Avsedd för in vitro-diagnostik För användning tillsammans med BD MAX-systemet Svenska 4 U I

Transkript

1 MAX MRSA XT Avsedd för in vitro-diagnostik P0205(01) För användning tillsammans med BD MAX-systemet Svenska 4 U I AVSEDD ANVÄNDNING BD MAX MRSA XT-analysen som utförs på BD MAX-systemet är ett automatiserat kvalitativt in vitro-diagnostiskt test för direkt detektion av DNA från meticillinresistent Staphylococcus aureus (MRSA) från nasalodlingar från patienter med risk för nasal kolonisering. Testet använder polymeraskedjereaktion (PCR) i realtid för amplifikationen av MRSA-DNA och fluorogena målspecifika hybridiseringsprober för detektion av amplifierat DNA. BD MAX MRSA XT-analysen är avsedd att hjälpa till för att förebygga och kontrollera MRSA-infektioner i vårdmiljöer. Den är inte avsedd för att diagnostisera MRSA-infektioner och inte heller för att vägleda vid eller följa upp behandlingar av MRSA-infektioner. Ett negativt resultat utesluter inte nasal kolonisering. Samtidiga odlingar är nödvändiga för att påvisa organismer för epidemiologisk typning eller för ytterligare resistensbestämning. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING AV FÖRFARANDET MRSA utgör en betydande orsak till vårdrelaterade infektioner. Den mesta spridningen sker på vårdinrättningar på grund av kontaminering av sjukvårdspersonalens händer eller att vårdmiljön har kontaminerats av patienter som bär på MRSA. MRSA kan orsaka infektioner med kliniska manifestationer som sträcker sig från pustler till sepsis och dödsfall, 1 men kan också finnas i näsan eller på huden hos individer (asymtomatiska bärare). Behandling av MRSA-infektioner har blivit en riktig utmaning eftersom MRSA ofta är resistent mot ett stort antal antimikrobiella medel. Meticillinresistenta stammar av Staphylococcus aureus påträffas regelbundet i vårdmiljöer, och utgör över 50 % av vårdrelaterade isolat av Staphylococcus aureus på vissa sjukhus i Nordamerika. Riskfaktorer för infektion med MRSA i vårdmiljöer inkluderar långvarig sjukhusvistelse, närhet till patienter som är infekterade eller koloniserade med MRSA, kolonisering med andra resistenta organismer, t.ex. vankomycinresistenta enterococci (VRE) och Clostridium difficile, exponering för flera och/eller långvariga behandlingar med bredspektrumantibiotika, exponering för områden med hög MRSA-prevalens inom vårdinrättningen och att tidigare ha varit infekterad med eller varit bärare av MRSA nasalt. Tidig identifiering av patienter som är bärare av MRSA nasalt kan ingå i ett effektivt program för att förebygga MRSA-infektioner. Odlingsbaserad detektion av MRSA kräver isolering av rena kolonier följt av resistensbestämning med antingen oxacillin eller cefoxitin, detektion av meca-genen eller detektion av det penicillinbindande proteinet (PBP 2a) som kodas av meca-genen. Den odlingsbaserade metoden tar minst 24 timmar med en mediantid till färdigt resultat på närmare 48 timmar för att MRSA ska kunna identifieras. På grund av den snabbhet med vilken MRSA-infektioner kan sprida sig, i synnerhet i vårdmiljöer där det är vanligt med bärare, är det en fördel vid infektionsförebyggande program att kunna erhålla ett resultat för om MRSA bärs nasalt samma dag som provet tas. Aktiv övervakning med molekylära tester för snabb detektion av MRSA är en beprövad strategi för att minska spridningen i vårdmiljöer och förhindra infektion hos känsliga patienter. Felaktig detektion kan leda till okontrollerad spridning av MRSA och att sjukvårdsresurser används på ett olämpligt sätt. 2 Med andra kommersiellt tillgängliga analyser är upp till 17,9 % av de positiva MRSA-resultaten felaktiga eftersom meca-genen saknas, vilket vanligtvis kallas bortfallsmutanter ( dropout mutants ). 3 Dessa falska positiva resultat kan leda till onödig och kostsam isolering och behandling av patienter. 1 MRSA-stammar med den nyligen upptäckta mecc-genen står för 3 4 % av alla nyupptäckta MRSA-fall 4 men kan inte detekteras med analyser som inte detekterar mecc-genen. 5 Oförmåga att detektera mecc-genen kan leda till falska negativa resultat vilket kan bidra till okontrollerad spridning av oupptäckta MRSA-stammar. Analysens utformning är avgörande för korrekt detektion av MRSA och för att säkerställa att rätt förebyggande åtgärder för infektionskontroll används. BD MAX MRSA XT-analysen använder en utökad kombination av primrar och prober för att detektera nya MRSA-stammar, inklusive stammar med meca- eller mecc-genen, och minska antalet falska positiva resultat som beror på meca- eller mecc-bortfall. 1

2 Ett prov från näsa tas och transporteras till laboratoriet med rekommenderad provtagningspinne (se avsnittet Material som krävs men ej medföljer). Provtagningspinnen placeras i ett BD MAX MRSA XT Sample Buffer Tube (provbuffertrör). Provbuffertröret vortexblandas för att celler ska frigöras från provtagningspinnen ut i bufferten. Provbuffertröret placeras i BD MAX-systemet och följande automatiserade förfarande utförs: bakteriecellerna lyseras, DNA extraheras till magnetiska kulor och koncentreras och sedan tillsätts en alikvot av eluerat DNA till PCR-reagenser som innehåller de MRSA-specifika primrar som används för att amplifiera de genetiska målen, om förekommande. I analysen ingår också en Sample Processing Control (provbearbetningskontroll, SPC). Provbearbetningskontrollen finns i extraktionsröret och genomgår extraktions-, koncentrations- och amplifieringsstegen för att övervaka förekomsten av eventuella inhibitoriska substanser samt processineffektivitet på grund av instrument- eller reagensfel. Det behövs inga ytterligare åtgärder från en operatör när det kliniska provet, BD MAX Unitized Reagent Strip (sammansatt reagensremsa) och BD MAX PCR Cartridge (PCR-kassetten) har laddats i BD MAX-systemet. BD MAX-systemet automatiserar lyseringen av provet, extraktionen och koncentrationen av DNA, reagensrehydreringen, amplifieringen av nukleinsyrorna och detektionen av mål-nukleinsyrasekvensen med användning av polymeraskedjereaktion (PCR) i realtid. Amplifierade mål detekteras med hydrolysprober märkta med dämpade fluoroforer. Amplifieringen, detektionen och tolkningen av signalerna görs automatiskt av BD MAX-systemet. PRINCIPER FÖR METODEN BD MAX-systemet använder en kombination av reagenser för lysering och extraktion för att utföra cellysering och DNA-extraktion. Efter enzymatisk cellysering vid förhöjd temperatur fångas de frigjorda nukleinsyrorna med magnetiska affinitetskulor. Kulorna med de bundna