Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod

Transkript

1 Avläsningsguide EUCAST lappdiffusionsmetod Version 4.0 Augusti 2014

2 Ändringar i EUCAST avläsningsguide Version Version 4.0 Augusti 2014 Version 3.0 Maj 2013 Version 2.0 Maj 2012 Version 1.0 September 2010 Ändringar Ytterligare information om otydliga zonkanter för streptokocker på bild 11. Förbättrade bilder för S. maltophilia och trimetoprim-sulfametoxazol, enterokocker och vankomycin samt S. aureus och bensylpenicillin på bild 17, 20 och 21. Särskilda instruktioner för detektion av inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker och streptokocker på bild Stafylokocker ändrat till S. aureus på bild 15 och 21. Ytterligare information kring avläsning av S. maltophilia och trimetoprimsulfametoxazol på bild 17. Ytterligare exempel för enterokocker och vankomycin på bild 20. Förtydligande angående avläsning på bild 3, 9, 10 och 22. Ytterligare exempel på inväxt i zon på bild 6. Ytterligare exempel på otyliga zonkanter för stafylokocker på bild 10. Exempel på β-hemolys på bild 13. Särskilda instruktioner för S. maltophilia på bild 17. Förtydligande angående Enterobacteriaceae och ampicillin på bild 18. Särskilda instruktioner för E. coli och mecillinam på bild 19. Ytterligare exempel med enterokocker och vankomycin på bild 20. Särskilda instruktioner för stafylokocker och bensylpenicillin på bild 21. EUCAST avläsningsguide publiceras för första gången i svensk version. 2

3 Avläsning Följande instruktioner för avläsning är en del av EUCAST lappdiffusionsmetod. Håll plattan på ca 30 cm avstånd, ta hänsyn till all växt som syns med blotta ögat och läs zonerna där växten slutar (se bild för särskilda avläsningsinstruktioner). Mät zondiametern med skjutmått, linjal eller med en automatisk zonavläsare. 3

4 Avläsning MH Mät zoner från baksidan mot en mörk bakgrund med belysning mot plattan MH-F Mät zoner från ovansidan utan lock med belysning mot plattan 4

5 Inväxt i zon Om det finns enskilda kolonier i zonen, undersök om det är en kontamination och gör om resistensbestämningen vid behov. Om det inte är en kontamination, ta hänsyn till kolonier i zon vid avläsning. 6 mm eller 6 mm Avläsning vid inväxt i zon. 5

6 Inväxt i zon Om det finns enskilda kolonier i zonen, undersök om det är en kontamination och gör om resistensbestämningen vid behov. Om det inte är en kontamination, ta hänsyn till kolonier i zon vid avläsning. E. coli med ESBL H. Influenzae med PBP-mutationer 6 mm 6 mm Avläsning vid inväxt i zon. 6

7 Svärmning Läs där växten slutar och bortse från svärmning som kan uppstå för Proteus-arter. 7

8 Dubbla zoner Kontrollera renhet och upprepa resistensbestämningen vid behov. Om inväxten inte är en kontamination, mät den inre zonen. Avläsning vid förekomst av dubbla zoner. 8

9 Otydliga zonkanter Enterobacteriaceae Håll plattan mot en mörk bakgrund på ca 30 cm avstånd och skapa en bild av var zongränsen går. Ta hänsyn till det som ser ut som växt vid första anblicken, utan att hålla upp plattan mot ljuset eller använda förstoringsglas. Avläsning av otydliga zonkanter för Enterobacteriaceae. 9

10 Otydliga zonkanter Stafylokocker Håll plattan mot en mörk bakgrund på ca 30 cm avstånd och skapa en bild av var zongränsen går. Ta hänsyn till det som ser ut som växt vid första anblicken, utan att hålla upp plattan mot ljuset eller använda förstoringsglas. Avläsning av otydliga zonkanter för stafylokocker. 10

