Analyser av biologiska läkemedel (med fokus på anti-tnf antikroppar) Per Marits ST-kurs i Allergi och Autoimmunitet 5:e oktober 2016

Relevanta dokument
Analyser för biologiska läkemedel

Proteinläkemedel. Patrik Strömberg. Disposition

Proteinläkemedel. Patrik Strömberg. Disposition

SGF Nationella Riktlinjer Användning av infliximab-biosimilarer vid inflammatorisk tarmsjukdom

Monitorering av biologiska läkemedel

Laboratorienytt. Nr: 5 November / December Innehåll: LabNytt nr Klinisk Immunologi. - Klinisk Immunologi har nu RoS from v48 inom VLL

Vaccination av barn och ungdomar med nedsatt immunförsvar hur svårt kan det va?

Monitorering av biologisk behandling, nytta eller nöje? Michael Eberhardson Överläkare, docent Karolinska universitetssjukhuset

TDM och Epilepsi. Magnus Axelsson Specialistläkare, Klinisk farmakologi Sahlgrenska Universitetssjukhuset

Lab-perspektiv på Lupusträsket. Maria Berndtsson, Karolinska Universitetslaboratoriet

Immunteknologi, en introduktion. Hur man använder antikroppar för att mäta eller detektera biologiska händelser.

Immunologisk monitorering av biologisk behandling vid inflammatorisk tarmsjukdom. Michael Eberhardson, docent Karolinska Universitetssjukhuset

Immun- och inflammationsfarmakologi Tandläkarprogrammet HT Ernst Brodin, Institutionen för Fysiologi och Farmakologi, Karolinska Institutet

Biosimilarer Vad är det?

Analys av D-dimer på patient med misstänkt HAMA

Farmakokinetik och Farmakodynamik: traditionella, nya och framtida läkemedel. Magnus Grenegård Professor i Fysiologi Docent i Farmakologi

Farmakokinetik. Farmakokinetik och farmakodynamik Ernst Brodin, Institutionen för Fysiologi och Farmakologi, Karolinska Institutet

Analys av hepariner, faktor Xahämmare och trombinhämmare

Arbetsdokument Nationella riktlinjer för rörelseorganens sjukdomar

IMMUNOLOGI. Anna Carlsson, Medical Manager

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Psoriasis, modern behandling. Tore Särnhult

Monitorering av immunmodulerande behandling med flödescytometri

Basofil allergenstimulering- CD-sens

Aktiv immunisering mot hepatit A

Slurapport för 2015 Ett unikt svenskt system för toleransbehandling av reumatoid artrit

Biologiska läkemedel: Klinisk användning och analysnytta inom Reumatologi

Medicin, avancerad nivå, Farmakologi och sjukdomslära, del % av totala poängen

Idag behandlas var tredje svensk som har

Glukokortikoider; Farmakodynamik och farmakokinetik. G Tobin 2013

Antikroppar; struktur och diversitet. Kursbok: The immune system Peter Parham

Det senaste inom NOAK metoder. Karin Strandberg Klinisk kemi, Malmö Labmedicin i Skåne

Hur följer vi upp biosimilarer? Behov och utmaningar? Johan Askling

Glukokortikoider; Farmakodynamik och farmakokinetik

Läkemedelsbehandling och amning

6.2 Offentlig sammanfattning Översikt över sjukdomens utbredning

CD-sens - Funktionellt allergitest När, Var Hur?

MOT EN INDIVIDUALISERAD LÄKEMEDELSBEHANDLING AV BARNREUMA

Offentlig sammanfattning av riskhanteringsplanen för Sylvant (siltuximab)

Polymerase Chain Reaction

Cirkulerande cellfritt DNA

Hög nivå IgG4 vid pankreatit vad betyder det?

Psoriasisartrit - Axplock från ACR Johan Wallman, Skånes Universitetssjukhus

NOAK-metoder. Karin Strandberg Klinisk kemi, Malmö Labmedicin i Skåne

S-IGF BP 3, Malmö Immulite2000XPi

Tentamen i Immunteknologi 23 maj 2007, 8-13

Föreläsningens innehåll. Rekombinanta läkemedel. Genterapi. 7 november 2008 Sissela Liljeqvist

Tentamen i Immunteknologi 28 maj 2003, 8-13

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Ogivri (trastuzumab) är en biosimilar för intravenös behandling av vuxna patienter med HER2-positiv:

NOAK Laboratorieaspekter Equalis användarmöte

IGFBP-3 på IDS isys (NPU28268)

MS eller multipel skleros är den allmännast förekommande. Läkemedelsbehandlingen av MS BLIR MÅNGSIDIGARE

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Ny analyskatalog 14 oktober 2015