nukleinsyrorna tvättas med tvättbuffert och nukleinsyrorna elueras med värme i elueringsbuffert. Eluerat DNA neutraliseras med neutraliseringsbuffert och överförs till mastermixröret för att rehydrera PCR-reagenserna. Den rekonstituerade amplifieringsreagensen dispenseras i en BD MAX PCR-kassett. Mikroventiler i BD MAX PCR-kassetten försluts av systemet innan PCR initieras för att förhindra avdunstning och kontamination av amplikoner. De amplifierade DNA-målen detekteras med hydrolysprober (TaqMan), märkta i ena änden med ett fluorescerande färgämne (fluorofor) och i den andra med ett inhiberande fragment. Prober märkta med olika fluoroforer används för att detektera en specifik amplikon i SCCmec-MREJ (mec right-extremity junction), generna för meticillinresistens meca och mecc, i tre olika optiska kanaler på BD MAX-systemet: Amplikoner för SCCmec-MREJ detekteras i 475/520-kanalen, amplikoner för de meticillinresistenta generna meca och mecc detekteras i 585/630-kanalen och provbearbetningskontrollamplikoner detekteras i 680/715-kanalen. När proberna är i sitt ursprungliga tillstånd inhiberas fluorescensen i fluoroforen på grund av dess närhet till inhiberaren. I närvaro av mål-dna hybridiseras dock proberna till sina komplementära sekvenser och hydrolyseras av DNA-polymerasens 5 3 -exonukleasaktivitet när den syntetiserar den begynnande strängen längs DNA-mallen. Till följd av detta separeras fluoroforerna från inhiberarmolekylerna och fluorescens avges. Mängden fluorescens som detekteras i de tre optiska kanalerna som används för BD MAX MRSA XTanalysen står i direkt proportion till mängden motsvarande prob som hydrolyseras. BD MAX-systemet mäter dessa signaler i slutet av varje amplifieringscykel och tolkar data för att ge ett resultat. REAGENSER REF Innehåll Kvantitet BD MAX MRSA XT Master Mix (C7) Torkad PCR-mastermix som innehåller polymeras, nukleotider och specifika molekylärprober och primrar samt en molekylärprob som är specifik för provbearbetningskontrollen. BD MAX MRSA XT Unitized Reagent Strip Sammansatt reagensremsa som innehåller alla flytande reagenser och pipettspetsar för engångsbruk som behövs för provbearbetning och DNA-extraktion. BD MAX MRSA XT Extraction Tube (B8) Torkad extraktionsreagens som innehåller magnetiska DNA-affinitetskulor, achromopeptidaser och provbearbetningskontroll BD MAX MRSA XT Sample Buffer Tube (med 25 membranlock) 24 tester 24 tester 24 tester 24 tester MATERIAL SOM KRÄVS MEN EJ MEDFÖLJER BD BBL CultureSwab Liquid Stuart single or double swab (BD katalognr eller ), Copan (Venturi) Transystem* Liquid Stuart single or double swab (Copan, katalognr. 141C eller 139C) VWR Multi-Tube Vortexer (VWR katalognr ) NALGENE Cryogenic Vial Holder (VWR, katalognr ) Engångshandskar, utan talk Steril sax (valfritt) Steril gasväv Tidur eller timer BD MAX PCR Cartridges (BD katalognr ) VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSBEAKTANDEN BD MAX MRSA XT är avsedd för in vitro-diagnostik. Denna produkt kan endast användas på BD MAX-systemet. Använd inte utgångna reagenser och/eller material. Använd inte kitet om etiketten som förseglar ytterkartongen är bruten vid mottagandet. 2

3 Använd inte reagenserna om skyddspåsarna är öppna eller trasiga vid mottagandet. Använd inte reagenserna om torkmedel saknas eller är trasigt inuti reagenspåsarna. Ta inte bort torkmedlet ur reagenspåsarna. Förslut reagensskyddspåsar med blixtlåset omedelbart efter varje användning. Tryck ut överflödig luft ur påsarna innan de försluts. Skydda reagenserna mot värme och fukt. Långvarig exponering för fukt påverkar produktens prestanda. Använd inte reagenser om folien har öppnats eller skadats. Blanda inte reagenser från olika påsar och/eller kit eller loter. Alternera inte och återanvänd inte lock eftersom kontamination som kan påverka testresultaten kan uppstå. Kontrollera att de sammansatta reagensremsorna är korrekt fyllda (se till att vätskorna finns på rörens botten) (se figur 1). Undersök de sammansatta reagensremsorna för att säkerställa att alla pipettspetsar finns på plats (se figur 1). Hantera kemiska lösningar försiktigt eftersom de kan göra streckkoden på mastermix- och extraktionsrören oläslig. God laboratorieteknik är avgörande för att den här analysen ska fungera korrekt. På grund av den höga analytiska känsligheten hos detta test så bör extrem försiktighet iakttas för att bevara renheten hos alla material och reagenser. I fall där andra PCR-tester också utförs i samma generella område i laboratoriet måste försiktighet iakttas för att säkerställa att BD MAX MRSA XT-analysen, eventuella övriga reagenser som behövs för testningen och BD MAX-systemet inte kontamineras. Undvik alltid mikrobiell kontamination och kontamination med deoxyribonukleas (DNas) av reagenserna. Byt handskar innan reagenser och kassetter hanteras. Förebygg kontamination av miljön med amplikoner genom att inte bryta isär BD MAX PCR-kassetterna efter användning. Förseglingarna på BD MAX PCR-kassetterna är utformade för att förebygga kontamination. Laboratoriet ska rutinmässigt bedriva miljöövervakning för att minimera risken för korskontamination. BD MAX Microfluidic-kassetterna kan användas för högst två körningar. Om BD MAX MRSA XT-analysen görs utanför de rekommenderade tidsintervallen kan resultatet bli ogiltigt. Analyser som inte har utförts inom det specificerade tidsintervallet bör upprepas. Ytterligare kontroller kan testas i enlighet med riktlinjer eller krav i lokala, kommunala, statliga och/eller nationella bestämmelser eller från ackrediteringsorganisationer. Hantera alltid prover som om de vore smittförande och i enlighet med säkra laboratorieförfaranden, till exempel de som beskrivs i CLSI-dokument M29 6 och i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 7 Använd skyddskläder och engångshandskar vid hantering av alla reagenser. Tvätta händerna noggrant efter testets utförande. Pipettera inte med munnen. Rök inte, drick inte, tugga inte och ät inte i områden där prover eller kitreagenser hanteras. Kassera oanvända reagenser och avfall i enlighet med lokala, statliga, landstings- och/eller kommunala bestämmelser. I BD MAX-systemets användarhandbok 10 finns ytterligare varningar, försiktighetsbeaktanden och förfaranden. FÖRVARING OCH STABILITET Tagna prover ska förvaras i mellan 2 C och 25 C under transport. Skydda mot frysning eller exponering för stark värme. Prover kan förvaras vid 25 ± 2 C i högst 48 timmar eller vid 2 8 C i högst 120 timmar (5 dagar) innan de testas. Reagenserna och komponenterna i BD MAX MRSA XT-analysen är stabila vid 2 25 C fram till det angivna utgångsdatumet. Använd inte utgångna komponenter. Mastermix och extraktionsrör för BD MAX MRSA XT levereras i förslutna påsar. Skydda produkten från fukt genom att omedelbart återförsluta påsarna efter att de öppnats. Reagensrör är stabila i upp till 14 dagar vid 2 25 C efter första öppnandet och återförslutningen av påsen. Orekonstituerade extraktions- och mastermixreagensrör är stabila i upp till 5 timmar vid 2 25 C efter att de tagits ur sina skyddspåsar. BRUKSANVISNING Provtagning och -transport Använd en rekommenderad transportenhet för provtagningspinnar (se avsnittet Material som krävs men ej medföljer) och ta prover i näsan enligt institutionens och laboratoriets standardförfaranden och/eller följande: 1. Fukta provtagningspinnen/-pinnarna med två droppar (cirka 50 µl) steril fysiologisk saltlösning eller använd torr provtagningspinne. 