Salivkortisol på Cobas E Niclas Rollborn, laboratorieingenjör Yasir Al-saffar, laboratorieingenjör Mats Stridsberg, överläkare
Bakgrund Kortisol bildas från kolesterol i binjurebarken och är den kvantitativt viktigaste glukokortikoiden. I serum transporteras kortisol bundet till transkortin (ca 75%), albumin (ca 15%) och resten är fritt (ca 10%). Det fria kortisolet kan antingen mätas i urin eller saliv, varpå fördelen med saliv är enkelheten vid provtagningen, patientvänligt och möjlighet att mäta vid flera tidpunkter och därmed även kunna ge ett mått på dygnsrytmen. Indikationen är misstänkt hyperfunktion eller hypofunktion i binjurebarken alt hypofysen. Stresstillstånd av olika genes.
Metodik ELISA Salivary Cortisol Enzym Immunoassay kit Mätområde 0,4 82 nmol/l. 96 brunnar, varav 6 kalibreringspunkter och 36 prover är möjliga Absorbansavläsning vid 450 nm mha plattläsare (Wallac 1420 Victor) Tidsåtgång: ca ½ arbetsdag (4 h) från start till resultat Elecsys och Cobas E Cortisol II, e602 Mätintervall 1,5 1750 nmol/l (1:10 spädning rekommenderad vid överskridande) Analystid är 18 min Kompetitiv analysprincip med rutenium som markör Kemiluminiscent emission som mäts med en fotomultiplikator Serum och plasma samt saliv är godkända provmaterial (Roche)
Varför? 2015-01-01 till 2016-06-30, 594 resultat har lämnats ut varav 540 st (91%) var inom mätbart område för ELISA (0,4 82 nmol/l) och 40 st (6,7%) behövdes spädas. Dessa 40 st prover kom ifrån 8 st patienter och hade nivåer om 91 till 13264 nmol/l, varpå intervallet medför många spädningsnivåer. En av dessa 8 patienter behandlades under lång period och fick prover under 5 månader, övriga under kortare tidsintervaller.
Orsak och Frågeställning Spädningsserier krävs då det förekommer stora koncentrationsvariationer Tidskrävande Dels per analyseringsomgång Dels då patienter behandlas under lång period, varpå prover skickas S-kortisol analyserades på e602, sedan tidigare Möjligt att använda samma metod som screening för saliv? (tidigare validering godkändes en Cut-off på 6 nmol/l, dvs att 40% av proverna skulle enbart kunna analyseras på Cobas) Cut-off nivå för att gå vidare med Elisa, då mätområdet ej är heltäckande? Möjliga felkällor?
Validering Cobas E mot Elisa Elisa, Salimetrics 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 Cortisol y = 0,9849x + 0,6232 R² = 0,6442 0,00 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 Cortisol gen II, Cobas Cortisol gen II, Cobas Elisa, Salimetrics <1,50 0,07 <1,50 0,39 <1,50 0,62 <1,50 0,76 <1,50 1,37 <1,50 1,42 <1,50 1,64 <1,50 1,66 <1,50 1,70 1,50 1,77 2,25 3,05 2,35 2,56 2,76 4,43 2,84 4,61 3,00 4,71 3,02 3,60 3,21 3,87 3,25 3,04 3,45 3,34 3,58 3,54 3,73 2,94 3,89 4,62 3,96 5,30 3,98 3,81 4,12 3,53 4,76 5,09 5,04 7,12 5,16 6,00 5,52 5,45 5,61 6,52
Utvärdering av validering Validering av mätningar av låga (<7 nmol/l) saliv-cortisol på CobasE, generation II jämfört med Elisa-metoden. Förvånansvärt god korrelation (R2 = 0,64) mellan metoderna, trots att valideringen omfattar prover från flera analyseringsomgångar på Elisa. God överensstämmelse (lutning = 0,98), även om vi ser genomgående 0,6 nmol/l högre värden för Elisa-metoden. Av de 9 prover som blev <1,5 nmol/l på Cobas var 6 st <0,5 även på elisan, de övriga 3 var mellan 1,64-1,70. Vid föregående validering så godkändes att Cobas-metoden kunde användas för värden ned till 6 nmol/l. Efter denna validering så är metoden godkänd för analys av Cortisol i salivprover ned till 2 nmol/l, lägre värden stannar i TEK (autovalidering ned till 2 nmol/l) och analyseras om på elisan.
Konsensus Cortisol II, Cobas E, används idag som screeningmetod med en Cuf-off nivå på 2 nmol/l Cut-off på 2 nmol/l ger oss möjlighet att släppa 74% via autovalidering och enbart 26% går vidare till Elisa (tidigare validering med Cut-off på 6 nmol/l var det 60% som behövdes analyseras på Elisa) Extra kontroll kring Cut-off nivån har behövts införas, för att fånga upp variationer och kalibreringsförändringar
Variation en möjlig felkälla Förskjutning ( svansning ) av nedre delen av kalibreringskurvan, 2 kalibreringspunkter justerar in masterkurvan Kontroll i nivå av en känd kontroll som håller över tiden i området kring Cut-Off, vid varje analyseringsomgång samt en liten uppkörning efter varje kalibreringstillfälle.
Frågor?