Snabb Resistensbestämning med disk diffusion. Emma Jonasson

Transkript

1 Snabb Resistensbestämning med disk diffusion Emma Jonasson

2 Samtalsämnen Varför snabb resistensbestämning Snabb res. enligt EUCAST-metoden Snabb res. från Urinprover Positiva blododlingar Möjligheter och begränsningar

3 Introduktion till snabb resistensbestämning Ökad antibiotikaresistens Riktad istället för empirisk behandling Snabbare svar snabbare rätt behandling Patienten blir bättre snabbare

4 Snabb resistensbestämning enligt EUCAST-metoden Eurostarprojektet, Eurostar Rapid disk projektet har som mål att utveckla en standardiserad metod för snabb automatiserad resistensbestämning med EUCAST brytpunkts tabell.

5 Metod McFarland på 0,5-0,6 Kort inkubation Plattor lästa från framsidan E. coli, E. feacalis 6 timmar S. aureus, Ps. aerugionosa 8 timmar Eurostar Metod Enterococcus faecalis ATCC efter 6h inkubation. Enterococcus faecalis ATCC efter 18h inkubation.

6 Eurostar QC-stammar Kvalitetskontroller Kort jfm standard inkubation Målvärdena 0-8mm lägre Spridningen var ca 5mm Escherichia coli ATCC Eurostar (6h) EUCAST (18h) (n=44/48) Target Range Target Range Cefotaxime Ciprofloxacin Meropenem Ceftazidime Piperacillin/tazobactam Trimethoprim Nitrofurantoin Tobramycin Gentamicin Enterococcus faecalis ATCC Eurostar (6h) EUCAST (18h) (n=55/56) Target Range Target Range Ampicillin Vancomycin Gentamicin 30* Linezolid Nitrofurantoin * 39/48 tested isolates

7 Eurostar kliniska isolat Mikrobiologiska laboratorium Hvidor, ImagA bänkmodell med manuell justering Amsterdam (AMC), Kiestra helautomatiska system Växjö, manuella avläsningar 93% av isolaten kunde läsas efter 6 el 8 timmar

8 Eurostar, kliniska isolat

9 EUROSTAR Sammanfattning Metod för snabb resistensbestämning (6 eller 8h), EUCAST disk diffusion metodik och kliniska brytpunkter. Resistens: MRSA (8h) ESBL i E.coli och K.pneumoniae (6h) Entreobacteriase: ciprofloxacin, cefotaxim, ceftazidim, meropenem och gentamicin S. aureus: cefoxitin, erytromycin och klindamycin

10 Långsamväxande bakterier Haemophilus influenzae 70 isolat >90% att läsa efter 8 timmar Separerar känsliga och resistenta Screening för β-laktam, 64/67 PBP-medierad resistens upptäcks

11 Haemophilus influenzae 8h 18h Screening för β-laktam resistens med PcG, 64/67 isolat kunde läsas av korrekt efter 8 timmar.

12 Långsamväxande bakterier Streptococcus pneumoniae 75 isolat 8 timmar inkubering 5/75 kunde inte läsas (8/75 för klindamycin) Separera känsliga och resistenta Nära brytpunkten

13 Långsamväxande bakterier Streptococcus pneumoniae 8h 18h Norfloxacin och S. pneumoniae, 8 timmars inkubation.

14 Direkt från urinprov 72 prover, riklig Enterobacteriaceae Inkubering 6h MH Uriselect

15 Antal isolat Direkt från urinprover Resultat 2/3 läsbara efter 6 timmar 29 st tydligt färgomslag Mindre zoner jfm med standarsinkubation Specifika brytpunker Enterobacteriaceae med ceftazidim 10 µg 47 kliniska isolat S R 0 Zondiameter (mm)

16 Direkt från Blododlingsflaskor 3 droppar till 1,5 ml NaCl Inkubering 6h för Enterobacter och Enterokock 8h för Staphylokocker 102 isolat

17 49 isolat Direkt från Blododlingsflaskor gramnegativer E. coli 31 st, (K. pneumoniae 8 st, P. mirabilis 6 st, P. aeruginosa 2 st, R. ornitolytica 1 st och E. cloacae 1 st) 11 mindre fel (me)

18 Direkt från Blododlingsflaskor 54 isolat S. aureus 22 st, resterande KNS 15 ej läsbara efter 8 timmar (KNS) 4 st väldigt allvarliga fel (VME) 2 st allvarliga fel (ME)

19 Direkt från blod Sammanfattning fungerar bra för Enterobacteriasae fungerar för S. aureus men mer data skulle behövas inte användbart för KNS

20 No of ioslates No of ioslates Begränsningar Tobramycin 10 µg, 6 hours incubation E. coli, 56 clinical isolates Kortare inkubering Ser inte kolonin Kromogena plattor R I S Färga in kolonier 4 2 Dålig separation 0 Inhibition zone diameter (mm) Tobramycin 10 µg, 8 hours incubation E. coli, 56 clinical isolates 25 Alla ab/agen komb. inte möjliga R I S 5 0 Inhibition zone diamter (mm)

21 Möjligheter Vad kan vi göra med resultatet Resbestämning på morgonen från koloni och läsa på eftermiddagen Resbestämning från urin och blododlingar Vad vill klinikerna ha? Viktigt med ID

22 Sammanfattning Snabb resistensbestämning är möjligt på 6 och 8 timmar Fungerande metod på urinprover Enterobacteriaceae Fungerande metod på blododlingar Enterobacteriaceae S. aureus Vad ska vi gör med resultatet?!

23

24 Vad säger EUCAST om D-AST EUCAST rekommenderar inte DAST Ett icke standardiserat inokulat Risk för Blandkultur och ph effekter Om man gör det ska man Validera Upprepa från ren koloni Om tunn växt rapportera inte S Inget stöd för kort inkuberingstid