Utvärdering av snabb resistensbestämning för Staphylococcus aureus och Streptococcus pneumoniae direkt från positiv blododlingsflaska

Storlek: px
Starta visningen från sidan:

Download "Utvärdering av snabb resistensbestämning för Staphylococcus aureus och Streptococcus pneumoniae direkt från positiv blododlingsflaska"

Transkript

1 Fakulteten för hälso- och livsvetenskap Examensarbete Utvärdering av snabb resistensbestämning för Staphylococcus aureus och Streptococcus pneumoniae direkt från positiv blododlingsflaska Författare: Rebecka Aniansson Ämne: Biomedicinsk laboratorievetenskap Nivå: Grundnivå

2 Utvärdering av snabb resistensbestämning för Staphylococcus aureus och Streptococcus pneumoniae direkt från positiv blododlingsflaska Rebecka Aniansson Examensarbete i biomedicinsk laboratorievetenskap 15 högskolepoäng Filosofie Kandidatexamen Handledare: Examinator: Annika Wistedt Överläkare, specialist i klinisk bakteriologi, Medicine doktor Monika Filipsson Universitetslektor Britt-Inger Marklund Universitetslektor Klinisk mikrobiologi Länssjukhuset Hus 17, plan Kalmar Linnéuniversitetet, Institutionen för biologi och miljö Hus Vita Kalmar Linnéuniversitetet, Institutionen för kemi och biomedicin Hus Vita Kalmar Examensarbetet ingår i programmet Biomedicinska analytikerprogrammet. Sammanfattning Sepsis är ett livshotande tillstånd som orsakas av bakterier i blodbanan. Tidig och korrekt antibiotikabehandling är viktig, antibiotikaresistens är ett ökande problem och resistensbestämning är därför essentiell. Vid sepsisdiagnostik med blododling krävs ofta minst två dygn innan resistensbesked kan ges. Antibiotikabehandling måste därför påbörjas innan odlingssvar. Rutinmetod för resistensbestämning vid svenska mikrobiologiska laboratorier är diskdiffusionsmetoden som är standardiserad av European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). Vid diskdiffusion odlas bakterier på agarplattor och hämningszoner kring pappersdiskar med antibiotika används som mått på antibiotikaeffekt. Metoden kräver framväxta bakteriekolonier på agarplattor som ursprungsmaterial och utförandet tar timmar. EUCAST har vidareutvecklat diskdiffusionsmetoden för snabb resistensbestämning (Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing, (RAST)). Resistensbestämning med diskdiffusion utförs då direkt från positiv blododlingsflaska och hämningszoner mäts redan efter 4, 6 och 8 timmar. I metoden används olika brytpunkter för känslighetskategorisering vid de olika tidpunkterna. Syftet med studien var att

3 undersöka hur väl RAST fungerade för Staphylococcus aureus och Streptococcus pneumoniae genom att undersöka bakterieisolat inokulerade i blododlingsflaskor. Totalt 31 isolat; 23 S.aureus och 8 S.pneumoniae undersöktes varav en hög andel med betalaktamresistens. Till båda bakteriearterna användes 5 sorters antibiotika. Zondiametrar mättes av två personer oberoende av varandra och resultaten jämfördes med de från standardiserad diskdiffusion. För S.aureus var vid 4 timmar 102/184 (55 %) avläsningar kategoriseringsbara, vid 6 timmar 164/184 (89 %) och vid 8 timmar 174/184 (95 %). Sammanlagt inträffade 7 felkategoriseringar varav 5 gällde underskattning av klindamycinresistens vid 4 timmar. S.pneumoniae hade sämre tillväxt och metoden var därför svårare att tillämpa. För S.pneumoniae var vid 4 timmar 74/80 (92 %) avläsningar kategoriseringsbara, vid 6 timmar 73/80 (91 %) och vid 8 timmar 77/80 (96 %). Resistens överskattades vid 21 zonmätningar vid 4 timmar. RAST fungerade väl för S.aureus efter 6 timmar. För S.pneumoniae kan sannolikt bedömning av penicillinresistens efter 6 timmar fungera men ytterligare undersökningar krävs. Nyckelord: MRSA, PNSP, diskdiffusion, blododling, antibiotikaresistens, RAST

4 Abstract Bacteria in the bloodstream may cause sepsis, therefore early and correct treatment is important. Antibiotic resistance is an increasing problem and antimicrobial susceptibility testing (AST) is essential for the patients survival. In sepsis with diagnosis based on blood culture, at least two days are required for results from AST. Routine AST-method in Swedish microbiological laboratories is the disc diffusion method standardized by the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). In disc diffusion, bacteria are grown on agar plates and inhibition zones around paper disks with antibiotics are used to measure the antibiotic effect. The method requires bacterial colonies as source material and takes hours. EUCAST has further developed the method for Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing (RAST). RAST is performed directly from positive blood culture bottles and inhibition zones are measured at 4, 6 and 8 hours. The method uses different breakpoints for categorization at the different timepoints. The purpose of the study was to evaluate RAST for Staphylococcus aureus and Streptococcus pneumoniae by examining bacterial isolates inoculated into blood culture bottles. Zone diameters were measured, and results were compared with those of standardized disk diffusion. For S.aureus, at 4 hours 102/184 (55%) readings were categorizable, at 6 hours 164/184 (89%) and at 8 hours 174/184 (95%). A total of 7 error categorizations occurred, 5 of which were underestimation of clindamycin resistance at 4 hours. For S.pneumoniae at 4 hours, 74/80 (92%) readings were categorizable, at 6 hours 73/80 (91%) and at 8 hours 77/80 (96%). Resistance was overestimated at 21 zone measurements at 4 hours.. RAST showed good results for S.aureus after 6 hours. For S.pneumoniae, further studies are required but RAST may work after 6 hours for penicillin resistance assessment.

5 Förkortningar APB AST ATP ATU CCUG erm EUCAST MALDI-TOF MS ME MH-agar MHF-agar MLSB MRSA PBP PCR PNSP R ROS RAST S VME Adsorbent Polymeric Beads Antimicrobial Susceptibility Testing Adenosintrifosfat Area of Technical Uncertainty Culture Collection University of Gothenburg Erytromycin Ribosomal Methylase European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry Major Error Mueller Hinton-agar Mueller Hinton Fastidious-agar Makrolid-Linkosamid-Streptogramin B MeticillinResistent Staphylococcus aureus PenicillinBindande Protein Polymerase Chain Reaction Penicillin-Non-Susceptible Pneumococci Resistent Reaktiva syreföreningar Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing Sensitiv Very Major Error

6 Innehållsförteckning 1 Introduktion Sepsis Blododlingsprocess Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae Antibiotika Resistensbestämning eller Antimicrobial Susceptibility Testing (AST) Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing Syfte 8 2 Material och metod Stammar Förberedelser Rapid antimicrobial susceptibility testing Viable count Avläsningsvariation Standardiserad diskdiffusion Etik 14 3 Resultat Staphylococcus aureus Kontroller Kliniska isolat Streptococcus pneumoniae Kontroller Kliniska isolat Avläsningsvariation 20 4 Diskussion Avläsningsvariation Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae Ekonomiska aspekter och klinisk relevans Slutsats 25 Referenser 26 Bilaga I Rådata Staphylococcus aureus kontrollstammar Bilaga II Rådata Staphylococcus aureus mätvärden Bilaga III Rådata Streptococcus pneumoniae kontrollstammar Bilaga IV Rådata Streptococcus pneumoniae mätvärden

7 1 Introduktion Bakterier kan orsaka flera olika typer av infektioner (1). Ett exempel är sepsis (blodförgiftning) som utan en snabb och korrekt behandling kan vara dödligt (2). Dagens behandling vid bakterieinfektion är antibiotika, men resistens mot antibiotika hos bakterier är ett allt mer ökande problem (1). För att avgöra om en bakterie i blodet är resistent används vanligen metoder som ofta tar minst två dygn från att patienten provtagits för sepsis (3). Då mortaliteten vid sepsis ökar med varje timme utan korrekt behandling är det viktigt med en snabb utredning (2). I detta arbete kommer därför en ny alternativ metod utvärderas och jämföras mot en standardmetod, och dess tillämpbarhet kommer diskuteras. 1.1 Sepsis Vid vissa allvarliga infektioner kan bakterier nå blodbanan (bakteriemi). I många fall innebär det mycket allvarliga symptom (sepsis) och en risk för septisk chock med en livshotande organdysfunktion som följd av infektionen och immunsvaret på denna (2). Sepsis orsakar årligen runt 6 miljoner dödsfall i världen. Organdysfunktion som uppstår vid sepsis orsakas av syrebrist i organen på grund av ett flertal reaktioner från immunförsvaret. Exempel på organ som påverkas är lungorna, njurarna, magtarmkanalen, levern och dessutom ses nedsatt funktion hos blod-hjärnbarriären (4). Bakterierna kan komma från bland annat lungorna, urinvägarna eller via en hudinfektion och några av de vanligaste patogenerna som orsakar sepsis är Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes och Streptococcus pneumoniae (5). Snabb och korrekt behandling i ett tidigt skede vid sepsis är mycket viktigt. Om korrekt antibiotikabehandling sätts in inom den första timmen av septisk chock är överlevnadschanserna ca 80 % och enligt flera studier ökar mortaliteten för varje timme med fördröjd antibiotikabehandling (2). Riskerna vid försenad behandling är högre ju mer allvarligt sjuk patienten är, och det är inte enbart den första antibiotikadosen som kan vara livsavgörande utan även de efterföljande (6). För att ställa sepsisdiagnosen görs odlingar från patientens blod. Direkt efter att blodprovet tagits sätts en bred antibiotikabehandling in utan att invänta odlingsresultatet (7). 1

8 1.2 Blododlingsprocess Vid misstanke om sepsis görs vanligtvis blododlingar i fyra flaskor om två par där varje par består av en aerob och en anaerob flaska (8). Vid det kliniskt mikrobiologiska laboratoriet vid länssjukhuset i Kalmar län används blododlingssystemet BacT/ALERT Virtuo från biomérieux. I botten på blododlingsflaskorna finns en ph-indikator som ändrar färg vid en ph-sänkning. Då mikroorganismer tillväxer produceras koldioxid vilket leder till en ph-förändring. Flaskorna placeras i ett så kallat blododlingsskåp där de inkuberas i värme. I blododlingsskåpet läses färgförändringen på ph-indikatorn av och flaskan indikeras som positiv då en ph-förändring registrerats. Om ingen förändring registreras efter ett bestämt antal dagar bedöms flaskan som negativ (9). I flaskorna finns det Adsorbent Polymeric Beads (APB) som binder och hämmar vissa typer av antibiotika (10). Flaskorna innehåller dessutom bland annat peptonextrakt, antikoagulanter, vitaminer, kolkällor och spårelement (11, 12) samt en blandning av gaserna koldioxid, syre och kväve i den aeroba flaskan (11) och koldioxid och kväve i den anaeroba flaskan (12). Vid det kliniskt mikrobiologiska laboratoriet på länssjukhuset i Kalmar län utförs en gramfärgning på material från den positiva blododlingsflaskan för att bedöma gramreaktion och morfologi. Innehåll från flaskan appliceras även på agarplattor som inkuberas (13). När tillväxt skett på agarplatta (ofta inom 4-8 timmar) görs en artbestämning av bakterien med instrumentet Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectometry (MALDI-TOF MS) och beroende på resultatet utförs en antibiotikaresistensbestämning med diskdiffusionsmetoden eller gradienttest (se avsnitt 1.5) av bakterien (14). Resistensbestämningen läses av dagen därpå (3) men för vissa snabbväxande gramnegativa stavar kan gradienttest användas för en snabb bedömning av resistensen inom 4-8 timmar (15). 1.3 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus är en grampositiv kock som växer i klasar (1). Bakterien koloniserar ca % av alla vuxna (5). S.aureus kan bland annat orsaka hudinfektioner, sepsis och pneumoni (lunginflammation) (1). För att diagnostisera en S.aureus-orsakad infektion görs bakterieodlingar. I Sverige består 2

