Snabb Resistensbestämning med disk diffusion Emma Jonasson
Samtalsämnen Varför snabb resistensbestämning Snabb res. enligt EUCAST-metoden Snabb res. från Urinprover Positiva blododlingar Möjligheter och begränsningar
Introduktion till snabb resistensbestämning Ökad antibiotikaresistens Riktad istället för empirisk behandling Snabbare svar snabbare rätt behandling Patienten blir bättre snabbare
Snabb resistensbestämning enligt EUCAST-metoden Eurostarprojektet, Eurostar Rapid disk projektet har som mål att utveckla en standardiserad metod för snabb automatiserad resistensbestämning med EUCAST brytpunkts tabell.
Metod McFarland på 0,5-0,6 Kort inkubation Plattor lästa från framsidan E. coli, E. feacalis 6 timmar S. aureus, Ps. aerugionosa 8 timmar Eurostar Metod Enterococcus faecalis ATCC 29212 efter 6h inkubation. Enterococcus faecalis ATCC 29212 efter 18h inkubation.
Eurostar QC-stammar Kvalitetskontroller Kort jfm standard inkubation Målvärdena 0-8mm lägre Spridningen var ca 5mm Escherichia coli ATCC 25922 Eurostar (6h) EUCAST (18h) (n=44/48) Target Range Target Range Cefotaxime 5 22 20-24 28 25-31 Ciprofloxacin 5 27 25-29 35 30-40 Meropenem 10 25 23-27 31 28-34 Ceftazidime 10 22 20-24 26 23-29 Piperacillin/tazobactam 30-6 20 18-22 24 21-27 Trimethoprim 5 22 20-24 25 21-28 Nitrofurantoin 100 20 17-22 20 17-23 Tobramycin 10 19 17-21 22 18-26 Gentamicin 10 19 17-21 23 19-26 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Eurostar (6h) EUCAST (18h) (n=55/56) Target Range Target Range Ampicillin 2 16 14-18 18 15-21 Vancomycin 5 14 13-15 13 10-16 Gentamicin 30* 16 14-18 15 12-18 Linezolid 10 22 20-24 22 19-25 Nitrofurantoin 100 20 18-22 21 18-24 * 39/48 tested isolates
Eurostar kliniska isolat Mikrobiologiska laboratorium Hvidor, ImagA bänkmodell med manuell justering Amsterdam (AMC), Kiestra helautomatiska system Växjö, manuella avläsningar 93% av isolaten kunde läsas efter 6 el 8 timmar
Eurostar, kliniska isolat
EUROSTAR Sammanfattning Metod för snabb resistensbestämning (6 eller 8h), EUCAST disk diffusion metodik och kliniska brytpunkter. Resistens: MRSA (8h) ESBL i E.coli och K.pneumoniae (6h) Entreobacteriase: ciprofloxacin, cefotaxim, ceftazidim, meropenem och gentamicin S. aureus: cefoxitin, erytromycin och klindamycin
Långsamväxande bakterier Haemophilus influenzae 70 isolat >90% att läsa efter 8 timmar Separerar känsliga och resistenta Screening för β-laktam, 64/67 PBP-medierad resistens upptäcks
Haemophilus influenzae 8h 18h Screening för β-laktam resistens med PcG, 64/67 isolat kunde läsas av korrekt efter 8 timmar.
Långsamväxande bakterier Streptococcus pneumoniae 75 isolat 8 timmar inkubering 5/75 kunde inte läsas (8/75 för klindamycin) Separera känsliga och resistenta Nära brytpunkten
Långsamväxande bakterier Streptococcus pneumoniae 8h 18h Norfloxacin och S. pneumoniae, 8 timmars inkubation.
Direkt från urinprov 72 prover, riklig Enterobacteriaceae Inkubering 6h MH Uriselect
6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 Antal isolat Direkt från urinprover Resultat 2/3 läsbara efter 6 timmar 29 st tydligt färgomslag Mindre zoner jfm med standarsinkubation Specifika brytpunker 12 10 Enterobacteriaceae med ceftazidim 10 µg 47 kliniska isolat 8 6 4 2 S R 0 Zondiameter (mm)
Direkt från Blododlingsflaskor 3 droppar till 1,5 ml NaCl Inkubering 6h för Enterobacter och Enterokock 8h för Staphylokocker 102 isolat
49 isolat Direkt från Blododlingsflaskor gramnegativer E. coli 31 st, (K. pneumoniae 8 st, P. mirabilis 6 st, P. aeruginosa 2 st, R. ornitolytica 1 st och E. cloacae 1 st) 11 mindre fel (me)
Direkt från Blododlingsflaskor 54 isolat S. aureus 22 st, resterande KNS 15 ej läsbara efter 8 timmar (KNS) 4 st väldigt allvarliga fel (VME) 2 st allvarliga fel (ME)
Direkt från blod Sammanfattning fungerar bra för Enterobacteriasae fungerar för S. aureus men mer data skulle behövas inte användbart för KNS
6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 No of ioslates 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 No of ioslates Begränsningar Tobramycin 10 µg, 6 hours incubation E. coli, 56 clinical isolates Kortare inkubering Ser inte kolonin Kromogena plattor 20 18 16 14 12 10 8 6 R I S Färga in kolonier 4 2 Dålig separation 0 Inhibition zone diameter (mm) Tobramycin 10 µg, 8 hours incubation E. coli, 56 clinical isolates 25 Alla ab/agen komb. inte möjliga 20 15 10 R I S 5 0 Inhibition zone diamter (mm)
Möjligheter Vad kan vi göra med resultatet Resbestämning på morgonen från koloni och läsa på eftermiddagen Resbestämning från urin och blododlingar Vad vill klinikerna ha? Viktigt med ID
Sammanfattning Snabb resistensbestämning är möjligt på 6 och 8 timmar Fungerande metod på urinprover Enterobacteriaceae Fungerande metod på blododlingar Enterobacteriaceae S. aureus Vad ska vi gör med resultatet?!
Vad säger EUCAST om D-AST EUCAST rekommenderar inte DAST Ett icke standardiserat inokulat Risk för Blandkultur och ph effekter Om man gör det ska man Validera Upprepa från ren koloni Om tunn växt rapportera inte S Inget stöd för kort inkuberingstid