Screening för MRSA-stammar med hjälp av anrikning och selektivt fast odlingsmedium

Relevanta dokument
Bestämning av koagulaspositiva stafylokocker. Koloniräkningsteknik.

Bestämning av mikrobernas antal. Koloniräkningstekning med ingjutningsmetoden.

Bestämning och identifiering av bakterien Clostridium perfringens. Koloniräkningsteknik.

Bestämning av presumtiv Bacillus cereus och sporer. Koloniräkningsteknik.

Bestämning och identifiering av bakterien Clostridium perfringens. Koloniräkningsteknik.

Detektion och identifiering av bakterien Listeria monocytogenes

Equalis kvalitetssäkringsprogram 2018

Detektion och identifiering av bakterien Listeria monocytogenes

Undersökning av ESBL-, AmpC- och karbapenemasproduktion med diskdiffusionsmetoden

Isolering av bakterier Diskdiffusion E-test och utvidgad resistensbestämning Vid multiresistenta fynd - anmälning till vårdhygienen.

Behandling och sammansättning av prover som ingår i programmet för salmonellakontroll

REFERENSLABORATORIEVERKSAMHET

Salmonella. Detektion i organ- och träckprover av djur och produktionsmiljöprover med MSRV-metoden

Behandling och sammansättning av prover som ingår i programmet för salmonellakontroll

Statens jordbruksverks författningssamling Statens jordbruksverk Jönköping Tfn

Salmonella. Detektion i organ- och träckprover av djur, produktionsmiljöprover och livsmedel med MSRV-metoden

Bestämning av bakterien Listeria monocytogenes Koloniräkningsteknik.

Snabb Resistensbestämning med disk diffusion. Emma Jonasson

Aktuellt om MRSA-bakterien på svingårdar

Kommunala livsmedelstillsynsmyndigheter Livsmedelslaboratorier som godkänts för analys av sådana myndighetsprover, som avses i livsmedelslagen

Pågående projekt EUCAST lappdiffusionsmetod. NordicAST Workshop 2013 Jenny Åhman

Snabb resistensbestämning. Martin Sundqvist leg läk, MD Avd för klinisk mikrobiologi, Växjö

Erik Eriksson VMD Enheten för Bakteriologi

Detektion av Streptococcus agalactiae (GBS) från selektiv odlingsbuljong med MALDI-TOF och illumigene

1. Provtagning av dagsgamla kycklingar i uppfödningsstall för avelshönor

Provtagningsanvisning för Ögonsekret odling. Avgränsning/Bakgrund. Provtagning

Mikrobiologisk kontroll av städkvalitet. Daniel Heimer Medicinsk chef Mikrobiologi, Unilabs

Påvisande av salmonella, ISO 6579 metoden, variation

Gastro och lite annat

Upphäver / Ändrar Jord- och skogsbruksministeriets cirkulär nr 199 av den 14 maj 1982 om bakteriologisk undersökning vid köttbesiktning

Analys av antibiotikakänslighet hos bakterier med diskdiffusionsmetoden

Resistenta bakterier (MRB) Smittspårningsutbildning 2018

PROJEKTPLAN. Namn: Malin Hagstrand Aldman ST-läkare, Infektionskliniken, Lund, SUS

STRAMA-dag Långdragna sår gör AB nytta? Provtagning och resistensförhållanden Eva Törnqvist, Mikrobiologen, USÖ

Provläsningsexemplar / Preview

Antibiotikaresistens

Nyheter och pågående arbete EUCAST. Jenny Åhman Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015

Extern och intern kvalitetskontroll. Erika Matuschek EUCAST Laboratory for AST

Multiresistenta bakterier

Mikrobiologisk diagnostik av sjukhusförvärvad pneumoni

Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL

MALDI-TOF - vad är nytt? Åsa Johanson, leg BMA Klinisk Mikrobiologi, Växjö

Projekt. Provtagning av köttfärs i butik. Miljö och hälsoskydd Falkenbergs Kommun

