLC

9 Provupparbetning Steroider: Testosteron, Androstendione, 17-OH-Prog 100µL prov fälles med 200µL Zinksulfat(0,25%) i MeOH innehållande IST Rören mixas alt skakas 30 sek Frys -20ºC i 10 min Rören mixas alt skakas 30 sek Centrifugering rpm 10 min Injektion100µL av ovanfasen Analyskolonn, Dionex Acclaim C 18,3µ Provet renas ytterliggare genom On-line extraktion i instrument, Strata C 18 Analystid: 6 min

10 Biocrates kalibrator 17 steroider 0.1 nmol/l 28 nmol/l 0.15 nmol/l 151 nmol/l 35 pmol/l 35 nmol/l

Steroider 2D kromatografi Prov renas On-line ex Separation analyskolonn Strata Analyskolonn Prov 100µL injiceras Till slask Vid reningssteg

11 Steroider 2D kromatografi Prov renas On-line ex Separation analyskolonn Strata Analyskolonn Prov 100µL injiceras Till slask Vid reningssteg Ms APCI Gradient pumpar A= 0,1% Myrsyra/H 2 O (v/w) B= 0,1% Myrsyra/Acetonitril(v/w) Renat Prov Tvättpump A=20% Acetonitril/H 2 O (v/w) Gradient

12 Androstendione kal-kurva r=1.000

13 Androstendione LcMs Immulite 2000

14 Prestanda Androstendion LcMs 6 mån 2016/17 Total CV Nivå 3,6% 2,4nmol/L 2,9% 8nmol/L Mätområde:0,1-28 nmol/l (0,1-140 nmol/l efter spädning) Tidigare metod Immulite 2000: Total CV Nivå 13% 8,5nmol/L 10% 21nmol/L

15 Testosteron kal-kurva r=1,0000

16 Cobas (nmol/l) Testosteron kvinnor, barn, män LcMs - Cobas Testosteron kvinnor,barn,män y = x R 2 = LcMs (nmol/l)

17 Cobas (nmol/l) Testosteron Kvinnor Testesteron Kvinnor LcMs - Cobas y = 1.138x R 2 = Testosterone LcMs (nmol/l)

18 17-OH-Prog kal-kurva r=0,9999

19 RfB Referenzintitut fur Bioanalytik Externkontroller 17-OH-prog Targetvärde åsatt av referensmetod RfB 17-OH-Progesteron deltagare 17-OH-Progesterone nmol/l Target Min Max Diff CV% 5,14 2,05 8,23 6,18 22,7 16,4 6,56 26,3 19,74 20,8 Target 6,43 2,57 10,3 7,73 20,2 9,68 3,87 15,5 11,63 16,4 Max 12,7 5,08 20,4 15,32 17,7 Min 2,41 0 6,41 6,41 28,3 2,91 0 5,91 5, ,9 7,33 2,93 11,8 8,87 2,422,4 0 2,41 0 7,86 7,86 35,6 2,91 1,16 8,66 Serie1 Serie3 Serie5 7,5 30,

20 E2 Östradiol Lc-Ms/Ms Dåvarande rutinmetod ospecifik lägre konc ca 3 ggr förhöjda (DELFIA) Behöver mätas ner till ca 5 pmol/l Negativ ESI Additiv av fluorid Extraktionskolonn, Supelquard LC-8-DB 3µ Analyskolonn, Supelcosil LC-8DB 3µ Nytt sätt att öka känsligheten, 5 identiska fragment användes i beräkningarna InHouse kalibrator

21 Biocrates kalibrator 17 steroider 138pmol/L InHouse kalibrator Aldosterone + Östradiol 73pmol/L

22 LcMsMs ESI APCI Kollision cell 5 ggr simultant HPLC

23 Kalibreringskurva pmol/L Quantifier Östradiol r=0,9999

24 Kalibreringskurva 11-75pmol/L Quantifier r=0,9998

26 Kalibrator Östradiol 11,4pmol/L Single mätning 5 summerade mätningar Ca 4,5 ggr högre signal Diverter

27 Pat-prov 2 pmol/l Single mätning 5 summerade mätningar S/N 3,5

28 Single mätning 2 pmol/l 5 summerade mätningar x Smoothing 3x Smoothing

29 Prestanda Ultrakänligt Östradiol LcMs 8 mån 2017 Total CV Nivå 5,2% 11,8pmol/L 2,9% 211pmol/L Mätområde: pmol/l (prover >486 pmol/l lämnas över till Roche Cobas) Tidigare manuell metod: Total CV Nivå 15% 67pmol/L 10% 292pmol/L

30 Aldosteron Lc-Ms/Ms Siemens dragit in reagens till manuell RIA Behöver mätas ner till ca 10 pmol/l Befintliga metoder RsB sprider stort (Referenzinstitut fur Bioanalytik) Negativ ESI Ether extraktion följt av Online extraktion Nya sättet att öka känsligheten, 5 identiska fragment användes i beräkningarna InHouse kalibrator

31 RfB Referenzintitut Aldosteron fur Bioanalytik RfB Externkontroller Aldosteron Targetvärde åsatt av referensmetod Aldosterone pmol/l TargetMax Min Max Diff CV% Min , , , , , , , , , , Serie Serie3 Serie , Target 200 deltagare

32 Aldosteron Kal 55pmol/L 5 mätningar s/n 8 Aldosteron-d4 (IST)

33 Kal-kurva pmol/L y=0,00422 r=1,0000

34 Kalibr 27pmol/L

35 Kalibr 27+55pmol/L Kal 27pmol/L IST Kal 55 pmol/l IST

36 Tack för visat intresse Frågor?

Relevanta dokument

Vitamin D Lc-Ms/Ms. Benny Larsson Laboratorie Medicin Skåne Klinisk Kemi Malmö

Vitamin D Lc-Ms/Ms. Benny Larsson Laboratorie Medicin Skåne Klinisk Kemi Malmö Vitamin D Lc-Ms/Ms Benny Larsson Laboratorie Medicin Skåne Klinisk Kemi Malmö 25-OH-Vitamin D3 + D2 3-epi-25-OH-Vitamin D3 + D2 1,25-di-hydroxy-Vitamin D3+D2 25-OH-Vitamin D3 + D2 3-epi-25-OH-Vitamin D3