9 behandling av isoxazolylpenicilliner eller andra betalaktamasstabila antibiotika som förstahandsalternativ (5). Anledningen till att de ska vara betalaktamasstabila är att ca 90 % av alla S.aureus producerar betalaktamas (16) som binder till betalaktamringen som finns i alla penicilliner, karbapenemer och cefalosporiner, vilket leder till nedbrytning av antibiotika (se avsnitt 1.5). Om patienten är allergisk mot penicillin kan exempelvis klindamycin ges (5). Meticillinresistenta Staphylococcus aureus (MRSA) upptäcktes i början av 1960-talet. Genen som ger meticillinresistens kallas för meca (16). De betalaktamasstabila penicillinerna som är verksamma mot vanliga S.aureus verkar genom att binda till penicillinbindande protein (PBP) i bakteriens membran. meca kodar för en annan typ av PBP (PBP2a) som de flesta betalaktamantibiotika inklusive isoxazolylpenicilliner inte kan binda till (5). År 2017 upptäcktes 37 fall med MRSA per invånare i Sverige och i Kalmar län 72 fall per invånare (17). Enligt lokal statistik vid kliniskt mikrobiologiska laboratoriet på länssjukhuset i Kalmar län var det år patienter som diagnosticerats med S.aureus i blodet varav 2 MRSA. 1.4 Streptococcus pneumoniae Streptococcus pneumoniae är en grampositiv kock som ofta växer i par (diplokocker) eller kedjor (1, 5). Bakterien koloniserar främst yngre barn (18). Den kan bland annat orsaka svåra sjukdomar som lunginflammation, öroninflammation, meningit (hjärnhinneinflammation), endokardit (inflammation i hjärtklaffarna) och sepsis (1). Behandlingen vid pneumokockinfektioner består vanligtvis av penicilliner. Pneumokockerna kan utveckla en penicillinresistens och då kan behandlingen istället ske med erytromycin eller klindamycin (5). Då pneumokockerna utvecklat en resistens mot penicillin kallas de för pneumokocker med nedsatt känslighet för penicillin (PNSP, Penicillin-Non-Susceptible Pneumococci). År 2017 upptäcktes 0,6 fall med resistenta S.pneumoniae per invånare i Sverige och i Kalmar län 0,82 fall per invånare (19). Enligt lokal statistik vid kliniskt mikrobiologiska laboratoriet på länssjukhuset i Kalmar län hade år patienter S.pneumoniae i blodet varav 2 PNSP. 3

10 1.5 Antibiotika Vid behandling av bakteriella infektioner används antibiotika eller så kallade antimikrobiella medel (1). Det finns en stor variation av antibiotika med olika breda spektrum och olika verkningsmekanismer. De kan bland annat påverka DNA-syntesen på olika sätt, påverka RNA-syntesen, hämma proteinsyntesen och blockera cellväggssyntesen (20). β-laktamantibiotika är ett exempel på antibiotika som blockerar cellväggssyntesen hos bakterier. Till gruppen β-laktamantibiotika hör bland annat penicillinerna och cefalosporiner. Vid bakteriernas cellväggssyntes är ett membranbundet transmembranprotein aktivt som katalysator. Detta protein är ett PBP och hämmas av β-laktamantibiotika där en β-laktamring är den aktiva komponenten. Hämningen av proteinet leder till att vissa reaktioner som ska ske vid cellväggssyntesen hämmas, cellväggen blir då instabil och bakterien lyserar (20). β-laktamantibiotika är ofta förstahandsvalet för behandling vid infektioner av bland annat S.aureus och S.pneumoniae (5). Vid penicillinallergi är behandling med klindamycin ett alternativ (5). Klindamycin tillhör antibiotikagruppen makrolid-linkosamid-streptogramin B (MLSB) (21) som verkar genom att binda till ribosomen och stoppa proteinsyntesen (22). Att bakterierna utvecklar resistens mot antibiotika är ett ökande problem (5). Olika typer av resistensmekanismer har utvecklats hos bakterier, bland annat flera mekanismer som leder till en nedsatt känslighet för β-laktamantibiotika (23). Exempelvis kan de ibland producera enzymet β-laktamas. Enzymet binder till β-laktamringen i β-laktamantibiotika och spjälkar β-laktamringen och inaktiverar därmed antibiotikan. Detta är den vanligaste resistensmekanismen mot β-laktamantibiotika (20). En annan resistensmekanism mot β- laktamantibiotika är att PBP förändras vilket förekommer hos både S.aureus och S.pneumoniae. Förändringen hos PBP leder till en låg affinitet för betalaktamer (20). S.aureus får en förändring av PBP genom att genen meca kodar för en annan typ av PBP (5). Hos S.pneumoniae utvecklas resistensen med flera stegvisa punktmutationer istället (20). 4

11 Som svar på β-laktamasorsakad resistens utvecklades isoxazolylpenicilliner som har en isoxazolylgrupp som skyddar β-laktamringen och därmed gör antibiotikan mer betalaktamasstabil. Dock fungerar dessa antibiotika inte om bakterien utvecklat ett nytt eller förändrat PBP (20). Vissa bakterier kan ha en så kallad inducerbar klindamycinresistens. Det ser då ut som att den är känslig för klindamycin vid resistensbestämning in vitro, samtidigt som den är resistent mot makroliden erytromycin (21). Detta beror på att en förändring skett på ribosomerna tack vare en erytromycin ribosomal metylas (erm)-gen. När en makrolid (exempelvis erytromycin) binder till bakterien uttrycks erm-genen och en resistens mot bland annat klindamycin uppstår då bindningsstället på ribosomen förändras (22). För att upptäcka denna resistensmekanism måste resistensbestämningen anpassas (24) (se avsnitt 1.6). 1.6 Resistensbestämning eller Antimicrobial Susceptibility Testing (AST) Antimicrobial Susceptibility Testing (AST) är metoder för att undersöka antibiotikaresistensmönstret hos olika bakterier. Exempel på en metod för detta är diskdiffusionsmetoden. Diskdiffusionsmetoden baseras på att pappersdiskar impregnerats med en känd mängd antibiotika. Disken placeras på en agarplatta med nyutstrukna bakterier och antibiotika diffunderar ut i agarn och bildar en koncentrationsgradient. Om bakterien är känslig mot antibiotikan kan den inte växa nära disken (1). Detta ses som en klar zon där bakterierna inte växer. Zonen mäts och zondiametern jämförs med bestämda SIR-brytpunkter (sensitiv, intermediär, resistent) för att klassificera om bakterien är möjlig att behandla eller inte (25). Sensitiv innebär att bakterien är känslig, intermediär står för att bakterien är känslig vid ökad exponering och att bakterien är resistent innebär att den inte är känslig trots höga antibiotikakoncentrationer (26). EUCAST (EUropean Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) har tagit fram en standardiserad metod med bestämda brytpunkter 5

12 för diskdiffusion. Metoden är kalibrerad mot referensmetoden buljongspädning (25). Den standardiserade diskdiffusionsmetoden innebär att bakteriekolonier från en övernattskultur slammas i 0,9 % NaCl tills suspensionen, som mäts turbidimetriskt når 0,5 ± 0,1 McFarland. Suspensionen sprids tätt på Mueller Hinton (MH) agar eller Mueller Hinton fastidious (MHF) agar för hand eller med rotator helst inom 15 min och absolut inom 60 min. Inom 15 minuter ska antibiotikadiskarna appliceras på plattan och då detta har gjorts ska plattan inom 15 minuter placeras i 35 ± 1 C i h. MH-plattorna inkuberas i luft och MHF-plattorna i 5 ± 1 % CO2 i inkubator. Vid avläsning bör en tydlig matta med bakterier ses så att zonerna runt diskarna är tydliga (25). Vid felaktiga resultat används uttrycken major error (ME) som innebär att isolatet felaktigt bedöms som resistent och very major error (VME) som innebär att isolatet felaktigt bedöms som känsligt (27). För att upptäcka inducerbar klindamycinresistens kan en klindamycindisk och en erytromycindisk placeras nära varandra på agarplattan. Erytromycinet inducerar då klindamycinresistensen och på agarplattan kan en skarp kant ses mellan erytromycin och klindamycin ( D-zon ) (24) se figur 1. Figur 1 Inducerad klindamycinresistens där en "D-zon" kan ses med en kant på klindamycinzonen på den sida som är mot erytromycindisken. Bild tagen under det laborativa arbetet. 6

13 Ett annat exempel på en resistensbestämningsmetod är gradienttest. Metoden baseras likt diskdiffusionsmetoden på att antibiotika diffunderar ut i agarn på en platta med nyutstrukna bakterier. Istället för pappersdiskar med antibiotika används en plastremsa som är impregnerad med en antibiotikagradient och bakteriens känslighetsnivå kan bedömas genom att avläsa vid vilken antibiotikakoncentration bakterieväxten tangerar plastremsan. Detta jämförs med förutbestämda värden för att avgöra om bakterien är resistent eller känslig (1). 1.7 Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing Det finns även snabba metoder för resistensbestämning, exempelvis Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing (RAST). EUCAST har tagit fram en snabb metod för resistensbestämning direkt från blododlingsflaskor och metoden innebär att μl av innehållet i blododlingsflaskan droppas på en MH- eller MHF-platta och stryks ut tätt över hela plattan. Utvalda antibiotikadiskar beroende på bakterieart placeras på plattan. Plattorna inkuberas i samma miljöer som vid den standardiserade diskdiffusionsmetoden och efter 4 timmar ± 5 minuter avläses plattorna. De får enbart vara ute i rumstemperatur i 10 minuter och zonerna ska ha tydliga avgränsningar för att kunna mätas. Om avläsning inte kan ske återinkuberas plattorna och de kan då läsas av efter 6 eller 8 timmar istället. För varje avläsningstillfälle (4, 6 och 8 timmar) och art finns specifika brytpunkter framtagna. Brytpunkterna blir något större för varje avläsningstillfälle, dvs att en ökning av zonstorleken ses under de första timmarna. Dessa brytpunkter är för tillfället endast bestämda för 8 olika bakteriearter och bara vissa specifika antibiotika. Plattorna ska avläsas framifrån utan lock, med ljus reflekterande i plattan och i ca 45 graders vinkel, MH-plattan mot mörk bakgrund och MHF-plattan mot ljus bakgrund (28). Mellan brytpunkterna för känslighet och resistens finns Area of Technical Uncertainty (ATU) där resultatet är osäkert och inget resultat kan lämnas ut vid den aktuella tidpunkten (25). En annan variant av snabb resistensbestämning direkt från positiva blododlingsflaskor är PCR (Polymerase Chain Reaction) för specifika resistensgener (29). Det finns också en snabb resistensbestämningsmetod direkt från positiva blododlingsflaskor för enbart gramnegativa stavar som redan används vid det kliniskt mikrobiologiska laboratoriet på 7