2. För försiktigt in provtagningspinnen i patientens näsborre (pinnens spets bör föras in upp till 2,5 cm (1 tum) från näsborrens kant). 3. Rulla pinnen/pinnarna utmed slemhinnorna i näsborren 5 varv. 4. För in samma pinne/pinnar i den andra näsborren och upprepa steg 2 och Placera provtagningspinnen/-pinnarna i transportröret. 6. Sätt etikett på transportröret. 7. Transportera provtagningspinnen/-pinnarna till laboratoriet i enlighet med institutionens och laboratoriets standardförfaranden (se avsnittet Förvaring och stabilitet). 3

4 Beredning av provmaterial OBS! Ett (1) provbuffertrör, ett (1) membranlock, en (1) mastermix (C7), ett (1) extraktionsrör (B8) och en (1) sammansatt reagensremsa krävs för varje prov och varje extern kontroll som ska testas. OBS! För odling av kliniska prover innan BD MAX MRSA XT-analysen används, se avsnittet Odling av kliniska prover. 1. Ta fram det antal provbuffertrör (med genomskinligt lock) som motsvarar antalet prover och externa kontroller som ska köras. 2. Märk varje provbuffertrör med rätt patient-id och se till att streckkoderna inte skrivs eller täcks över eller görs oläsliga. 3. Ta av locket från provbuffertröret. 4. Ta ut provtagningspinnen från provtransportröret och placera provtagningspinnen i motsvarande provbuffertrör. 5. Håll provtagningspinnen i skaftet nära provbuffertrörets kant (använd steril gasväv för att minska risken för kontaminationsrisk). Lyft provtagningspinnen cirka en (1) cm från botten av provbuffertröret och böj skaftet mot rörets kant för att bryta av den. Alternativ metod: använd en steril sax för att klippa av skaftet. 6. Förslut provbuffertröret med ett membranlock. 7. Placera provbuffertröret i en NALGENE Cryogenic Vial Holder och vortexblanda vid maxhastighet i en (1) minut med Multi-Tube Vortexer (vortexblandare för flera rör). Upp till 24 prover kan bearbetas samtidigt med vortexblandaren för flera rör. Användning av BD MAX-systemet OBS! Se BD MAX-systemets användarhandbok för detaljerade användningsinstruktioner (avsnittet Användning). OBS! BD MAX MRSA XT-analysen måste utföras direkt efter vortexsteget ovan (se Provberedning, steg 7). Om omtestning krävs måste provet/proverna vortexblandas på nytt. 1. Starta BD MAX-systemet (om det inte redan är på) och logga in genom att ange <användarnamn> och <lösenord>. 2. Byt handskar innan reagenser och kassetter hanteras. 3. Ta ut önskat antal sammansatta reagensremsor ur BD MAX MRSA XT-kitet. Knacka försiktigt de sammansatta reagensremsorna mot en hård yta för att säkerställa att alla vätskor finns på rörens botten. 4. Ta ut önskat antal extraktionsrör och mastermixrör ur deras skyddspåsar. Tryck ut överflödig luft och förslut påsarna med blixtlåset. 5. För varje prov som ska testas ska en (1) sammansatt reagensremsa placeras i BD MAX-systemets ställ med början i position 1 i ställ A. 6. Kläm fast ett (1) extraktionsrör (vit folie) i varje sammansatt reagensremsa i position 1 enligt figur Kläm fast ett (1) mastermixrör (grön folie) i varje sammansatt reagensremsa i position 2 enligt figur 1. Snap-in-rör Avfallsbehållare Pipettspetsar #1 #2 #3 Lyseringsrör Extraktionsrör MRSA XT Master Mix Elueringsbuffert Tvättbuffert Neutraliseringsbuffert Figur 1: Kläm fast BD MAX MRSA XT-extraktionsrör och mastermixrören i de sammansatta reagensremsorna. 8. Klicka på ikonen Run (Kör) och ange kitets lotnummer för BD MAX MRSA XT-analysen (för lotspårning) antingen genom att skanna streckkoden eller mata in den manuellt. OBS! Upprepa steg 8 varje gång en ny kit-lot används. 9. Gå till Worklist (Arbetslistan). Använd rullgardinsmenyn och välj <BD MAX MRSA XT 54>. 10. Ange ID för provbuffertrör, patient-id och åtkomstnummer (i förekommande fall) i Worklist (Arbetslistan), antingen genom att skanna streckkoden med skannern eller genom manuell inmatning. 11. Välj lämpligt partinummer för kitet (hittas på ytterlådan) från listrutan. 12. Upprepa steg 9 till 11 för alla återstående provbuffertrör. 13. Sätt provbuffertrören i BD MAX-systemets ställ som motsvarar de sammansatta reagensremsorna som sattes samman i steg 5 till 7. OBS! Sätt provbuffertrören i provställen med 1D-streckkodsetiketterna vända utåt (det underlättar skanning av provrören vid inloggning av proverna). 4

5 14. Sätt tillämpligt antal BD MAX PCR-kassetter i BD MAX-systemet (se figur 2). Varje kassett kan användas till 2 körningar med upp till 12 prover, alltså sammanlagt 24 prover. BD MAX-systemet väljer automatiskt position och rad i PCR-kassetten för varje körning. BD MAX PCR-kassetter kan användas flera gånger tills alla banor har utnyttjats. Maximera användningen av BD MAX PCR-kassetter genom att välja Run Wizard (Körningsguide) under fliken Worklist (Arbetslista) i Sample Mode (Läge med prover) och tilldela banor. Se BD MAX-systemets användarhandbok för mer information. Figur 2: Ladda BD MAX PCR-kassetter. 15. Ladda ställ i BD MAX-systemet (se figur 3). Sida A Sida B Figur 3: Ladda ställ i BD MAX-systemet. 16. Stäng BD MAX-systemets lock och klicka på <Start> (Starta) för att påbörja bearbetningen. 