RPR

RPR 100 72515 500 72516 KIT FÖR KVALITATIV OCH DELVIS KVANTITATIV DETEKTION AV ICKE TREPONEMALA SYFILISRELATERADE, REAGINER, ANTIKROPPAR I HUMANT SERUM ELLER PLASMA MED MAKROSKOPISKAGGLUTINATION PÅ ENGÅNGSTESTKORT 883684-2014/12

INNEHÅLLSFÖRTECKNING 1. AVSEDD ANVÄNDNING... 3 2. ÖVERSIKT OCH FÖRKLARING AV TESTET... 3 3. PROCEDURPRINCIPER... 3 4. REAGENS... 4 5. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER... 4 6. PROVER... 5 7. PROCEDUR... 6 8. TESTBEGRÄNSNING... 8 9. EGENSKAPER... 8 10. BIBLIOGRAFISKA REFERENSER.... 9 [SE] 2

1. AVSEDD ANVÄNDNING RPR-kiten används för kvalitativ och delvis kvantitativ detektion av icke treponemala syfilisrelaterade antikroppar (reagin) i humant serum eller plasma för att diagnostisera syfilisinfektion. 2. ÖVERSIKT OCH FÖRKLARING AV TESTET Syfilis är en kronisk infektion som genomgår tydliga stadier: primärt, sekundärt, latent och tertiärt. De här stadierna ger olika symptom, som börjar med schanker och sedan utslag som följs av långa perioder av inaktivitet. Obehandlad infektion kan leda till neurologiska eller hjärtrelaterade symtom. Infektionen orsakas av spiroketbakterien Treponema pallidum, och överförs vanligast vid sexuell kontakt. Man kan dock även smittas via blodtransfusion med infekterat blod. Infektionen kan även överföras av modern till fostret. Organismen är omöjlig att odla i artificiella medier och diagnosen av infektionen beror oftast på antikropparna i blodet som bildas ganska snart efter infektionen och kan finnas kvar i många år. Tester för syfilis kan delas in i fyra kategorier: direkt undersökning med mikroskop, treponematester av antikroppar, tester av antikroppar ospecifika för treponema och direkta antigentester. RPR (Rapid Plasma Reagin) är ett icke treponemalt test eftersom antikropparna som detekteras inte är specifika för T pallidum, fastän deras förekomst i patientens serum eller plasma är starkt förknippade med infektion orsakad av den här organismen. Den här typen av test mäter antikropparna (IgG och IgM) som produceras av lipoidalt material från skadade värdceller och lipoproteinliknande material från spiroketbakterien. De här antikropparna brukar försvinna när infektionen är botad. 3. PROCEDURPRINCIPER RPR-kit använder kolpartiklar belagda med en blandning av lipidantigener som kombineras med reaginantikroppar i patientens serum eller plasma. Partiklarna fördelas i ett medium som innehåller ämnen för att eliminera icke specifika reaktioner. Positiva reaktioner framgår av att partiklarna agglutineras makroskopiskt (klumpar). Även om kitet i första hand är avsedda för kvalitativa tester kan antikroppsnivåerna titreras genom att spädningen fördubblas. Agglutinationsmönstren bedöms med ögat. [SE] 3