14 länssjukhuset i Kalmar län. Metoden som används är gradienttest på en agarplatta där blodkulturen strukits ut och resultatet avläses efter tidigast 4 timmar (15). 1.8 Syfte Syftet med undersökningen var att utvärdera EUCAST s metod Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing (RAST) för Staphylococcus aureus samt Streptococcus pneumoniae och jämföra resultaten med de från den standardiserade diskdiffusionsmetoden. Arbetet avser att besvara följande frågeställningar: 1. Är resultaten från EUCAST s metod RAST likvärdiga med resultat från standardiserad diskdiffusionsmetod? 2. Kan metoden tillämpas på ett säkert och effektivt sätt i klinisk rutindiagnostik på det kliniskt mikrobiologiska laboratoriet vid Länssjukhuset i Kalmar? 2 Material och metod 2.1 Stammar Under det praktiska arbetet användes två kontrollstammar till försöken med S.aureus. Stammarna kom från Culture Collection University of Gothenburg (CCUG). CCUG15915 är en S.aureus från sår, vilken ofta rekommenderas som känslig referensstam (30). CCUG35600 är en S.aureus som är resistent mot meticillin/oxacillin, tetracyklin, erytromycin, klindamycin och känslig för gentamicin (31). För kontrollstammen CCUG15915 fanns bestämda målvärden och målintervall för zonstorlekarna bestämda av EUCAST. Andra stammar som användes var från patientprover tagna från olika lokaler (sår, blod m fl.) samt stammar som skickats till laboratoriet för kvalitetskontroll. Av isolaten var det 16 kända MRSA-stammar som användes samt 7 känsliga S.aureus. De resistenta stammarna hämtades från -80 C frys och de känsliga stammarna hämtades från den dagliga rutinen på laboratoriet. Samtliga stammar var sedan tidigare bekräftade S.aureus samt resistensbestämda med diskdiffusion. Samtliga MRSA-stammar var verifierade med meca- 8

15 PCR. Av stammarna var 1 gentamicinresistent, 3 norfloxacinresistenta samt 7 klindamycinresistenta varav 5 hade inducerbar klindamycinresistens. Kontrollstammarna som användes vid försöken med S.pneumoniae var CCUG33638 som är en penicillinresistent S.pneumoniae från sputum (32) samt en stam som tidigare erhållits som extern kontroll på laboratoriet. Den var alltså inte inköpt utan skickad till laboratoriet som kontroll och hade sedan sparats och saknade därför stambeteckning. Den var känslig för penicillin. För kontrollstammen CCUG33638 fanns bestämda målvärden och målintervall för zonstorlekarna bestämda av EUCAST. Kliniska isolat utgjordes av 6 penicillinresistenta stammar samt 2 penicillinkänsliga stammar. Stammarna var frysta i -80 C och bestod av isolat från patientprover samt stammar som skickats till laboratoriet för kvalitetskontroll. Av stammarna var 2 resistenta mot trimethoprim-sulfamethoxazol, 1 stam var klindamycinresistent, 4 erytromycinresistenta och alla stammar var känsliga för norfloxacin. 2.2 Förberedelser De frysta stammarna som skulle användas togs från frys och spreds på blodagarplattor (Columbia Blood Agar Base, Acumedia 7125, NEOGEN Lansing, USA) med bomullspinne medan de stammar som hämtades från den dagliga rutinen spreds med 1 µl platinös. Kolonier av kontrollstammarna plockades från blodagarplattor i en kyl på laboratoriet. Isolaten spreds på blodagarplattor med 1 μl-platinös. Alla plattor placerades i termostat 34-36ºC över natt. Kolonier från stammar som inkuberats över natt slammades i 1,5 ml NaCl 0,9 % tills 0,5 McFarland uppnåtts, vilket kontrollerades med DensiCheck plus (biomérieux, Inc, Durham, USA). Tre rör per stam fylldes med 1,089 ml NaCl 0,9 %. Av de slammade bakterierna pipetterades 11 μl till ett av dessa rör för att uppnå en spädning på 1:100. Röret vortexades (Vortex-Genie 2, Scientific Industries, New York, USA) och 11 μl togs från detta rör och tillfördes till nästa rör vilket gav en spädning på 1: Detta upprepades till det sista röret vilket gav en slutlig spädning på 1: Mellan varje spädning vortexades rören noggrant. 9

16 Aeroba blododlingsflaskor (BACT/ALERT FA Plus, lot , biomérieux, Inc, Durham, USA) till S.aureus och anaeroba blododlingsflaskor (BacT/ALERT FN Plus Anaerob, lot , biomérieux, Inc, Durham, USA) till S.pneumoniae märktes upp. Gummimembranet på flaskorna steriliserades genom att 99,9 % etanol droppades på det och brändes av. Spruta 5 ml Omnifix S med kanyl, injektion 1,2 x 50 mm rosa, Sterican 18 G x2 användes för att dra upp 5 ml defibrinerat hästblod (Håtunalab AB; Håtunaholm, Sverige). Blodet sprutades ner i flaskorna. Gummimembranet på flaskorna desinficerades igen. Spruta 1 ml MX Omnifix S med kanyl användes för att dra upp och spruta ner 1 ml av de spädda bakteriesuspensionerna i flaskorna. Gummimembranen desinficerades och brändes av igen och placerades i instrumentet BacT/ALERT Virtuo (biomérieux, Inc, Durham, USA). Metoden ovan följde rekommenderad Quality control (QC) -metod från EUCAST (27). Första dagen ympades enbart dubbelprover av de två kontrollstammarna av S.aureus, där det sista spädningssteget utfördes i två rör för att uppnå en tillräcklig mängd. Under första perioden av studien analyserades S.aureus och därefter S.pneumoniae; 2 4 av de kliniska isolaten samt de två kontrollstammarna av samma art som de kliniska isolaten analyserades varje dag. 2.3 Rapid antimicrobial susceptibility testing De positiva flaskorna togs ur blododlingsskåpet på morgonen, flaskorna hade indikerats positiva 5 11 timmar innan de hämtades. Gummimembranet på flaskorna steriliserades genom att 99,9 % etanol droppades på det och brändes av. En steril ventilationsnål (sterile airway needle/subculture units) stacks i flaskorna och ca 6 droppar blod blandat med flaskinnehåll droppades på en MH-platta (agarbas från OXOID, Basingstoke, UK) för S.aureus och på en MHF-platta för S.pneumoniae. Antalet droppar från de positiva blododlingsflaskorna som skulle användas beräknades genom att ett visst antal droppar från en blododlingsflaska droppades i ett rör. Innehållet i röret sögs upp med en 1 ml spruta och volymen noterades. Målet var volymen µl. 10

17 Provet spreds tätt på plattorna med bomullspinne när plattorna stod på en plattrotator (Retro C80, biomérieux, Marcy-l'Étoile, Frankrike). Antibiotikadiskar i tabell I applicerades på MH-plattan enligt figur 2 och antibiotikadiskarna i tabell II applicerades på MHF-plattorna enligt figur 3. För att detektera MRSA användes cefoxitin (33) och för att detektera PNSP användes oxacillin (34). Klockslaget för inkubering antecknades och MHplattorna placerades i termostat 34-36ºC och MHF-plattorna placerades i 34-36ºC i en inkubator (BINDER, Tuttlingen, Tyskland) med 5 % CO2 atmosfär. Tabell I De antibiotikadiskar som använts för resistensbestämning av S.aureus. Antibiotika Styrka (µg) Förkortning Tillverkare Lot Cefoxitin 30 FOX OXOID, Basingstoke, UK Norfloxacin 10 NOR OXOID, Basingstoke, UK Gentamicin 10 CN OXOID, Basingstoke, UK Klindamycin 2 DA OXOID, Basingstoke, UK Erytromycin 15 E OXOID, Basingstoke, UK Figur 2 Schema för antibiotikadiskarnas placering på Mueller-Hintonplattorna S.aureus odlades på. NOR står för norfloxacin, DA står för klindamycin, E står för erytromycin, FOX står för cefoxitin och CN för gentamicin. 11

18 Tabell II De antibiotikadiskar som använts för resistensbestämning av S.pneumoniae. Antibiotika Styrka (µg) Förkortning Tillverkare Lot Oxacillin 1 OX OXOID, Basingstoke, UK Norfloxacin 10 NOR OXOID, Basingstoke, UK Klindamycin 2 DA OXOID, Basingstoke, UK Erytromycin 15 E OXOID, Basingstoke, UK Trimethoprim-sulfamethoxazole 25 SXT OXOID, Basingstoke, UK Figur 3 Schema för antibiotikadiskarnas placering på Mueller-Hinton-fastidiousplattorna S.pneumoniae odlades på. NOR står för norfloxacin, DA står för klindamycin, E står för erytromycin, OX står för oxacillin och SXT för trimethoprim-sulfamethoxazol. Plattorna togs ut från termostaten och eventuella zoner runt diskarna mättes av två personer oberoende av varandra. Till hjälp i detta arbete användes den personal på laboratoriet som för dagen var placerad på arbetsstationen för blododlingar. Detta innebar att totalt 8 olika personer med behörighet för resistensavläsning deltog vid zonregistreringarna. Således erhölls 2 zonregistreringar för varje platta efter 4 timmars inkubering ± 5 min. Inom 10 min återinkuberades plattorna. Proceduren upprepades efter 6 och 8 timmar. Zondiametrarna jämfördes med brytpunkterna för bedömning vid RAST enligt tabell från EUCAST (35). För S.aureus-isolaten mättes inte zonerna runt erytromycindisken då brytpunkter inte är framtagna. Erytromycin användes enbart för att upptäcka inducerbar klindamycinresistens (28). 12

19 Alla uppmätta zondiametrar registrerades i ett diagram i Excel för att kunna ställa resultatet från RAST mot resultaten från standardiserad diskdiffusion. 2.4 Viable count Vid ett tillfälle per bakterieart kontrollerades tätheten i inokulatet vid bakterietillsats till blododlingsflaskorna. Vid korrekt spädning skulle det vara colony forming units (CFU)/ml. Spädning utfördes på samma sätt som då bakterier skulle sättas till blododlingsflaskor. Från röret med spädningen 1: pipetterades 100 μl upp med automatpipett och spreds på blodagarplatta. Plattorna inkuberades i termostat 34-36ºC över natt och därefter räknades kolonierna på plattan. Det skulle vara kolonier på plattan för att spädningen skulle kunna godkännas. 2.5 Avläsningsvariation Avläsningsvariationen mellan personal på laboratoriet kontrollerades genom att ytterligare en platta för snabb resistensbestämning inokulerades. Denna platta användes för obereoende zonavläsning av 6 personer efter 6 timmars inkubering. Uppmätta zondiametrar antecknades. 2.6 Standardiserad diskdiffusion Standardiserad diskdiffusion enligt EUCAST s metod användes för att bestämma bakteriernas resistens eller känslighet. Kolonier från blodagar av stammar som odlats över natt slammades i 1,5 ml NaCl 0,9 % tills 0,5 ± 0,1 McFarland uppnåtts, vilket kontrollerades med DensiCheck plus. En steril bomullspinne användes för att jämnt stryka ut de slammade S.aureus på en MH-platta och S.pneumoniae på en MHF-platta med hjälp av plattrotator (24). Antibiotikadiskarna i tabell I placerades enligt schemat i figur 2 på MH-plattorna, antibiotikadiskarna i tabell II placerades enligt figur 3 på MHF-plattorna. MH-plattorna placerades i termostat i 34-36ºC och MHF-plattorna i 34-36ºC med 5 % CO2 i h. 13