VERIFIERING AV ANALYS FÖR KONCENTRATIONSMÄTNING AV BIOLOGISKA LÄKEMEDEL MOHAMAD DAOUD

Lymfom. 2000/år varav 50% lågmaligna

LÄKEMEDELSMETABOLISM: MEKANISMER FÖR INTERINDIVIDUELL VARIABILITET

Immunsystemet. Kursmål. Innehåll 4/25/2016. Människan: biologi och hälsa SJSF11

Glukokortikoider; Farmakodynamik och farmakokinetik KORTIKOSTEROIDER. Kortikosteroider används för: G Tobin 2015

Narkotikafri gymnasieskola. Inför och under provtagning av missbruksmedel i urin & saliv & Mats Ohlson

Apoptos Kap 18. Alberts et al., Essential Cellbiology 4th ed, 2014 Apoptos kap 18, sid

Studier av anti-citrullinerade protein antikroppars roll i reumatoid artrit

Droplet Digital PCR Ny metod för identifiering och kvantifiering av HTLV

Biologiska terapier Seminarium Christina Stranger

Reumatologiska kliniken. Karolinska Universitetssjukhuset. Diagnostiskt prov MEQ- fråga 1 Eva. Maximal poäng 19

Detektion av Borrelia burgdorferi IgG. med hjälp av ELISA

De olika typer av T celler är specialiserade på att identifiera och bekämpa patogen på olika sätt.

Byte till biosimilar Hur kommer alla med på tåget?

Tentamen i Allmän farmakologi, 2 hp

Tema Försvar. Ordinarie tentamen termin 2 VT 2013

Biologi breddning (mikrobiologi och immunologi) Kurskod: BI 1203-A Poäng: 50 Program: Förkunskapskrav: Biologi A och Biologi B

02/ BEN-SWE-0057 Broschyr Biologiska & sjukdomar BIOLOGISKA LÄKEMEDEL OCH INFLAMMATORISKA SJUKDOMAR

Patient-/vårdgivarguide

Autoimmuna tarmsjukdomar och graviditet

Analys av fria lätta kedjor i cerebrospinalvätska vid MS-diagnostik

Jan-Erik Frödin Onkologi Karolinska Universitetssjukhuset

Introduktion till farmakokinetik

Ackrediteringens omfattning

Tentamen i Immunteknologi 29 maj 2002, 8-13

Innata och adaptiva immunsystemet

Immunoterapi av cancer aktuell igen

PRODUKTRESUMÉ. Behandling av bakterieinfektioner orsakade av bakteriestammar som är känsliga för enrofloxacin.

MabThera (rituximab) patientinformation

Ny analyskatalog 15 april

Jan-Erik Frödin Onkologi Karolinska Universitetssjukhuset

Psoriasis vad händer?

Lymfoida organ och immunsystemet. Innehåll. Leukocyter 11/14/2014. Människan: biologi och hälsa SJSE11. Ospecifika immunförsvaret

Aminoglykosider; farmakokinetik, toxicitet och koncentrationsmätningar

BRYSSEL 2016 Biologiskt / Biosimilar

2. Skriv tydligt och läsvänligt. Oläslig handstil medför att poängbedömning ej sker.

Ny analyskatalog 15 oktober

Presentation. Den vardagliga reumatologin Srood Dilan. Allmän presentation Kliniska frågor. Hur sätter man en reumatisk diagnos

- Förändringar i TakeCare:s beställningar av laboratorieanalyser

Förändringar i TakeCare:s beställningar av laboratorieanalyser

Läkemedel vi inte har råd med

Inflammatoriska Tarmsjukdomar (IBD)

KAPITEL 30 FARMACEUTISKA PRODUKTER

Reumatiker behandlas allt oftare med biologiska läkemedel

Arbetsdokument Nationella riktlinjer för rörelseorganens sjukdomar

Transkript:

Analyser av biologiska läkemedel (med fokus på anti-tnf antikroppar) Per Marits ST-kurs i Allergi och Autoimmunitet 5:e oktober 2016

Biologiska läkemedel Biological medicinal product, biologicals Framställda genom biologiska processer; inte kemiskt syntetiserade Några huvudgrupper: 1) Rekombinant framställda kopior av kroppsegna proteiner, t ex insulin, tillväxthormon, interleukin-2 2) Monoklonala antikroppar 3) Lösliga receptorer; fusionsproteiner 4) Vacciner 5) Genterapi

Immunogenicitet Biologiskt Läkemedel TH B B HLA II Cytokiner CD40-CD40L Antigen-presentation för CD4+ T hjälparceller Y Y Antikroppar mot läkemedlet

Potentiella konsekvenser för patienten Utebliven behandlingseffekt Infusionsreaktioner Autoimmunitet

Drug target Läkemedelskoncentration Antikroppsbildning mot läkemedlet

Anti-TNF läkemedel Tracey, D. et al. (2008). Pharmacol. Therap.

