NGS-panel ärftliga förändringar Analysen utförs med nya generationens sekvenseringsteknik, next generation sequencing (NGS). Analysen utförs med avseende på genetiska förändringar associerade med ärftliga tillstånd inom områdena metabola sjukdomar (lysosomala, peroxisomala, pyruvatdehydrogenas-brist och riboflavinsvarande sjukdomar), Wilson/kopparmetabolism, hemokromatos, familjära erytrocytoser samt erytrocytenzymdefekter. Indikation för analysen: Stark misstanke om sjukdom orsakad av genetisk förändring i någon av de ingående generna. Sådan misstanke kan vara baserad på klinisk misstanke och/eller tidigare utredning med biokemiska analyser. Analys kan utföras på flera eller enskilda gener och baseras på frågeställningen. Anlagsbärarskap i ingående gener kan analyseras i vissa fall, efter kontakt med laboratoriet. Följande gener kan analyseras: Gen Sjukdom Gen Sjukdom ABCD1 Adrenoleukodystrofi DNM1L Dynamin-like protein 1 deficiency ACOX1 Peroxisomal acyl-coa oxidasbrist DTNBP1 Hermansky-Pudlak syndrom typ 7 ADA SCID orsakad av ADA-brist EGLN1 Familjär erytrocytos 3 AGA Aspartylglukosaminuri EPAS1 Familjär erytrocytos 4 AGPS Rhizomel kondrodysplasi typ 3 EPOR Familjär erytrocytos 1 AGXT Hyperoxaluri typ 1 ETFA Multipel acyl-coa dehydrogenasbrist AK1 Adenylatkinasbrist ETFB Multipel acyl-coa dehydrogenasbrist ALDOA Aldolas A ETFDH Multipel acyl-coa dehydrogenasbrist AMACR Alfa-metylacyl-CoA racemasbrist FUCA1 Fukosidos AP3B1 Hermansky-Pudlak syndrom typ 2 G6PD Glukos-6-fosfat-dehydrogenasbrist ARSA Metakromatisk leukodystrofi GAA Mb Pompe ARSB Mukopolysackaridos typ VI GALC Mb Krabbe ASAH1 Mb Farber GALNS Mukopolysackaridos typ IVa ATP13A2 Ceroidlipofuscinos typ 12 GBA Mb Gaucher ATP7A Menkes sjukdom GLA Mb Fabry ATP7B Mb Wilson GLB1 GM1 gangliosidos, Mukopolysackaridos typ IVb Bile acid CoA: Amino acid N-acetyltransferase BAAT deficiency GNE Sialuri BLOC1S3 Hermansky-Pudlak syndrom typ 8 GNPAT Rhizomel kondrodysplasi typ 2 BPGM Erytrocytos orsakad av bisfosfoglyceratmutasbrist GNPTAB Mukolipidos typ II/III CAT Acatalasemia GNPTG Mukolipidos typ IIIc CLN3 Ceroidlipofuscinos typ 3 GNS Mukopolysackaridos typ IIId CLN5 Ceroidlipofuscinos typ 5 GPI Glukos-6-fosfatisomerasbrist CLN6 Ceroidlipofuscinos typ 6 / 4A GRN Ceroidlipofuscinos typ 11 CLN8 Ceroidlipofuscinos typ 8 GSR Glutationreduktasbrist CP Aceruloplasminemia GSS Glutationsyntetasbrist CTNS Cystinos GUSB Mukopolysackaridos typ VII CTSA Galaktosialidos HAMP Hemokromatos typ 2B CTSD Ceroidlipofuscinos typ 10 HEXA Mb Tay-Sachs CTSF Ceroidlipofuscinos typ 13 HEXB Mb Sandhoff CTSK Pyknodysostos HFE Hemokromatos typ 1 / Hereditär hemokromatos CYP27A1 Cerebrotendinös xantomatos HFE2 Hemokromatos typ 2A / Juvenil hemokromatos DHCR7 Smith-Lemli-Opitz syndrom HGSNAT Mukopolysackaridos typ IIIc DLAT Pyruvatdehydrogenas-komplex-brist HK1 Hexokinasbrist DNAJC5 Ceroidlipofuscinos typ 4B HPS1 Hermansky-Pudlak syndrom typ 1
