Extern och intern kvalitetskontroll. Erika Matuschek EUCAST Laboratory for AST

Transkript

1 Extern och intern kvalitetskontroll Erika Matuschek EUCAST Laboratory for AST

2 Kvalitetskontroll Nödvändigt för att kunna lita på sina resultat!

3 Extern kvalitetskontroll Att provocera laboratoriets rutiner med stammar med kända resistensmönster ( färdighetstestning ) Oberoende utvärdering där man kan jämföra utfallet Mellan laboratorier Över tid

4 Extern kvalitetskontroll Belyser ofta problemområden Organismer som normalt förekommer på laboratoriet (men ibland med ovanliga resistensmönster) Provet ska behandlas som övriga prover på laboratoriet

5 Extern kvalitetskontroll Resultaten analyseras och värderas Hur vanligt är ett visst problem? Tekniska svårigheter? Relaterat till tolkning?

6 Problem som kan upptäckas med extern kvalitetskontroll Fel lappstyrka Mupirocin 5 µg istället för 200 µg Avvikelser för svåra test HVISA VRE (vanb) Skrivfel!

7 Egen extern kvalitetskontroll 1. Omtestning av isolat genom ommärkning 2. Isolat delas och processas parallellt Möjliggör snabb återkoppling Bra underlag för diskussioner på laboratoriet Tätare kontroller än externa kvalitetsutskick

8 Intern kvalitetskontroll Rutinmässig kvalitetskontroll på laboratoriet säkerställer kontroll av Metodik Material (lappar, MH-agar mm) Inkubatorer

9 Intern kvalitetskontroll Bör utföras dagligen, särskilt för antibiotika som används rutinmässigt Resultaten från de senaste 20 konsekutiva mätningarna analyseras. Var uppmärksam på: Trender Zoner som upprepade gånger hamnar över eller under målvärdet Om två eller fler av 20 mätningar ligger utanför intervallet krävs felsökning

10 Avvikande resultat 2 icke-konsekutiva / 20 mätningar Rapportera resultat, men gör felsökning 2 konsekutiva / 20 mätningar Gör felsökning innan rapportering > 2 antibiotikalappar på samma dag Gör felsökning innan rapportering Kontrollstam förlorat resistensegenskaper Rapportera ej resultat, undersök och gör om

11 Zondiameter (mm) Övervakning av kvalitetskontroll Enstaka mätningar utanför QC-intervallet Alla mätningar inom intervallet men på samma sida om målvärdet. Övre gräns Målvärde (target) Nedre gräns Konsekutiva mätningar utanför intervallet på samma sida om målvärdet Dag

12 Kontrollstammar för intern kvalitetskontroll E. coli ATCC P. aeruginosa ATCC S. aureus ATCC E. faecalis ATCC S. pneumoniae ATCC H. influenzae NCTC 8468 (CCUG 23946)

13 Kontrollstammar med resistensmekanismer E. coli ATCC TEM-1 β-laktamas K. pneumoniae ATCC ESBL (SHV-18) S. aureus NCTC MRSA (meca-positiv) E. faecalis ATCC HLAR, VRE (vanb-positiv) H. influenzae ATCC β-laktamas-negativ, PBP-mutation

14 Escherichia coli ATCC (NCTC 12241, CIP 76.24, DSM 1103, CCUG 17620) Mueller-Hinton agar, McFarland 0.5, air, 35±1ºC, 18±2h. Read zone edges as the point showing no growth from the back of the plate against a black background illuminated with reflected light. MIC Disk content Inhibition zone size Antimicrobial agent (mg/l) (µg) (mm) Target 1 Range 2 Target 1 Range 3 Amikacin Amoxicillin-clavulanic acid 4/2 2/1-8/4 20/ Ampicillin Aztreonam Cefadroxil Cefepime Cefotaxime Cefoxitin Cefpodoxime Ceftazidime Ceftibuten Cefuroxime Chloramphenicol Ciprofloxacin Doripenem Ertapenem Gentamicin Imipenem Mecillinam Meropenem Moxifloxacin Nalidixic acid Nitrofurantoin Norfloxacin Piperacillin-tazobactam 2/4 1/4-4/4 30/ Tetracycline Tigecycline Tobramycin Trimethoprim Trimethoprim-sulfamethoxazole 0.5/ /