20 2.7 Etik Under hela försöket har de isolat som använts inte kopplats till någon patientinformation. Detta leder till att patientens integritet skyddas. Vid tillfällen där patientdata varit synlig, exempelvis vid kontroll av tidigare resultat gäller sekretessen (offentlighets- och sekretesslagen, ((2009:400 OSL) kap 25, 1 ). Etikprövning krävs inte för laboratorieundersökningar med enbart bakterier. 3 Resultat 3.1 Staphylococcus aureus Kontroller Mätvärden från RAST av kontrollstammen CCUG15915 (känslig S.aureus) jämfördes med av EUCAST bestämda målvärden och målintervall. Sammanlagt 5 gånger var resultat utanför målintervallet, norfloxacin efter 4 timmar och klindamycin vid alla mättillfällen. 30 mätningar utfördes per mättillfälle och antibiotikadisk. Av de beräknade medianerna var klindamycin under målvärdet efter 4 timmar och gentamicin under målvärdet efter 6 timmar, se tabell III. För rådata se bilaga I tabell X, XI och XII. 14

21 Tabell III Tabellen visar medianen och de högsta och lägsta värdena från resultatet för kontrollstammen CCUG15915 (S.aureus) vid de dagliga mätningarna efter 4, 6 och 8 timmar samt av EUCAST bestämda målvärden och målintervall. Röd färg indikerar att medianen inte stämde överens med målvärdet eller att högsta/lägsta värden inte låg inom målintervallet. Antibiotika Målvärde (mm) Zondiameter (median, Målintervall (mm) Lägsta uppmätta värde (mm) Högsta uppmätta värde (mm) mm) 4h Cefoxitin Norfloxacin Gentamicin Klindamycin h Cefoxitin Norfloxacin Gentamicin Klindamycin 20 19, h Cefoxitin Norfloxacin Gentamicin Klindamycin För kontrollstammen CCUG35600 (MRSA) saknas bestämda målvärden och målintervall vid RAST-metoden. Av 30 mätningar per mättillfälle och antibiotika skedde en felkategorisering för cefoxitin efter 4 timmar. För beräknad median, högsta och lägsta värde efter 4, 6 och 8 timmar se tabell IV. För rådata se bilaga I tabell XIII, tabell XIV och tabell XV. 15

22 Tabell IV Tabellen visar medianen och de högsta och lägsta värdena från resultatet för kontrollstammen CCUG35600 (MRSA) vid de dagliga mätningarna efter 4, 6 och 8 timmar. Till höger visas EUCAST s brytpunkter. Röd färg innebär att en felkategorisering skett. Antibiotika Zondiameter Lägsta Högsta S ATU R < (median, mm) uppmätta värde (mm) uppmätta värde (mm) 4h Cefoxitin Norfloxacin Gentamicin Klindamycin h Cefoxitin 14, Norfloxacin Gentamicin 14, Klindamycin h Cefoxitin Norfloxacin Gentamicin Klindamycin Kliniska isolat Resultatet från RAST-metoden visar att inga av de testade kliniska stammarna felkategoriserades för norfloxacin, cefoxitin eller gentamicin efter sammanlagt 414 mätningar (tabell V). För klindamycin har 5 mätningar visat VME efter 4 timmar, och en mätning efter 6 timmar. En stam hade även ett ME efter 6 timmar. För rådata från RAST samt den standardiserade diskdiffusionsmetoden se bilaga II tabell XVI. Efter 4 timmar var det sammanlagt 63 av 184 avläsningar på 23 plattor som inte kunde bedömas. Efter 6 och 8 timmar kunde samtliga zoner läsas av. 92 zoner bedömdes av två personer vid tre tidpunkter. Vid 4 timmar var 102/184 (55 %) avläsningar kategoriseringsbara (utanför ATU). Vid 6 timmar var 164/184 (89 %) avläsningar 16

23 kategoriseringsbara. Vid 8 timmar var 174/184 (95 %) kategoriseringsbara. Av de sammanlagt 552 mätningarna var alltså 440 kategoriseringsbara. Samtliga MRSA kunde detekteras redan vid 6 timmar. Tabell V Resultatet för 23 S.aureus-stammar med 4 antibiotikadiskar som lästes av vid 3 avläsningstillfällen. Vid varje avläsningstillfälle har 2 separata registreringar av varje zon gjorts av 2 oberoende avläsare. Gul färg innebär att avläsning inte kunnat utföras eller att zonen hamnat i ATU-zonen och därmed inte ger ett rapporteringsbart resultat. Röd färg innebär att en felkategorisering skett. D står för D-zon. Siffrorna visar antalet mätningar. Cefoxitin 4h 6h 8h R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt Förväntat resistenta Förväntat känsliga Norfloxacin 4h 6h 8h Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt R ATU S Förväntat resistenta Förväntat känsliga Gentamicin 4h 6h 8h Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt R ATU S Förväntat resistenta Förväntat känsliga Klindamycin 4h 6h 8h Ej läsbar R D ATU S Ej läsbar R D ATU S Ej läsbar Totalt R D ATU S Förväntat resistenta Förväntat känsliga Streptococcus pneumoniae Kontroller För kontrollstammen CCUG33638 (PNSP) var medianen vid 9 tillfällen lägre än målvärdet. Detta gällde all testad antibiotika efter 4 timmar och alla utom oxacillin efter 8 timmar. Sammanlagt 10 mätvärden var lägre än målintervallet efter 4 timmar, varav 5 för 17

24 erytromycin (se tabell VI). För rådata se bilaga III tabell XVII, XVIII och XIX. Tabell VI Tabellen visar medianen och de högsta och lägsta värdena från resultatet för kontrollstammen CCUG33638 (PNSP) från 30 mätningar per antibiotika på 15 plattor efter 4, 6 och 8 timmar i relation till angivet målvärde och accepterat målintervall från EUCAST. Röd färg indikerar att medianen inte stämde överens med målvärdet eller att högsta/lägsta värden inte låg inom målintervallet. Antibiotika Målvärde (mm) Zondiameter (median, mm) Målintervall (mm) Lägsta uppmätta värde (mm) Högsta uppmätta värde (mm) 4h Oxacillin Trimethoprimsulfamethoxazol Norfloxacin Klindamycin Erytromycin 19 14, h Oxacillin Trimethoprimsulfamethoxazol 17 16, Norfloxacin Klindamycin Erytromycin 21 20, h Oxacillin Trimethoprimsulfamethoxazol Norfloxacin Klindamycin 19 17, Erytromycin 22 20, Den känsliga kontrollstammen saknar bestämda målvärden och målintervall. Efter 4 timmar gjordes vid 10 tillfällen felkategoriseringar med överskattning av resistens för framförallt klindamycin men även erytromycin och norfloxacin. För lägsta och högsta värde samt median se tabell VII. För rådata se bilaga III tabell XX, tabell XXI och tabell XXII. 18

25 Tabell VII Tabellen visar den medianen och de högsta och lägsta värdena från resultatet för den känsliga kontrollstammen (S.pneumoniae) från 30 mätningar per antibiotika på 15 plattor efter 4, 6 och 8 timmar. Till höger visas EUCAST s bestämda brytpunkter. Röd färg innebär att en felkategorisering skett. Zondiameter (median, mm) Lägsta uppmätta värde (mm) 4h Högsta uppmätta värde (mm) S ATU R < Oxacillin Trimethoprimsulfamethoxazol 14, Norfloxacin 11, Klindamycin Erytromycin 16, h Oxacillin Trimethoprimsulfamethoxazol Norfloxacin 13, Klindamycin Erytromycin 21, h Oxacillin 20, Trimethoprimsulfamethoxazol Norfloxacin Klindamycin Erytromycin Kliniska isolat Resultatet för RAST-metoden visar att inga av de testade kliniska stammarna uppvisat VME eller ME för oxacillin. För Trimethoprim-sulfamethoxazol var det efter 4 timmar och 80 avläsningar en felkategorisering, för norfloxacin 2, klindamycin 13 och erytromycin 5. Det var sammanlagt 21 felkategoriseringar vid 224 kategoriseringsbara mätningar på 8 stammar. 40 zoner bedömdes av två personer vid tre tidpunkter. Vid 4 timmar var 74/80 (92 %) avläsningar kategoriseringsbara (utanför ATU). Vid 6 timmar var 73/80 (91 %) avläsningar kategoriseringsbara. Vid 8 timmar var 77/80 (96 %) kategoriseringsbara. Samtliga PNSP kunde detekteras efter 4 timmar. För rådata från RAST samt den standardiserade diskdiffusionsmetoden se bilaga IV tabell XXIII. 19

26 Tabell VIII Resultatet för 8 S.pneumoniae-stammar med 5 antibiotikadiskar som lästes av vid 3 avläsningstillfällen. Vid varje avläsningstillfälle har 2 separata registreringar av varje zon gjorts av 2 oberoende avläsare. Gul färg innebär att avläsning inte kunnat utföras eller att zonen hamnat i ATU-zonen och därmed inte får svaras ut. Röd färg innebär att en felkategorisering skett. Siffrorna visar antalet mätningar. Oxacillin 4h 6h 8h R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt Förväntat resistenta Förväntat känsliga Trimethoprimsulfamethoxazol 4h 6h 8h R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt Förväntat resistenta Förväntat känsliga Norfloxacin 4h 6h 8h R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt Förväntat resistenta Förväntat känsliga Klindamycin 4h 6h 8h R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt Förväntat resistenta Förväntat känsliga Erytromycin 4h 6h 8h R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar R ATU S Ej läsbar Totalt Förväntat resistenta Förväntat känsliga Avläsningsvariation Variationen i avläsningen undersöktes genom att personal på laboratoriet efter 6 timmar läste av samma platta. Avläsningsvariationen var olika för olika antibiotika (tabell IX). Variationen var överlag liten men var störst för norfloxacin som gav en dubbel zon och klindamycinzonen som hade något otydlig zonkant. 20

27 Tabell IX Tabellen visar resultatet från undersökningen av avläsningsvariationen. Sex personer i personalen som har behörighet för resistensbestämning mätte zonerna på samma platta efter 6 timmars inkubering. Antibiotika Uppmätta zondiametrar (mm) Intervall (mm) Cefoxitin Norfloxacin Gentamicin Klindamycin Diskussion Syftet med studien var att undersöka hur väl RAST-metoden fungerade på S.aureus och S.pneumoniae jämfört med EUCAST s standardiserade diskdiffusionsmetod. Resultaten var varierande då metoden fungerade relativt väl för S.aureus när resultaten jämfördes med de från standardiserad diskdiffusion medan det för S.pneumoniae skedde ett stort antal felkategoriseringar. 4.1 Avläsningsvariation Avläsningsvariationen bland laboratoriepersonalen kan påverka resultat. Under studien var det mycket få tillfällen där endast en av avläsarna felkategoriserat. Den undersökning av avläsningsvariation som utfördes visade att personalen som mest mätte med 5 mm skillnad på en disk medan skillnaderna var mycket små på två av diskarna. På laboratoriet finns dokument där kontrollstammar resistensbestämts med diskdiffusion vid upprepade tillfällen och då är den största variationen 4 mm för S.aureus. Zonerna är svårare att läsa av vid RAST då bakterien haft kort tid att växa och för att kunna se zoner kan det vara nödvändigt att hitta en väldigt exakt vinkel i förhållande till ljuset. Detta är något personalen inte är vana vid vilket kan ha bidragit till variationen. Vid vissa tillfällen inträffade det att en av avläsarna tolkade det som att bakterierna växte intill disken även då 21

