Screening av blodburna infektioner HIV-screening, gammal och ny metodik
Historik 1948-1954 Syfilis VDRL-test 1970-1972 Hepatit B HBsAg 1985 HIV-antikroppar 1991 Hepatit B, anti-hbc
Hepatit B Hepatitis B Diagnostic Profile Duration Incubation (4-12 weeks) Acute Infection (2 weeks 3 months) Early Recovery (3-6 months) Recovery (6-12 months) (Years) Anti-HBc Total Relative Concentration HBsAg HBeAg Symptoms Anti-HBc IgM Anti-HBs Anti-HBe Time
Historik 1991 HIV 1 och HIV 2 antikroppar 1992 Hepatit C antikroppar 1994 HTLV 1+2 antikroppar 2010 HIV antigen/antikroppstest NAT-tester?
HIV / AIDS Första fallen av AIDS beskrivs 1981. HIV-1 upptäcktes 1983-84, retrovirus HIV-2 virus upptäcktes 1986. Infekterar celler med CD4 protein, till exempel T4- lymfocyter, monocyter och makrofager. Virus integrerar sin genetiska information i värdcellen, och kan när som helst börja replikera igen
HIV / AIDS i världen 37 miljoner människor i världen lever med HIV C:a 3 miljoner dödsfall årligen Totalt har c:a 30 miljoner dött av AIDS sedan första fallet diagnosticerades 1981.
A global view of HIV infection 33 million people [30 36 million] living with HIV, 2007 2008 Report on the global AIDS epidemic
HIV / AIDS i Sverige T.o.m dec. 2008 har 7500 patienter rapporterats med HIV. C:a 2050 har insjuknat i AIDS. C:a 1930 har avlidit. C:a 5000 patienter inskrivna vid HIVkliniker. 70% av dessa behandlas med antiviral terapi. 448 nya fall 2008.
http://en.wikipedia.org/wiki/image:hiv-timecourse.png
HIV-infektion HIV RNA HIV antibodies HIV antigen 2w 4w 2-3 mon after infection (11-28d) years
HIV Diagnostik Screeningtester som bygger på EIA-teknik Upprepad positivitet Konfirmerande tester Antigentest WB-test RNA-påvisning Flera antikropps- eller kombinationstester B-prov
HIV screeningtest 1985 1988 1994 1999 1 gen 2 gen 3 gen 4 gen Helt viruslysat Indirekt rekomb ± syntetiska ag Indirekt, kompetitiv rekomb ± syntetiska ag Sandwich antikroppar + recomb ± synt ag Sandwich + indirekt IgG IgG IgM, IgG antigen, IgM, IgG
HIV screening Obligatorisk Blod och plasmagivare IVF-patienter Donatorer (organ, vävnad, modersmjölk) Övriga Gravida Inför operation STI-kliniker Ungdomsmottagningar Stickincidenter
HIV-screening i Örebro län År 2008 275 000 invånare 35 205 prover från blod- och plasma-givare 11 765 kliniska prover 13 HIV positiva individer, nyupptäckta.
HIV screening vid USÖ Fr.o.m 1999 tredje generationens EIA-test (Abbott Murex HIV 1.2.O) Fr.o.m maj 2003 Kombotest (Abbott AxSYM HIV Ag/Ak Kombo) Fr.o.m januari 2005 Kombotest (Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ak Kombo
Murex 1.2.O Tredje generationens antikroppstest Syntetisk peptid HIV-1 (O), rekombinant protein från höljet hos HIV-1 och HIV-2 samt HIV Coreprotein Serum och diluenttillsats med en pipetteringsrobot. Tillsats av reagens manuellt, tvätt med separat tvättapparat, avläsning med Multiscan spektrofotometer Hög manuell arbetsinsats Carry-over effekter vid starkt positiva prover Ingen random access
Automatiserade analyser PRISM ARCHITECT AxSYM
Abbott AxSYM HIV Ag/Ak Kombo 2002 Microparticle Enzyme Immunoassay (MEIA) Rekombinant HIV antigen (transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O och HIV-2) och HIV p24 monoklonala antikroppar. Flourescensproduktens bildningshastighet jämförs med ett fastställt cut-offvärde Första resultat efter 30 minuter, 50 test/timme.
Abbott ARCHITECT HIV Ag/ Kombo 2005 Chemiluminescent Microparticle Immunoassay (CMIA) Recombinant HIV-1 and HIV-2 antigen (transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O och HIV-2) och monoklonala antikroppar mot HIV p24 antigen. Energi frigörs som en ljusblixt, vilken mäts av instrumentets optiska system. Första resultat efter 30 minuter, 130 test/timme.