17. Vid slutet av körningen ska du kontrollera resultatet direkt eller lagra provbuffertrören vid 2 8 C i upp till 5 dagar ELLER vid 25 ± 2 C i högst 48 timmar tills resultaten har kontrollerats. OBS! Om ett membranlock skadades under körningen ska det ersättas med ett nytt innan du lägger undan provet för förvaring. OBS! Beredda BD MAX MRSA XT-provbuffertrör kan förvaras vid 2 8 C i högst 120 timmar (5 dagar) ELLER vid 25 ± 2 C i högst 36 timmar efter det att provet har tillsatts till provbuffertröret. När resultatet är Indeterminate (obestämt, IND), Unresolved (olöst, UNR) eller Incomplete (ofullständigt, INC) eller när ett externt kontrollfel inträffar måste testet upprepas från det beredda provbuffertröret inom denna tidsram (se avsnittet Procedur för upprepning av test). KVALITETSKONTROLL Med procedurer för kvalitetskontroll övervakas analysens prestanda. Laboratorierna måste fastställa antal, typ och frekvens för testning av kontrollmaterial enligt riktlinjer eller krav i lokala, kommunala, statliga och/eller nationella bestämmelser eller från ackrediteringsorganisationer. För allmänna riktlinjer om kvalitetskontroll kan användaren konsultera CLSI MM3 och EP12. 8,9 1. Externa kontrollmaterial tillhandahålls inte av BD. Externa positiva och negativa kontroller används inte av BD MAX-systemets programvara för tolkning av testresultat. Externa kontroller behandlas som om de vore patientprover. (Se tabellen i avsnittet Resultattolkning för tolkning av analysresultat från externa kontroller.) 2. En (1) extern positiv kontroll och en (1) extern negativ kontroll bör köras minst dagligen tills adekvat processvalidering uppnås på BD MAX-systemet i varje laboratoriemiljö. Minskad frekvens av kontrolltestning ska göras i enlighet med tillämpliga föreskrifter. 3. Den externa positiva kontrollen används för att övervaka förekomsten av större reagensfel. Den externa negativa kontrollen är avsedd för att detektera reagens- eller miljökontamination (eller överföring) av målnukleinsyror. 5

6 4. Kontrollstammar bör testas i enlighet med riktlinjer eller krav i lokala, statliga och/eller kommunala bestämmelser eller från ackrediterade organisationer i syfte att kontrollera effektiviteten hos hela analysprocessen. 5. Olika typer av externa kontroller rekommenderas så att användaren kan välja den som är mest lämplig för kvalitetskontrollprogrammet i deras laboratorium. a. Extern negativ kontroll: Kommersiellt tillgängligt kontrollmaterial (t.ex. en Staphylococcus epidermidis-stam (ATCC 12228)) eller ett tidigare karakteriserat prov som är känt negativt. BD rekommenderar att den externa negativa kontrollen framställs före den externa positiva kontrollen för att minska risken för förorening till följd av kontrollberedningen. b. Extern positiv kontroll: Kommersiellt tillgängligt kontrollmaterial (t.ex. en MRSA-referensstam (ATCC 43300)) eller ett tidigare karakteriserat prov som är känt positivt. För framställning av externa kontrollsuspensioner rekommenderas att isolaten resuspenderas i en saltlösning till en grumlighet på 0,5 McFarland (~1 X 10 8 CFU/mL). Utför seriella spädningar med koksaltlösning för att erhålla en slutlig suspension med ~1,0 X 10 4 CFU/mL. Doppa en provpinne i den utspädda bakteriesuspensionen, pressa bort vätska och placera pinnen i motsvarande provbuffertrör. Bearbeta och testa som ett prov (se avsnitten Provberedning och Användning av BD MAX-systemet). 6. Alla externa kontroller bör ge förväntade resultat (positiva för en extern positiv kontroll eller negativa för en extern negativ kontroll) och inga misslyckade externa kontroller (olösta eller ofullständiga resultat). 7. En extern negativ kontroll som ger ett positivt testresultat är indikativt för fel på provhanteringen och/eller att en förorening har inträffat. Granska provhanteringstekniken för att undvika sammanblandning och/eller kontamination. En extern positiv kontroll som ger ett negativt resultat är indikativt för problem med provhantering/beredning. Granska provhanterings-/beredningstekniken. 8. En extern kontroll som ger ett olöst, obestämt eller ofullständigt resultat är indikativt för ett reagens- eller BD MAX-systemfel. Kontrollera om några felmeddelanden visas på BD MAX-systemets bildskärm. Se avsnittet Översikt över systemfel i BD MAXsystemets användarhandbok 10 för tolkningar av varnings- och felkoder. Om problemet kvarstår, använd reagenser från en oöppnad påse eller använd ett nytt analyskit. 9. Varje extraktionsrör innehåller en provbearbetningskontroll som är en plasmid med en syntetisk mål-dna-sekvens. Provbearbetningskontrollen övervakar effektiviteten i insamling, tvättning och eluering av DNA under provbearbetningen, samt effektiviteten i amplifiering och detektion av DNA under PCR-analysen. Om resultatet av provbearbetningskontrollen inte uppfyller kriterierna för godkännande rapporteras resultatet av provet som olöst, medan positiva (POS) analysresultat rapporteras och inga mål kommer att anges som negativa (NEG). Ett olöst resultat är indikativt för provrelaterad inhibering eller reagensfel. Upprepa ett prov som rapporteras som olöst enligt avsnittet Upprepa testförfarande. RESULTATTOLKNING Resultat finns på fliken Resultat i fönstret Resultat på BD MAX-systemets bildskärm. Testresultaten tolkas automatiskt av BD MAXsystemets programvara. Ett testresultat kan kallas MRSA NEG (negativt), MRSA POS (positivt) eller MRSA UNR (olöst) baserat på målets amplifieringsstatus och provbearbetningskontrollen. IND (obestämt) eller INC (ofullständigt) resultat beror på ett BD MAXsystemfel. Resultaten baseras på följande beslutsalgoritm: Rapporterade analysresultat MRSA POS MRSA NEG MRSA UNR IND INC Tabell 1: Tolkning av resultat från BD MAX MRSA XT-analysen a Se avsnittet Felsökning i BD MAX-systemets användarhandbok 10 för tolkningar av varnings- och felkoder. Tolkning av resultat MRSA-DNA detekterat MRSA-DNA ej detekterat Olöst inhiberande prov eller reagensfel, ingen amplifiering av mål eller provbearbetningskontroll Obestämt resultat beror på BD MAX-systemfel (med varnings- eller felkoder a ) Ofullständig körning (med varnings- eller felkoder a ) MRSA POS (MRSA-DNA detekterat) Fluorescenssignal detekteras för både MREJ (Staphylococcus aureus-specifik) och meca eller mecc-mål och Provbearbetningskontrollen ignoreras eftersom MRSA-målamplifiering åsidosätter denna kontroll. MRSA NEG (MRSA-DNA ej detekterat) Fluorescenssignal detekteras inte av BD MAX MRSA XT-analysen för något mål (meca-, mecc- och MREJ-mål) och fluorescenssignal detekteras för provbearbetningskontrollen eller Fluorescenssignal detekteras endast för meca- eller mecc-genen (meca- och mecc-generna är inte unika för Staphylococcus aureus-species och kan hittas i andra bakteriesläkten [t.ex. S.epidermidis]) eller Fluorescenssignal detekteras endast för MREJ (meca- eller mecc-genbortfall). MRSA UNR (olöst resultat) Fluorescenssignal detekteras inte för meca, mecc och MREJ-mål, och Fluorescenssignal detekteras inte för provbearbetningskontrollen (inhiberande prov eller reagensfel). 6