28 ingen växt var synlig. Materialet från blododlingsflaskan misstolkades alltså som tillväxt vilket ledde till felkategorisering. Under första försöksdagen upptäcktes det att rotator till spridning på agarplatta var nödvändigt då zonerna var svårare att tyda om spridning gjordes för hand. Det var även viktigt att sprida proverna på agarplattorna snabbt då blodet rann ut från mitten av plattan och sjönk ner i agarn och färgen störde avläsningen. 4.2 Staphylococcus aureus Resultaten för S.aureus visade att 35 % av zonerna inte kunde mätas efter 4 timmar. Av dessa var majoriteten de där ingen av de två avläsarna kunde se några zoner. Vid de övriga tillfällen då zon inte kunnat läsas av var det bara en person som inte kunde se en zon. Majoriteten av dessa gällde klindamycinzonen. Efter 4 timmar var det dessutom 5 resultat med felkategoriseringar med underskattning av resistens för klindamycin. Alla resultat kunde läsas av efter 6 och 8 timmar även om det var 21 mätvärden av 184 i ATU-zonen efter 6 timmar och 10 mätvärden av 184 i ATU-zonen efter 8 timmar. Detta innebär att resultatet inte skulle kunna svaras ut om metoden användes i rutinarbetet på laboratoriet. De 5 mätvärden som efter 4 timmar gjorde att stammarna bedömdes som känsliga trots att de var resistenta berodde på inducerbar klindamycinresistens. Efter 4 timmar var Dfenomenet inte synligt vilket ledde till felaktig bedömning. Efter 6 timmar var det vid ett mättillfälle där den inducerbara klindamycinresistensen inte upptäcktes. Att mäta zoner efter 4 timmar kan efter denna studie bedömas osäkert då den inducerbara klindamycinresistensen inte upptäcks samt att flera zoner inte kan läsas av. Vid 36 tillfällen kunde cefoxitinzonen läsas av redan efter 4 timmar och vid endast 10 tillfällen var den inte avläsningsbar. Därför skulle det eventuellt vara möjligt att använda RAST för enbart cefoxitin efter 4 timmar. 22

29 4.3 Streptococcus pneumoniae För S.pneumoniae var det större problem än för S.aureus med felkategoriseringar. Detta gällde både kontrollstammarna och de kliniska isolaten. Vid mätningar efter 4 timmar skedde 20 ME vid 80 mätningar för de kliniska isolaten. Av dessa 80 mätningar skulle 26 mätvärden påvisa resistens och ME kan därmed inte uppstå för dem. Detta innebär att 20 av 54 mätningar resulterade i felkategoriseringar med överskattning av resistens. Efter 6 timmar skedde inga felkategoriseringar och efter 8 h erhölls ett enstaka avvikande resultat som inte kontrollerats vidare. Det är oklart varför så många fel uppstått för RAST vid analys av S.pneumoniae men bakterien har varit något mer problematisk än S.aureus under arbetet. S.aureus i blododlingsflaskor har varit i blododlingsskåpen i ca 19 timmar innan de resistensbestämts med RAST. Odlingarna har larmat positiva efter 9 11 h men plockats ur ytterligare 10 h senare då de blivit positiva under natten. När S.pneumoniae hanterades på samma sätt överlevde de inte till morgonen och inget kunde växa vid RAST. För att öka överlevnadschanserna placerades flaskorna i blododlingsskåpet senare på dagen i aeroba flaskor och då ökade överlevnaden men tillväxten var fortfarande så dålig att inget kunde avläsas efter 4 timmar. Nya försök utfördes med anaeroba flaskor istället för aeroba som sattes ännu senare på eftermiddagen och togs ur tidigare på morgonen. De befann sig då enbart ca 3 5 timmar i blododlingsskåpet efter larmtid och zoner kunde läsas av efter 4 timmar. Endast dessa resultat med urladdning max 3-5 timmar efter positivt larm har redovisats i studien. En möjlighet är att bakterierna i den positiva blododlingsflaskan påverkats negativt av den förlängda inkubationstiden i flaskan. Det är välkänt på laboratoriet att Streptococcus pneumoniae har en sämre återväxt jämfört med de flesta andra bakteriearter efter en tids förvaring på fasta eller i flytande medier (36). Något som stärker teorin men inte bekräftar den är att det sista provet (se rådata i bilaga IV) är det enda som uppvisat en känslig klindamycinzon redan efter 4 h. Detta specifika prov kom från en flaska som till skillnad från alla andra inte var positiv då de skulle tas ur på morgonen utan blev positiv senare och därmed kunde hanteras direkt efter positivt larm. 23

30 Inga felkategoriseringar gjordes för oxacillin. Oxacillin används för att upptäcka PNSP (35) och det skulle därför vara önskvärt att kunna använda metoden för enbart oxacillin men då endast två oxacillinkänsliga stammar samt kontrollstammen använts finns inte tillräckligt mycket data för att säkerställa att felkategoriseringar inte kan ske för oxacillin. Med fortsatta undersökningar kan metoden förhoppningsvis användas för oxacillinresistensbestämning efter 6 timmar. 4.4 Ekonomiska aspekter och klinisk relevans Då mortaliteten ökar varje timme efter att septisk chock uppstått (2) kan det vara livsavgörande att en resistens upptäcks så pass mycket tidigare som den gör vid RAST än med standardmetoden. Det kan också tilläggas att en sepsispatient som intensivvårdas kostar ca kr (5) vilket innebär att en snabbare vård som leder till ett tidigare tillfrisknande även är positivt ur ett ekonomiskt perspektiv. Under 2018 var det enligt lokal statistik endast 4 fall av MRSA och PNSP, vilket innebär att metoden i många fall kommer vara onödig för att en korrekt behandling ska ges i tid eftersom den primära sepsisbehandlingen då fungerar. Men metoden är viktig för de patienter som är drabbade, även om Sverige har relativt få fall. Infektioner av resistenta bakterier är det betydligt vanligare i andra länder där det ibland kan vara över hälften av alla S.aureus-infektioner som orsakas av MRSA (5). Om det blir lika vanligt i Sverige kan det vara viktigt att redan ha en väl fungerande metod för snabb diagnostik. Under studien användes en stor mängd engångsmaterial i form av blododlingsflaskor, sprutor och kanyler. Då de kontaminerades med bakterier kunde de inte sorteras miljövänligt enligt material utan i gula avfallsbackar för smittförande material samt stickande/skärande material. Övrigt material sorterades som plast och papper. Vid användning av metoden kliniskt används endast en liten mängd material (agarplattor och antibiotikadiskar). Fortsatt undersökning av metoden skulle förutom att inkludera fler oxacillinkänsliga S.pneumoniae kunna innefatta ytterligare försök för att se skillnaderna mellan aeroba och 24

Snabb Resistensbestämning med disk diffusion. Emma Jonasson

Snabb Resistensbestämning med disk diffusion. Emma Jonasson Snabb Resistensbestämning med disk diffusion Emma Jonasson Samtalsämnen Varför snabb resistensbestämning Snabb res. enligt EUCAST-metoden Snabb res. från Urinprover Positiva blododlingar Möjligheter och

Läs mer

Snabb resistensbestämning. Martin Sundqvist leg läk, MD Avd för klinisk mikrobiologi, Växjö

Snabb resistensbestämning. Martin Sundqvist leg läk, MD Avd för klinisk mikrobiologi, Växjö Snabb resistensbestämning Martin Sundqvist leg läk, MD Avd för klinisk mikrobiologi, Växjö Varför? Ökande antibiotikaresistens Felaktig antibiotikabehandling ger ökad risk för död hos våra svårast sjuka

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning

Läs mer

Antibiotikaresistens 2017 Blekinge och Kronoberg. Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg

Antibiotikaresistens 2017 Blekinge och Kronoberg. Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg Antibiotikaresistens 217 Blekinge och Kronoberg Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg Allmän information Metod En angiven resistens kan påverkas både av en faktiskt ökad resistens i bakteriepopulationen,

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar resistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd under 2010-2018 på Södersjukhuset.

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning

Läs mer

Antibiotikaresistens 2018 Blekinge och Kronoberg. Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg

Antibiotikaresistens 2018 Blekinge och Kronoberg. Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg Antibiotikaresistens 18 Blekinge och Kronoberg Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg Allmän information Metod En angiven resistens kan påverkas både av en faktiskt ökad resistens i bakteriepopulationen,

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd under 2005-2015

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd under 2010-2018 på Danderyds

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar resistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd under 2005-2017 på Karolinska

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar resistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae/klebsiella variicola, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd

Läs mer

Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod

Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod Avläsningsguide EUCAST lappdiffusionsmetod Version 5.0 Juni 2017 Ändringar från tidigare version (v 4.0) Bild Ändring 3 Förtydligande om automatiska zonavläsare. 17 Förtydligande om avläsning av trimetoprim-sulfametoxazol

Läs mer

Isolering av bakterier Diskdiffusion E-test och utvidgad resistensbestämning Vid multiresistenta fynd - anmälning till vårdhygienen.

Isolering av bakterier Diskdiffusion E-test och utvidgad resistensbestämning Vid multiresistenta fynd - anmälning till vårdhygienen. Isolering av bakterier Diskdiffusion E-test och utvidgad resistensbestämning Vid multiresistenta fynd - anmälning till vårdhygienen. PCR analys för påvisande av resistensgenen ex: mec-genen (MRSA) Sekvenseringen,

Läs mer

Bakteriella resistensmekanismer och antibiotikaresistens på akutsjukhus i Stockholms län Christian G. Giske

Bakteriella resistensmekanismer och antibiotikaresistens på akutsjukhus i Stockholms län Christian G. Giske Bakteriella resistensmekanismer och antibiotikaresistens på akutsjukhus i Stockholms län Christian G. Giske Sammanfattning Generellt är antibiotikaresistensnivån relativt låg bland kliniska bakterieisolat

Läs mer

Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod

Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod Avläsningsguide EUCAST lappdiffusionsmetod Version 4.0 Augusti 2014 Ändringar i EUCAST avläsningsguide Version Version 4.0 Augusti 2014 Version 3.0 Maj 2013 Version 2.0 Maj 2012 Version 1.0 September 2010

Läs mer

Pågående projekt EUCAST lappdiffusionsmetod. NordicAST Workshop 2013 Jenny Åhman

Pågående projekt EUCAST lappdiffusionsmetod. NordicAST Workshop 2013 Jenny Åhman Pågående projekt EUCAST lappdiffusionsmetod NordicAST Workshop 13 Jenny Åhman Pågående projekt Ceftaroline, brytpunkter och QC-kriterier S. pseudintermedius och cefoxitin Pseudomonas non-aeruginosa Lappdiffusion

Läs mer

Antibiotikaresistens i Blekinge och Kronoberg Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg

Antibiotikaresistens i Blekinge och Kronoberg Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg Antibiotikaresistens i Blekinge och Kronoberg - Klinisk mikrobiologi för Blekinge och Kronoberg Allmän information Metod En angiven resistens kan påverkas både av en faktiskt ökad resistens i bakteriepopulationen,

