Snabb resistensbestämning. Martin Sundqvist leg läk, MD Avd för klinisk mikrobiologi, Växjö

Transkript

1 Snabb resistensbestämning Martin Sundqvist leg läk, MD Avd för klinisk mikrobiologi, Växjö

2 Varför? Ökande antibiotikaresistens Felaktig antibiotikabehandling ger ökad risk för död hos våra svårast sjuka patienter. Vill vi ha Mikrobiologi i tiden eller arkeologiska svar?

3 Metod Lappdiffusion MH-F i CO 2 Inkubering i 6 eller 8 timmar Zonavläsning med SIRtolkning Alla Blododlingar som larmar mellan kl 17 och 9 nästa morgon

4 Hur har vi kommit dit? Validering av att inokulat vid olika larmtider för referensstammar för E.coli, S.aureus och S.pneumoniae ger McF om spädning 1/10. (BacTAlert) Resistensbestämning av kliniska isolat mot standarduppsättning av antibiotika (7-12) E.coli (n=50) K.pneumoniae (n=47) S.aureus (n=50) S.pneumoniae (n=50) E.faecalis (n=42) Betahemolytiska streptokocker (n=60) P.aeruginosa (n=49)

5 S.aureus S. aureus (MSSA) 6h (n= 50) CFX ERY KLI FUS TSU NOR RIF VAN LIN GEN TOB

6 Hur har vi kommit dit? Beräkning av epidemiologiska brytpunkter (Kronvall) Testa de nya brytpunkterna med väldefinierade resistenta stammar CFX CFX MRSA MSSA E-test separerar dessa lika bra/dåligt

7 Hur har vi kommit dit? Beräkning av epidemiologiska brytpunkter (Kronvall) Testa de nya brytpunkterna med väldefinierade resistenta stammar Testa konsekutiva kliniska stammar prospektivt

8 28 Scatterplot: NAL 6h vs. NAL18 (Casew ise MD deletion) Kliniska blodisolat, Enterobacteriacae NAL18 = -, ,2025 * NAL 6h och nalidixinsyra, Correlation: r zon =,95614 (mm) 6h vs 18h NAL NAL 6h 95% confidence

9 Funderingar När visar sig resistens? Fler stammar måste testas Fler resistensmekanismer måste testas Värdera MH i luft verkar separera t.ex MRSA bättre från MRSA Verkar ge P.aeruginosa resistensbestämning på 6h

10 Typisk vardag i Växjö Positiva flaskor (3-10) plockas ut kl 7.30 Gramfärgning (Resultat rings ut och preliminärsvaras i journalsystem) Sprid ut 1 droppe på halv MH- F platta och lägg på aztreonam och linezolid lapp Aztreonamzon (= gramneg) Linezolidzon (= grampos) Zon på båda, ev GAS Växt kring båda: blandning

11 Resistensbestämning Gör en 1/10 spädning i NaCl från blododlingsflaska Sprid jämnt (bomullspinne och snurra) över en MH-F platta Gram pos: cefoxitin, oxacillin, ampicillin, klindamycin Gram neg: cefotaxim, ceftazidim, meropenem, tobramycin, nalidixinsyra

12 Artbestämning Blodplatta Cledplatta Chokladplatta (CO 2 ) FAA-platta (Anaerobt) Om Gramneg: uriselectplatta Om streptokocker: eskulinplatta, Optokin och Bacitracin

13 Mellan 14 och 16 Bedömning av växt på respektive substrat Preliminära tester (Staphaurex, Streptex, spotindol, oxidas mm) Avläsning av zoner (mäts i mm) med bedömning av SIR mot brytpunkter anpassade till 6 och 8h inkubation. Förnyat preliminärsvar

14 Fördelar Många blododlingar med primärpatogener erhåller preliminär art och resistensbestämning inom h. Plattorna tittas på samma eftermiddag Gramnegativer pseudomonas Streptokocker enterokocker Nästa morgon definitiv artbestämning och full standardiserad resistensbestämning Bättre flöde genom laboratoriet Tidigare ID av blandningar, ovanliga arter mm

15 Lappdiffusion vs Vitek och Phoenix Number of MIC/zone mm results Number of interpretations Phoenix Vitek 2 RDDT Phoenix Vitek 2 Antibiotic 6h 8h 6h 8h 6h 8h 6h 8h 6h 8h Ampicillin HLARd c 4 c 9 b 10 b c 4 c Linezolid b Co-trimoxazole a 10 a 9 b 10 b 1 a 1 a 3 a 3 a Vancomycin The automated systems were in most cases slower than the DD method. Jonasson et al Poster SSAC 2010

16 Nackdelar Något mer arbetskrävande Mer tid direkt på morgonen Extra avläsning/arbete på eftermiddagen

17 Slutsats Snabb resistensbestämning (6-8h) är möjlig för de flesta arter Alla antibiotika lämpar sig möjligen inte lika bra Validering av zonbrytpunkter viktigt. Att bara titta på zonen och säga S eller R är osäkert. Diskdiffusion blir ett bra alternativ till Vitek/Phoenix

18 Framtiden Definitiv artbestämning med MALDI-TOF direkt från blododlingsflaskor efter bara några timmars inkubering Urinodlingar (slutsvar inom 8h) Urinflödescytometer sålla bort negativa 6h resistensbestämning Några timmars odling med artid med MALDI- TOF