Gen Sjukdom Gen Sjukdom HPS3 Hermansky-Pudlak syndrom typ 3 PEX7 Peroxisomal biogenesstörning HPS4 Hermansky-Pudlak syndrom typ 4 PEX10 Peroxisomal biogenesstörning HPS5 Hermansky-Pudlak syndrom typ 5 PEX11B Peroxisomal biogenesstörning HPS6 Hermansky-Pudlak syndrom typ 6 PEX12 Peroxisomal biogenesstörning HSD17B4 D-bifunktionell proteinbrist PEX13 Peroxisomal biogenesstörning HYAL1 Hyaluronidasbrist PEX14 Peroxisomal biogenesstörning IDS Mukopolysackaridos typ II PEX16 Peroxisomal biogenesstörning IDUA Mukopolysackaridos typ I PEX19 Peroxisomal biogenesstörning KCTD7 Ceroidlipofuscinos typ 14 PEX26 Peroxisomal biogenesstörning LAMP2 Mb Danon PFKL Fosfofruktokinasbrist LIAS Pyruvatdehydrogenas-komplex-brist PFKM Fosfofruktokinasbrist LIPA Mb Wolman PGK1 Fosfoglyceratkinasbrist MAN2B1 α-mannosidos PHYH Refsums sjukdom MANBA β-mannosidos PKLR Pyruvatkinasbrist MCOLN1 Mucolipidos typ IV PPT1 Ceroidlipofuscinos typ 1 MFSD8 Ceroidlipofuscinos typ 7 PSAP Saposinbrist MVK Mevalonatkinas-brist SGSH Mukopolysackaridos typ IIIa NAGA Mb Schindler SLC17A5 Mb Salla NAGLU Mukopolysackaridos typ IIIb SLC40A1 Hemokromatos typ 4 NEU1 Sialidos SLC52A1 Riboflavinbrist NPC1 Niemann-Pick C1 SLC52A2 Brown-Vialetto-Van Laere syndrom 2 NPC2 Niemann-Pick C2 SLC52A3 Brown-Vialetto-Van Laere syndrom 1 NT5C3A P5N Pyrimidin 5'-nukleotidas SMPD1 Niemann-Pick A / B PDHA1 Pyruvatdehydrogenas-komplex-brist SUMF1 Multipel Sulfatasbrist PDHB Pyruvatdehydrogenas-komplex-brist TFR2 Hemokromatos typ 3 PDHX Pyruvatdehydrogenas-komplex-brist TMPRSS6 IRIDA (järnresistent järnbrist-anemi) PDP1 Pyruvatdehydrogenas-komplex-brist TPI1 Triosfosfatisomerasbrist PEX1 Peroxisomal biogenesstörning TPP1 Ceroidlipofuscinos typ 2 PEX2 Peroxisomal biogenesstörning TRIM37 Mulibrey nanism PEX3 Peroxisomal biogenesstörning UGT1A1 Gilberts sjukdom / Crigler-Najjars syndrom PEX5 Peroxisomal biogenesstörning VHL Familjär erytrocytos 2 PEX6 Peroxisomal biogenesstörning Remiss Metabola sjukdomar: Remiss 8 Neurometabola sjukdomar Hematologiska sjukdomar: Remiss 4 Hematologi Medicinsk information metabola sjukdomar Lysosomala sjukdomar Analysen görs som led i utredning av medfödda lysosomala sjukdomar som beror på olika ärftliga förändringar i den lysosomala funktionen. De lysosomala sjukdomarna indelas i olika grupper baserad på typ av ansamlad substans (Lipidoser, Mukopolysackaridoser, Glykoproteinoser, Neuronal ceroidlipofuscinoser, Multipla enzymdefekter och Transportdefekter). Ett drygt 50-tal lysosomala sjukdomar är idag kända. De flesta är orsakade av förändringar i något enzymprotein, alternativt frånvaro av någon co-
faktor eller förändrad lysosomal membranfunktion. De beskrivna förändringarna leder till upplagring av icke nedbrytbara naturligt förekommande substanser i organ och utsöndring i kroppsvätskor, vilket i sin tur leder till fortskridande fysiska och/eller intellektuella försämringar. Analys kan utföras av enskild gen i gruppen om mycket stark klinisk/biokemisk misstanke Följande gener ingår i analyspanelen: AGA, AP3B1, ARSA, ARSB, ASAH1, ATP13A2, BLOC1S3, CLN3, CLN5, CLN6, CLN8, CTNS, CTSA, CTSD, CTSF, CTSK, DNAJC5, DTNBP1, FUCA1, GAA, GALC, GALNS, GBA, GLA, GLB1, GNE, GNPTAB, GNPTG, GRN, GNS, GUSB, HEXA, HEXB, HGSNAT, HPS1, HPS3, HPS4, HPS5, HPS6, HYAL1, IDS, IDUA, KCTD7, LAMP2, LIPA, MAN2B1, MANBA, MCOLN1, MFSD8, NAGA, NAGLU, NEU1, NPC1, NPC2, PPT1, PSAP, SGSH, SLC17A5, SMPD1, SUMF1, TPP1. Peroxisomala sjukdomar Analysen görs som led i utredning av medfödda peroxisomala sjukdomar. Idag är ca 20 