7 IND (obestämt resultat) BD MAX-systemfel med varnings- eller felkoder. Se avsnittet Felsökning i BD MAX-systemets användarhandbok 10 för tolkningar av varnings- och felkoder. INC (ofullständig körning) BD MAX-systemfel med varnings- eller felkoder. Se avsnittet Felsökning i BD MAX-systemets användarhandbok 10 för tolkningar av varnings- och felkoder. UPPREPA TESTFÖRFARANDE OBS! Det finns endast tillräckligt med provvolym i provbuffertröret för en upprepad körning. Provbuffertrör som förvarats i 25 ± 2 C måste testas om inom 36 timmar efter att stegen i avsnittet Provberedning ovan har utförts. Provbuffertrör som förvarats i 2 8 C måste testas om inom 120 timmar (5 dagar) efter att stegen i avsnittet Provberedning ovan har utförts. OBS! Nya prover kan testas vid samma körning som de upprepade proverna. Olöst resultat Olösta resultat kan uppstå om ett inhiberande ämne eller ett reagensfel förhindrar att målet eller provbearbetningskontrollen amplifierar korrekt. Prover kan upprepas från sina motsvarande provbuffertrör inom de tidsramar som anges ovan. Vortexblanda proverna i en (1) minut och starta om från avsnittet Användning av BD MAX-systemet. Obestämt resultat Obestämda resultat kan erhållas vid systemfel. Prover kan upprepas från sina motsvarande provbuffertrör inom de tidsramar som anges ovan. Vortexblanda proverna i en (1) minut och starta om från avsnittet Användning av BD MAX-systemet. Tolkningar av varnings- och felkodmeddelanden finns i BD MAX-systemets användarhandbok 10 (avsnittet Felsökning). Ofullständigt resultat Ofullständiga resultat kan uppstå om en avslutande varning eller felkod inträffar eller om provberedningen eller PCR inte nådde förväntade tidpunkter. Ofullständiga resultat kan gälla en körning eller en bana. Prover kan upprepas från sina motsvarande provbuffertrör inom de tidsramar som anges ovan. Vortexblanda proverna i en (1) minut och starta om från avsnittet Användning av BD MAX-systemet. Tolkningar av varnings- och felkodmeddelanden finns i BD MAX-systemets användarhandbok 10 (avsnittet Felsökning). Externt kontrollfel Externa kontroller ska ge förväntade resultat vid testning. Om prover måste upprepas på grund av ett felaktigt resultat från en extern kontroll ska de upprepas från sina provbuffertrör tillsammans med nyberedda externa kontroller inom de tidsramar som anges ovan. Vortexblanda proverna i en (1) minut och börja om enligt avsnittet Användning av BD MAX-systemet. ODLING AV KLINISKA PROVER Om antimikrobiell resistensbestämning eller epidemiologisk typning ska utföras kan kliniska prover odlas från provtagningsenheten (provtagningspinnen) innan förfarandet Provberedning utförs (med utstryksplatta) eller efter förfarandet Provberedning (med berikad buljong). Omedelbart efter att den första PCR-körningen har avslutats kan provtagningspinnarna förvaras vid 2 8 C i upp till 36 timmar i provbuffertrör före odling i enlighet med sjukhusets rutiner. PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR Denna produkt är avsedd att användas med pinnprov från näsa som insamlats med de provtagnings- och transportenheter som anges i avsnittet Material som krävs men ej medföljer. Prestanda hos BD MAX MRSA XT-analysen vid användning av transportenheter för enkla eller dubbla provtagningspinnar i flytande Amies-medium har inte fastställts. Denna produkt får endast användas med BD MAX-systemet. Felaktiga analysresultat kan uppstå till följd av felaktig provtagning, hantering eller förvaring, tekniskt fel, sammanblandning av prover eller på grund av att antalet organismer i provet är lägre än testets analytiska känslighet. Anvisningarna på bipacksedeln och i BD MAX-systemets användarhandbok 10 måste följas noga för att felaktiga resultat ska undvikas. Screening fastställer status för koloniseringen vid en viss tidpunkt. Koloniseringen kan variera beroende på patientbehandling (t.ex. avkoloniseringsregim), patientstatus (t.ex. övergående MRSA-kolonisering) eller exponering för högriskförhållanden (t.ex. kontakt med MRSA-bärare och/eller lång sjukhusvistelse). Koloniseringsstatus bör övervakas i enlighet med institutionens rutiner. Ett positivt resultat från BD MAX MRSA XT-analysen indikerar inte nödvändigtvis behandlingssvikt eftersom det fortfarande kan finnas DNA kvar. Ett negativt resultat efter ett tidigare positivt test kan tala för en lyckad behandling eller kan uppstå på grund av intermittent kolonisering. Ett positivt resultat innebär inte alltid förekomst av livsdugliga organismer. Ett positivt resultat är indikativt för förekomst av MRSA-DNA. BD MAX MRSA XT-analysen detekterar samtidigt den burna meca- eller mecc-genen i SCCmec-kassetten och en Staphylococcus aureus-specifik sekvens som finns i fogen mellan SCCmec-kassetten och orfx-genen (MREJ). BD MAX MRSA XT-analysen är utformad för att detektera MREJ-genotyperna i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv och xxi vilket utgör de flesta meca- och mecc-bärande MRSA-stammarna (som tillhör olika SCCmec-/MREJ-typer), vilket inbegriper över 98 % av de stammar runt om i världen som testats av BD hittills. BD MAX MRSA XT-analysens förmåga att detektera andra MREJgenotyper är inte känd. BD MAX MRSA XT-analysen rapporterar inte gränsfall till oxacillinresistent Staphylococcus aureus (BORSA) som MRSA (de rapporteras som NEG). Oxacillinresistensen hos BORSA-stammar beror på en ökad produktion av β-laktamaser, inte på mecaeller mecc-genen. BORSA-stammar är sällsynta. BD MAX MRSA XT-analysens förmåga att detektera modifierad Staphylococcus aureus (MOD-SA) är inte känd eftersom dessa stammar inte har utvärderats. Oxacillinresistensen hos MOD-SA-stammar beror på förändringar i affiniteten för penicillinbindande proteiner för oxacillin. MOD-SA-stammar är sällsynta. 7