4. REAGENS 4.1. Beskrivning Identifiering på etikett R1 RPR Antigen R2 Positive control R3 Negative control Beskrivning RPR-antigen Kolpartiklar belagda med kardiolipin, lecitin och kolesterolantigen i fosfatbuffert Positiv kontroll Humant serum som innehåller antikroppar relaterade till T. pallidum, negativa för HBs-antigen, anti-hiv1/2 och anti-hcv-antikroppar utspätt i fosfatbuffert Negativ kontroll Innehåll 72515 72516 100 test 500 test 2 ml 1 ml 10 ml 2 ml Kaninserum i fosfatbuffert 1 ml Fördelningsflaska (kan användas igen) 1 1 Fördelningsnål (kan användas igen) 1 1 Testkort (10 ringar) 10 50 2 ml 4.2. Förvaring och hantering Kitet ska förvaras i +2-8 C. Förvara flaskorna stående. Får ej frysas. Alla delar i kitet kan användas till det utgångsdatum som anges på förpackningen om de förvaras i +2 8 C. När det öppnats och inte kontaminerats kan reagenserna R1, R2 och R3 som förvaras vid +2-8 C användas fram till bäst före-datumet på etiketten. 5. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER För in vitro-diagnostiskt bruk. Används av utbildad sjukvårdspersonal. 5.1. Försiktighetsåtgärder för hälsa och säkerhet: Denna testsats bör bara hanteras av behörig personal som är utbildade i laboratorieprocesser och bekanta med eventuella risker. Bär lämpliga skyddskläder, handskar och ögon-/ansiktsskydd och hantera korrekt enligt den goda laboratoriepraxis som krävs. Kontrollmaterialen är baserade på humant serum. De har testats på blodgivarnivå och befunnits vara negativa för HBs-antigen, anti-hiv1/2 och anti-hcv-antikroppar. Ingen känd testmetod kan fullständigt garantera frånvaro av smittsamma ämnen. Därför ska alla produkter från humant blod, reagenser och prover från människor hanteras som om de kan överföra infektionssjukdomar. Följ alla rekommenderade lokala, regionala och nationella försiktighetsåtgärder för blodburna patogener. [SE] 4

Biologiskt spill: Spill av mänskligt material ska betraktas som potentiellt smittsamt. Spill som inte innehåller syror ska dekontamineras genast med lämpligt kemiskt desinfektionsmedel som är effektivt mot de potentiella biologiska risker som proverna utgör. Vanligen betyder det att spillet, området och eventuella kontaminerade ytor eller utrustningsdelar torkas av med en blandning i förhållandet 1:10 av blekmedel, 70 80 % etanol eller isopropanol, en jodofor (t.ex. 0,5 % Wescodyne Plus) som sedan torkas torra. Spill som innehåller syra ska torkas torrt eller neutraliseras, området spolas med vatten och torkas. Material som används för att torka upp spill bör hanteras som smittfarligt avfall. Området ska sedan dekontamineras med ett kemiskt desinfektionsmedel. OBS! Placera inte lösningar som innehåller blekmedel i autoklaven! Kassera alla prover och material som används för att utföra testet, precis som om de innehöll ett smittsamt ämne. Laboratorieavfall, kemiskt avfall eller smittfarligt avfall måste hanteras och kasseras i enlighet med alla lokala, regionala och nationella bestämmelser. Säkerhetsdatabladet finns på www.bio-rad.com. 5.2. Försiktighetsåtgärder i samband med proceduren 5.2.1. Förberedelse Resultatens kvalitet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) tillämpas: Blanda inte reagenser från olika partier i samma analysomgång. Använd inte utgångna reagenser. Innan reagenserna används ska de stabiliseras vid rumstemperatur (18 30 C) i 30 minuter. 5.2.2. Bearbetning Ändra inte testproceduren. Använd en ny pipettspets för varje prov. Vidrör inte reaktionsytan på agglutinationskorten. 6. PROVER Serum- eller plasmaprover (EDTA, natriumcitrat, natriumheparin och ACD) får inte innehålla blodceller. De kan förvaras vid +2-8 C i upp till 7 dygn innan de testas. Prover som måste förvaras längre ska frysas vid -20 C eller kallare. Frysta prover ska tinas och blandas väl innan de testas. Tina inte fler än 5 gånger. Prover som värms upp till 56 C i 1 timme påverkar inte resultatet. [SE] 5