Assay Design Anti-HIV Antibody Detection Conjugate Microparticle rhiv-1 Group M Envelope Protein,(gp 41) rhiv-2 Envelope Protein, (gp36) rhiv-1 Group O Envelope Protein, (gp41) rhiv-1 Group M Envelope Protein Conjugate HIV-2 Peptide Conjugate HIV-1 Group M Peptide Conjugate rhiv-1 Group O Envelope Protein Conjugate Abbott diagnostic division
Assay Design HIV p24 Antigen Detection Microparticle Monoclonal Ab (Conformational) Conjugate Monoclonal Ab (Conformational) Sample Specimen Diluent Microparticle 18 min Incubation 4 min Wash Add 50 µl Conjugate Incubation Wash Pretrigger Trigger Report Result Abbott diagnostic division
Abbott Prism HIV Ag/Ab Kombo 2005 Chemiluminescent Immunoassay (ChLIA) Rekombinant HIV-1 and HIV-2 antigen (transmembran-protein från HIV-1 grupp M och O och HIV-2) och monoklonala antikroppar mot HIV p24 antigen. Energi frigörs som en ljusblixt, vilken mäts av instrumentets optiska system 240 test/timme
Utvärdering av analyserna Sensitivitet Utvalda konfirmerat positiva ur prod. 90 HIV-1 och ~40 HIV-2 från SMI 4 serokonversionspaneler (3 köpta 1 egen) 13 patientfall, 27 prover blev tidigare positiva Spädd p24 antigen Specificitet Jämförelser med tredjegenerationstester Murex 1.2.O (USÖ) AxSYM HIV 1/2 go (KS) PRISM HIV O Plus (KS)
Konf. positiva och p24 spädning Fourth generation assays AxSYM HIV Ag/Ab Combo ARCHITECT HIV Ag/Ab PRISM HIV Ag/Ab HIV-1 selected HIV-2 selected HIV-1 panel HIV-2 panel HIV p24 antigen pg/ml 32/32 13/13 90/90 26/27 14 32/32 16/16 90/90 36/36 18 18/18 4/4 83/83 16/16 25
Serokonversionspaneler Days since first bleed HIV antigen test HIV-1 RNA Third generation assay Fourth generation assays PRB944-1 0 1.0 7x10 3 0,41 0,55 0,38 0,21 PRB944-2 2 3.5 8x10 4 0,4 0,55 0,83 0,44 PRB944-3 7 26.7 >8x10 5 0,48 4,96 15,07 8,42 PRB944-4 9 26.3 >8x10 5 1 5,53 16,91 11,39 PRB944-5 14 22.5 6x10 5 18,56 5,25 12,8 5,85 PRB944-6 16 12.1 3x10 5 15,52 5,26 20,19 5,36 ORE001-1 0 40.3 >8x10 5 0,35 6,24 130,78 NT ORE001-2 1 NT NT 0,4 NT 153,94 NT ORE001-3 7 49.2 >8x10 5 5,19 21,16 652,57 NT ORE001-4 10 NT NT 20,01 19,41 196,68 NT ORE001-5 15 NT NT 20 8,91 297,1 NT ORE001-6 21 NT NT 15,71 7,44 211,9 NT ORE001-7 24 NT NT 16,53 9,19 168,5 NT ORE001-8 30 0,68 NT 20 9,67 122,62 NT
Diagnostisk sensitivitet 13 patienter med primär HIV-infektion (PHI) inkluderades, 27 prover. Samtliga 27 prover var positiva med kombotest, men samtidigt negativa med antikroppstest (RIBA eller WB).
Exempel PHI-patient Man, 56 år. Feber, diarré en vecka efter oskyddad sex med ny partner. Utslag tillkommer fyra dagar senare. Söker primärt på STI-mottagning, där HIV-test rutinmässigt erbjuds. Kombo test utfaller reaktivt, medan antikroppstest var negativt på detta första prov.
Diagnostisk sensitivitet, patient 2 Days since symptom debut HIV Ag/Ab Combo S/CO Axs ARC HIV p24 Ag EIA S/CO Anti-HIV EIA S/CO Anti-HIV RIBA HIV RNA 9 Pos Pos Pos Neg Neg 2.6 25 25 0.62 16 Pos Pos 8.0 38 Pos 14 Pos >9 Indet gp41 2.3x10 6 copies/ml 25 Pos Pos Pos Pos 7.2 76 25 Gp41,p24 39 285 000 copies/ml
Exempel PHI-patient Man 29 år. Feber och kroppsvärk sedan 2 veckor, varit i Kina Söker på vårdcentral en dag efter symtomdebut Kombotest utfaller positivt, antikroppstest är negativt.