sjukdomar kända, som beror på störningar i den peroxisomala funktionen. Peroxisomala sjukdomar kan indelas i två undergrupper; 1. Peroxisomal biogenesstörning (PBD) 2. Isolerad peroxisomal enzymdefekt. Peroxisomal biogenesstörning orsakas av ärftliga förändringar i olika PEX-gener som i sin tur kodar för komponenter som medverkar vid proteinimport över det peroxisomala membranet. Den mest uttalade fenotypen inom denna grupp är klassisk Mb Zellweger. Inom gruppen isolerade peroxisomala enzymdefekter ingår Adrenoleukodystrofi/adrenomyeloneuropati (ALD/AMN), som är den vanligaste peroxisomala sjukdomen (2-5 per 100 000 födda pojkar). Analys kan utföras av enskild gen i gruppen om mycket stark klinisk/biokemisk misstanke Följande gener ingår i analyspanelen: ABCD1, ACOX1, AGPS, AGXT, AMACR, BAAT, CAT, DNM1L, GNPAT, HSD17B4, MVK, PEX1, PEX10, PEX11B, PEX12, PEX13, PEX14, PEX16, PEX19, PEX2, PEX26, PEX3, PEX5, PEX6, PEX7, PHYH, TRIM37. Neurometabola sjukdomar Analysen görs som led i utredning av medfödda neurometabola sjukdomar (i första hand med peroxisomal eller lysosomal dysfunktion). Utöver gener kopplade till lysosomala och peroxisomala sjukdomar (för medicinsk bakgrund se information ovan), innehåller panelen gener associerade med defekter i kolesterolmetabolism (Smith-Lemli-Opitz (SLO) samt Cerebrotendinös Xantomatos (CTX)). SLO orsakas av brist på enzymet 7- dehydrokolesterolreduktas som omvandlar 7-dehydrokolesterol till kolesterol. Kliniskt har Smith-Lemli-Opitz sjukdom indelats i två former, en försvagad med långsammare förlopp (typ I) och en snabb under neonatalperioden letal form med allvarliga multipla missbildningar (typ II). Vanligt förekommande är syndaktyli mellan 2:a och 3:e tån. CTX orsakas av brist på enzymet sterol-27-hydroxylas och därmed en sekundär ackumulering av kolestanol. Bristen av enzymet leder till ackumulering av steroler i xantom i olika senor samt lunga, skelett och CNS. CTX är en långsamt fortskridande sjukdom där det första symtomet
oftast är kronisk diarré. Analys kan utföras av enskild gen i gruppen om mycket stark klinisk/biokemisk misstanke Följande gener ingår i analyspanelen: AGA, AP3B1, ARSA, ARSB, ASAH1, ATP13A2, BLOC1S3, CLN3, CLN5, CLN6, CLN8, CTNS, CTSA, CTSD, CTSF, CTSK, DNAJC5, DTNBP1, FUCA1, GAA, GALC, GALNS, GBA, GLA, GLB1, GNE, GNPTAB, GNPTG, GRN, GNS, GUSB, HEXA, HEXB, HGSNAT, HPS1, HPS3, HPS4, HPS5, HPS6, HYAL1, IDS, IDUA, KCTD7, LAMP2, LIPA, MAN2B1, MANBA, MCOLN1, MFSD8, NAGA, NAGLU, NEU1, NPC1, NPC2, PPT1, PSAP, SGSH, SLC17A5, SMPD1, SUMF1, TPP1, ABCD1, ACOX1, AGPS, AGXT, AMACR, BAAT, CAT, DNM1L, GNPAT, HSD17B4, MVK, PEX1, PEX10, PEX11B, PEX12, PEX13, PEX14, PEX16, PEX19, PEX2, PEX26, PEX3, PEX5, PEX6, PEX7, PHYH, TRIM37, CYP27A1, DHCR7. Pyruvatdehydrogenas-brist Analys utförs efter klinisk/biokemisk misstanke om pyruvatdehydrogenas-brist (PDH-brist). Sjukdomen orsakas av bristande funktion hos en av tre subenheter (E1, E2 och E3) i pyruvatdehydrogenaskomplexet (PDHc). PDHc omvandlar pyruvat till acetyl-coa i mitokondria och spelar en viktig roll i oxidationen av kolhydrater. Den vanligaste orsaken till PDH-brist (ca 90%) är mutationer i PDHA1, som kodar för E1 subenheten, men sjukdomen kan också orsakas av