Axis- Shield. Anti-CCP FCCP600

Transkript

1 Axis- Shield Ati-CCP FCCP600 Edast för yrkesmässig avädig Axis-Shield Diagostics Limited The Techology Park, Dudee DD2 1XA, Storbritaie Tel: +44 (0) , Fax: +44 (0) E-post: Webb:

2 SVENSKA: AVSEDD ANVÄNDNING Testet Axis-Shield Ati-CCP är e semikvatitativ/kvalitativ ezymkopplad immuadsorberade aalys (ELISA) för detektio av IgG-klasse av autoatikroppar som är specifika för cyklisk citrullierad peptid (CCP) i humaserum (iklusive serumseparatiosrör (SST)) eller -plasma (EDTA, litiumhepari eller atriumcitrat). Detektio av atikroppar mot CCP aväds som ett hjälpmedel vid diagos av reumatoid artrit (RA) (ledgågsreumatism), och ska avädas tillsammas med aa kliisk iformatio. Nivåer av autoatikroppar utgör e parameter i e diagostisk process med flera kriterier som ibegriper både kliiska och laboratoriebaserade bedömigar. Edast för i vitro-diagostisk avädig. INLEDNING Reumatoid artrit (RA) är e valig och systemisk autoimmusjukdom som påverkar 0,5-1,0 % av de vuxa populatioe. RA karakteriseras av kroisk iflammatio av syovialmembraet vilket ka leda till progressiv leddestruktio och i måga fall leda till ivaliditet och e sämre livskvalitet. 1 Det är allmät vedertaget att tidig itervetio är ödvädig för att förhidra irreversibel ledskada och det är därför viktigt att diagostisera RA så tidigt i sjukdomsförloppet som möjligt. 2,3 Diagose av RA baseras primärt på kliiska, radiologiska och immuologiska udersökigar. Det valigaste serologiska testet är mätige av reumafaktor (RF). 4 Äve om RF-testet ger bra käslighet så är det ite specifikt för RA, eftersom de ofta förekommer hos friska idivider och patieter med adra reumatiska eller iflammatoriska sjukdomar, autoimmua sjukdomar eller kroiska ifektioer. 5 Uder flera år har det varit kät att atikroppar mot atiperiukleär faktor (APF) och kerati (AKA) är mycket specifika för RA. Det rapporterades därefter att båda dessa atikroppar reagerade med ativt filaggri och u häförs till atifilaggriatikroppar (AFA). 6,7,8 Seare bevis har påvisat att alla dessa atikroppar är riktade mot citrulliiehållade epitoper. 9 Citrulli är e icke-stadardamiosyra, eftersom de ite ikorporeras i proteier uder proteisytes. De ka emellertid geereras via posttraslatioell modifierig av argii av ezymet peptidylargiideimias (PAD). 10 År 1998 rapporterade Schellekes och kolleger att autoatikroppar som är reaktiva med lijära sytetiska peptider iehållade citrulli var mycket specifika för RA i e ELISA-baserad aalys. 11 Efterföljade studier uppvisade att cykliska variater av dessa lijära peptider, beämda cykliska citrullierade peptider (CCP), var lika specifika för RA me med högre käslighet ä lijära peptider. 12 I ett försök att vidare förbättra käslighete för CCP-testet udersöktes ett därför avsett bibliotek av citrulliiehållade peptider med RA-sera och e y uppsättig av peptider (CCP2) upptäcktes, vilka gav överlägse prestada jämfört med CCP1-testet. 13 Uder de seaste åre har måga publicerade rapporter bekräftat de diagostiserade prestada för CCP2-testet. 14 Ati-CCP-atikroppar, vilka också ofta beäms aticitrullierade protei- /peptidatikroppar (ACPA), har befuits förekomma mycket tidigt uder sjukdome, ofta uta kliiska symtom och måga rapporter påvisar att förhöjda ivåer av ati-ccp-atikroppar ka förutsäga utvecklige av erosiv sjukdom. 15,16,17,18,19,20 Dessa resultat atyder e viktig roll för cykliska citrullierade peptider vid diagos av RA i ett tidigt stadium av sjukdomsförloppet. År 2010 publicerades ACR / EULAR Rheumatoid Arthritis Classificatio Criteria och ersatte de "gamla" ACR-kriteriera frå 1987 som allmät asågs vara olämpliga för tidig diagos av RA. De reviderade klassificerigskriteriera, som äve publicerades av America College of Rheumatology (ACR) och Europea League Agaist Rheumatism (EULAR), rekommederade ett poägräkigssystem på mella 0 och 10. De ya klassificerigskriteriera ska tillämpas för varje idivid som uppvisar defiitiv syovit (odifferetierad iflammatorisk artrit). De fyra ytterligare kriteriera var atalet påverkade leder, serologisk abormitet, svar i akutfas och varaktighet för symtom i de påverkade ledera. I de serologiska kriteriera ikluderades för första gåge mätig av ACPA, t.ex. ati-ccp, och viss defiitio av ett lågt positivt och högt positivt serologiskt resultat. 