TNF biologi Tracey, D. et al. (2008). Pharmacol. Therap.

Verkningsmekanismer Neutraliserar löslig TNF inflammationsdämpande Binder membranbundet TNF Blockering / reverse signaling apoptosinduktion Interaktion med Fc receptorer ADCC Immunreglering Relevanta skillnader föreligger mellan preparaten med avseende på aviditet, farmakodynamik och -kinetik

Farmakokinetik Tracey, D. et al. (2008). Pharmacol. Therap.

Total vs fritt läkemedel mab + L [mab*l]

Serumnivåer av TNF vid behandling med infliximab

Koncentrationsbestämning av Infliximab Αnti-human IgG Detektions antikropp ALP-anti-human IgFc Infliximab Patientserum TNFα Koncentrationen av fritt TNF-bindande läkemedel korrelerar med behandlingsresultaten

Dalvärden av Infliximab underhållsbehandlade IBD-patienter

Immunogenicitet mot anti-tnf läkemedel Frekvens antikroppsbildare varierar kraftigt mellan olika studier för infliximab 10-60%! I de flesta har punktprevalensen immuniserade patienter angivits Infliximab > Adalimumab >> Etanercept

Faktorer som påverkar immunogeniciteten av proteinläkemedel Läkemedlet Kroppseget / främmande Substitutionsbehandling? Framställningsmetod Beredning Hantering Patienten Grundsjukdom Annan medicinering? Immunstatus T-cellsepitoper Administrationssätt (i.v. / s.c.) HLA-presentation Doseringsschema

Förvirrande terminologi ATI Antibodies To Infliximab AAA Antibodies Against Adalimumab HACA Human Anti-Chimeric Antibodies ADA Anti-Drug Antibodies

Immunogenicitet mot terapeutiska antikroppar Antikroppar mot murina sekvenser Antikroppar mot glykosylerade epitoper Allotyp-specifika antikroppar Anti-idiotypa antikroppar Neutraliserande eller icke-neutraliserande (nada vs bada)

Att detektera antikroppsbildning mot terapeutiska antikroppar De flesta terapeutiska antikroppar är humana IgGantikroppar med lätta kedjor av kappa (κ) typ. Kliniskt relevanta antikroppar mot läkemedel av denna typ är också humana IgG-ak Analysen kan störas av: 1. Läkemedel använd som antigen i mätmetoden 2. Läkemedel som är kvar i cirkulationen

Total vs fritt läkemedel igen mab + L [mab*l] mab + ADA [mab*ada]

Hur man kan skilja antigen från antikropp när båda är humant IgG ELISA Anti-λ light chain antikropp som sekundärreagens Konvertera läkemedlet till F(ab) 2 fragment Enzym-märkt läkemedel som sekundärreagens (bridging-elisa) Radioimmunoassay (RIA) Läkemedel som F(ab) 2 använd som sekundärreagens (Antigen Binding Assay, ABA)

Bridging ELISA den vanligaste metoden för ADA mot terapeutiska antikroppsläkemedel ALP-Infliximab Y Y Y Y Y Infliximab Patientserum med anti-infliximab ak

Felkällor vid ADA-analys med Bridging ELISA ALP-Infliximab Y Y Y Y Y Y Patientserum med anti-infliximab ak Falskt negativ: Läkemedlet blockerar (bilden) Falskt positiv: Reumatoid Faktor (RF) som korsbinder inflixmab i frånvaro av ADA

Bestämning av anti-infliximab antikroppar vid Karolinska universitetslaboratoriet Inhibitions-ELISA TNFα ALP-Infliximab

Bestämning av anti-infliximab antikroppar vid Karolinska universitetslaboratoriet Inhibitions-ELISA ALP-Infliximab TNFα Patientserum med anti-infliximab ak

Felkällor för inhibitions ELISA Bindning av ALP-Infliximab blockeras av LM som finns kvar i patientens blod. ALP-Infliximab Patientserum med anti-infliximab ak Y Y Y TNFα Ger falskt positivt resultat RF interfererar inte med analysen

Cell-baserade metoder för ADA (Bioassays) Definitionen av neutraliserande ADA (nada) = antikroppar som blockerar effekten av läkemedlet i ett cellulärt system (farmakodynamisk påverkan) Cellulära assays är obligata för läkemedelsindustrin vid validering och godkännande av nya biologiska preparat Dyrare och mer arbetsintensiva än ELISA och RIA-metoder, som påvisar bindande ADA (bada) både neutraliserande och icke-neutraliserande. Kräver vana att hantera cellinjer

Cell-baserade metoder för ADA Aktivering av NFkB TNF-R1 ADA Infliximab Cellulär read-out för anti-tnfläkemedel = bortfall av TNFmedierad effekt, t ex minskad TNFinducerad apoptos ilite : cellinje som uttrycker Luciferase vid TNF-signalering Kvarvarande läkemedel interfererar även här DNA NFkB response element Luciferas Tillsats av substrat och detektion av luminiscens

Cell-baserade metoder för klinisk rutindiagnostik? Kan tillföra information, förutsatt att vald read-out är biologiskt och kliniskt relevant. En cell-baserad assay täcker sällan alla potentiella verkningsmekanismer för ett läkemedel Icke-neutraliserande ADA kan i vissa fall också påverka behandlingsresultatet genom att förändra farmakokinetiken (ökad clearance). Beror på läkemedlet och dess farmakokinetik och -dynamik.