mutationer i någon av fem andra gener som alla kodar för proteiner av betydelse för PDH funktion. Sjukdomen finns i olika svårighetsgrader. Hos de flesta visar sig symtomen under de första levnadsmånaderna i form av nedsatt muskeltonus och försenad utveckling. Andra vanliga symtom, som kommer något senare, är ataxi, spasticitet, muskelsvaghet och epilepsi. Det finns också lindrigare former av sjukdomen som visar sig först hos äldre barn och vuxna. Följande gener ingår i analyspanelen: DLAT, PDHA1, PDHB, PDP1, LIAS, PDHX. Riboflavinsvarande metabola sjukdomar Analys utförs efter klinisk/biokemisk misstanke om multipel acyl-coa dehydrogenas-brist (MADD) eller riboflavintransportördefekter (RTD). MADD kan presenteras i olika svårighetsgrader. Svåra neonatala former har dålig prognos, men milda former, som kan debutera hos äldre barn och även i vuxen ålder, svarar på riboflavinbehandling och har därmed mycket bättre prognos. Vanliga symptom hos milda former är cykliska kräkningar och muskelsvaghet. RTD (gammal benämningen: Brown-Vialetto-Van Laere/Fazio Londe sjukdom) påverkar nervsystemet i form av progredierande bulbar palsy och en sjukdomsbild som liknar amyotrofisk lateralskleros. Sensorineural hörselnedsättning kan också förekomma. Debutåldern kan variera mellan 4 månader och 27 år, och riboflavinbehandling har lyckats förhindra sjukdomsprogressen eller förbättra patientens tillstånd hos alla publicerade fall. Följande gener ingår i analyspanelen: ETFA, ETFB, ETFDH, SLC52A1, SLC52A2, SLC52A3.,
Wilson/Kopparmetabolism Analysen utförs vid klinisk/biokemisk misstanke om Mb Wilson, Mb Menkes eller aceruloplasminemi. Analys kan utföras av enskild gen i gruppen om specifik misstanke Patienter med Mb Wilson presenterar sig med lever- eller neurologisk påverkan. Debutåldern varierar från 3 till över 50 år. Mb Menkes brukar debutera vid några månaders ålder med kramper och nedsatt muskeltonus och drabbar framför allt pojkar (X-bundet ärftlighet). Klassiska symptom är vridna hår (pili torti). Aceruloplasminemi debuterar i vuxen åldern med neurologisk bild i form av chorea, cerebellar ataxi, dystoni, parkinsonism och psykiatriska symptom, degeneration av retina och diabetes mellitus. Analys av S-koppar, S- ceruloplasmin och U-koppar är centralt för diagnostik av de tre sjukdomarna. Följande gener ingår i analyspanelen: ATP7A, ATP7B, CP. Medicinsk information hematologiska sjukdomar Erytrocytenzymdefekt/hyperbilirubinemi Analys kan utföras som led i utredning av misstänkt erytrocytenzymdefekt. Biokemisk utredning avseende aktivitet av glukos 6-fosfatdehydrogenas (G6PD) och pyruvatkinas (PK) ska vara utförd. Analysen används också för att verifiera biokemiskt diagnosticerad PK-brist. Erytrocytenzymdefekt kan misstänkas baserat på familjehistoria och vid nyfödd oförklarad bilirubinstegring eller icke-immunmedierad icke-sfärocytisk hemolytisk anemi utan förklaring. Följande gener ingår i analyspanelen: GPI, PKLR, PFKM, PFKL, TPI1, ALDOA, HK1, PGK1, GSR, GSS, NT5C3A, AK1, ADA, TMPRSS6, G6PD, UGT1A1. Kontakt för konsultation: Stefan Jacobsson Erytrocytoser Analysen utförs vid primär erytrocytos där misstanke om familjär form finns. Tillståndet kan misstänkas baserat på insjuknandeålder