ÅRET SOM GÅTT APTT-ANTITROMBIN-FIBRINOGEN Equalis 2014: APTT Aktiverad partiell tromboplastintid A. Hillarp (andreas.hillarp@regionhalland.se)
Reaktioner som påverkar APTT Intrinsic pathway HMWK PK Extrinsic pathway XII XIIa XI XIa TF VIIa TF VII IX IXa VIIIa X Xa Va Protrombin Trombin Fibrinogen Fibrin
APTT: utförande 1 del plasma 1 del aktivator (ej Ca 2+ ) Inkubation 3-5 min, 37 C 1 del kalciumklorid Bestäm tiden till koagelbildning Mäter summan av alla faktorer i intrinsic-vägen Normal tid ca. 30-40 s Går ej att kalibrera! Påvisa faktorbrist, mäta heparin, lupus antikoagulans, inhibitorer etc.
Equalis: APTT
Youden plot 2015:01
APTT: uppdelat på material och metoder Material APTT-SP Actin FSL STA PTT Alla Koag 96 31,4 sek CV = 2,5 % 28,5 sek CV = 1,5 % 35,3 sek CV = 4,5 % 33,7 sek CV = 9,7 % Koag 97 48,6 sek CV = 5,6 % 63,9 sek CV = 4,7 % 61,9 sek CV = 4,0 % 60,6 sek CV = 8,2 % Koag 98 55,1 sek CV = 6,3 % 63,5 sek CV = 4,3 % 63,7 sek CV = 3,9 % 62,5 sek CV = 8,2 %
CV (%) Equalis: APTT 2014 Equalis utskick 2014
Equalis 2014: Antitrombin
Equalis: Två metodgrupper för antitrombin Xa och IIa (trombin) baserade reagens
Indirekt substratmetod baserad på trombininhibition 1. Antitrombin + heparin [AT-heparin] 2. [AT-heparin] + trombin (överskott) [AT-heparin-trombin] + trombin (rest) 3. Substrat (peptid-pna) peptid + pna (färg) Antitrombin (AT) binder heparin och inaktiverar trombin. Rest-trombin klyver substratet. Frisättning av pna ger upphov till färgutveckling vilket detekteras spektrofotometriskt. Absorbansen blir omvänt proportionell mot AT-koncentrationen
Indirekt substratmetod baserad på Xa-inhibition 1. Antitrombin + heparin [AT-heparin] 2. [AT-heparin] +Xa (överskott) [AT-heparin-Xa] + Xa (rest) 3. Substrat (peptid-pna) peptid + pna (färg) Antitrombin (AT) binder heparin och inaktiverar faktor Xa Rest-Xa klyver substratet. Frisättning av pna ger upphov till färgutveckling vilket detekteras spektrofotometriskt. Absorbansen blir omvänt proportionell mot AT-koncentrationen
Equalis: Antitrombin
Kommersiella reagens för antitrombin: A. Inhibition av bovint/humant faktor Xa, NPU21557 Coamatic Antithrombin (Chromogenix) HemosIL Antithrombin (IL) Innovin Antithrombin (Siemens) B. Inhibition av bovint trombin, NPU21558 Berichrom Antithrombin III (Siemens) Stachrom AT III (Stago) m.fl. reagenstillverkare... Samtliga reagens innehåller heparin (ofta av okänd typ och konc.).
Antitrombin: uppdelat på material och metoder Material Anti-Xa-metoder Anti-IIa metoder Alla Koag 96 0,83 kie/l CV = 5,8 % 0,85 kie/l CV = 6,7 % 0,83 kie/l CV = 6,2 % Koag 97 0,33 kie/l CV = 10,7 % 0,36 kie/l CV = 10,2 % 0,33 kie/l CV = 11,3 % Koag 98 0,39 kie/l CV = 9,1 % 0,41 kie/l CV = 10,8 % 0,40 kie/l CV = 9,8 %
CV (%) Equalis: Antitrombin 2014 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 anti-fxa CV (%) anti-iia CV (%) Equalis utskick 2014
Equalis: Fibrinogen
Equalis: Resultat för fibrinogen
Mätprincip Clauss fibrinogenmetod: En standardiserad mängd trombin blandas med testplasman och tiden till ett koagel bestäms. Fibrinogen Trombin 37 C Fibrinkoagel Koagulationstiden är omvänt proportionell mot fibrinogenkoncentrationen. Kalibreras med en referensplasma som analyseras i en spädningsserie (ställd mot IS).
Samtliga deltagare med fibrinogen Metod/reagens Utskick 2014:01 Utskick 2015:01 Dako polyklonal antikropp 1 1 Dade Thrombin 37 44 Fibrinogen C 5 5 Fibri-Prest 3 2 Multifibren U 2 - QFA Fibrinogen 11 8 STA Fibrinogen 8 11 STA Liquid Fib - 2 Totalt antal lab 67 73
CV (%) Resultat fibrinogen 2014 (alla med Clauss-metod i samma metodgrupp) Equalis utskick 2014
Fibrinogen, problem 1 Metodberoende resultat Majoritetsreagenset får stor inverkan på totalmedelvärdet (Dade Thrombin 44/73 lab) Mindre vanliga reagens avviker >2SD (utan möjlighet att korrigera - metodberoende) Vi borde kanske ha fler metodgrupper? Men vilka?
Fibrinogen: uppdelat på material och metod Medelvärden (g/l) och medel-cv för samtliga användare och utskick CV ej beräknat vid 5 lab Material Dade Thrombin QFA Fib STA Fib Fib C Fibri- Prest STA Liquid Dako (imm) Koag 96 2,19 CV=5,0% Koag 97 1,50 CV=6,4% Koag 98 1,53 CV=6,6% 2,03 CV=7,0% 1,55 CV=9,0% 1,58 CV=5,8% 2,49 CV=5,0% 1,72 CV=3,9% 1,77 CV=4,5% 1,98 2,27 2,61 2,67 1,56 1,63 1,70 1,80 1,56 1,63 1,78 1,89 KOAG 96 är en kommersiell normalplasma med angiven fibrinogen på 2,64 g/l (acceptansgränser på 2,38 2,90 g/l)
Resultat fibrinogen 2014: tre största metodgrupperna (n>5)
Fibrinogen, problem 2 Vad är korrekt referensintervall? Intervallet 2 4 g/l generellt accepterat Enkelt och bra, inte varit i fokus tidigare Undre gräns nu av särskilt intresse finns riktlinjer för fibrinogensubstitution vid olika situationer Tillverkarna egna ref. intervall kan variera Spänner över 1,7 4,2 g/l Rekommenderar lokalt etablerade intervall Om 2-4 g/l är allmänt accepterat i vårdprogram etc. så stämmer det inte med verkligheten
Summering: APTT, Antitrombin och Fibrinogen Tre material har använts 2014 (KOAG96, KOAG97 och KOAG98) APTT Tre metod/reagensgrupper CV mellan 2 6 % uppdelat på metod och material Antitrombin Sju olika reagens fördelat på två metodgrupper (IIa och Xa) Ingen skillnad på metodgrupper, CV 6 11 % Fibrinogen En metodgrupp ( trombininducerad ), CV 8 11 % CV mellan 4 9 % uppdelat på metod och material Nya metodgrupper? (metodberoende resultat) Referensintervallen?