11 Otydliga zonkanter S. pneumoniae Ta hänsyn till inväxt av små kolonier som är synliga med blotta ögat när plattan hålls på ca 30 cm avstånd. Förekomst av små kolonier i zonkanten kan bero på fuktiga MH-F plattor, och kan i vissa fall minskas genom torkning av plattorna före inokulering. 11

12 Växt eller hemolys? Läs zonen där växten slutar och inte där hemolysen slutar. Ibland kan det vara svårt att skilja hemolys från växt. β-hemolysiner diffunderar ut i agarn. β-hemolys är därför ofta fri från växt. α-hemolysiner diffunderar inte ut i agarn. Det är ofta växt i områden med α-hemolys. Zoner med α-hemolys ses vanligen med pneumokocker och β-laktamantibiotika. 12

13 β-hemolys Vicka på plattan för att se skillnad på växt och hemolys. β-hemolys är ofta fri från växt. S. pyogenes Streptococcus grupp C 13

14 α-hemolys Vicka på plattan för att se skillnad på växt och hemolys. Det är ofta växt i hela området med α-hemolys. För vissa organismer syns ytterligare α-hemolys utan växt. Vicka på plattan för att skilja mellan växt och hemolys! 14

15 Särskilda avläsningsinstruktioner Trimetoprim och trimetoprim-sulfametoxazol allmänt Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprimsulfametoxazol Enterobacteriaceae och ampicillin E. coli och mecillinam Enterokocker och vankomycin S. aureus och bensylpenicillin Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker och streptokocker 15

16 Trimetoprim och trimetoprimsulfametoxazol Följ instruktionerna för avläsning och mät den inre zonen då dubbla zoner förekommer. Bortse från en tunn hinna av växt in till lappen i en i övrigt tydlig zon. E. coli KNS Moraxella Haemophilus 16

17 Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprim-sulfametoxazol Bortse från inväxt i zonen, som kan ses för Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprimsulfametoxazol. Inväxten kan variera i utseende från tunn dimma till tydlig växt. 6 mm Om en yttre zon kan urskiljas, mät den yttre zonen. = Känslig om zonen 16 mm Tjock växt in till lappen = Resistent

18 Enterobacteriaceae och ampicillin Bortse från tunn inväxt i form av en inre zon som kan förekomma med viss Mueller Hintonagar. Den inre zonen förekommer inte med vissa batcher av agar och när yttre zonen läses ses ingen skillnad mellan batcher. 18

19 E. coli och mecillinam Bortse från isolerade kolonier i zonen. 6 mm 19

20 Enterokocker och vankomycin Håll upp plattan mot ljuset och undersök zonen. Otydlig zonkant och kolonier i zonen indikerar vankomycinresistens. Om zonen är 12 mm och zonkanten är otydlig, utför konfirmatoriska tester. E. faecalis Ej VRE E. faecium VRE 20

21 S. aureus och bensylpenicillin Håll upp plattan mot ljuset och undersök zonen. För att detektera penicillinasproduktion hos stafylokocker krävs att zondiametern mäts OCH att zonkanten undersöks noggrant. S. aureus med skarp zonkant och zondiameter 26 mm = Resistent S. aureus med otydlig zonkant och zondiameter 26 mm = Känslig 21

22 Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker Inducerbar klindamycinresistens kan detekteras genom antagonism mellan klindamycin och en makrolid. Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell antagonism (D-fenomen). Exempel på D-fenomen hos stafylokocker. 22

23 Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos streptokocker Inducerbar klindamycinresistens kan detekteras genom antagonism mellan klindamycin och en makrolid. Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell antagonism (D-fenomen). Exempel på D-fenomen hos streptokocker. 23

24 Avläsningsguide Håll plattan på ca 30 cm avstånd, ta hänsyn till all växt som syns med blotta ögat och läs zonerna där växten slutar. Undantag E. coli Ciprofloxacin S. aureus Linezolid S. aureus Erytromycin Enterobacteriaceae Ampicillin Observera att det ofta är växt i områden med α-hemolys! S. pneumoniae Kloramfenikol S. pneumoniae Tetracyklin S. pneumoniae Cefaklor 24