Prover som innehåller upp till 120 g/l albumin, 200 mg/l bilirubin, 33 g/l triolein och prover som innehåller upp till 2 g/l hemoglobin påverkar inte resultaten. Prover med hyperlipemiskt eller hyperhemolyserat serum eller plasma bör inte användas. Om proverna ska transporteras, förpacka dem enligt gällande regler för transport av etiologiska ämnen och transportera dem helst frysta. 7. PROCEDUR 7.1. Nödvändigt material 7.1.1. Material som ingår Korrekt kalibrerad droppflaska och droppnål (engångs) för att fördela karbonpariklarna. 7.1.2. Nödvändigt material som inte ingår Rotationsmaskin för att rotera testkorten vid 100 rpm, i en cirkel med en diameter på ca 1 cm. Korrekt kalibrerad och underhållen pipett och spetsar för 50 µl volym. 0,9 %-ig saltlösning (för delvis kvantitativ procedur) 7.2. Testprocedur Kitet med positiva och negativa kontroller (R3 och R3) måste genomgå alla testkörningar. 7.2.1. Kvalitativt test 1. Placera 50 µl av provet eller kontrollen i en ring på testkortet. 2. Fördela provet och kontrollerna jämnt över hela ringen. 3. Skaka röret med RPR-antigen så att det blandas väl precis innan det ska användas så att det inte sedimenteras. 4. Fäst droppnålen på droppflaskan och sug upp RPR-antigen. 5. Vänd dropparen och tryck försiktigt för att trycka ut luften från nålen. 6. Håll droppflaskan vertikalt över provet som ska testas och droppa en droppe RPR-antigen. 7. Placera testkortet på en kortroterare och rotera i 100 rpm i 8 minuter. 8. Läs genast av och tolka resultaten visuellt i bra ljus. (Se avsnitt 7.4) Obs! Det går inte att läsa av direkt, kortet måste vara i kortroteraren i upp till 15 minuter. 9. Häll tillbaka oanvänt antigen från droppflaskan i glasröret. 10. Rengör droppflaskan och nålen med destillerat vatten och låt torka innan den används igen. 7.2.2. Delvis kvantitativt test 1. Gör dubbla spädningar från outspätt till 1:16 i 0,9 %-saltlösning. 2. Placera 50 µl av varje spädning och kontroller i en separat ring på testkortet. 3. Fördela varje spädning jämnt över hela ringen. 4. Fortsätt med avsnitt 3 för kvalitativt test Provets titer är reciprokal med den högsta spädningen som visar agglutination hos kolpartiklarna. [SE] 6

Om den hösta spädningen som testats (1:16) är reaktiv: Fortsätt med ytterligare en spädningsserie genom att förbereda dubbla spädningar av provet från 1:32 till 1:512 med 0,9 %-ig saltlösning. Blanda väl och fortsätt med steg 2 i det delvis kvantitativa testet. 7.3. Kvalitetskontroll Använd positiva (R2) och negativa (R3) kontroller i varje körning för att validera analysen. 7.4. Tolkning av resultat och kriterier för testvalidering Starkt reaktivt (SR): Stora klumpar kolpartiklar med klar bakgrund. Reaktivt (R): Stora klumpar kolpartiklar något mer ojämnt fördelade än vid starkt reaktivt. Svagt reaktivt (WR): Små klumpar kolpartiklar med grå bakgrund. Spår av reaktivitet (TR): Något klumpade kolpartiklar som ser ut som knappar med aggregat i mitten av ringen eller fördelade runt kanten av ringen. Icke reaktivt (NR): Ett jämnt grått mönster eller knappar med ej aggregerade kolpartiklar i mitten av ringen eller en stor ring av kolpartiklar i mitten av ringen utan klumpar. Reaktiva prover ska registreras som antikroppspositiva och måste (med hänsyn till antikropparnas icke specifika natur) testas ytterligare för att fastställa förekomsten eller frånvaron av specifika antitreponemala antikroppar. [SE] 7