Diagnostisk sensitivitet, patient 5 Days since symptom debut HIV Ag/Ab Combo S/CO Axs ARC HIV p24 Ag EIA S/CO Anti-HIV EIA S/CO Anti-HIV RIBA 1 Pos Pos Pos Neg Neg 2.63 25.32 24.7 0.62 17 Pos Pos Pos Pos Indet 8.00 37.57 14.2 >9 gp41 26 Pos Pos Pos Pos 7.17 75.69 24.6 P24, gp41
Exempel PHI patient Man, 23 år, oskyddad sexkontakt Mononukleosliknande bild, lymfopeni, leverpåverkan Axsym HIV-combo positiv ( 4,78 x cut-off), ARCHITECT HIV-combo positiv (30,79x cut-off), 6 dagar efter symtomdebut Antikroppstester negativa (SMI), t.o.m dag 10
Specificitet Jämförelse med äldre, tredje generationens EIA-analys; Murex HIV 1.2.O Proverna delades in i fyra grupper; blod- och plasmagivare, nyanmälda givare, gravida kvinnor och övriga kliniska prover. Specificitet räknades ut för varje grupp och totalt för samtliga grupper
MUREX HIV 1.2.0 Antal testade Antal reaktiva (init/upprep) Specificitet (init/upprep) Konfirmerade Plasmagivare 25 921 107 22 99,58% 99,91% 0 Blodgivare 16 845 59 14 99,65% 99,91% 0 Nyanmälda 936 11 5 98,82% 99,47% 0 givare Kliniska, exl 8 211 120 54 98,68% 99,63% 12 (10 ind.) gravida Gravida 2 770 42 17 98,48% 99,39% 0 Totalt 54 683 339 112 99,42% 99,82% 12 (10 ind.)
AxSYM HIV Antal Antal reaktiva Specificitet Konfirmerade Combo testade (init/upprep) (init/upprep) Plasmagivare 18 506 21 5 99,88% 99,97% 0 Blodgivare 10 154 16 4 99,84% 99,96% 0 Nyanmälda 798 2 2 99,75% 99,75% 0 givare Kliniska, 4 935 39 29 99,55% 99,76% 17 (12ind.) excl. gravida Gravida 1 740 12 10 99,31% 99,43% 0 Totalt 36 148 96 54 99,80% 99,91% 17 (12 ind)
Architect HIV Combo Antal testade Antal reaktiva (init/upprep) Specificitet (init/upprep) Konfirmerade Plasmagivare 22 867 35 4 99,85% 99,98% 0 Blodgivare 15 374 22 10 99,86% 99,94% 1 Nyanmälda 664 0 0 100% 100% 0 givare Kliniska 6 386 38 29 99,69% 99,83% 18 Gravida 2 561 4 2 99,84% 99,92% 0 Totalt 47 852 99 45 99,83% 99,95% 19
Specificitet 2 AxSYM HIV 1/2 g O. 45 320 kliniska prover, 38 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys. Prism HIV O Plus. 143 547 blod- och plasmagivare, 116 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys. ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo. 34 450 kliniska prover, 37 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys. Prism HIV Ag/Ab Combo. 64 453 blod- och plasmagivare, 20 ospecifikt reaktiva efter upprepad analys.
Specificitet 2 AxSYM HIV 1/2 g O NA 99,92% PRISM HIV O Plus 99,90% 99,92% ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo NA 99,89% PRISM HIV Ag/Ab Combo 99,86% 99,97%
Variationer i specificiet? Assay and Used between Number tested % false reactives reagent lot dates AxSYM HIV Initial Repeat Kombo 2003 03156LU00 (A) May 19-Jun 04 3089 0.26% 0.03% 04090LU00 (B) Jun 05-Jun 23 2834 0.42% a 0.25% b 04276LU00 (C) Jun 24-Sep 03 9091 0.25% 0.11% 07090LU00 (D) Sep 04-Sep 16 2440 0.12% 0.08% 07255LU00 (E) Sep 17-Sep 30 2637 0.08% 0.00% 08017LU00 (F) Oct 01-Oct 26 4721 0.11% 0.04% 08059LU00 (G) Oct 27-Nov 19 4735 0.21% 0.11% 08059LU01 (H) Nov 20-Dec 14 4603 0.17% 0.09% 09235LU00 (I) Dec 15-Dec 31 1926 0.10% 0.10%
Variationer i specificiet? Ingen signifikant variation månadsvis Viss batchvariation kunde påvisas Ingen carry-over effekt
Sammanfattning Alla tre fjärdegenerations HIV-testerna har hög sensitivitet. Alla tre testerna kan detektera HIV p24-antigen, ner till åtminstone 25 pg/ml Alla tre testerna har hög specificitet (99.97%, 99.98% och 99,97% blod- och plasmagivare, 99,91% resp 99,95% totalt för AxSYM och ARCHITECT). Viss batchvariation kan ses. Inga carry-over effekter observerades, Instrumenten är lätta att arbeta med, och innebär en rationell hantering av stora mängder prover.
TACK Sören Andersson, USÖ och SMI Madeleine von Sydow, KS, Solna Lena Jakobsson, Mikrobiologen USÖ Ingmarie Jonsson, Blodcentralen USÖ Monica Ulfström, KS Christina Wallberg, KS Abbott