21 Axis-Shield Ati-CCP-aalyse är ELISA baserad på detektio av autoatikroppar i humaserum eller -plasma mot e sytetisk cyklisk peptid iehållade modifierade argii-eheter (CCP2-peptider). Testet tillhadahåller ett ytterligare verktyg vid diagos av patieter med RA. ANALYSPRINCIP Bruara på mikrotiterremsa är belagda med e högt read sytetisk cyklisk citrullierad peptid iehållade modifierade argii-eheter. Uder de första ikubatioe bider specifika autoatikroppar i spätt serum eller spädd plasma till de atigebelagda yta. Bruara tvättas seda för att avlägsa obuda kompoeter. Uder de adra ikubatioe bider kojugatet, e ezymmärkt polykloal atikropp till huma-igg, till evetuella autoatikroppar buda till yta. Efter ytterligare tvättig spåras specifika autoatikroppar geom ikubatio med substratet. Tillsats av stopplösig avbryter reaktioe, vilket resulterar i e färgad slutprodukt och mägde budet kojugat mäts i absorbaseheter. I det kvalitativa protokollet jämförs mägde kojugat som är budet till provet med de mägd kojugat som är budet till refereskotrolle. I det semikvatitativa protokollet ka kocetratioe av ati-ccpautoatikropp uppskattas geom iterpolerig frå e dos-resposkurva baserad på kalibratorer

3 KOMPONENTER I SATSEN 1 15,0 ml Pepparrotsperoxidas-märkt polykloal getatikropp mot huma-igg, 0,1 % (viktprocet) p- hydroxyfeylättiksyra, 0,15 % (viktprocet) Procli och 1 % proteistabiliserade medel (bovit) (viktprocet) i e HEPES-buffert Bruksfärdigt. OBS! VARNING 1 15,0 ml 3,3',5,5'-tetrametylbesidi, buffertlösig Bruksfärdig. Expoera ite för ljus vid förvarig. OBS! VARNING 1 15,0 ml 3 25,0 ml Mikrotiterremsa (avbrytbar) med 8 x 12 bruar 1 25,0 ml Svavelsyra 0,25 mol/l, vattehaltig lösig Bruksfärdig. OBS! FARA Fosfatbuffrad koksaltlösig, 1,3 % (volymprocet) Twee 20 Späd före avädig. Belagd med sytetisk cyklisk citrullierad peptid, i e återförslutigsbar folieförpackig med torkmedel Fosfatbuffert, proteistabiliserade medel (bovit), 0,5 % (viktprocet) atriumazid Späd före avädig. OBS! FARA 1 1,0 ml 5 x 1,0 ml 1 1,5 ml Fosfatbuffert, proteistabiliserade medel (bovit), <0,1 % (viktprocet) atriumazid 0 E/mL Bruksfärdig. Humaplasma, fosfatbuffert, proteistabiliserade medel (bovit), <0,1 % (viktprocet) atriumazid 2, 8, 30, 100, 300 E/mL Bruksfärdig. Humaplasma, buffert, <0,1 % (viktprocet) atriumazid Bruksfärdig. 1 0,3 ml 1 x 0,3 ml Humaplasma, <0,1 % (viktprocet) atriumazid Späd 1:100 med spätt provspädigsmedel före avädig precis som för prover

4 FÖRVARING AV REAGENSER Hållbarhet för öppe reagessats E reagessats öppades och återavädes uder tre tillfälle uder e period på tre måader uta ågra egativa effekter på prestada för reagessatse. Efter avädig ska kompoetera förvaras vid 2 8 C. Amärkigar om haterig och procedur 1. Förvara kompoetera i satse vid 2 8 C och aväd dem före utgågsdatumet som är agivet på förpackigara. Aväd ite utgåga reageser. 2. Blada ite reageser frå olika partier. 3. Frys ite ed satsera. 4. Tvättbuffertkocetrat, provspädigsmedelskocetrat, positiv och egativ kotroll måste spädas före avädig. Alla adra reageser är bruksfärdiga. 5. Säkerställ att det ite sker ågo mikrobiell kotamiatio av de spädda tvättbufferte och det spädda provspädigsmedlet och förvara dessa reageser vid 2 8 C mella testera. 6. Förvara överbliva (oaväda) mikrotiterremsor i folieförpackige med torkmedel mella tester. Säkerställ att förseglige är hel och förvara vid 2 8 C mella avädigar. 7. Expoera ite substratet för ljus vid förvarig. 8. Udvik kotamiatio av reageser. Aväd e y pipettspets för egågsbruk för varje reages eller prov. Tecke på försämrig Färge på substratet ska vara färglös till mycket svagt blå. Grumlighet eller fälligar i e kompoet påvisar försämrig och kompoete ska kasseras. Om kristaller sys i tvättbufferte eller provspädigsmedlet vid framtagig frå kall förvarig ska du väda reagesera upp och ed för att lösa upp kristallera och låt reagesera ata rumstemperatur. Provtagig och -förvarig Aalyse rekommederas för prover av humaserum (iklusive serumseparatiosrör (SST)) eller -plasma (EDTA, litiumhepari eller atriumcitrat). Adra rörtyper har ite testats för avädig i aalyse. Aväd ite kraftigt hemolyserade eller grumliga prover. Blada upptiade prover ordetligt före aalyse och udvik upprepad edfrysig/upptiig. Värmeiaktivera ite provera, eftersom det ka leda till falskt positiva resultat. Följ provrörstillverkares avisigar för aalysförberedig. Prover ka förvaras ospädda vid 2 8 C i fyra veckor. För lägre förvarig ska de förvaras vid 20 C eller lägre. Prover spädda 1:100 i spätt provspädigsmedel måste avädas iom 24 timmar efter spädig. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Edast för i vitro-diagostisk avädig. Säkerhetsåtgärder 1. Följ oggrat avisigara i dea bruksavisig, särskilt beträffade haterigs- och förvarigsförhållade. 2. Kalibratorer och kotroller iehåller humaplasma som testats med FDA-godkäda aalyser för HBsAg, HIV-1 RNA eller HIV-1 Ag, ati-hiv-1/hiv-2 och ati-hcv eller HCV RNA och befuits vara ickereaktiva/egativa. Eftersom iga käda tester helt ka garatera att smittäme ite förekommer ska kalibratorer och kotroller ases vara potetiellt smittsamma och hateras med samma försiktighetsåtgärder som för vilket aat potetiellt biofarligt material som helst. Godkäda riktlijer frå Cliical ad Laboratory Stadards Istitute (CLSI) "Protectio of Laboratory Workers from Occupatioally Acquired Ifectios" (M29-A3 tredje upplaga) 22 beskriver hur dessa material ska hateras i elighet med god laboratoriesed. 3. Pipettera ite med mue. 4. Rök, ät, drick ite eller aväd ite kosmetika i område där reagessatser och prover hateras. 5. Hudbesvär, skärsår, skrubbsår eller adra hudskador ska skyddas på ett lämpligt sätt. 6. Kalibratorer, kotroller och provspädigsmedelskocetrat iehåller atriumazid som ka reagera med bly- eller kopparrörledigar och bilda högexplosiva metallazider. Spola med mycket vatte vid kasserig för att förhidra asamlig av metallazider. 7. Materialsäkerhetsdatablad för alla farliga kompoeter i dea sats fis tillgägliga på begära frå Axis-Shield Diagostics Observera: Eligt federal lag får dea ehet edast säljas av läkare eller på uppdrag av e läkare

5 Kojugat Substrat Fara Provspädigsmedel Fara Stopplösig H317 Förebyggade P272 - P2 - P363 - H302 H312 H315 H319 H332 H335 Förebyggade P260 P2 Respos P P P H302 H318 H412 EUH032 Förebyggade P264 P2 Respos P P P330 H314 Förebyggade P260 P273 P2 Respos P P P P Ka orsaka allergisk hudreaktio. Nedstäkta arbetskläder får ite avlägsas frå arbetsplatse. Aväd skyddshadskar/skyddskläder/ögoskydd/asiktsskydd. Nedstäkta kläder ska tvättas ia de aväds ige. Skadligt vid förtärig. Skadligt vid hudkotakt. Irriterar hude. Orsakar allvarlig ögoirritatio. Skadligt vid iadig. Ka orsaka irritatio i luftvägara. Iadas/itedam/ rö Kotakta geastk/gaser/dimma /ågor/sprej. Aväd skyddshadskar/skyddskläder/ögoskydd/asiktsskydd. VID FÖRTÄRING: Kotakta geast GIFTINFORMATIONSCENTRAL eller läkare. VID INANDNING: Flytta persoe till frisk luft och se till att ha eller ho vilar i e ställig som uderlättar adige. VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatte i flera miuter. Ta ur evetuella kotaktliser om det går lätt. Fortsätt att skölja Skadligt vid förtärig. Orsakar allvarliga ögoskador. Skadliga lågtidseffekter för vattelevade orgaismer. Utvecklar mycket giftig gas vid kotakt med syra. Tvätta häder grudligt efter av ädig. Aväd skyddshadskar/skyddskläder/ögoskydd/asiktsskydd. VID FÖRTÄRING: Kotakta geast GIFTINFORMATIONSCENTRAL eller läkare. VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatte i flera miuter. Ta ur evetuella kotaktliser om det går lätt. Fortsätt att skölja Skölj mue. Orsakar allvarliga frätskador på hud och ögo. Iadas/itedam/ rö Kotakta geastk/gaser/dimma /ågor/sprej. Udvik utsläpp till miljö. Aväd skyddshadskar/skyddskläder/ögoskydd/asiktsskydd. VID FÖRTÄRING: Skölj mue. Framkalla INTE kräkig. VID HUDKONTAKT (äve håret): Ta omedelbart av alla edstäkta kläder. Skölj hude med vatte/duscha. VID INANDNING: Flytta persoe till frisk luft och se till att ha eller ho vilar i e ställig som uderlättar adige. VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatte i flera miuter. Ta ur evetuella kotaktliser om det går lätt. Fortsätt att skölja