och familjehistoria. Polycytemia vera, tumörsjukdom med EPO-produktion samt hemoglobinvariant med ändrad syrgasaffinitet bör ha uteslutits, liksom sekundär erytrocytos. Följande gener ingår i analyspanelen: EPOR, VHL, EGLN1, EPAS1, BPGM. Kontakt för konsultation: Stefan Jacobsson Hereditär hemokromatos Analys kan utföras i fall av påvisad hemokromatos där sekundär hemokromatos samt hereditär hemokromatos (HH) typ 1 har uteslutits.) HH finns i ett flertal typer, där typ 1 är den i Sverige särklass vanligaste formen. Genotypning av HFE-genen för diagnos av HH typ 1 utförs som separat analys. Övriga former av HH ger i de flesta fall järninlagring i yngre åldrar än vad som ses vid typ 1, men insjuknandeåldern varierar mellan de olika
typerna. HH kan föreligga vid S-Transferrinmättnad >45% (hos både kvinnor och män) i kombination med förhöjt S-Ferritin (>200 g/l hos män och >130 g/l hos kvinnor) alternativt vid histologiskt eller MRI-påvisad järninlagring. S-Hepcidin är lågt. Vid Ferroportinsjukdom (HH typ 4) ses vanligen inte förhöjd transferrinmättnad eller lågt S- Hepcidin. Observera att andra former av genetiskt orsakad hemokromatos som ej täcks av denna genpanel finns, såsom hypotransferrinemi, defekt DMT1, aceruloplasminemi med flera. Följande gener ingår i analyspanelen: HFE, HFE2, HAMP, TFR2, SLC40A1. Kontakt för konsultation: Stefan Jacobsson Teknisk information Analysen baseras på riktad sekvensering med NGS-teknik (Next Generation Sequencing) av kodande exon samt närliggande splice sites (enligt RefSeq-databas och assembly Feb. 2009 (GRCh37/hg19)), hos nedan angivna gener. För provupparbetning används hybridiseringsbaserad anrikning med hjälp av SureSelect QXT Target Enrichment teknologi (Agilent ). Sekvensering utförs med MiSeq instrument (Illumina ). Genetiska förändringar i form av punktmutationer samt mindre insertioner och deletioner (max 8 baspar) detekteras genom variant calling. Varianterna filtreras för att identifiera de förändringar som möjligen kan vara sjukdomsorsakande. Förändringar med en allelfrekvens över 3% hos den globala befolkningen filtreras bort. Därefter exkluderas även varianter som inte påverkar det protein som genen kodar för, dvs. tysta mutationer (synonymous) samt varianter i intron som inte annoteras som splice sites. Copy number analys, baserat på variation i sekvenseringsdjup, används för att möjliggöra detektion av större deletioner (>1 Kb). Detektion av alla stora deletioner kan dock inte garanteras. Alla fynd kontrolleras avseende ärftlighetsmönster och jämförs med information tillgänglig i databaser. Endast varianter som bedöms vara av relevans för den kliniska frågeställningen rapporteras i svaret, enligt riktlinjer från SFMG (Svensk förening för medicinsk genetik). Anlagsbärarskap för autosomalt recessiva sjukdomar rapporteras inte. Information om detta finns tillgänglig vid behov. Kontakt Tekniska frågor Julia Lindgren, Genanalys tel 031-3427891 Konsultation För metabola sjukdomar: Jorge Asin Cayuela, docent, överläkare, tel 031-3428822 För hematologi-associerade tillstånd: Stefan Jacobsson, överläkare, tel 031-3427796 Övergripande medicinskt ansvarig Linda Fogelstrand, docent, specialistläkare, tel 031-3429296