Läs mer

Extern och intern kvalitetskontroll. Erika Matuschek EUCAST Laboratory for AST

Extern och intern kvalitetskontroll. Erika Matuschek EUCAST Laboratory for AST Extern och intern kvalitetskontroll Erika Matuschek EUCAST Laboratory for AST Kvalitetskontroll Nödvändigt för att kunna lita på sina resultat! Extern kvalitetskontroll Att provocera laboratoriets rutiner

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd under 2010-2015

Läs mer

Nyheter och pågående arbete EUCAST. Jenny Åhman Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015

Nyheter och pågående arbete EUCAST. Jenny Åhman Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015 Nyheter och pågående arbete EUCAST Jenny Åhman Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015 Utvärdering av lappar från olika leverantörer Utvärdering av utvalda lappar från 9 leverantörer Leverantörer Abtek

Läs mer

Kvalitetskontroll och felsökning. Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015

Kvalitetskontroll och felsökning. Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015 Kvalitetskontroll och felsökning Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015 Rutinmässig kvalitetskontroll Kontrollera material och utrustning Agarplattor Antibiotikalappar Inkubatorer mm Kontrollera utförandet

Läs mer

Phoenix/Vitek/Lappdiffusion vs Sensititre. Stina Bengtsson Klinisk mikrobiologi Växjö NordicAST workshop 2012

Phoenix/Vitek/Lappdiffusion vs Sensititre. Stina Bengtsson Klinisk mikrobiologi Växjö NordicAST workshop 2012 Phoenix/Vitek/Lappdiffusion vs Sensititre Stina Bengtsson Klinisk mikrobiologi Växjö NordicAST workshop 2012 Syfte Utvärdera automatiserad MIC-bestämning och lappdiffusion mot ISO referensmetoden broth

Läs mer

PROJEKTPLAN. Namn: Malin Hagstrand Aldman ST-läkare, Infektionskliniken, Lund, SUS

PROJEKTPLAN. Namn: Malin Hagstrand Aldman ST-läkare, Infektionskliniken, Lund, SUS PROJEKTPLAN Kan vi fortfarande behandla Staphylococcus aureus i Sverige med bensylpenicillin? En kartläggning av känslighet för bensylpenicillin hos Staphylococcus aureus från Lund/Helsingborg/Kristianstad.

Läs mer

Gymnasieskolan Knut Hahn Projektrapport - Anna Goos

Gymnasieskolan Knut Hahn Projektrapport - Anna Goos - Anna Goos Innehållsförteckning Inledning Sida 2 Syfte Sida 3 Teori Sida 3-5 Vad är ESBL? Sida 3 Hur hittar man ESBL (hur screenar man efter ESBL-producerande bakterier)? Sida 3 Vad är lappdiffusion?

Läs mer

Aktuellt resistensläge Helena Sjödén och Torbjörn Kjerstadius Klinisk mikrobiologi

Aktuellt resistensläge Helena Sjödén och Torbjörn Kjerstadius Klinisk mikrobiologi Aktuellt resistensläge 15 Helena Sjödén och Torbjörn Kjerstadius Klinisk mikrobiologi E coli antibiotika vid nedre UVI Gällande terapirekommendationer anger nitrofurantoin, mecillinam och cefadroxil som

Läs mer

Snabb standardiserad resistensbestämning

Snabb standardiserad resistensbestämning nabb standardiserad resistensbestämning Martin undqvist Emma Jonasson Gunilla Cederbrant Erika Matuschek Gunnar Kahlmeter Dept of Clinical Microbiology Växjö Varför? Ökande resistens Felaktig behandling

Läs mer

Staphylococcus aureus sårisolat aggregerade data från ResNet

Staphylococcus aureus sårisolat aggregerade data från ResNet Staphylococcus aureus sårisolat aggregerade data från ResNet 2001-2009 10 8 2001 2002 % R 6 4 3,8 3,2 4,5 4,7 2003 2004 2005 2006 2007 2 0 0,8 Oxacillin/ Cefoxitin (=MRSA) Erythromycin Clindamycin Fusidic

Läs mer

Resistensläge i öppenvård:

Resistensläge i öppenvård: Resistensläge i öppenvård: S. aureus i sårodlingar Haemophilus influenzae i nasofarynxodlingar Streptococcus pneumoniae i nasofarynxodlingar E. coli i urinodlingar Inga Fröding och Christian Giske Klinisk

Läs mer

Antibiotikaresistens i blododlingar

Antibiotikaresistens i blododlingar Antibiotikaresistens i blododlingar Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae Statistiken är baserad på provtagning utförd under 2005-2014

Läs mer

Nyheter och pågående arbete EUCAST. Erika Matuschek Jenny Åhman NordicASTs workshop 2014

Nyheter och pågående arbete EUCAST. Erika Matuschek Jenny Åhman NordicASTs workshop 2014 Nyheter och pågående arbete EUCAST Erika Matuschek Jenny Åhman NordicASTs workshop 2014 Nyheter EUCASTs brytpunktstabell v 4.0 Nya brytpunkter (I) Enterobacteriaceae Amoxicillin-klavulansyra (okomplicerad

Läs mer

Bakteriologisk diagnostik av urinodlingar och resistensläge för viktiga urinvägspatogener

Bakteriologisk diagnostik av urinodlingar och resistensläge för viktiga urinvägspatogener Bakteriologisk diagnostik av urinodlingar och resistensläge för viktiga urinvägspatogener Christian G. Giske Docent / Överläkare Klinisk mikrobiologi Karolinska Universitetssjukhuset 21 februari 2014 Provtagningsanvisning

Läs mer

Antibiotikaresistens i Uppsala län och Sverige

Antibiotikaresistens i Uppsala län och Sverige Antibiotikaresistens i Uppsala län och Sverige T o m 216 Gunilla Stridh Ekman, apotekare/teamledare Anna-Karin Smekal, klinisk bakteriolog och virolog 12 Anmälningspliktig antibiotikaresistens i Sverige,

Läs mer

Resistensläge i öppenvård:

Resistensläge i öppenvård: Resistensläge i öppenvård: S. aureus i sårodlingar Haemophilus influenzae i nasofarynxodlingar Streptococcus pneumoniae i nasofarynxodlingar E. coli i urinodlingar Johanna Haiko och Inga Fröding Klinisk

Läs mer

Antibiotikaresistensstatisik Blododlingsfynd 2010 Södersjukhuset

Antibiotikaresistensstatisik Blododlingsfynd 2010 Södersjukhuset Antibiotikaresistensstatisik Blododlingsfynd 2010 Södersjukhuset Sammanställt av Inga Fröding, ST-läkare, Klinisk mikrobiologi, Huddinge, 20120113 Granskat av Christian Giske, bitr. överläkare Klinisk

Läs mer

Antibiotika verkningsmekanismer. Christian G. Giske Biträdande överläkare / Med Dr Klinisk mikrobiologi Karolinska Universitetssjukhuset 18 mars 2010

Antibiotika verkningsmekanismer. Christian G. Giske Biträdande överläkare / Med Dr Klinisk mikrobiologi Karolinska Universitetssjukhuset 18 mars 2010 Antibiotika verkningsmekanismer Christian G. Giske Biträdande överläkare / Med Dr Klinisk mikrobiologi Karolinska Universitetssjukhuset 18 mars 2010 Historik: från Fleming till bad bugs need drugs Christian

Läs mer

REFERENSLABORATORIEVERKSAMHET

REFERENSLABORATORIEVERKSAMHET REFERENSLABORATORIEVERKSAMHET TEST AV ANTIMIKROBIELLA MEDEL Bilaga 3. Testning av antimikrobiella medel Staphylococcus sp. Hundar, katter Nötkreatur Svin Hästar ß-laktamastest* G-penicillin amoxicillinklavulansyra

Läs mer

Mekanismer för antibiotikaresistens

Mekanismer för antibiotikaresistens Mekanismer för antibiotikaresistens Bengt Wretlind Avd för klinisk bakteriologi Karolinska Institutet, Huddinge Vilka bakterier har ännu inte utvecklat resistens? Betastreptokocker har ännu inte utvecklat

Läs mer

RESISTENSLÄGET I KALMAR LÄN FÖRSTA HALVÅRET 2015.

RESISTENSLÄGET I KALMAR LÄN FÖRSTA HALVÅRET 2015. 1 (5) RESISTENSLÄGET I KALMAR LÄN FÖRSTA HALVÅRET 2015. Resistensuppgifterna grundar sig på samtliga prover som inkommit till laboratoriet under perioden januari till och med juni 2015. Prover från ytliga

Läs mer

Antibiotikaresistensstatisik Blododlingsfynd 2010 Danderyds sjukhus

Antibiotikaresistensstatisik Blododlingsfynd 2010 Danderyds sjukhus Antibiotikaresistensstatisik Blododlingsfynd 2010 Danderyds sjukhus Sammanställt av Aina Iversen, mikrobiolog Granskat av Christian Giske, bitr. överläkare Klinisk mikrobiologi, Solna 2011-09-15 Uppdaterad

Läs mer

Epidemiologiska resistensdata minimini-pricklista

Epidemiologiska resistensdata minimini-pricklista Epidemiologiska resistensdata minimini-pricklista 7 nov. 2017 Tinna (Christina) Åhrén. Sahlgrenska Universitetssjukhuset, Strama VGR christina.ahren@vgregion.se Vad påverkar resistensdata Prelab Typ av

Läs mer

Resistensbestämning. lappdiffusionsmetod. Version 5.0 Februari 2015

Resistensbestämning. lappdiffusionsmetod. Version 5.0 Februari 2015 Resistensbestämning enligt EUCAST lappdiffusionsmetod Version 5.0 Februari 2015 Innehåll Media Inokulatberedning Inokulering av plattor Antibiotikalappar Inkubering Avläsning Tolkning Kvalitetskontroll

Läs mer

Equalis kvalitetssäkringsprogram 2018

Equalis kvalitetssäkringsprogram 2018 Equalis kvalitetssäkringsprogram 2018 Meticillinresistenta Staphylococcus aureus Christina Welinder Olsson Equalis användarmöte 12 mars 2019 Meticillinresistenta Staphylococcus aureus MRSA 2018:01A-E Molekylärbiologisk

Läs mer

Kommentarer till resistensläget 2012

Kommentarer till resistensläget 2012 Kommentarer till resistensläget 12 Endast små förändringar i resistensläget noteras utom beträffande Haemophilus influenzae där en påtaglig ökning av resistens mot ampicillin och trim/sulfa noteras. Vad

Läs mer

Blododling görs vid misstanke om bakteriemi/sepsis.

Blododling görs vid misstanke om bakteriemi/sepsis. Sidan 1 av 6 Avgränsning/Bakgrund görs vid misstanke om bakteriemi/sepsis. Provtagning I normalfallet rekommenderas två provtagningar (skilda stick). Vid varje provtagning fylls en aerob (grön) och en

Läs mer

REFERENSLABORATORIEVERKSAMHET

REFERENSLABORATORIEVERKSAMHET Sivu 1 REFERENSLABORATORIEVERKSAMHET Evira 3484/bilaga 2/version 8 RESISTENSBESTÄMNING Bilaga 2. SIR-gränsvärden av den diskdiffusionsmetoden 1,2,3 AMINOGLYKOSIDER Gentamicin Hund Enterobacteriaceae, Pseudomonas

Läs mer

Antibiotikaresistens i Region Skåne

Antibiotikaresistens i Region Skåne Antibiotikaresistens i Region Skåne Annette Skovby, Klinisk Mikrobiologi Lena Hyllebusk, Klinisk Mikrobiologi Eva Gustafson, Smittskydd Eva Melander, Smittskydd Bakgrund På uppdrag av STRAMA Skåne övervakar

Läs mer

Antibiotikaresistens. Christian G. Giske Docent / BÖL Klinisk mikrobiologi Karolinska Universitetssjukhuset 14 mars 2012

Antibiotikaresistens. Christian G. Giske Docent / BÖL Klinisk mikrobiologi Karolinska Universitetssjukhuset 14 mars 2012 Antibiotikaresistens Christian G. Giske Docent / BÖL Klinisk mikrobiologi Karolinska Universitetssjukhuset 14 mars 2012 Historik: från Fleming till bad bugs need drugs Vägen till ett nytt preparat EMA

Läs mer

1 (5) RESISTENSLÄGET I KALMAR LÄN JULI-DECEMBER 2014.