RESISTENTA BAKTERIER MRSA, VRE, ESBL och ESBLCARBA

Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod

Gymnasieskolan Knut Hahn Projektrapport - Anna Goos

Anmälningspliktiga resistenta bakterier (ARB) MRSA, VRE, ESBLcarba och ESBL

ALLMÄN BAKTERIOLOGI ETT HANTVERK OCH NY TEKNIK. Erik Eriksson

PRINCIPER FÖR OCH FÖRKLARING AV METODEN

EKOLOGI MILJÖ OCH GEOVETENSKAP MIKROBIOLOGISK UNDERSÖKNING OCH KEMISKA ANALYSER AV LIVSMEDEL

Kvalitetskontroll och felsökning. Erika Matuschek NordicASTs workshop 2015

KVALITETSSÄKRA MILJÖANALYSER. Vattenundersökningar, Mikrobiologiska analyser & Svensk Standard

För delegationerna bifogas dokument D043211/04 ANNEX 1.

Antibiotikaresistens och risker med smittspridning i primärvården

FÖRSLAG TILL EN FÖRBÄTTRAD RESISTENSÖVERVAKNING. Ragnar Norrby Smittskyddsinstitutet

Avläsningsguide. EUCAST lappdiffusionsmetod

Mekanismer för antibiotikaresistens

VIKTIGT SÄKERHETSMEDDELANDE TILL MARKNADEN FSCA VITEK 2 - Card Pouch Integrity

Alexander Fleming Nobelföreläsning 1945

III. Multiresistent bakterie (MRB) i särskilt och ordinärt boende samt LSS-boende i Skåne. Basala hygienrutiner

Antibiotikaresistens en fara för folk och fä. Christina Greko Strama VL Djurhälsa och antibiotikafrågor

Sepsisdiagnostik från A till Ö - och: vad kan vi mäta?

Aktuellt resistensläge Helena Sjödén och Torbjörn Kjerstadius Klinisk mikrobiologi

Resistensbestämning. lappdiffusionsmetod. Version 5.0 Februari 2015

Kommentarer till resistensläget jan-juni 2014

MRSA. Information till patienter och närstående

BBL TM CHROMagar MRSA II

Antibiotikaresistens i Uppsala län och Sverige

Mikrobiologisk kontroll av produkter för linsoch ögonsköljning

Förekomst av meticillinresistenta Staphylococcus spp i djursjukhusmiljö med fokus på hästsjukhus

Kontroll av mikrobiologisk kvalitet på mjukglass i Varbergs Kommun, sommaren 2012

Optimisation of a method for isolation of Clostridium difficile from. faeces

Säkerställande av ESBL-, AmpC- och karbapenemasproduktion med diskdiffusionsmetoden

Antibiotikaresistens i blododlingar

Teknik blad 2. Tillverkning av termofil inhemsk Gårdskultur

EZ-PEC Microorganisms

Antibiotikaresistens i blododlingar

Phoenix/Vitek/Lappdiffusion vs Sensititre. Stina Bengtsson Klinisk mikrobiologi Växjö NordicAST workshop 2012

Distriktsveterinärernas hygienpolicy

Är gris en reservoar för MRSA som kan orsaka risk för ökad antibiotikaresistens hos människa?

MRSA. Information till patienter och närstående

BD CHROMagar Orientation Medium

Detta dokument är endast avsett som dokumentationshjälpmedel och institutionerna ansvarar inte för innehållet

UMEÅ UNIVERSITET

Prov kommer inte analyseras om det inte transporteras med en ytterburk som även den märks med patient id!

Kommentarer till resistensläget 2012

Bakteriella resistensmekanismer och antibiotikaresistens på akutsjukhus i Stockholms län Christian G. Giske

Klinisk mikrobiologi 1

Resistensläge i öppenvård:

Aktuellt på referenslaboratoriefronten (3/2010)

Jämförelse av BDMax, Simplexa, direktodling och in-house PCR screening för MRSA detektion

Härlig grillkväll. eller. risk för magont?

