Utvärdering av rosa glukosrören Ian Jones Kem lab Falun
Rutin mätmetoder för glukos Glukosoxidas (1963) Glukos + O 2 Glukonsyra + H 2 O 2 Amperometrisk detektion Clarke elektrod (tex Yellow Spring, Blodgasinstrument) H 2 O 2 2H + + O 2 + 2e - Färgutveckling (tex Vitros glukos slide) 2 H 2 O 2 + 4-aminoantipyrin + 1,7-dihydroxinaftalen röd färg
Mätning av glukos idag 2 Glukoshexokinas D-Glukos + ATP Glukos-6-PO 4 + ADP Glukos-6-PO 4 dehydrogenas Glukos-6-PO 4 + NADP + 6-fosfoglukonat + NADPH + H + NADPH mäts vid 340 nm Glukosdehydrogenas D-glukos + NAD D-glukolakton + NADH +H + NADH mäts vid 340 nm
Kalibrering De flesta metoderna är spårbara till: NIST 917c Renhet bestämd med differential scanning calorimetry och GC/MS (Kan köpas, ca 2500 kr för 50 g)
Krav på metoderna Biologiska variationen (intraindividuell variation) CVws Friska: fp-glukos ca 5 % (CVa krav ca 2,5 %) Diabetes: fp-glukos ca 30 % Total error 6,4 % (Carsen S et al. Clin Chem Lab Med 2011 49(9)) 2h glukosbelastning CVws = 16,6 % (Selvin S et al. Arch Intern Med 2007;167(14):1545-1551)
Svenska kem lab bra på att bestämma glukos Bra med Equalis referensmaterial utskick Problem med preanalys
Hur ska vi ta provet? Enligt WHO (Definition and Diagnosis of Diabetes Mellitus and Intermediate Hyperglycaemia 2006) vp-glukos bör vara standardmetod för mätning och rapportering. Snabb separation av plasma (inom minuter) eller helblod i isbad högst 30 min innan centrifugering. WHO erkänner att kapillär provtagning finns, ssk i U-länder och därför uppge den som ett alternativ för 2 h belastningsprov. Det är välkänt att I vanliga provrör minskar glukos 5 7 % per timme pga glykolys i rumstemp. I fluorid rör har fluorid mycket liten effekt på glykolys under de första 1-3 h efter provtagningen (Sidebottom, RA et al. Clin Chem 1982;28:190-192. Chan et al Clin Chem 1989;35:315-7.) Förbättring.
Terumo Venosafe Glycaemia (FC-mix) rör Venosafe Glycaemia rör innehåller NaF, citratbuffert och EDTA (som pulver) ph av blodprovet blir ca 5,5 Surgörningen innebär att glykolys hämmas omedelbart i erytrocyter, leukocyter och trombocyter. NaF-tillsats förlänger hållbarheten. EDTA förstärker effekten genom bindning till Mg ++ Rekommenderad hållbarhet som helblod: Upp till 48 h i rumstemp, 72 h i kyl
Terumo Venosafe Glycaemia (FC-mix) rör 2 Patent söktes i USA 1986 och beviljades till Terumo 1988 Uchida, K et al. A new method of inhibiting glycolysis in blood samples. Clin Chim Acta 172;(1988): 101-108 Rörtypen har använts nästan genomgående i Finland i ca 15 år Har en relativ stor spridning i Danmark sedan 2004 Använts av ett ökande antal landsting i Sverige sedan 2008 Uppmärksammades i USA Gambino, R et al. Acidification of blood is superior to sodium fluoride alone as an inhibitor of glycolysis. Clin Chem 2009;55:1019-1021
Uchida, K et al. A new method of inhibiting glycolysis in blood samples. Clin Chim Acta 1988;177:101-108
Change in glucose (%) Figure 1. Changes in glucose levels (%) compared with the reference samples (0 h). Samples were stored as whole blood and tubes were centrifuged just before analyses. Väisänen et al Kliinlab 2002:19(3-4): 48-50 2 0-2 -4-6 -8 1. tube (NaF/EDTA) 2. tube (Li-hep) 3. tube (NaF/K-oksal) 4. tube (FC-mix) -10-12 -14 0 0.5 1 2 6 24 Time (h)
Gambino R et al Clin Chem 2009;55:1019-1021
Fluoride has no effect on the rate of decline in glucose concentrations in the first 1 2 h after blood is collected and glycolysis continues for up to 4 h in samples containing fluoride.a recent publication showed that acidification of the blood sample inhibits glycolysis in the first 2 h after phlebotomy (Gambino 2009) but the collection tubes used in the study are not commercially available. Placing tubes in ice water immediately after collection may be the best way to stabilize glucose initially but is not a practical solution in most clinical situations. Separating cells from plasma within minutes is also effective, but impractical. Sacks DB. A1C versus Glucose testing: A Comparison. Diabetes Care 34;Feb 2011: 518-523
Recommendation: To minimize glycolysis one should place the sample tube immediately in an ice-water slurry, and the plasma should be separated by the cells within 30 minutes. If that cannot be achieved, a tube containing a rapidly effective glycolysis inhibitor, such as citrate buffer should be used for collecting the sample. Tubes with only enolase inhibitors, such as sodium fluoride, should not be relied upon to prevent glycolysis. Sacks DB et al. Laboratory Analysis of Diabetes. Clin Chem 2011 (June); 57
Hemolys och FC-mix rör Hemolys i FC-mix rör har en mörk färg. Terumo säger att det beror på dålig blandning. Rören innehåller relativt mycket salter som måste lösas. Vändning rekommenderas 10 gånger. Enligt företaget uppfattas detta inte som ett problem i Finland och Danmark Många lab har testat genom att provocera fram den mörka färgen och har visat att det har ingen effekt på glukosmätningen.
Hemolys och FC-mix rör 2 Den spektroskopiska undersökningen av hemolys visar att det till stor del består av methemoglobin. Tillsatsförsök med ren methb upp till 10 g/l visar att det har ingen effekt på glukosbestämning för glukoshexokinas metoder från Roche (Cobas c501), Abbott (ci8200) och Beckman (Unicel DxC 800). Vitros (5,1) glukosoxidas metod visade en 2,7 % ökning vid 6,6 g/l Hb. Hemolysindex mätning på Abbott, Roche och Vitros fungerar inte alls medan Beckman fungerar. Hemocue Low Hb användes till mätningar (azidmethemoglobin metod)
Hemolysindex MetHb (g/l) HemoCue H index Cobas H index Abbott H index Beckman H index Vitros 1,45 4 0.02 1 <15 2,1 15-0.04 3 <15 3,25 26-0.26 5 <15 4,25 31-0.51 8 <15 5,25 38-0.82 10 <15 6,6 43-1.06 >10 <15 7,8 54-1.35 >10 <15 9,1 63-1.64 >10 <15 9,75 60-1.95 >10 <15 10,9 91-2.24 >10 <15 Cobas: 90 = ca 1g hemoglobin/l. Beckman: 1 = ca 0,5 g/l. Abbott: 1 = ca 1g/L. Vitros: 15 = ca 0,15 g/l
Slutsats Preanalytiska problem löst med Terumo FC-rör Hemolys inget problem Övergång till plasma glukos från venblod för diagnostiska P-glukos? fp-glukos 2 timmars belastningsprov Icke fastande P-Glukos för gravida Hypoglykemi