8 BD MAX MRSA XT-analysen genererar ett falskt positivt MRSA-resultat när ett samkoloniserat prov från näsa som innehåller både en meticillinresistent koagulasnegativ Staphylococcus (MRCoNS) och en meticillinkänslig tomkassett -variant av SA testas. Samkolonisering med MRCoNS och en meticillinkänslig tomkassett -variant av SA är sällsynt. Som med alla PCR-baserade in vitro-diagnostiska test kan extremt låga nivåer av målet under analysens detektionsgräns detekteras utan att resultaten är reproducerbara. Tobramycin kan interferera med BD MAX MRSA XT-analysen (se avsnittet Interfererande substanser för närmare detaljer). Falska negativa resultat kan förekomma på grund av förlust av nukleinsyra till följd av otillräcklig beredning, transport eller förvaring av prover, eller på grund av otillräcklig lysering av bakteriellcellerna. Provbearbetningskontrollen har lagts till för att bidra till identifiering av prover som innehåller inhiberare av PCR-amplifiering och som en kontroll för reagensens egenskaper och analyssystemet i helhet. Provbearbetningskontrollen indikerar inte om nukleinsyran har förlorats på grund av inadekvat provtagning, transport eller förvaring av proverna, eller om bakterieceller har lyserats adekvat. I en blandad odling kan detektionen av MRSA variera när det förekommer höga koncentrationer av MRSE. Konkurrens från MRSE observerades vid ett MRSA:MRSE-förhållande på 1: I en blandad odling kan detektionen av MRSA variera när det förekommer höga koncentrationer av MSSA. Konkurrens från MSSA observerades vid ett MRSA:MSSA-förhållande på 1: Resultaten från BD MAX MRSA XT-analysen kan ibland vara olösta på grund av en ogiltig provbearbetningskontroll eller obestämda eller ofullständiga på grund av instrumentfel, och därmed kan en omtestning krävas vilket kan medföra att de slutliga resultaten fördröjs. Mutationer eller polymorfismer i primer- eller probbindande regioner kan påverka detektionen av ny eller okänd MRSA, vilket kan ge ett falskt negativt resultat med BD MAX MRSA XT-analysen. Som med alla in vitro-diagnostiska test beror positiva och negativa prediktiva värden i hög grad på prevalens. Prestanda hos BD MAX MRSA XT-analysen kan variera beroende på prevalens och den population som testas. BD MAX MRSA XT-analysen behöver använda tre (3) optiska kanaler från BD MAX-systemet: 475/520-kanalen, 585/630-kanalen och 680/715-kanalen. Prestanda hos den sista optiska kanalen har inte fastställts med denna analys. FÖRVÄNTADE VÄRDEN I den kliniska studien med BD MAX MRSA XT-analysen erhölls totalt rapporterbara resultat, från prover som var godkända på prov- och PCR-nivå, från tre olika geografiska platser och dessa jämfördes med direkt och berikad odling. Studiepopulationen delades in i grupper med inlagda patienter respektive öppenvårdspatienter. Antalet och procentandelen positiva fall, som fastställdes med BD MAX MRSA XT-analysen, presenteras i tabellen 2. Tabell 2: Sammanfattning av inlämningar till kompatibel klinisk prövning enligt patientgrupp Grupp Totalt antal prover a Antal MRSA-positiva Antal MRSA-positiva i procent Patient på sjukhus Öppenvårdspatient Totalt a a Totalt antal prover baserat på godkända PCR-resultat. KLINISKA PRESTANDA 10,2 % (172/1 681) 3,9 % (28/710) 8,4 % (200/2 391) Kliniska prestanda Kliniska prestanda för BD MAX MRSA XT-analysen fastställdes i en undersökande prospektiv multicenterstudie. Tre (3) undersökande centra deltog i studien. För att ingå i studien måste patienterna vara kvalificerade för MRSA-testning enligt institutionens rutiner. Kvalificeringskraven för screening enligt klinikens rutiner omfattade, men var inte begränsade till: patienter som skrivits in i det specifika vårdsystemet, patienter som skrivits in på intensivvårdsavdelningen, patienter som flyttats till intensivvårdsavdelningen, patienter som skulle genomgå en planerad operation och patienter som skrivits in från långtidsvårdinrättningar. Prover från patienter som tidigare deltagit i studien uteslöts. Den jämförande referensmetoden bestod av direkt odling kompletterat med berikad odling. Analysen med berikad odling slutfördes för alla prover som var negativa för MRSA vid direkt odling. Presumptiva Staphylococcus aureus-kolonier som observerats i selektivt (Staphylococcus aureus) kromogent medium genomgick fortsatt odling på blodagarplatta (BA). Identifieringen bekräftades med ett agglutinationstest, medan meticillinresistensen bekräftades med resistensbestämning med cefoxitindiskdiffusion (30 μg). Berikning i Trypticase-sojabuljong med 6,5 % NaCl (TSB 6,5 % NaCl) slutfördes i händelse av att MRSA inte kunde bekräftas med den inledande direkta odlingen. Turbid TSB 6,5 % NaCl-buljong användes för att inokulera ytterligare kromogent medium och BA-plattor. MRSA bekräftades enligt beskrivningen ovan. Resultat som erhållits med BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med referensmetoden Totalt prover ingick i studien. Av dessa ansågs 94 prover som icke godkända utifrån protokollets kriterier och sex (6) fullt godkända prover fick slutgiltiga PCR-resultat som inte var rapporterbara. Totalt provresultat användes för att fastställa kliniska prestanda hos BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med referensmetoden (tabell 3). Jämfört med referensmetoden (direkt/berikad odling) identifierade BD MAX MRSA XT-analysen 93,1 % av de MRSA-positiva proverna och 97,8 % av de MRSA-negativa proverna (tabell 4). För den testade populationen resulterade detta i ett negativt prediktivt värde (NPV) på 99,5 % och ett positivt prediktivt värde (PPV) på 75,4 %. 8

9 Tabell 3: Resultat som erhållits för MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med referensmetoden Alla platser BD MAX MRSA XT-analysen Referensmetod MRSA Positiv Negativ Totalt Positiv a 197 Negativ 11 a Totalt Sensitivitet: 93,1 % (149/160) (95 % KI: 88,1 %, 96,1 %) Specificitet: 97,8 % (2 143/2 191) (95 % KI: 97,1 %, 98,3 %) PPV: 75,4 % (95 % KI: 70,0 %, 80,5 %) NPV: 99,5 % (95 % KI: 99,1 %, 99,7 %) a Ytterligare undersökningar utfördes på prover med osamstämmiga resultat mellan referensmetoden och BD MAX MRSA XT-analysen. 11 av 48 falskt positiva BD MAX MRSA XT-prover befanns MRSA-positiva efter att referensmetoden upprepats. 