Mikrobiologi - Livsmedel

MRSA. Svar på vanliga frågor om MRSA

FINLANDS FÖRFATTNINGSSAMLING

Om Strama, resistens och antibiotikaförskrivning

Molekylärbiologisk diagnostik av tarmparasiter

Lokal anvisning

Vårdhygien, Smittskydd och Infektionsklinikerna i Skåne

PROGENSA PCA3 Urine Specimen Transport Kit

Transkript:

Ansvarig Nykäsenoja Suvi Sida/sidor 1 / 6 Screening för MRSA-stammar med hjälp av anrikning och selektivt fast odlingsmedium 1 Metodreferenser och avvikelser Europeiska gemenskapens referenslaboratoriums beskrivning: Laboratory protocol, Isolation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) from food-producing animals and farm environment, Version 1, June 2018. Avvikelser till referensmetoden: Metoden kan också användas för färskt svinkött. Som selektiv agar används BioRad MRSA Select TM II agar som skall inkuberas enligt tillverkarens instruktioner. Som inkuberingstemperatur används 37 ± 1 ºC (i stället för 35 37 ºC). Volymen som används för preanrikningsbuljong för svabbprov från hud är 30 ml. Till artkonfirmering används MALDI-TOF och för konfirmering av meca-genen även PCR-metoden Evira 3550. 2 Metodens syfte och tillämpningsområde Metoden är lämpad för isolering av meticillinresistenta Staphylococcus aureus (MRSA) bakterier från näsborrar (provstickor), svabbprover från hud, svinkött och miljöprover. Metoden kan i tillämpliga delar även användas för screening av resistensegenskaper i prover där djursjukdom misstänks. MRSA-stammar som har andra mec-gener (såsom mecc) kan eventuellt isoleras med metoden, men tillväxten på MRSA-plattan kan vara svag. 3 Definition(er) Meticillinresistenta Staphylococcus aureus (MRSA) skiljer sig från vanliga stafylokocker då det gäller känslighet för antibiotika. MRSA-bakterier har meca- eller mecc-genen och de är därför motståndskraftiga, dvs. resistenta mot alla betalaktamantibiotika (med undantag av anti- MRSA cefalosporiner). BORSA-stammarna (borderline oxacillin-resistant S. aureus) har ingen meca-gen, men deras resistens mot betalaktamantibiotika, t.ex. oxacillin, varierar. Det är inte alltid möjligt att särskilja BORSA-stammar från MRSA-stammar endast på basis av bestämning av antibiotikaresistens. MecC, som karakteriserades år 2011, har en nukleotidsekvens som liknar meca 70 % (García- Álvarez et al., 2011). Växten av dessa mecc-mrsa-stammar är mycket varierande på kromogena odlingsmedier (Cuny et al., 2011) och därför är screening av dessa stammar inte lämplig med den här metoden. I Europa har mecc-genen påvisats speciellt i nöt (Pantosti, 2012).

Ansvarig Nykäsenoja Suvi Sida/sidor 2 / 6 4 Princip Det är möjligt att screena för meticillinresistenta Staphylococcus aureus (MRSA) stammar med hjälp av en stimulerande och milt selektiv preanrikning och selektivt fast medium. MRSAstammar växer på fast medium som kolonier av en färg och storlek som är typiska för dem. Som selektivt medium används BioRad MRSA Select TM II agar. Denna agar innehåller, utöver selektiva antibiotika, kromogen som blir starkt rosafärgad genom det allmänna fosfatasenzymet hos stafylokocker. Vid misstanke om djursjukdom kan proverna även inokuleras direkt på fast medium. 5 Felkällor Vissa BORSA-typer som ibland förekommer i prover från näsborrarna på svin kan bilda kolonier som klart påminner om egentliga MRSA stammar. BORSA-stammar har varken meca- eller mecc-genen. I synnerhet vissa enterokocker kan växa på MRSA Select TM II plattor efter 18 28 h inkubering i punktformade kolonier eller som en mattliknande tillväxt, och om växten är riklig kan färgen påminna om färgen hos MRSA kolonier. 6 Arbetssäkerhet Vid arbete i ett mikrobiologiskt laboratorium följs verksamhetsbeskrivning LAB 223. Då MRSA-stammar hanteras ska bordsytorna alltid vara täckta med absorberande papper och de arbetsskeden där vätskekulturer hanteras ska göras i dragskåp. Dammprover hanteras alltid i dragskåp. 7 Utrustning och redskap sk basutrustning Värmeskåp 37,0 ±1,0 C 8 Substrat och reagenser Preanrikningsbuljong: Müller-Hinton buljong, med 6,5 % NaCl - 300 ml/kärl med vid mynning som är lätt att öppna (damm- och sockprover) - 30 ml/kärl med öppen mynning (strykningsprov bakom örat, små dukar) - 3 ml/rör (prover på provsticka) - 225 ml/flaska, påse eller annat lämpligt kärl (livsmedelsprover) MRSA Select TM II plattor (BioRad), ordernummer: 63747