15 Streptococcus pneumoniae ATCC 49619*/** (NCTC 12977, CIP , DSM 11967, CCUG 33638) * Penicillin-intermediate strain ** Zone edges for S. pneumoniae on MH-F are often accompanied by α-haemolysis. Read inhibition of growth and not inhibition of haemolysis. Tilt the plate to easier differentiate between haemolysis and growth. There is usually growth in the whole area of α-haemolysis but on some MH-F media, there is additional α-haemolysis without growth. Mueller-Hinton agar + 5% horse blood and 20 mg/l β-nad, McFarland 0.5, 5% CO 2, 35±1ºC, 18±2h. Read zone edges as the point showing no growth viewed from the front of the plate with the lid removed and with reflected light. MIC (mg/l) Disk content Inhibition zone diameter (mm) Antimicrobial agent Target 1 Range 2 (µg) Target 1 Range 3 Amoxicillin Ampicillin Azithromycin Benzylpenicillin unit Cefaclor Cefepime Cefotaxime Cefpodoxime Ceftaroline IP IP Ceftriaxone Cefuroxime Chloramphenicol Ciprofloxacin Clarithromycin Clindamycin Daptomycin Doripenem Doxycycline Ertapenem Erythromycin Imipenem Levofloxacin Linezolid Meropenem Minocycline

16 Inhibition zone diameter (mm) E. coli ATCC with cefotaxime 5 µg Övre gräns Nedre gräns

17 Inhibition zone diameter (mm) 40 S. aureus ATCC with erythromycin 15 µg

18 Inhibition zone diameter (mm) 40 S. pneumoniae ATCC with erythromycin 15 µg

19 Inhibition zone diameter (mm) 40 H. influenzae NCTC 8468 with tetracycline 30 µg

20 Inhibition zone diameter (mm) 40 H. influenzae NCTC 8468 with trimethoprim-sulfamethoxazole 25 µg Tymidininnehåll i agarn Fukthalt Avläsning 0

21 Inhibition zone diameter (mm) 40 S. pneumoniae ATCC with trimethoprim-sulfamethoxazole 25 µg

22 Inhibition zone diameter (mm) 30 P. aeruginosa ATCC with gentamicin 10 µg

23 Inhibition zone diameter (mm) 30 P. aeruginosa ATCC with gentamicin 10 µg

24 Kontroll mot referensdistributioner Analysera egna distributioner mot referensdistributioner på Kan användas både för kvalitetskontrollstammar och kliniska isolat

25 Antal isolat (%) isolat E. coli Mecillinam Zondiameter (mm) EUCAST 5504 isolat 2 datakällor

26 Antal isolat (%) isolat E. coli Mecillinam Zondiameter (mm) EUCAST 5504 isolat 2 datakällor

27 % isolates 35 E. coli vs. cefotaxime 5 µg svenska laboratorier ResNet 2010 EUCASTs referensdistribution Inhibition zone diameter (mm)

28 23-31 mm Median: mm

29 21-31 mm Median: 26 mm

30 21-33 mm Median: 27 mm

31 21-35 mm Median: 27 mm

32 Potentiella felkällor (1) Förvaring av plattor Ej följt instruktioner vid tillverkning av plattor Medium Variation mellan batcher eller byte av leverantör Tillsatser (variation mellan batcher, fel mängd eller passerat utgångsdatum) ph Agardjup/Agarvolym Passerat utgångsdatum Test- förhållanden Ej följt minutersregeln (använd slamning inom 15 min, applicera lappar inom 15 min, inkubera inom 15 min) Inkubering (temperatur, miljö och tid) Felaktig inokulering (för tjockt, tunt eller ojämnt inokulat) Avläsning med fel belysning eller bakgrund Avläsning av zoner

33 Potentiella felkällor (2) Fel antibiotikalapp (fel antibiotika eller fel lappstyrka) Antibiotikainnehåll (felaktig förvaring, känsliga antibiotika, passerat utgångsdatum) Lapparna inte rumstempererade när behållaren öppnats För många lappar på plattan (interaktion mellan lappar) Antibiotikalappar Kontrollstammar Fel kvalitetskontrollstam Mutation Kontamination För gammal kultur

34 Följ metodbeskrivningen! Konfluerande inokulat (McFarland 0,5) Rätt styrka på antibiotikalappar Följ minutersregeln Inkubera h varken mer eller mindre! Följ instruktioner för avläsning

35 Felsökning vid problem Skicka plattor till Växjö för diagnostisering MH-agar Agardjup Antibiotikalappar Avläsning