1 (5) RESISTENSLÄGET I KALMAR LÄN JULI-DECEMBER 2014. 1 (5) RESISTENSLÄGET I KALMAR LÄN JULI-DECEMBER 2014. Resistensuppgifterna grundar sig på samtliga prover som inkommit till laboratoriet under perioden 20140701-20141231. Prover från ytliga lokaler på

Läs mer

Tentamen Medicinsk vetenskap Kurs: M0029H

Tentamen Medicinsk vetenskap Kurs: M0029H Institutionen för hälsovetenskap Röntgensjuksköterskeprogrammet Tentamen Medicinsk vetenskap Kurs: M0029H Lärare Delmoment Fråga Max G 70 % VG 90 % Anders Österlind Infektionssjukdomar 1-14 21p 14p 19p

Läs mer

Kommentarer till resistensläget jan-maj 2012

Kommentarer till resistensläget jan-maj 2012 Kommentarer till resistensläget jan-maj 212 Endast små förändringar i resistensläget noteras utom beträffande Haemophilus influenzae där en påtaglig ökning av resistens mot ampicillin och trim/sulfa noteras.

Läs mer

Kommentarer till resistensläget jan-juni 2014

Kommentarer till resistensläget jan-juni 2014 Kommentarer till resistensläget jan-juni 214 Endast små förändringar i resistensläget noteras under första halvåret 214 Noterbart är att resistens mot mecillinam hos E coli ökat men fortfarande på en låg

Läs mer

Provtagningsanvisning för Anaerob odling och Actinomyces/ Nocardia. Avgränsning/Bakgrund

Provtagningsanvisning för Anaerob odling och Actinomyces/ Nocardia. Avgränsning/Bakgrund Sidan 1 av 5 Avgränsning/Bakgrund Anaeroba infektioner är ofta blandinfektioner med fakultativt anaeroba och aeroba bakterier. Dessa infektioner är oftast endogena och uppstår i närheten av områden där

Läs mer

Utvärdering av resistensbestämning med diskdiffusionstest från selektiva agarmedier för MRSA, ESBL och VRE i jämförelse med från blodagar

Utvärdering av resistensbestämning med diskdiffusionstest från selektiva agarmedier för MRSA, ESBL och VRE i jämförelse med från blodagar Utvärdering av resistensbestämning med diskdiffusionstest från selektiva agarmedier för MRSA, ESBL och VRE i jämförelse med från blodagar HUVUDOMRÅDE: Biomedicinsk laboratorievetenskap FÖRFATTARE: Johanna

Läs mer

Antibiotikaresistens i Region Skåne

Antibiotikaresistens i Region Skåne Antibiotikaresistens i Region Skåne 2011-2018 Ilona Veréb, Klinisk Mikrobiologi Lena Hyllebusk, Klinisk Mikrobiologi Eva Gustafsson, Smittskydd Kristina Trell, Vårdhygien Bakgrund På uppdrag av STRAMA

Läs mer

Antibiotikaresistens

Antibiotikaresistens Antibiotikaresistens Martin Sundqvist Överläkare, Med Dr Lab medicin, Klinisk Mikrobiologi, Universitetssjukhuset, Örebro STRAMA-utbildning Långholmen 190315 Resistensmekanismer Enzymer ESBL aminoglykosidresistens

Läs mer

Blododlingsdiagnostik

Blododlingsdiagnostik Blododlingsdiagnostik Vad kan vi göra bättre med små o stora medel? Anna Åkerlund Överläkare Klinisk mikrobiologi Jönköping/Linköping Doktorand, Linköpings universitet RAF, RAF-enkät, RAST, Rekommenderade

Läs mer

Antibiotikaresistens

Antibiotikaresistens Antibiotikaresistens 190910 Resistenta bakterier MRSA Metithicillinresistenta Staphylococcus aureus Hudbakterie, ger sårinfektioner, blodförgiftning ESBL Extended spectrum betalactamases Egenskap hos flera

Läs mer

Klassificering av antimikrobiella läkemedel baserad på kemisk struktur och verkningsmekanism

Klassificering av antimikrobiella läkemedel baserad på kemisk struktur och verkningsmekanism Substanser som : Klassificering av antimikrobiella läkemedel baserad på kemisk struktur och verkningsmekanism 1. Inhiberar syntesen av bakteriens cellvägg: penicillin, cefalosporin m.m. (strukturellt lika

Läs mer

Nordic Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing

Nordic Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing Nordic Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing Brytpunktstabeller för tolkning av MIC-värden och zondiametrar NordicAST Version 6.0, 2016-01-01 Baserat på EUCAST Version 6.0 Innehåll Externa

Läs mer

EQUALIS användarmöte patientnära analyser Sara Karlsson Söbirk Klinisk mikrobiologi Lund / Infektionskliniken Helsingborg

EQUALIS användarmöte patientnära analyser Sara Karlsson Söbirk Klinisk mikrobiologi Lund / Infektionskliniken Helsingborg EQUALIS användarmöte patientnära analyser 2017 Sara Karlsson Söbirk Klinisk mikrobiologi Lund / Infektionskliniken Helsingborg Hur tillgodoser vi (laboratoriemedicin) vårdens ökande behov av mikrobiologisk

Läs mer

Provtagning för blododling, information till vårdenhet

Provtagning för blododling, information till vårdenhet sida 1 (6) Provtagning för blododling, information till vårdenhet Indikation Vid misstanke om bakteriemi/septikemi, meningit, pneumoni eller annan svår infektion. Förberedelser Remiss och etikett Ange

Läs mer

Bestämning och identifiering av bakterien Clostridium perfringens. Koloniräkningsteknik.

Bestämning och identifiering av bakterien Clostridium perfringens. Koloniräkningsteknik. Ansvarig Marjaana Hakkinen, Sida/sidor 1 / 6 Bestämning och identifiering av bakterien Clostridium perfringens. Koloniräkningsteknik. 1 Metodreferenser och avvikelser ISO 7937:2004 (SC 37 C/20 h ingjutning,

Läs mer

STRAMA-dag Långdragna sår gör AB nytta? Provtagning och resistensförhållanden Eva Törnqvist, Mikrobiologen, USÖ

STRAMA-dag Långdragna sår gör AB nytta? Provtagning och resistensförhållanden Eva Törnqvist, Mikrobiologen, USÖ STRAMA-dag 121206 Långdragna sår gör AB nytta? Provtagning och resistensförhållanden Eva Törnqvist, Mikrobiologen, USÖ Provtagning från sår Undvik kontamination från omgivande hud Tag bort ev krustor,

Läs mer

Blododling görs vid misstanke om bakteriemi/sepsis.

Blododling görs vid misstanke om bakteriemi/sepsis. Sidan 1 av 6 Avgränsning/Bakgrund görs vid misstanke om bakteriemi/sepsis. Provtagning I normalfallet rekommenderas två provtagningar i skilda stick, för att lättare kunna bedöma eventuella kontaminationer.

Läs mer

Multiresistenta bakterier en enkel resa till Eländet

Multiresistenta bakterier en enkel resa till Eländet Multiresistenta bakterier en enkel resa till Eländet och konsekvenser för empirisk behandling Gunnar Kahlmeter Klinisk mikrobiologi Landstingen Kronoberg och Blekinge ECDC, Czech ministerial conferance,

Läs mer

Vanligaste odlingsfynden i primärvården. Martin Sundqvist Överläkare, Med Dr Laboratoriemedicinska kliniken, Klinisk Mikrobiologi, Region Örebro Län

Vanligaste odlingsfynden i primärvården. Martin Sundqvist Överläkare, Med Dr Laboratoriemedicinska kliniken, Klinisk Mikrobiologi, Region Örebro Län Vanligaste odlingsfynden i primärvården Martin Sundqvist Överläkare, Med Dr Laboratoriemedicinska kliniken, Klinisk Mikrobiologi, Region Örebro Län Förkylning Otroligt vanligt Rhinovirus, Coronavirus,

Läs mer

Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL

Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL Biträdande smittskyddsläkare Smittskydd Stockholm Innehåll Mer info Handlingsprogram Epidemiologi Smittskyddslagen Smittspårning

Läs mer

ALLMÄN BAKTERIOLOGI ETT HANTVERK OCH NY TEKNIK. Erik Eriksson

ALLMÄN BAKTERIOLOGI ETT HANTVERK OCH NY TEKNIK. Erik Eriksson ALLMÄN BAKTERIOLOGI ETT HANTVERK OCH NY TEKNIK Erik Eriksson KLINISK BAKTERIOLOGI Urinprov Sårinfektioner Prov från öron Bölder Hudinfektioner Prov från luftvägar Prov från ögoninfektioner mm OLIKA ODLINGSMETODER

Läs mer

SEPSIS. VAD är sepsis? dödlighet. kostnader. Sepsis - patogenes. Systemisk inflammation. Koagulation. Immunsvar

SEPSIS. VAD är sepsis? dödlighet. kostnader. Sepsis - patogenes. Systemisk inflammation. Koagulation. Immunsvar SEK VAD är sepsis? SEPSIS Singer et. al., 216, JAMA Volkan Özenci, Överläkare, Docent Inga Fröding, Specialistläkare Karolinska Universitetslaboratoriet Klinisk Mikrobiologi, F72, Huddinge Volkan Özenci

Läs mer

Direkt resistensbestämning

Direkt resistensbestämning Direkt resistensbestämning (Direct Antimicrobial usceptibility Testing, D-AT) Martin undqvist Laboratoriemedicinska Länskliniken, Klinisk Mikrobiologi, Universitetssjukhuset, Örebro Varför? Ökande resistens

Läs mer

Resistensåterkoppling Värmland STRAMA-möte 19/

Resistensåterkoppling Värmland STRAMA-möte 19/ Resistensåterkoppling Värmland 217 STRAMA-möte 19/12 217 Statistik baserad på odlingar utsvarade 1/1-3/11 217. S pneumoniae Samtliga odlingar, korrigerad statistik PcV: 11.2 % resistenta Ännu ingen ampicillin-resistens!

Läs mer

Rapport från 2018 års ringtest för kliniska mastiter

Rapport från 2018 års ringtest för kliniska mastiter Rapport från 2018 års ringtest för kliniska mastiter SAMMANFATTNING I år deltog 50 arbetsplatser vilket glädjande nog är högsta deltagandet hittills. Vi fick in svar från nästan 100 deltagare och 41 arbetsplatser.