Ansvarig Nykäsenoja Suvi Sida/sidor 3 / 6 9 Utförande 9.1 Förvaring av proverna 9.2 Preanrikning Proverna ska förvaras som regel vid +4 +8 C innan analysen inleds. Dammprover ska ändå förvaras i 18 22 C för att förhindra kondensation. Undersökningen av proverna borde inledas i laboratoriet inom 3 dygn efter provtagningen, köttprover dock senast på sista förbrukningsdagen. Miljöprover: Det är bäst att använda skyddshandskar vid hantering av miljöprover som ska preanrikas för att undvika att provet kontamineras av stafylokocker i normalfloran på huden. Preanrikning av miljöprover utförs i dragskåp. Duken som använts till provtagning av dammprov eller skoskyddet som använts som sockprov läggs i ett kärl med 300 ml preanrikningsbuljong och trycks ner under ytan. Kärlet blandas så att man ser dammet blandas i buljongen. Prover som kommer i transportrör med gel: Provtagningsstickan klipps med steril sax ner i röret med preanrikningsbuljong (3 ml) och röret blandas med en provrörsblandare. Ytstrykningsprover som tagits från hud: 1 duk sätts i ett kärl med 30 ml preanrikningsbuljong och trycks ner under ytan. Rör om i kärlet. Köttprover: Livsmedelsprover hackas/sönderdelas 25,0 g ± 0,5 g och det hackade/sönderdelade provet sätts i 225 ml preanrikningsbuljong i en Stomacher-påse av lämplig storlek eller i en steril burk/flaska. Blanda i kärlet. Inkubera preanrikningsbuljongen vid 37,0 ± 1,0 C, 16-24 h. Preanrikningskärlen och -rören förvaras i kylskåp tills plattorna utläses. 9.3 Inokulering och inkubering av MRSA Select plattor Rören med anrikningsbuljong blandas noggrant med provrörsblandare och 10 μl ögla selektiv anrikningsbuljong sprids ut på plattans yta antingen med hjälp av en drejskiva från centrum av plattan eller med traditionell utstryksteknik. Utstryket görs över tre eller fyra sektorer och öglan byts emellanåt. Målsättningen är att nära den drejade plattans yttre kant eller på området med minst tillväxt på en platta med utstryk efter inkuberingen finna enskilda kolonier som är klart åtskilda från varandra. Inkubera plattorna vid 37,0 ± 1,0 C 18 28 h. Plattorna kan inkuberas i upp till 48 h, om tillväxt inte upptäcks före det eller köttprovet är särskilt fet. Då djursjukdom misstänks i proverna kan MRSA-bakterier även screenas utan anrikning genom att inokulera provmaterial direkt på MRSA-selektiv agar. Inkubering vid 37,0 ± 1,0 C, 18 28 h, vid behov 48 h.