6 FÖRBEREDNING Material/utrustig som krävs me som ite medföljer 1. Avläsare för platta/remsa med 96 bruar med 450 m filter. 2. Precisiospipetter för att dispesera 10 µl, 100 µl, 1 ml. Automatisk pipett för att dispesera 100 µl. Automatisk pipett för att dispesera 300 µl för mauell tvättig, automatisk plattvättare är valfri. 3. Mätglas av glas/plast: ml, ml. 4. Provrör på 1 ml. 5. Destillerat/avjoiserat vatte. 6. Pappershaddukar. 7. Tidtagare för 30 och 60 miuters itervall. Aalysförberedig Låt alla kompoeter i satse, iklusive mikrotiterremsora, värmas upp till C uder miuter före avädig. Blada reagesera geom att väda dem försiktigt upp och ed. Späd ite refereskotrolle. Späd följade reageser och blada ordetligt. Reages Volym Tillsätt Tvättbuffertkocetrat 1 flaska 225 ml destillerat/avjoiserat vatte Provspädigsmedelskocetrat 1 flaska 100 ml destillerat/avjoiserat vatte Positiv och egativ kotroll/prover 10 µl 1 ml spätt provspädigsmedel Beräka atalet mikrotiterremsor som krävs för aalyse och placera dem i hållare för mikrotiterremsor. Lägg tillbaka oaväda remsor i de återförslutigsbara folieförpackige med torkmedel och förvara vid 2 8 C tills de ska avädas. Säkerställ att alla remsor är säkert placerade iom hållare för mikrotiterremsor. Avädare ka umrera varje remsa lägs de övre kate för att uderlätta idetifierig. Behåll hållare för mikrotiterremsor för seare avädig. ANALYSPROTOKOLL Kvalitativt protokoll: aalysrefereskotroll, positiv och egativ kotroll samt prover. Semikvatitativt protokoll: aalyskalibratorer (1 6), positiv och egativ kotroll samt prover. 1. Referesbruar för idetifierig. 2. Pipettera 100 µl refereskotroll/kalibratorer och förspädda (1:100) positiva och egativa kotroller i duplikat i lämpliga bruar. Pipettera 100 µl förspädda (1:100) patietprover atige ekelt eller i duplikat i lämpliga bruar. Det rekommederas att prover aalyseras i duplikat me det är valfritt eligt lokala laboratoriebestämmelser. Detta steg får ite överskrida 10 miuter för ågo uppsättig av kalibratorer/kotroller/prover. 3. Ikubera 60 ± 10 miuter vid C. 4. Dekatera iehållet på remsa geom att sabbt väda de upp och ed över e vask som är lämplig för kasserig av biologiska material och täk på de potetiella smittoriske frå provera. Torka av dekaterade remsor med pappershaddukar. 5. Tvätta bruara fyra gåger med mist 300 µl spädd tvättbuffert. Dekatera och torka av efter varje tvättsteg. 6. Tillsätt 100 µl kojugat till varje bru. 7. Ikubera 30 ± 5 miuter vid C. 8. Upprepa steg 4 och Tillsätt 100 µl substrat till varje bru. 10. Ikubera 30 ± 5 miuter vid C. Dekatera ite. 11. Tillsätt 100 µl stopplösig till varje bru i samma ordig och hastighet som för tillsatse av substrat. Kacka försiktigt på bruara för att blada om och säkerställ att det ite fis ågra syliga bubblor. 12. Avläs remsora vid 450 m. 13. Avläs aalyse iom 60 miuter efter slutförade av testet

7 BERÄKNING OCH TOLKNING AV RESULTAT Beakta varje aalys separat vid beräkig och tolkig av resultat. Kvalitativt protokoll Beräka kvote mella medelvärdet av absorbasvärde (optisk desitet) för de positiva kotrolle, de egativa kotrolle, för varje (medelvärde) prov och medelvärdet av refereskotrolles absorbasvärde: Absorbaskvot = Absorbaskvot = Absorbasvärde för kotroll, medelvärde Absorbasvärde för refereskotroll, medelvärde Absorbasvärde för prov, medelvärde Absorbasvärde för refereskotroll, medelvärde Avädare ska beräka ett gräsvärde ("cutoff") mella positiva och egativa prover som är specifikt för tillämpliga patietpopulatioer. Resultat frå patietpopulatioera som avädes i Axis-Shields kliiska prövig atyder följade gräsvärde: Absorbaskvot Tolkig av resultat < 0,95 Negativ 0,95 till 1,0 Gräs rekommedatio för upprepad testig > 1,0 Positiv Semikvatitativt protokoll Rita e kurva med medelabsorbasvärdet för varje kalibrator mot log10 för kalibratorkocetratio (se följade tabell) på lämpligt grafpapper. Medelvärdeskocetratioer av positiva och egativa kotroller och prover (medelvärde) ka seda avläsas frå kalibrerigskurva. E typisk kalibrerigskurva visas eda som referes me de får ite avädas vid tolkig av resultat. Kurvapassigar som 4-parameters logistisk (4PL) apassig och kubisk "splie" är tillfredsställade. Adra kurvapassigsmodeller rekommederas ite. Prov med absorbasvärde över kalibrator 6 (300 E/mL) ligger utaför aalyses itervall och bör rapporteras som > 300 E/mL, spätt och omaalyserat, korrigerat för de ytterligare spädigsfaktor. För tolkig av semikvatitativa resultat och baserat på populatiosdata frå Axis-Shield referespopulatio* föreslås följade: Provresultat, (medelvärde) Tolkig av resultat 5 E/mL Negativ > 5 E/mL Positivt *Detta är bara e riktlije. Avädare bör fastställa ett referesitervalll, som ka vara uikt för populatioe. OBS! Precis som i vilke aalys som helst som mäter atikroppar bestämmer dea aalys aktivitete, sarare ä kocetratioe, av atikroppe som förekommer i provet. Aktivitet ka påverkas av ett atal parametrar, t.ex. atikroppsaviditet. Kalibratorkocetratioer Kalibratorum Kocetratio mer E/mL Typisk kalibrerigskurva - 7 -

8 KVALITETSKONTROLL Säkerställ att tillräckligt uderhåll och kalibrerig utförs för plattavläsare eligt tillverkares avisigar och att korrekt våglägd aväds. Avädare bör säkerställa att de är fullstädigt bekata med avisigara för aalyse, särskilt avsittet om varigar och försiktighetsåtgärder samt amärkigar om haterig och avädig. Avädare ska visa att de ka erhålla prestadaspecifikatioer för precisio och rapporterbart itervall för testresultat jämfört med de som fastställts av tillverkare ia de rapporterar patiettestresultat. Det rekommederas att de förspädda positiva och egativa kotrolle körs dubbelt i alla aalyser för att övervaka kvalitete av testprocedure. Kör de bruksfärdiga refereskotrolle dubbelt i alla kvalitativa aalyser. Om ågo kotroll ite överesstämmer med kotrollkvotspecifikatioera eda, förutsatt att precisiosspecifikatioera som beskrivs av tillverkare följs, ska aalyse ases vara ogiltig och patietresultat ska ite rapporteras. Avädare ka upprepa aalyse efter att ha graskat procedure eller kotakta leveratöre/tillverkare. Bered e färsk spädig av varje kotroll och prov vid upprepig av aalyse. Laboratorier ka vilja ikludera itera kotroller i varje aalyskörig. Förvara kotrollmaterial vid högst -20 o C och udvik upprepad edfrysig och upptiig. Koserverigsmedel som atriumazid vid 0,1 % (vikt/volym) påverkar ite provresultat. Nivåer av aalyter som idetifierats vid särskilda sjukdomar är de som fastställts av tillverkare för specifika populatioer och avspeglar kaske ite iformatio i refereslitterature. Icidesivåer och deras relatio till specifika sjukdomar, referesitervall och lämpliga gräsvärde ska alla beräkas för de specifika populatioera som är tillämpliga för avädare. Kotrollkvotspecifikatioer Protokoll Kvalitativt (kvoter) Semikvatitativt Specifikatioer Absorbasvärde för positiv kotroll > 1,1 Absorbasvärde för refereskotroll Absorbasvärde för egativ kotroll < 0,95 Absorbasvärde för refereskotroll Se flasketikett för positiv kotroll för godkät förvätat itervall (E/mL) Kocetratio av egativ kotroll < 2 E/mL FÖRVÄNTADE VÄRDEN 200 serumprover frå asymtomatiska sybart friska givare i åldersitervallet år, beståede av ett ugefärligt lika atal mä [ = 105] och kvior [ = 95], testades med e Axis-Shield Ati-CCP-aalys (FCCP200). Iga skillader som ases bero på kö och ålder påvisades (beräkat med jämförelse av åldersitervall på 40 år [ = 115] och >40 år [ = 85]). De totala ati-ccp-medelkocetratioe för dea populatio var 0,63 ± 0,419 E/mL (itervall 0,05 3,8 E/mL). Utgåede frå data för dea referespopulatio och data för e kliisk populatio är aalyses föreslaga gräsvärde: Referesitervall 5 E/mL = egativt > 5 E/mL = positivt Detta referesitervall föreslås edast som e riktlije och varje laboratorium bör fastställa ett referesitervall som ka vara uikt för populatioe i fråga beroede på geografiskt läge, patiet, diet, miljöfaktorer eller kliisk praxis. Observera att reumatoid artrit är dubbelt så valigt hos kvior som hos mä. PRESTANDADATA Spädigslijäritet Axis-Shield Ati-CCP-aalyse är utformad för att vara lijär över mätitervallet frå detektiosgräse (LOD) till 300 E/mL. Baserat på e studie utförd eligt CLSI-dokumet EP6-A 23 uppvisade Axis-Shield Ati-CCP-aalyse lijäritet frå 1,04 E/mL till 300 E/mL.* * Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera. Prover > 300 E/mL uppvisar medelutbyte på 100 % + 15 %* av förvätat resultat vid spädig till aalysitervallet och avädig av korrekt spädigsfaktor. * Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera

9 Kliisk käslighet och specificitet De kliiska käslighete för Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP600) fastställdes för 229 bekräftade RA-idivider och kliisk specificitet fastställdes för 285 icke-ra-prover (135 frå patieter med adra reumatiska och icke-reumatiska sjukdomar och 150 frå asymtomatiska sybart friska idivider). Med ett gräsvärde på 5,0 E/mL beräkades käslighete vara 78 % med e specificitet på 99 %. Resultate sammafattas i följade tabeller.* Provkategori Totalt Positivt % käslighet RA Totalt Positivt Provkategori % specificitet Icke-RA-prover, totalt ,6 Icke-RA, friska asymtomatiska ,3 Icke-RA-sjukdomsprover ,8 + Kliisk specificitet för 135 prov frå patieter med adra reumatiska och icke-reumatiska sjukdomar kategoriseras i edaståede tabell.* Prover, icke-reumatiska sjukdomar Totalt Positivt Kliisk specificitet Totalt ,8% Iflammatorisk polyartrit ,6 % EBV IgG-positiv ,4 % Hashimotos thyreoidit % Sjögres sydrom ,8 % Systemisk lupus erythmatosus % Vaskulit % Sklerodermi % Osteoartrit % Crohs sjukdom % Rayauds feome % Ulcerös kolit % Psoriasisartrit % Reaktiv artrit % Akyloserade spodylit och polymyosit % *Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera. Metodjämförelse Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP600) är utformad för att ha e samstämmighet på > 99 % för RA- och icke-raprover vid jämförelse med e jämförade Axis-Shield Ati-CCP-aalys (FCCP200). RA- och icke-ra-prover som beskrivs i avsittet om kliisk käslighet och specificitet avädes för att jämföra Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP600) med Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP200). Gräsvärdet för Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP200) var 5,0 E/mL, eligt tillverkares bipacksedel. Med ett gräsvärde på 5,0 E/mL för Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP600) beräkades samstämmighete vara 99 %. Resultate sammafattas i följade tabeller.* FCCP200 Alla prover (514) Positivt Negativt Positivt FCCP600 Negativt

10 Jämförelsemetod FCCP600 kotra FCCP200 Atal prover 65 Regressioslijes lutig 0,910 Y-skärigspukt 1,226 Korrelatioskoefficiet 0,94 *Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera. E ROC-aalys (Receiver Operator Characteristic) utfördes med avädig av ovaståede data för de två aalysera. Area uder kurva för Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP600) var 0,910 (95 % kofidesitervall: 0,881 0,940) och 0,903 (95 % kofidesitervall: 0,871 0,934) för de jämförade Axis-Shield Ati-CCP-aalyse (FCCP200), vilket ager att de båda aalysera är jämförbara med avseede på kliisk differetierig. ROC-aalyskurva visas eda.* Sesitivity (true positives) Specificity (false positives) No discrimiatio FCCP200 FCCP600 *Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera. Precisio E studie utfördes eligt CLSI (tidigare NCCLS)-dokumet EP5-A2. 24 Två ati-ccp-kotroller, sex QC-paelmedlemmar och ett humaserumprov aalyserades med avädig av två reagespartier, i replikat på två, vid två olika tidpukter per dag i 20 dagar ( = ). Data frå dea studie sammafattas i följade tabell som represetativa data (avrudade till 1 decimal): Prov Positiv kotroll QC 1 QC 2 QC 3 QC 4 QC 5 QC 6 Refereskotroll Prov 1 Iom körigar Mella körigar Sats- Medelvärde Mella dagar Totalt Parti (E/mL) SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV 20,30 1,05 5,2 1,24 6,1 0,00 0,0 1,63 8, ,62 0,43 2,1 1,20 5,8 0,00 0,0 1,27 6,2 3,72 0,33 8,8 0,17 4,5 0,13 3,6 0,39 10, ,92 0,23 5,8 0,35 8,9 0,04 1,1 0,42 10,7 8,17 0,34 4,2 0,72 8,8 0,00 0,0 0, 9, ,47 0,30 3,6 0,70 8,3 0,25 2,9 0, 9,5 15,30 0,37 2,4 0,93 6,0 0,30 1,9 1,04 6, ,98 0,36 2,2 0,92 5,8 0,00 0,0 0,99 6,2 53,55 2,30 4,3 3,19 6,0 1,71 3,2 4,29 8, ,49 2,36 4,2 3,35 6,0 0,00 0,0 4,09 7,4 94,26 3,17 3,4 7,31 7,8 2,01 2,1 8,22 8, ,15 2,61 2,7 5,56 5,7 4,79 4,9 7,79 8,0 134,77 4,58 3,4 5,84 4,3 5,74 4,3 9,38 7, ,41 5,69 4,0 9,02 6,3 0,00 0,0 10,67 7,5 5,18 0,34 6,6 0,24 4,6 0,21 4,0 0,46 9, ,09 0,26 5,1 0,21 4,1 0,21 4,2 0,39 7,7 4,83 0,16 3,3 0,38 7,9 0,24 5,0 0,48 9, ,77 0,20 4,1 0,37 7,8 0,25 5,2 0,49 10,2 * Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera

