Basofil allergenstimulering- CD-sens

Transkript

1 Basofil allergenstimulering- CD-sens Anna Nopp, Docent Institutionen för medicin Solna Enheten för klinisk immunologi och allergi Karolinska Institutet Nopp 1

2 Nopp 2

3 Sensibilisering Först sedan man kommit i kontakt med ett allergen flera gånger kan man bli sensibiliserad, dvs man får IgE-antikroppar i blod och slemhinnor riktade mot allergenet. Nopp 3

4 i Sensibilisering Allergen Cytokiner Dendritisk cell Naiv T-cell Th2-cell B-cell IgE-antikroppar Plasmacell Mastceller och basofiler Nopp 4

5 Epitel Lunga Blod Allergen Kontraktion av glatt muskulatur Vascular permeabilitet Mucus produktion Klåda Tidig fas (vascular) Benmärg Mastceller lymfocyter Sen fas (cellular) Leukocyter Nopp 5

6 Mastceller Basofiler Nopp 6

7 Basofiler Basofilerna mognar i benmärgen, cirkulerar i blodbanan och rekryteras ut till vävnaden. Överlever ca 1-2 dygn. Har IgE-receptorer. Aktiveras av allergen. Frisätter histamin, heparin, leukotriener, cytokiner (IL-4) mm. Nopp 7

8 Vilande basofil Aktiverad basofil IgE-antikropp Histamin CD203c CD63 Nopp 8

9 Analys av allergenkänsligheten Natriumheparin som antikaogulantia Analys inom 24 timmar Förvaras i kylskåp Transport kan ske i rumstemperatur Nopp 9

10 100 l blod+100 l allergen/stimuli Inkubering 20 min i +37 o C Placera rören på is i 5 min Tillsätt antikroppar: CD203c-PE CD63-FITC - basofilspecifik markör - aktivitets markör Inkubering i 25 min i +4 o C i mörker Hemolysering av erytrocyter, tvätt och anlays i flödescytometer Nopp 10

11 Vilande basofil Aktiverad basofil (Uttryck av CD63) Allergen koncentration (SQU/ml) Nopp 11

12 % aktiverade basofiler Reaktionsmönster 0 Allergenkoncentration Nopp 12

13 % CD63-positiva basofiler Basofil allergenkänslighet , LC50 = 4,5 SQU/ml 80 % 40 % Allergenkoncentration Nopp 13

14 CD-sens Ett sätt att ange allergenkänsligheten LC50 inverterat och multiplicerat med 100 (100/LC50) Ju högre CD-sens, desto högre allergenkänslighet Nopp 14

15 Reproducerbarhet Intra assay CV: 13% Inter assay CV: 5,5% Nopp et al. Allergy 2006;61: Biologisk variation: 25% Dahlén et al. CEA 2011;41: Glaumann et al, Allergy 2012;67: Nopp 15

16 Non responders /Low responders Non-responder: < 5% positiva basofiler ( -Fc RI) - Provet kan inte bedömas Low-responder: 5-16% positiva basofiler ( -Fc RI) - Provet bedöms som pos/neg men CD-sens beräknas inte Nopp 16

17 Diagnostik Nopp 17

18 Allergen testade i CD-sens Luftvägsallergen Björk, timotej, katt, hund, häst, kvalster Födoämnen Mjölk, ägg, vete, jordnöt, hasselnöt, kardemumma Läkemedel mm Penicilin, patent blå, fluorescein, NMBA, hexvix, propofol, povidon Övrigt SAE, aspergillus, latex, bi och geting Nopp 18

19 CD-sens hos allergiker Allergen Antal patienter Geom. medel Björk 37 1 Katt 16 5 Timotej Nopp 19

20 CD-sens CD-sens Korrelation mellan CD-sens och serum IgE-antikroppar Absolute IgE ab. conc. (ku A /l) Non significant Relative IgE ab. conc. (%) r=0.72, p<0.001 Nopp et al,, Allergy 2006;61: Nopp 20

21 Komplement till provokationer Varför? Nopp 21

22 Utförs på ett fåtal sjukhus lång väntetid Tidskrävande Svåra att urvärdera - påverkas ex. av patientens förväntningar, rädsla, stress Kan ge svåra allergiska reaktioner Nopp 22

23 Korrelation mellan CD-sens och allergenkänsligheten i målorganet SPT-titrering Nasalprovokation Bronkialprovokation (PD20Ag) Dubbel-blind placebo kontrollerad födoämnesprovokation (jordnöt) Nopp 23

24 CD-sens och bronkialprovokation Allergen PD Inverted CD-sens r=0.41, p<0.05 Dahlén, CEA 2011;41: /04/2014 Nopp 24

25 CD-sens hos astmatiker med hög (A) respektive låg (B) bronkiell hyperreaktivitet A. B Allergen PD Allergen PD Inverted CD-sens r=0,38; p=0,26, n=13 (r=0.88; P<0.0001) Inverted CD-sens r=0,88; p=0,0001, n=13 (r=0.38; P=0.3) Dahlén, CEA 2011;41:1091 Nopp 25

26 Jämförelse mellan nasalprovokation och CD-sens CD-sens PNIF <80% 15 minuter Positiv Negativ Positiv 19 2 Negativ 0 5 Glaumann et al, Allergy 2012;67: Nopp 26

27 Jämförelse mellan DBPCFC och CD-sens hos jordnötsallergiska barn Positiv DBPCFC Negativ CD-sens Positiv CD-sens Negativ Glaumann et al, Allergy 2012;67: /04/2014 Nopp 27

28 ASIT (allergen specifik immunoterapi) Nopp 28

29 ASIT Nopp 29

30 CD-sens och IgG4-antikroppar mot timotej under ASIT Före Underhållsdos Före pollensäsong CD-sens 39 4,2 3,9 IgG4-ab (mg/l) 3, Nopp et al., Allergy 2009;64: Nopp 30

31 Xolair (anti-ige) Nopp 31

32 Humaniserad monoklonal anti-ige antikropp: omalizumab (Xolair) IgE C 3 region Omalizumab Nopp 32

33 Korsbindning av cellbundet IgE Allergen IgE C 3 Binding site Fc RI receptor Mast cell Nopp 33

34 %CD63 positive basophils %CD63 positive basophils ASIT Xolair Sample 1 Sample 2 Sample 1 Sample 2 Timothy SQU/ml Cat SQU/ml Nopp 34

35 CD-sens -lactalbumin Xolair CD-sens casein Xolair Ökad Xolairdos resulterade i negativ CD-sens och inga symtom Months Months Nopp 35

36 Användningsområden Diagnostik Komplement till provokationer Följa ett förlopp över tid Nopp 36

37 Tack till alla medarbetare!!! S.G.O. Johansson Caroline Nilsson Gunnar Lilja Susanne Glaumann Lars-Olaf Cardell Barbro Dahlén Jaro Ankerst Reidar Grönneberg Gunilla Hedlin Jon Konradsen m.fl. Nopp 37