Ansvarig Nykäsenoja Suvi Sida/sidor 4 / 6 9.5 Avläsning av plattorna Typiska MRSA-kolonier på MRSA Select TM II plattor är efter 18 28 h inkubering små, har en diameter av ca 1-2 mm, och är starkt rosafärgade (se bild). Tillverkaren beskriver färgen som strong pink. 9.6 Konfirmeringstester Identifiering av isolerade stammar på artnivå kräver ytterligare tester. Inokulera 1-5 kolonier med typiskt utseende från en MRSA Select TM II platta på en blodplatta för konfirmeringstest. Inkubera blodplattorna vid 37,0 ± 1,0 C 22 24 h. Av de kolonier som ska konfirmeras räcker det med att påvisa att en koloni är MRSA för att konfirmera att provet är MRSA-positivt. Konfirmera bakteriearten med MALDI Biotyper (LAB 7085) och förekomsten av mec-genen med PCR (Evira 3550 eller Evira 3590). 10 Intern kvalitetssäkring Säkerställ per parti att anrikningsbuljongen och den selektiva plattan fungerar enligt anvisningarna för kvalitetskontroll av substraten. MRSASelect TM 2-plattornas certifikat per parti förvaras i mappen Analyysitodistukset (Analysintyg) som finns i rum A233. Metoden testas årligen med hjälp av inokulerade prover. Köttprover, utstryk och prover på provsticka inokuleras på minst två olika nivåer nära detektionsgränsen som noterades under valideringen, på så sätt att ett MRSA-positivt resultat uppvisas åtminstone då den större inokuleringen används. Därtill tas negativa prover med i testningen. Resultaten och de som deltog i testningen registreras i tabellen vertailututkimussuunnitelmat ja toteumat. 11 Meddelande av resultaten Resultaten meddelas efter konfirmeringstesterna. Om resultatet av screeningen är positivt ska det meddelas och man för in i systemet Elmo att MRSA-bakterier påvisades och om resultatet är negativt meddelas att MRSA-bakterier inte påvisades.

Ansvarig Nykäsenoja Suvi Sida/sidor 5 / 6 12 Validering av metoden Plattan som används vid denna metod validerades vid Evira år 2010 samt jämförelsen mellan plattorna MRSASelect TM och MRSASelect TM II år 2015. Metoden för screening av prov från näsborrarna hos svin validerades år 2013, och av prov från svinkött och hud år 2015. År 2017 gjordes en metodjämförelse mellan anrikning i en fas och anrikning i två faser med svinköttsprover, svabbprover från hud och prover i slem från näsborrar. Förvaring av valideringsmaterial: Det rum där den som ansvarar för metoden arbetar (originaldokumenten) och \\evira.local\evira\tuto\mibi\ambi\mrsa_asiat\evira3563_mrsaseulonta\validointiaineisto. 13 Metodens status Metoden ingår i en internationell metodsamling Officiell metod Intern metod 14 Metoder för kvalitetssäkring Laboratoriernas inbördes jämförande undersökningar Metodjämförelser Användning av referensstammar/kontrollstammar Inokulerade prover (intern jämförande undersökning, s.k. blindprov) Parallellbestämningar Kontrollkort 15 Referenser Cuny, C. et al. 2011. Rare occurrence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus CC130 with a novel meca homologue in humans in Germany, PLOS One, 6 (9): e2460. García-Álvarez, L. et al. 2011. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus with a novel meca homologue in human and bovine populations in the UK and Denmark: a descriptive study, Lancet Infect Dis, 11(8): 595-603. Larsen, J., Sunde, M., Islam, MD. Z., Urdahl, A. M., Barstad, A., Larsen, A. R., Grøntvedt, C. A & Angen, Ø. Evaluation of the EURL-AR method to isolate MRSA from pig and dust samples. Pantosti, A. 2012. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus associated with animals and its relevance to human health, Front. Microbiol. 3: 127. Selective and differential chromogenic culture medium for the isolation and direct identification of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) produktbeskrivning MRSA Select TM II.

Ansvarig Nykäsenoja Suvi Sida/sidor 6 / 6 16 Årtal då metoden togs i bruk Den första versionen av metoden togs i bruk år 2010. Den ursprungliga anvisningen utarbetades av Merja Outavaara och Lasse Nuotio 26.5.2010. 17 Ändringar till den föregående versionen Metodens referensmetod har ändrats: Anrikningen i två faser har ändrats till anrikning i en fas. Texten har uppdaterats och preciserats alltigenom. Anvisningen uppdaterades av Suvi Nykäsenoja. 6.2.2019