11 Detektiosgräs Detektiosgräs (LOD) för Axis-Shield Ati-CCP-aalyse eligt CLSI (tidigare NCCLS)-dokumetEP17-A 25 befas vara 1,04 E/mL*. Bestämigar av detektiosgräs utfördes med avädig av ett egativt ati-ccp-prov (60 replikat) och sex ati-ccpprover på låg ivå (15 replikat vardera). *Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera. Hook-effekt Hook-effekt är ett feome då prover på mycket hög ivå ka avläsas iom aalyses dyamiska itervall. För Axis- Shield Ati-CCP-aalyse uppvisades ige Hook-effekt är ett prov iehållade cirka E/mL av ati-ccpatikropp aalyserades.* *Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera. Iterferes Axis-Shield Ati-CCP-aalyse är utformad för att ha e maximal avvikelse i ati-ccp-kocetratio frå följade potetiellt iterfererade äme iom: + 15 % för ati-ccp-kocetratioer > 10,0 E/mL + 10 % för ati-ccp-kocetratioer > 4,0 E/mL till < 10,0 E/mL <0,75 E/mL för ati-ccp-kocetratioer < 4,0 E/mL E studie utfördes baserad på riktlijer i CLSI-dokumetEP7-A2 26 för Axis-Shield Ati-CCP-aalyse. Sex prover med ati-ccp-ivåer över aalysitervallet tillsattes de potetiellt iterfererade ämea som ages i tabelle eda. De maximala avvikelse av ati-ccp-kocetratio som observerades i prover uder dessa studier var: -9,4 % till 3,3 % för ati-ccp-kocetratioer > 10,0 E/mL -7,3 % till 4,8 % för ati-ccp-kocetratioer > 4,0 E/mL till < 10,0 E/mL -0,6 E/mL till 0,05 E/mL för ati-ccp-kocetratioer < 4,0 E/mL* Potetiellt iterfererade äme Hemoglobi Bilirubi Triglycerid (Itralipid-lösig) Reumafaktor Totalprotei (gammaglobulier) Ige iterferes upp till följade kocetratio 4 mg/ml 0,2 mg/ml 15 mg/ml 200 IE/mL 120 mg/ml *Represetativa data, resultat för eskilda laboratorier ka variera. ANVÄNDNINGSBEGRÄNSNINGAR 1. Äve om förekomste av atikroppar mot CCP förkippas med reumatoid artrit är ett positivt resultat ite diagostiskt i sig själv, uta data måste beaktas utifrå adra kliiska resultat och laboratorieresultat. 2. Vissa idivider ka ha höga ivåer av ati-ccp-atikroppar med få eller iga tecke på kliisk sjukdom. Omvät ka vissa patieter med aktiv sjukdom ha odetekterbara ivåer av dessa atikroppar. De kliiska betydelse av dea iformatio är okäd för ärvarade. 3. Som ett resultat av att e ati-ccp-aalys ite är diagostiskt bevis på förekomst eller fråvaro av kliisk sjukdom ska e behadlig ite påbörjas baserat på edast ett positivt ati-ccp-resultat. 4. Påbörja eller ädrig av e behadlig ska ite baseras på ädrigar av kocetratioe av ati-ccpautoatikropp uta sarare på kliisk observatio. 5. De kliiska effekte av övervakig av CCP-autoatikroppsivåer som e idikatio på progressio/remissio av reumatoid artrit har ite defiierats. 6. Värdet av ati-ccp vid juveil artrit har ite fastställts. 7. På grud av specifika egeskaper av atige-/atikroppsiteraktioer är det ite atikroppes kocetratio som bestäms, uta sarare aktivitete. Eftersom patietsera iehåller heterogea atikroppspopulatioer ka vissa prover uppvisa icke-lijäritet, särskilt vid mycket höga provspädigar

12 REFERENSER 1. Feldma M, Brea FM, Maii RN. Rheumatoid Arthritis. Cell 1996;85: Ladewé RB. The beefits of early treatmet i rheumatoid arthritis: cofoudig by idicatio, ad the issue of timig. Arthritis Rheum 2003;48(1): Lard LR, Visser H, Speyer I, et al. Early versus delayed treatmet i patiets with recet-oset rheumatoid arthritis: compariso of two cohorts who received differet treatmet strategies. Am J Med 2;111: Arett FC, Edworthy SM, Bloch DA, et al. The America Rheumatism Associatio 1987 revised criteria for the classificatio of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 1988;31(3): va Verooij WJ, Hazes JM, Visser H. Aticitrulliated protei/peptide atibody ad its role i the diagosis ad progosis of early rheumatoid arthritis. Neth J Med 2002;60(10): Niehuis RL, Madema E, Smids C. A ew serum factor i patiets with rheumatoid arthritis. The atiperiuclear factor. A Rheum Dis 1964;23: Youg BJ, Mallya RK, Leslie RD, et al. Ati-kerati atibodies i rheumatoid