Jämförande studie av patienter med RA Läkemedelsnivåer (anti-tnf) med ELISA och ilite Binding ADA (bada) med ELISA Neutraliserade ADA (nada) med ilite

Läkemedelskoncentration med ELISA vs ilite infliximab n=62 adalimumab n=22 ELISA ilite ilite ELISA low > 0.4 µg/ml low > 0.4 µg/ml low 17 0 17 low 9 0 9 > 0.2 µg/ml 0 45 45 > 0.2 µg/ml 0 13 13 17 45 62 9 13 22 Bra överensstämmelse!

Läkemedelsnivå och ADA med ELISA infliximab adalimumab ELISA ADA ELISA ADA ADA+ ADA- ADA+ ADAdrug level drug level low 17 0 17 low 3 6 9 > 0.2 µg/ml 0 45 45 > 0.2 µg/ml 0 13 13 17 45 62 3 19 22 I sex (6) prover uppmättes låga läkemedelsnivåer men inga ADA. Ökad clearance av annan orsak än immunogenicitet.

Jämförelse av bada med ELISA vs nada med ilite infliximab n=46 adalimumab n=22 ELISA ilite ilite ELISA nada+ nada- nada+ nadabada+ 7 10 17 bada+ 3 0 3 bada- 0 29 29 bada- 0 19 19 7 39 46 3 19 22 10 prover är bada+ men nada- bada-negativa prover är även negativa för nada!

Läkemedelsnivåer, bada och nada ELISA Bioassay (ilite) ELISA (BAb)+ / ilite (NAb) + <0.2 µg/ml <0.65 µg/ml ELISA (BAb)+ / ilite (NAb) - <0.2 µg/ml <0.65 µg/ml ELISA (BAb) - / ilite (NAb) - 0.4 11 µg/ml 0.6 2.3 µg/ml Tidsfråga: bada på väg att bli nada? Spelar det någon roll?

Drug tolerant assays Påvisar ADA som är bundet till läkemedlet Dissociera immunkomplex t ex med lååång inkubationstid eller syrabehandling och sedan förhindra reassociation innan analys av ADA Komplexa metoder Relevanta för kliniskt bruk?

Immunkomplex kan påvisas tidigare än fria ADA van Schouwenburg Ann Rheum Dis 2013;72:1680 1686

Temporal evolution of ADA De flesta studier av ADA rapporterar punkt-prevalens Ungar et al analyserade s-infliximab och ADA med en drug tolerant assay i >1000 sera från 125 patienter under 2009-2012 De flesta patienter som utvecklade persisterande ADA gjorde det under behandlingens första 12 mån. ADA-positivitet föregick klinisk loss-of-respons 26% av patienterna vid uppvisade övergående ADA-positivitet i isolerade prov, vilket inte verkade påverka behandlingseffekten Mindre än hälften av patienterna var ADA-negativa efter 4 år, trots kontinuerlig behandling Ungar et al. Gut 2014;63:1258-64

Monitorering av biologiska läkemedel i praktiken Börja med läkemedelskoncentrationen (dalvärde) Vid omätbara nivåer av läkemedlet komplettera med analys av ADA (om det inte utförts med automatik) Stämmer analysresultatet med den kliniska bilden? Persisterande vs temporära ADA? => Upprepad provtagning Utvärdera behandlingsjustering med intensifierad monitorering

Aktuellt analysutbud för biologiska läkemedel vid Karolinska universitetslaboratoriet (Klinisk immunologi, Solna) Läkemedel Koncentration ADA Infliximab (inklusive biosimilarer) JA Adalimumab JA JA Rituximab JA NEJ Vedolizumab JA NEJ (inte än iallafall) Ustekinumab JA NEJ (inte än iallafall) Etanercept Under utveckling - Goliumumab Some day maybe - JA

Tack till: Klinisk immunologi, Solna: Ulf Sundin Theresa Neimert-Andersson Ann-Charlotte Wikström Lena A. Nilsson Kerstin Lavenius, mfl Gastrocentrum, Karolinska: Michael Eberhardson CMM, Karolinska institutet: Anna Fogdell-Hahn Reumatologkliniken, Karolinska: Saedis Saevarsdottir

Frågor o/e synpunkter?