5 av 11 falskt negativa BD MAX MRSA XT-prover befanns MRSA-negativa efter att referensmetoden upprepats. Tabell 4: Klinikspecifika prestandaresultat som erhållits för MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med referensmetoden Klinikplatser Prevalens a Sensitivitet (95 % KI) b Specificitet (95 % KI) b Plats 1 4,3 % (41/960) Plats 2 5,8 % (38/650) Plats 3 10,6 % (81/765) Sammanlagt 6,7 % (160/2 375 c ) a Prevalens baserat enbart på referensmetoden b Konfidensintervall c prover var godkända för referensmetoden 92,7 % (38/41) (80,6 %, 97,5 %) 86,8 % (33/38) (72,7 %, 94,2 %) 96,3 % (78/81) (89,7 %, 98,7 %) 93,1 % (149/160) (88,1 %, 96,1 %) 99,0 % (908/917) (98,1 %, 99,5 %) 98,6 % (583/591) (97,4 %, 99,3 %) 95,5 % (652/683) (93,6 %, 96,8 %) 97,8 % (2 143/2 193) (97,1 %, 98,3 %) Resultat som erhållits med BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med direkt odling Totalt prover ingick i studien. Av dessa ansågs 54 prover från näsa som icke godkända utifrån protokollets kriterier och åtta (8) fullt godkända prover fick slutgiltiga PCR-resultat som inte var rapporterbara. Totalt provresultat användes för att fastställa procentandelen positiv och negativ överensstämmelse hos BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med direkt odling (tabell 5). Jämfört med direkt odling identifierade BD MAX MRSA XT-analysen 96,5 % av de MRSA-positiva proverna och 97,2 % av de MRSA-negativa proverna (tabell 6). Tabell 5: Resultat som erhållits för MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med direkt odling Alla platser BD MAX MRSA XT-analysen Direkt odling Positiv Negativ Totalt Positiv Negativ Totalt Procentandel positiv överensstämmelse: 96,5 % (137/142) (95 % KI: 92,0 %, 98,5 %) Procentandel negativ överensstämmelse: 97,2 % (2 184/2 247) (95 % KI: 96,4 %, 97,8 %) Tabell 6: Klinikspecifika prestandaresultat som erhållits för MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen jämfört med direkt odling Klinikplatser Plats 1 Plats 2 Plats 3 Sammanlagt a Konfidensintervall Procentandel positiv överensstämmelse med 95 % KI a 100 % (35/35) (90,1 %, 100 %) 93,5 % (29/31) (79,3 %, 98,2 %) 96,1 % (73/76) (89,0 %, 98,6 %) 96,5 % (137/142) (92,0 %, 98,5 %) Procentandel negativ överensstämmelse med 95 % KI a 98,7 % (911/923) (97,7 %, 99,3 %) 98,0 % (586/598) (96,5 %, 98,8 %) 94,6 % (687/726) (92,7 %, 96,0 %) 97,2 % (2 184/2 247) (96,4 %, 97,8 %) 9

10 Av prov från näsa som var godkända på prov- och PCR-nivå och testade med BD MAX MRSA XT-analysen rapporterades 18 (0,8 %) som olösta efter den inledande testningen. Antalet olösta prov efter upprepad testning var 0,1 % (2/2 396) (se tabell 7, [ett prov testades inte om]). Tabell 7: Antal olösta prov Antal inledningsvis olösta prov 0,8 % (18/2 399) a (95 % KI: 0,5 %, 1,2 %) Antal olösta prov efter upprepad testning 0,1 % (2/2 396) (95 % KI: 0 %, 0,3 %) a Totalt antal baserat på godkända prov och resultat från BD MAX MRSA XT-analysen. Av prov från näsa som testades med BD MAX MRSA XT-analysen rapporterades inledningsvis 14 (0,6 %) som obestämda. Inga resultat förblev obestämda vid upprepad testning (två prov testades inte om). Åtta (8) (0,3 %) rapporterades inledningsvis som ofullständiga. Inga resultat förblev ofullständiga vid upprepad testning (ett prov testades inte om). Tomkassett -varianter För att ett prov ska identifieras som MRSA-positivt med BD MAX MRSA XT-analysen måste ett positivt resultat erhållas för både MREJ och meca eller mecc. Ett prov som bär på MREJ, men varken meca- eller mecc-genen är MRSA-negativt, eftersom det är meticillinkänsligt. Denna situation uppstår när meca- eller mecc-genen avlägsnas från SCCmec-kassetten, men MREJ kvarstår, vilket ger ett positivt MREJ-resultat. Provtypen kallas ibland en tomkassett -variant. Förmågan att detektera meca- och meccgenen gör att BD MAX MRSA XT-analysen kan urskilja och identifiera denna variant som MRSA-negativ på korrekt sätt. Bland de godkända proverna som ingick i den kliniska prestandabestämningen överensstämmer totalt 10 prover med tomkassett -profilen med ett positivt MREJ-resultat, utan detektion av meca- eller mecc-genen. Dessa 10 prover befanns vara sant negativa (TN) MRSA-prover i förhållande till referensmetoden. Analytisk sensitivitet Den analytiska sensitiviteten (detektionsgräns, eller LoD) för BD MAX MRSA XT-analysen bestämdes enligt följande: positiva prover bereddes genom att provtagningspinnar blötlades i en rad olika MRSA-bakteriesuspensioner som beretts och kvantifierats från odlingar. De testade stammarna inkluderade 11 MRSA-stammar som representerade 11 MREJ-genotyper (i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv och xxi) vilket motsvarade 5 SCCmec-typer (I, II, III, IV och XI). Provtagningspinnarna eluerades sedan i simulerad nasalmatris. Varje MRSA-stam testades i replikat om 24 per koncentration av 2 olika operatörer som använde 3 olika produktionsloter av BD MAX MRSA XT-analysen. Den analytiska sensitiviteten (LoD), definierad som den lägsta koncentrationen vid vilken minst 95 % av alla replikat visade positivt resultat, varierade från 71 till 454 CFU/provtagningspinne (tabell 8) för detektion av MRSA-stammar. Tabell 8: Detektionsgräns för MRSA-genotyper av BD MAX MRSA XT-analysen MRSA-stam MREJ-genotyp SCCmec-typ a LoD-koncentration (CFU/ provtagningspinne (95 % KI b )) 1 Typ i I 91 (55, 150) 2 Typ ii II 110 (68, 176) 3 Typ iii III 181 (102, 322) 4 Typ iv III 81 (48, 136) 5 Typ v IV 128 (74, 224) 6 Typ vi ND c 454 (246, 839) 7 Typ vii II 269 (134, 538) 8 Typ ix ND c 199 (111, 356) 9 Typ xiii ND c 71 (41, 121) 10 Typ xiv ND c 96 (57, 163) 11 Typ xxi d XI 108 (64, 183) a SCCmec-typen korrelerar inte med MREJ-typen eftersom dessa är två olika bestämningsmetoder. b Kl: Konfidensintervall c ND = ej fastställt d MRSA-stammar med mecc (även kallade meca LGA251 -stammar) Analytisk inklusivitet En studie av analytisk inklusivitet genomfördes med olika MRSA-stammar, under beaktande av geografiskt ursprung, MREJgenotyp (vild typ och mutant), SCCmec-typ, PGFE-typ (pulsfältsgelelektrofores), temporal olikhet och resistensmönster. Sjuttiosju (77) MRSA-stammar från 27 länder testades i denna studie, inklusive stammar från offentliga samlingar och välkarakteriserade kliniska isolat, inklusive stammar med vankomycinresistent Staphylococcus aureus (VRSA) och intermediärt vankomycinresistent Staphylococcus aureus (VISA). BD MAX MRSA XT-analysen detekterade MREJ-typerna i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv och xxi vid testning med låg bakteriell belastning (2 3 LoD). BD MAX MRSA XT-analysen detekterade MRSA SCCmec-typerna I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII och XI samt MRSA PFGE-typerna USA 100 till 800, och vid 2 3 LoD. Alla MRSA-stammar som uppvisade ytterligare resistens för vankomycin (VRSA och VISA) detekterades också. 10

