Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod

Transkript

1 Avläsningsguide EUCAST lappdiffusionsmetod Version 5.0 Juni 2017

2 Ändringar från tidigare version (v 4.0) Bild Ändring 3 Förtydligande om automatiska zonavläsare. 17 Förtydligande om avläsning av trimetoprim-sulfametoxazol för Stenotrophomonas maltophilia. 18 Ampicillin-sulbaktam och amoxicillin-klavulansyra tillagt. 20 Avläsningsinstruktioner tillagt för fosfomycin och Escherichia coli. 21 Information tillagt om avläsning av vankomycin och enterokocker. 2

3 Avläsning Följande instruktioner för avläsning är en del av EUCAST lappdiffusionsmetod. Ta hänsyn till all växt som syns med blotta ögat när plattan hålls på ca 30 cm avstånd och läs zonerna där växten slutar. (se bild för särskilda avläsningsinstruktioner). Mät zondiametern till närmsta millimeter med skjutmått eller linjal. Om en automatisk zonavläsare används måste denna kalibreras mot manuell avläsning. 3

4 Avläsning MH Mät zoner från baksidan mot en mörk bakgrund med belysning mot plattan. MH-F Mät zoner från ovansidan utan lock med belysning mot plattan. 4

5 Inväxt i zon Om det finns enskilda kolonier i zonen, undersök om det är en kontamination och gör om resistensbestämningen vid behov. Om det inte är en kontamination, ta hänsyn till kolonier i zon vid avläsning. 6 mm eller 6 mm Avläsning vid inväxt i zon. 5

6 Inväxt i zon Om det finns enskilda kolonier i zonen, undersök om det är en kontamination och gör om resistensbestämningen vid behov. Om det inte är en kontamination, ta hänsyn till kolonier i zon vid avläsning. E. coli med ESBL H. Influenzae med PBP-mutationer 6 mm 6 mm Avläsning vid inväxt i zon. 6

7 Svärmning För Proteus spp., bortse från svärmning och läs zonen där växten slutar. 7

8 Dubbla zoner Kontrollera renhet och upprepa resistensbestämningen vid behov. Om inväxten inte är en kontamination, mät den inre zonen. Avläsning vid förekomst av dubbla zoner. 8

9 Otydliga zonkanter Enterobacteriaceae Håll plattan mot en mörk bakgrund på ca 30 cm avstånd och skapa en bild av var zongränsen går. Ta hänsyn till det som ser ut som växt vid första anblicken, utan att hålla upp plattan mot ljuset eller använda förstoringsglas. Avläsning av otydliga zonkanter för Enterobacteriaceae. 9

10 Otydliga zonkanter Stafylokocker Håll plattan mot en mörk bakgrund på ca 30 cm avstånd och skapa en bild av var zongränsen går. Ta hänsyn till det som ser ut som växt vid första anblicken, utan att hålla upp plattan mot ljuset eller använda förstoringsglas. Avläsning av otydliga zonkanter för stafylokocker. 10

11 Otydliga zonkanter S. pneumoniae Ta hänsyn till inväxt av små kolonier som är synliga med blotta ögat när plattan hålls på ca 30 cm avstånd. Förekomst av små kolonier i zonkanten kan bero på fuktiga MH-F plattor, och kan i vissa fall minskas genom torkning av plattorna före inokulering. 11

12 Växt eller hemolys? Läs zonen där växten slutar och inte där hemolysen slutar. Ibland kan det vara svårt att skilja hemolys från växt. β-hemolysiner diffunderar ut i agarn. β-hemolys är därför ofta fri från växt. α-hemolysiner diffunderar inte ut i agarn. Det är ofta växt i områden med α-hemolys. Zoner med α-hemolys ses vanligen med pneumokocker och β-laktamantibiotika. 12

13 β-hemolys Vicka på plattan för att se skillnad på växt och hemolys. β-hemolys är ofta fri från växt. S. pyogenes Streptococcus grupp C 13

14 α-hemolys Vicka på plattan för att se skillnad på växt och hemolys. Det är ofta växt i hela området med α-hemolys. För vissa organismer syns ytterligare α-hemolys utan växt. Vicka på plattan för att skilja mellan växt och hemolys! 14

15 Särskilda avläsningsinstruktioner Trimetoprim och trimetoprim-sulfametoxazol allmänt Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprimsulfametoxazol Enterobacteriaceae och ampicillin, ampicillin-sulbaktam samt amoxicillin-klavulansyra E. coli och mecillinam E. coli och fosfomycin Enterokocker och vankomycin S. aureus och bensylpenicillin Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker och streptokocker 15

16 Trimetoprim och trimetoprimsulfametoxazol Följ instruktionerna för avläsning och mät den inre zonen då dubbla zoner förekommer. Bortse från en tunn hinna av växt in till lappen i en i övrigt tydlig zon. E. coli KNS Moraxella Haemophilus 16

17 Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprim-sulfametoxazol Bortse från inväxt i zonen om en yttre zon kan urskiljas och rapportera isolatet som känsligt om zonen är S- brytpunkten. Observera att det kan vara kraftig inväxt i zonen. 6 mm Om en yttre zon kan urskiljas, mät den yttre zonen. = Känslig om zonen 16 mm Tjock växt in till lappen = Resistent 17

18 Enterobacteriaceae och ampicillin, ampicillin-sulbaktam samt amoxicillinklavulansyra Bortse från tunn inväxt i form av en inre zon som kan förekomma med viss Mueller Hintonagar. Den inre zonen förekommer inte med vissa batcher av agar och när yttre zonen läses ses ingen skillnad mellan batcher. 18

19 E. coli och mecillinam Bortse från isolerade kolonier i zonen. 6 mm 19

20 E. coli och fosfomycin Bortse från isolerade kolonier i zonen och läs den yttre zonen. 6 mm 20

21 Enterokocker och vankomycin Håll upp plattan mot ljuset och undersök zonen. Otydlig zonkant och kolonier i zonen indikerar vankomycinresistens. Om zonen är 12 mm och zonkanten är otydlig, utför konfirmatoriska tester. E. faecalis Ej VRE E. faecium VRE 21

22 S. aureus och bensylpenicillin Håll upp plattan mot ljuset och undersök zonkanten. För att detektera penicillinasproduktion hos stafylokocker krävs att zondiametern mäts OCH att zonkanten undersöks noggrant. S. aureus med skarp zonkant och zondiameter 26 mm = Resistent S. aureus med otydlig zonkant och zondiameter 26 mm = Känslig 22

23 Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos stafylokocker Inducerbar klindamycinresistens kan detekteras genom antagonism mellan klindamycin och en makrolid. Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell antagonism (D-fenomen). Exempel på D-fenomen hos stafylokocker. 23

24 Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos streptokocker Inducerbar klindamycinresistens kan detekteras genom antagonism mellan klindamycin och en makrolid. Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell antagonism (D-fenomen). Exempel på D-fenomen hos streptokocker. 24

25