Analys av hepariner, faktor Xahämmare och trombinhämmare

Transkript

1 Analys av hepariner, faktor Xahämmare och trombinhämmare Maria Berndtsson Karolinska Universitetssjukhuset

2

3 Ofraktionerat heparin UFH Intravenöst Hämmar i komplex med Antitrombin både Faktor Xa och Trombin För monitorering används främst APT-tid Påverkas av ex lupusantikroppar, faktorbrister mm Reagensskillnader Även anti-faktor Xa eller anti-faktor IIa analys kan användas

4 Lågmolekylärt heparin LMWH Subkutan administrering För monitorering tas prov ofta 3-4 h efter behandling då peak koncentration förväntas Hämmar i komplex med Antitrombin främst Faktor Xa (varierar mellan olika preparat) För monitorering används främst anti-faktor Xa analys Även klott-baserade tester förekommer

5 Anti-Faktor Xa test Anti-FXa aktiviteten av hepariner uttrycks i kie/l

6 Anti-Faktor Xa analys Preanalys: Centrifugering inom 30 minuter /1 timme efter provtagning Dubbelcentrifugering: Viktigt om provet ska frysas Platelet factor 4 (PF4) kan frisättas från trombocyter och hämmar heparin. Interferenser: Bilirubin, hemoglobin och triglycerider Ej känsligt för faktorbrist, lupusantikroppar osv

7 Anti-Faktor Xa analys Kalibratorer specifika för UFH resp. LMWH med spårbarhet till WHOstandarder. Flera tillverkare har kalibratorer som kan kombineras i gemensam kalibreringskurva. Specifika kalibratorer kan behövas för vissa preparat, ex fondaparinux Antitrombin-innehållande reagens För att patientprovets antitrombin inte ska vara begränsande för reaktionen Resultaten avspeglar inte den verkliga behandlingseffekten

8 UFH, LMWH Externkontroller ECAT För få deltagare för att EQUALIS ska ha eget program

9

10 När behöver analyserna utföras? Vid blödningar Bedöma blödningsrisk inför operation Misstanke om överdosering Patienter med nedsatt njur- eller leverfunktion Risk för läkemedelsinteraktioner Trombos hos patienter som behandlas med läkemedlen

11 NOAKs Non-vitamin K dependent Oral Anticoagulants LC-MS/MS referensmetod för direkt mätning av koncentration Begränsad tillgänglighet Kostnad Långa svarstider ej användbart vid akuta frågeställningar Koagulationsanalyser indirekt uppskattning av koncentration

12 Faktor Xa-hämmare Rivaroxaban, Apixaban Anti-Faktor Xa metoder med specifika kalibratorer Anti-Faktor Xa aktiviteten omvandlas till en masskoncentration ug/l Reagens innehållande antitrombin kan ge falsk höga rivaroxabanvärden (Mani et al, Thromb Haemost, 2012)

13 Anti-Faktor Xa analys

14 Rivaroxaban, anti-faktor Xa vs LC-MS/MS Douxfils et al, Thromb Haemost 2013

15 Apixaban, anti-faktor Xa vs LC-MS/MS Karolinska Universitetslaboratoriet

16 Anti-Faktor Xa analys Rivaroxaban och Apixaban Preanalys: Centrifugering inom 30 minuter /1 timme efter provtagning Enkel- /Dubbelcentrifugering före frysning? Interferenser: Bilirubin, hemoglobin och triglycerider Ej känsligt för faktorbrist, lupusantikroppar osv UFH, LMWH

17 Trombinhämmare Dabigatran Trombintids-analyser Ecarin-baserade analyser Kromogena anti-faktor II analys

18 Trombintid Tiden till koagelbildning mäts (s) För känslig metod för kvantitativ bestämning av dabigatran

19 Trombintid Diluted Trombintid Spädd testplasma blandas med normalplasma före tillsats av trombin Tiden till koagelbildning mäts (s) För känslig metod för kvantitativ bestämning av dabigatran Metoden kalibreras med dabigatran. Tiden till koagelbildning omvandlas till koncentration ug/l

20 Diluted Trombintid vs LC-MS/MS Antovic et al, Eur J Clin Pharmacol, 2013

21 Trombintid Prover från 70 dabigatranbehandlade patienter analyserades med LC- MS/MS samt vanlig trombintid Trombintidsresultaten var inom referensområdet endast i prover där ingen dabigatran detekterats med LC-MS/MS (< 2 ng/ml). Dabigatrankonc upp till 50 ng/ml korrelerade signifikant (p<0.0001) med trombintidsresultat (R = 0.79, y = x ). Karolinska Universitetslaboratoriet

22 Ecarin Sandrasselhuggorm, Echis carinatus.

23 Ecarin Clotting Time (ECT) Ecarin Chromogenic Assay (ECA)

24 Ecarin Chromogenic Assay vs LC-MS/MS Antovic et al, Eur J Clin Pharmacol, 2013

25 Anti-Faktor IIa analys

26 Dabigatran analys Problem med känslighet i låga området För att mäta låga (<30-50µg/L) koncentrationer eller kunna utesluta att det finns läkemedel kan LC-MS/MS behövas. Trombintid kan vara till hjälp

27 NOAK-analyser utförda på Klinisk kemi, Karolinska 2014

28 NOAK-analyser ECAT externkontrollprogram finns för dabigatran, rivaroxaban och apixaban. NPU-koder: NPU28683 P-Dabigatran (µg/l) NPU28689 P-Rivaroxaban (µg/l) NPU28690 P-Apixaban (µg/l) Information om vilken metod som använts saknas Rapportnamnen ser olika ut på olika sjukhuslab i Sverige

29 Sammanfattning UFH monitoreras främst med APT-tid LMWH monitoreras främst med anti-faktor Xa analys För analys av NOAKs är LC-MS/MS referensmetod Anti-Faktor Xa metoder med specifika kalibratorer används för analys av rivaroxaban och apixaban För mätning av dabigatran finns flera alternativ, varav diluted Trombintid med specifika kalibratorer är vanligast förekommande.