För att analysen ska vara giltig måste den positiva kontrollen ge ett starkt reaktivt mönster och den negativa kontrollen ge ett tydligt icke reaktivt resultat. 8. TESTBEGRÄNSNING Ingen särskild test- eller definitiv referensstandard finns för sjukdomens alla stadier. Diagnosen av syfilis är till stor del baserad på serologisk testning som kräver resultat både från icke treponemala och treponemala metoder. Falskt positiva resultat kan förekomma om proverna inte läses av direkt efter roteringen. RPR-koltestet är inte specifikt för syfilis. Alla reaktiva prover ska testas om med treponemala metoder som TPHA för att bekräfta resultaten. 9. EGENSKAPER 9.1. Precisionsstudie Enprovpanel med ett negativt prov, ett svagt positivt prov (titer 1:4) och ett positivt prov (titer 1:16) testades för repeterbarget i 8 dubbletter under samma körning. För medelhög precision och interpartireproducerbarhet testades proverna i 2 dubbletter per dygn i 5 dygn (lästes av av två olika användare) och i två olika partier. 9.1.1. Repeterbarhet Alla negativa provdubbletter gav negativa resultat och alla positiva provdubbletter gav positiva resultat. 9.1.2. Medelhög precision/interpartireproducerbarhet Alla negativa provdubbletter gav negativa resultat och alla positiva provdubbletter gav positiva resultat oavsett förhållandena. 9.2. Kliniska egenskaper 9.2.1. Specificitet Specificitetsstudien var en retrospektiv studie av 102 frysta serumprover från laboratoriet för sexuellt överförda sjukdomar i Frankrike. Resultaten för analysen Syphilis RPR jämfördes med en CE-märkt RPR/VDRLanalys. Totalt antal prover Initialt reaktivt (IR) Upprepat reaktiva (RR) RR-specificitet (%) CI 95 % 102 2 (tveksamma) 0 100 % 102/102 [96,4 % - 100,0 %] Av 102 prover var 2 tveksamma. Efter omtestning var alla prover negativa. Den diagnostiska specificiteten hos de retrospektiva proverna var lika med 102/102 = 100 % med ett konfidensintervall på 95 % av [96,4 % 100,0 %]. [SE] 8

9.2.2. Känslighet Känslighetsstudien var en retrospektiv studie av 101 frysta serumprover från laboratoriet för sexuellt överförda sjukdomar i Frankrike. Resultaten för analysen Syphilis RPR jämfördes med en CE-märkt RPR/VDRLanalys. Totalt antal prover Initialt reaktivt (IR) Upprepat reaktiva (RR) RR-specificitet (%) CI 95 % 101 100 (1 tveksamt) 101 100 % 101/101 [96,4 % - 100,0 %] Av 101 prover var 1 tveksamt. Efter omtestning var alla prover positiva. Den diagnostiska känsligheten hos de retrospektiva proverna var lika med 100% (101/101) med ett konfidensintervall på 95 % av [96,4 % 100,0 %]. 9.3. Studie av analytisk specificitet - korsreaktivitet Den analytiska specificiteten hos analysen Syphilis RPR utvärderades på totalt 65 korsreaktiva prover från andra infektionssjukdomar och/eller andra förhållanden som kan ge falskt positivt resultat pga. icke-specificitet (reumatoid faktor, Lymes sjukdom, EBV, rubella, leptospiros, SLE (lupus), hepatit B, hepatit C, HIV ½, kvinnor som fött fler än ett barn, gravida kvinnor). Specificiteten som observerades var 100,0% (65/65) med ett 95 %-igt konfidensintervall på [94,5% 100,0 %]. 9.4. Prozoneffekt Tre (3) prover som var starkt positiva för Ab Syphilis (>1:128) testades outspädda och spädda för att verifiera att prozoneffekt inte förkom. Alla outspädda prover var positiva. Ingen prozoneffekt förekom i titer upp till 1:256. 10. BIBLIOGRAFISKA REFERENSER. 1. Larsen SA.,Pettit, et coll., EDTA treated plasma in the Rapid Plasma Reagin card test and the toluidine red unheated serum test for serodiagnosis of syphilis. J Clin Microbiology 1983;17;431-5 2. Larsen S.A., Pope V., et coll., A manual of Tests for Syphilis. 9th Edition ;1998; 193 207 3. Portnoy J. Modifications of the rapid plasma reagin (RPR) card test for syphilis, for use in large-scale testing.am J Clin Pathol;1963;40;473-9 4. Singh AE and Romanowski. Syphilis: Review with emphasis on clinical, epidemiological, and some biologic features. Clin Microbiol Rev. 1999 Apr; 12(2):187 209. 5. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank. Clin Chem Lab Med. 2009. 47:596-606. [SE] 9

[SE] 10

Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette, Frankrike Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax: +33 (0) 1 47 41 91 33 2014/12 www.bio-rad.com 883684 [SE] 11