Läs mer

FÖRSLAG TILL EN FÖRBÄTTRAD RESISTENSÖVERVAKNING. Ragnar Norrby Smittskyddsinstitutet

FÖRSLAG TILL EN FÖRBÄTTRAD RESISTENSÖVERVAKNING. Ragnar Norrby Smittskyddsinstitutet FÖRSLAG TILL EN FÖRBÄTTRAD RESISTENSÖVERVAKNING Ragnar Norrby Smittskyddsinstitutet Uppdraget SMI skall tillsammans med Strama göra en översyn av nationella program för övervakning av antibiotikaresistens.

Läs mer

Optimalt omhändertagande av pneumonipatienter. Jessica Kaminska 2012-10-24

Optimalt omhändertagande av pneumonipatienter. Jessica Kaminska 2012-10-24 Optimalt omhändertagande av pneumonipatienter Jessica Kaminska 2012-10-24 Pneumoni Hos icke immunsupprimerade patienter med samhällsförvärvad pneumoni som behandlas på sjukhus Innehåll Pre- och post-antibiotika

Läs mer

Detektion av Streptococcus agalactiae (GBS) från selektiv odlingsbuljong med MALDI-TOF och illumigene

Detektion av Streptococcus agalactiae (GBS) från selektiv odlingsbuljong med MALDI-TOF och illumigene Detektion av Streptococcus agalactiae (GBS) från selektiv odlingsbuljong med MALDI-TOF och illumigene Emma Sjöberg Handledare: Martin Sundqvist, M.D., Ph.D. Avdelningen för Klinisk mikrobiologi Karlskrona,

Läs mer

Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800)

Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800) Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800) Kursens namn: BMLVA II 22,5 högskolepoäng Kurskod: BL1004 Kursansvarig: Rolf Pettersson, Charlotte Sahlberg Bang Datum: 2/5-2011 Skrivtid:

Läs mer

Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL

Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL Biträdande smittskyddsläkare Smittskydd Stockholm Antibiotikaresistenta bakterier Ökar i världen och i Sverige Gör bakterieinfektioner

Läs mer

Resistensläget hos Urinvägspatogener i Region Örebro län. Martin Sundqvist Överläkare, PhD Lab medicin, Mikrobiologi, USÖ STRAMA dag

Resistensläget hos Urinvägspatogener i Region Örebro län. Martin Sundqvist Överläkare, PhD Lab medicin, Mikrobiologi, USÖ STRAMA dag Resistensläget hos Urinvägspatogener i Region Örebro län Martin Sundqvist Överläkare, PhD Lab medicin, Mikrobiologi, USÖ STRAMA dag 150303 Antibiotikaresistens vid UVI Vanligast och ökar snabbast Ganska

Läs mer

Cykloserins och ceftazidim/avibaktams effekt på multiresistenta gramnegativa bakterier

Cykloserins och ceftazidim/avibaktams effekt på multiresistenta gramnegativa bakterier Examensarbete Cykloserins och ceftazidim/avibaktams effekt på multiresistenta gramnegativa bakterier Författare: Åsa Götesson Ämne: Biomedicinsk Laboratorievetenskap Nivå: Grundnivå Cykloserins och ceftazidim/avibaktams

Läs mer

Antibiotikaresistens i Uppsala län och Sverige

Antibiotikaresistens i Uppsala län och Sverige Antibiotikaresistens i Uppsala län och Sverige T o m 215 12 Antal inrapporterade fall av ESBL per 1 invånare och år i Uppsala län respektive Sverige. Källa: Folkhälsomyndigheten 1 Antal fall per 1 invånare

Läs mer

Antibiotikabehandling på sjukhus vid samhällsförvärvad pneumoni

Antibiotikabehandling på sjukhus vid samhällsförvärvad pneumoni Antibiotikabehandling på sjukhus vid samhällsförvärvad pneumoni Antibiotikabehandling på sjukhus vid samhällsförvärvad pneumoni 1. Hur ska samhällsförvärvad pneumoni behandlas? - Infektionsläkarföreningens

Läs mer

PRODUKTRESUMÉ. Behandling av bakterieinfektioner orsakade av bakteriestammar som är känsliga för enrofloxacin.

PRODUKTRESUMÉ. Behandling av bakterieinfektioner orsakade av bakteriestammar som är känsliga för enrofloxacin. PRODUKTRESUMÉ 1. DET VETERINÄRMEDICINSKA LÄKEMEDLETS NAMN Fenoflox vet 100 mg/ml injektionsvätska, lösning för nöt och svin 2. KVALITATIV OCH KVANTITATIV SAMMANSÄTTNING 1 ml innehåller: Aktiv substans:

Läs mer

Sjukhusförvärvad pneumoni - behandlingsrekommendation

Sjukhusförvärvad pneumoni - behandlingsrekommendation Sjukhusförvärvad pneumoni - behandlingsrekommendation Ett konsensusdokument från expertmöte anordnat av Läkemedelsverket 5 6 maj 2015 Definitioner HAP (hospital-acquired pneumonia) - sjukhusförvärvad pneumoni,

Läs mer

Rapport från Pneumoniregistret för år 2008

Rapport från Pneumoniregistret för år 2008 Rapport från Pneumoniregistret för år 2008 Inledning Det nationella kvalitetsregistret för pneumonier vårdade på infektionsklinik skapades av infektionsläkarföreningen för att öka kunskapen om vilka patienter

Läs mer

Klimatförändringen en drivkraft för vattenburen smitta? Ann-Sofi Rehnstam-Holm Högskolan Kristianstad

Klimatförändringen en drivkraft för vattenburen smitta? Ann-Sofi Rehnstam-Holm Högskolan Kristianstad Klimatförändringen en drivkraft för vattenburen smitta? Ann-Sofi Rehnstam-Holm Högskolan Kristianstad Kristianstad Reningsverk Hammarsjön Våtmarker Helge Å Lillö Vattenburna infektioner Förändringar att

Läs mer

Tentamen 3p mikrobiologi inom biologi 45p, Fråga 1 (2p) Fråga 2 (2p) Fråga 3 (2p)

Tentamen 3p mikrobiologi inom biologi 45p, Fråga 1 (2p) Fråga 2 (2p) Fråga 3 (2p) Tentamen 3p mikrobiologi inom biologi 45p, 050308 Fråga 1 Du har isolerat en bakterie och vill titta på om den kan förflytta sig, vilken/vilka metoder använder du? a Elektronmikroskopi b Gramfärgning c

Läs mer

Resistenta bakterier (MRB) Smittspårningsutbildning 2018

Resistenta bakterier (MRB) Smittspårningsutbildning 2018 Resistenta bakterier (MRB) Smittspårningsutbildning 2018 Bodil Ardung Tf enhetschef/ smittskyddssjuksköterska Bild från vårdhygien, Uppsala Antibiotikaresistenta bakterier ESBL ESBL carba MRSA VRE Smittspårningspliktiga

Läs mer

Hur kan vi behandla infektioner med MDR gramnegativa bakterier? Kombinationsbehandling och tester info r detta?

Hur kan vi behandla infektioner med MDR gramnegativa bakterier? Kombinationsbehandling och tester info r detta? Hur kan vi behandla infektioner med MDR gramnegativa bakterier? Kombinationsbehandling och tester info r detta? Thomas Tängdén Infektionskliniken Uppsala Behandling av ESBL A -producerande Enterobacteriaceae

Läs mer

Teoretisk workshop i resistensbestämning med lappdiffusion. Erika Matuschek Jenny Åhman EUCAST Development Laboratory (EDL)

Teoretisk workshop i resistensbestämning med lappdiffusion. Erika Matuschek Jenny Åhman EUCAST Development Laboratory (EDL) Teoretisk workshop i resistensbestämning med lappdiffusion Erika Matuschek Jenny Åhman EUCAST Development Laboratory (EDL) Infektionsveckan och Mikrobiologiskt vårmöte, Karlstad, 2018 EUCASTs utvecklingslaboratorium

Läs mer

Antibiotika i öppen- och slutenvård Malin Vading. Innehåll

Antibiotika i öppen- och slutenvård Malin Vading. Innehåll Antibiotika i öppen- och slutenvård Malin Vading Innehåll Grupp 1-4: Betalaktamantibiotika... 3 Allmänt om penicilliner... 3 Penicillinresistens... 3 1. Penicillinaskänsliga penicilliner... 3 Fenoximetylpenicillin...

Läs mer

PNEUMOKOCK- SJUKDOM ÄR DU I RISKZONEN?

PNEUMOKOCK- SJUKDOM ÄR DU I RISKZONEN? PNEUMOKOCK- SJUKDOM ÄR DU I RISKZONEN? Vad är pneumokocksjukdom? Till pneumokocksjukdom räknas ett antal olika sjukdomar, som orsakas av en vanlig bakterie vid namn Streptococcus pneumoniae (pneumokocker).

Läs mer

Fakulteten för hälso- och livsvetenskap

Fakulteten för hälso- och livsvetenskap Fakulteten för hälso- och livsvetenskap Examensarbete Enterobacteriaceae och amoxicillin-klavulansyra. - Effekt av bestämt förhållande respektive bestämd koncentration av klavulansyra på MIC-värden och

Läs mer

Provtagningsanvisning för Ögonsekret odling. Avgränsning/Bakgrund. Provtagning

Provtagningsanvisning för Ögonsekret odling. Avgränsning/Bakgrund. Provtagning Sidan 1 av 5 Avgränsning/Bakgrund Här beskrivs provtagning för allmän bakteriologisk frågeställning vid konjunktivit, keratit eller endoftalmit. För odling avseende gonokocker krävs att detta begärs på

Läs mer

VIKTIGT SÄKERHETSMEDDELANDE TILL MARKNADEN FSCA VITEK 2 - Card Pouch Integrity

VIKTIGT SÄKERHETSMEDDELANDE TILL MARKNADEN FSCA VITEK 2 - Card Pouch Integrity biomérieux NORDICS Customer Service Department Direct no.: +46 31 68 58 58 Fax no.: +46 31 68 48 68 e-mail: customersupport.nordic@biomerieux.com Our Ref.: FSCA 3445 - VITEK 2 - Card Pouch Integrity VIKTIGT

Läs mer

Patientenkät. Tre delar. Patientdata. Antibiotikabehandlingsdata. Tecken och symptom på infektion

Patientenkät. Tre delar. Patientdata. Antibiotikabehandlingsdata. Tecken och symptom på infektion Patientenkät Patientenkät Endast för patienter som har tecken och symptom på en infektion och/eller står på antibiotika på dagen för mätningen och uppfyller kriterierna för att delta i mätningen Tre delar

Läs mer

Återkoppling av resistensdata, diagnostic stewardship

Återkoppling av resistensdata, diagnostic stewardship Återkoppling av resistensdata, diagnostic stewardship Tinna (Christina) Åhrén Infektionsläkare, Mikrobiolog Ordf. Strama VGR christina.ahren@vgregion.se Vad syftar diagnostiken till? Bekräfta, förkasta

Läs mer

Prokaryota celler. Bakterier och arkéer

Prokaryota celler. Bakterier och arkéer Prokaryota celler Bakterier och arkéer Det finns tre domäner Bakterier Arkéer Eukaryota Kännetecken Domän: Eukaryoter Cellkärna Organeller Domän: Bakterier Kallades tidigare eubakterier = "Äkta" bakterier

Läs mer

Undersökning av ESBL-, AmpC- och karbapenemasproduktion med diskdiffusionsmetoden

Undersökning av ESBL-, AmpC- och karbapenemasproduktion med diskdiffusionsmetoden 1 / 5 Undersökning av ESBL-, AmpC- och karbapenemasproduktion med diskdiffusionsmetoden 1 Metodreferenser och avvikelser CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests

Läs mer