11 Utvärdering av en välkarakteriserad utmaningspanel En ytterligare analytisk studie utfördes för att utvärdera analytiska prestanda hos BD MAX MRSA XT-analysen med en välkarakteriserad utmaningspanel: Sjutton (17) av 17 MRSA-stammar med höga och låga minimala inhibitoriska koncentrationer av oxacillin, inklusive PFGEtyperna USA 100 till 800, 1 000, PFGE-typen IV/IBERIAN och mecc-varianten (Staphylococcus aureus-stammen LGA251 med meca) som testades vid en koncentration på 2 3 LoD, uppvisade MRSA-positiva resultat. Fyra (4) av 4 BORSA-stammar (gränsfall av oxacillinresistent Staphylococcus aureus) som testades vid 10 6 CFU/ provtagningspinne uppvisade MRSA-negativa resultat. Fem (5) av 5 MSSA-stammar som testades vid 10 6 CFU/provtagningspinne uppvisade MRSA-negativa resultat. En (1) av 1 stam med meticillinresistent Staphylococcus epidermidis (MRSE) som testades vid 10 6 CFU/provtagningspinne uppvisade ett MRSA-negativt resultat. Analytisk specificitet BD MAX XT-analysen utfördes på prover som innehöll höga nivåer av icke-målorganismer, med BD MAX-systemet, för att påvisa analysens specificitet för detektion av MRSA. Femtiosju (57) av 57 stammar av olika species som inte var stafylokocker som testades vid koncentrationer på minst 10 6 CFU/mL (med undantag för Cryptococcus neoformans som testades vid CFU/provtagningspinne) uppvisade MRSA-negativa resultat. Fyrtiofem (45) koagulasnegativa stafylokockstammar (CoNS) och koagulaspositiva stafylokockstammar (CoPS) som utgjorde 28 species testades vid en koncentration på 0,5 McFarland med BD MAX XT-analysen. Fyrtiofem (45) av de 45 stammarna som testades uppvisade MRSA-negativa resultat. Sextiofem (65) MSSA-stammar (inklusive 15 MSSA-stammar av tomkassett -variant) som testades vid höga koncentrationer ( 10 6 CFU/provtagningspinne) uppvisade MRSA-negativa resultat. Sjutton (17) virus som utgjorde 12 olika virala species testades vid 10 5 PFU/mL (plackbildande enheter). Alla 17 virus gav MRSA-negativa resultat. Störande substanser Tjugonio (29) mikroorganismer och kemiska substanser som kan användas i näsborrarna eller påträffas i prover från näsa utvärderades med avseende på potentiell interferens med BD MAX MRSA XT-analysen (tabell 9). MRSA-negativa och MRSApositiva prover vid 2 3 LoD testades med den högsta mängden av respektive förening eller mikroorganism som sannolikt skulle påträffas vid provtagningsstället eller i provet från näsa. Resultaten visade ingen rapporterbar interferens med några mikroorganismer eller kemiska substanser med undantag för Tobramycin som uppvisade interferens med BD MAX MRSA XTanalysen vid testning med en koncentration på 4, g/provtagningspinne. Tabell 9: Endogena och exogena substanser som testades med BD MAX MRSA XT-analysen Substans Resultat a Substans Resultat Mucin, från bovina submaxillära körtlar NI Rhinocort aqua* NI Dexamethasone Sodium Phosphate Ophtalmic Solution Zicam* No-Drip Liquid Nasal NI USP, motsvarande 0,1 % dexametasonfosfat Gel* Extreme Congestion Relief NI Chloraseptic* NI Flutikasonpropionat NI Taro-Mupirocin, Mupirocin Ointment USP, 2 % NI Luffeel* NI Long Lasting Dristan* Nasal Mist NI Staphylococcus epidermidis NI Neo-Synephrine* NI Micrococcus luteus NI Equate* Nasal Spray Decongestant NI Enterococcus faecium NI Beconase AQ* NI Enterococcus faecalis NI Flunisolide Nasal Solution USP, 0,025 % NI Escherichia coli NI Nasacort* AQ NI Corynebacterium flavescens NI Nasonex* NI Moraxella catarrhalis NI Relenza* NI Staphylococcus hominis subsp hominis NI Tobramycin I Haemophilus influenzae NI Blod NI Streptococcus pneumoniae NI Flumist* a NI: Ingen rapporterbar interferens med BD MAX MRSA XT-analysen. I: Rapporterbar interferens med BD MAX MRSA XT-analysen. NI Jämförelse med mikrobiell hämmande effekt En potentiell mikrobiell hämmande effekt utvärderades med en ökande koncentration av MRSE eller MSSA vid spetsning med en låg koncentration (1 2 LoD) av MRSA. Resultaten uppvisade konkurrens från: MRSE vid ett MRSA:MRSE-förhållande på 1: MSSA vid ett MRSA:MSSA-förhållande på 1:

12 Precision Inom laboratorieprecision utvärderades för BD MAX MRSA XT-analysen på en (1) plats. Precisionspanelen bestod av 4 provkategorier nära LoD. Varje prov innehöll simulerad nasalmatris. MRSA-stammarna testades enligt följande: Måttligt positiv (MP) (MRSA MREJ-typ ii): 2 och 5 LoD Lågt positiv (LP) (MRSA MREJ-typ ii): 1 och < 2 LoD Lågt positiv (LP) (MRSA MREJ-typ vii): 1 och < 2 LoD Högt negativt (HN) (MRSA MREJ-typ ii): < 1 LoD Sant negativt (TN): Negativt prov (inget mål) Testningen utfördes dubbelt, över 12 dagar med 2 körningar per dag av 2 olika tekniker. Resultaten från precisionsstudien för prover som var TN, MP, LP och HN för MRSA uppvisade en överensstämmelse på 100 %, 97,9 %, 95,8 % respektive 64,6 %. Reproducerbarhet Reproducerbarhetsstudien utfördes med samma provkategorier som definierades ovan för precisionsstudien. Proverna i varje kategori testades tredubbelt, på 5 olika dagar, då 2 paneler testades varje dag av 2 olika tekniker vid 3 klinikplatser med 1 reagenslot (mellan platserna). En (1) av dessa kliniker deltog i en förlängd studie där 2 ytterligare reagensloter testades (mellan loter). Resultatet för respektive provkategori visas med data från bägge MRSA-stammarna som poolats. För reproducerbarhet mellan platser var den totala procentuella överensstämmelsen 100 % för TN för MRSA, 97,8 % för MP för MRSA, 96,7 % för LP för MRSA och 63,3 % för HN för MRSA (tabell 10). Kategori Tabell 10: Resultat av studie av reproducerbarhet mellan platser med en lot av BD MAX MRSA XT-analysen PLATS Plats 1 Plats 2 Plats 3 Procentuell överensstämmelse Antal Procentuell överensstämmelse Antal Procentuell överensstämmelse Sammanlagd procentuell överensstämmelse Procent KI b 95 % HN a MRSA 60,0 % 18/30 66,7 % 20/30 63,3 % 19/30 63,3 % (53,0 %, 72,6 %) b LP MRSA 95,0 % 57/60 98,3 % 59/60 96,7 % 58/60 96,7 % (92,9 %, 98,5 %) MP MRSA 100,0 % 30/30 100,0 % 30/30 93,3 % 28/30 97,8 % (92,3 %, 99,4 %) TN 100,0 % 30/30 100,0 % 30/30 100,0 % 30/30 100,0 % (95,9 %, 100,0 %) a Den procentuella överensstämmelsen korrelerar med procentandelen negativa resultat. b Konfidensintervall För reproducerbarhet mellan loter var den totala procentuella överensstämmelsen 100 % för TN för MRSA, 96,7 % för MP för MRSA, 96,1 % för LP för MRSA och 64,4 % för HN för MRSA (tabell 11). Kategori Antal Tabell 11: Resultat av reproducerbarhet mellan loter med tre loter av BD MAX MRSA XT-analysen Parti 1 Parti 2 Parti 3 Procentuell överensstämmelse Antal Procentuell överensstämmelse Antal Procentuell överensstämmelse Sammanlagd procentuell överensstämmelse Procent KI b 95 % HN a MRSA 63,3 % 19/30 66,7 % 20/30 63,3 % 19/30 64,4 % (54,2 %, 73,6 % b ) LP MRSA 96,7 % 58/60 96,7 % 58/60 95,0 % 57/60 96,1 % (92,2%, 98,1%) MP MRSA 93,3 % 28/30 100,0 % 30/30 96,7 % 29/30 96,7 % (90,7 %, 98,9 %) TN 100,0 % 30/30 100,0 % 30/30 100,0 % 30/30 100,0 % (95,9 %, 100,0 %) a Den procentuella överensstämmelsen korrelerar med procentandelen negativa resultat. b Konfidensintervall Antal 12