arthritis. Br Med J 1979;2: Hoet RM, Boerbooms AM, Areds M, et al. Atiperiuclear factor, a marker autoatibody for rheumatoid arthritis: colocalisatio of the periuclear factor ad profilaggri. A Rheum Dis 1991;50: Sebbag M, Simo M, Vicet C, et al. The atiperiuclear factor ad the so-called atikerati atibodies are the same rheumatoid arthritis-specific autoatibodies. J Cli Ivest 1995;95: Vosseaar ER, Zedma AJ, va Verooij WJ, et al. PAD, a growig family of citrulliatig ezymes: gees, features ad ivolvemet i disease. BioEssays 2003;25: Schellekes GA, de Jog BA, va de Hooge FH, et al. Citrullie is a essetial costituet of atigeic determiats recogized by rheumatoid arthritis-specific autoatibodies. J Cli Ivest 1998;101(1): Schellekes GA, Visser H, de Jog BA, et al. The diagostic properties of rheumatoid arthritis atibodies recogizig a cyclic citrulliated peptide. Arthritis Rheum 2000;43(1): Vosseaar ER, va Verooij WJ. Ati-CCP atibodies, a highly specific marker for (early) rheumatoid arthritis. Cli Applied Immuol Rev 2004;4: Pruij GJ, Vosseaar ER, Drijfhout JW, et al. Ati-CCP atibody detectio facilitates early diagosis ad progosis of rheumatoid arthritis. Curret Rheumatology Reviews 2005;1(1): Ratapaa-Dahlqvist S, de Jog BA, Bergli E, et al. Atibodies agaist cyclic citulliated peptide ad IgA rheumatoid factor predict the developmet of rheumatoid arthritis. Arthirtis Rheum 2003: 48(10): Niele MM, va Schaardebur D, Reesik HW, et al. Specific autoatibodies precede the symptoms of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 2004: 50 (2): va Gaale, Li-Rasker SP, va Verooij WJ, et al. Autoatibodies to cyclic citrulliated peptides predict progressio to rheumatoid arthritis i patiets with udifferetiated arthritis. Arthritis Rheum 2004: 50(3): Meyer O, Labarre C, Dougados M, et al. Aticitrulliated protei / peptide atibody assays i early Rheumatoid Arthritis for predictig five year radiographic damage. A Rheum Dis 2003: 62: Forslid K, Ahlmé M, Eberhardt K, et al. Predictio of radiological outcome i early rheumatoid arthritis i cliical practice: role of atibodies to citrulliated peptides (ati-ccp). A Rheum Dis 2004: 63: Kastbom A, Stradberg G, Lidroos A, et al. Ati-CCP atibody test predicts the disease course durig 3 years i early rheumatoid arthritis (the Swedish TIRA project). A Rheum Dis 2004: 63: Aletaha D, Neogi T, Silma AJ, et al Rheumatoid Arthritis Classificatio Ciriteria. A America College of Rheumatology/Europea League agaist Rheumatism Collaborative Iitiative. Arthritis Rheum 2010: 62 (9): Cliical ad Laboratory Stadards Istitute. Protectio of Laboratory Workers from Occupatioally Acquired Ifectios; Approved Guidelie Third Editio. CLSI Documet M29-A3. Waye, PA: Cliical ad Laboratory Stadards Istitute, The Natioal Committee for Cliical Laboratory Stadards. Evaluatio of the Liearity of Quatitative Measuremet Procedures: A Statistical Approach; Approved Guidelie. NCCLS documet EP6-A. Waye, PA: The Natioal Committee for Cliical Laboratory Stadards, The Natioal Committee for Cliical Laboratory Stadards. Evaluatio of Precisio Performace of Quatitative Measuremet Methods; Approved Guidelie Secod Editio. NCCLS documet EP5-A2. Waye, PA: The Natioal Committee for Cliical Laboratory Stadards, The Natioal Committee for Cliical Laboratory Stadards. Protocols for Determiatio of Limits of Detectio ad Limits of Quatitatio; Approved Guidelie. NCCLS documet EP17-A Waye, PA: The Natioal Committee for Cliical Laboratory Stadards, Cliical ad Laboratory Stadards Istitute. Iterferece Testig i Cliical Chemistry; Approved Guidelie Secod Editio. CLSI documet EP7-A2. Waye, PA: Cliical ad Laboratory Stadards Istitute, Axis-Shield Diagostics Limited The Techology Park, Dudee DD2 1XA, Storbritaie Tel: +44 (0) , Fax: +44 (0) E-post: shield@axis-shield.com Webb:

13 Medicisk utrustig för i vitro-diagostik Katalogummer Parti 96 tester Läs bruksavisige Skydda mot ljus Utgågsdatum Förvara vid 2 8 C Rx Oly Aväds edast vid förskrivig Tillverkad av Positiv kotroll Negativ kotroll Kojugat Substrat Stopplösig Tvättbuffert Mikrotiterremsa (avbrytbar) Provspädigsmedel Kalibrator 1 Kalibrator 2 6 Refereskotroll Ver: 2016/