BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

Transkript

1 BRUKSANVISNING FÄRDIGA ODLINGSPLATTOR PA Rev.: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) AVSEDD ANVÄNDNING BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) (BD choklagar (GC II-agar med IsoVitaleX)) och BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) (BD chokladagar (blodagar, bas nr 2)) är ickeselektiva media för isoleringen och kultiveringen av svårodlade mikroorganismer, speciellt Neisseria och Haemophilus species, från många olika kliniska prover. PRINCIPER FÖR OCH FÖRKLARING AV METODEN Mikrobiologisk metod. Carpenter och Morton beskrev ett förbättrat medium för isoleringen av gonokocer under 24 h. 1 Effektiviteten av detta mediet, GC-agar kompletterad med hemoglobin och jästextrakt, demonstrerades i en studie med tolv använda media för isoleringen av denna organism. 2 Senare gjordes flera förbättringar av mediet. 3-5 I BD chokladagar (GC II-agar med IsoVitaleX) tillhandahålls näringsmedel från GC I-basen, vilken innehåller kasein och utvalda köttpeptoner som kvävekällor, fosfater för att bibehålla ph och majsstärkelse för att neutralisera toxiska fettsyror som kan vara närvarande i agarn. Hemoglobin tillhandahåller X-faktor (hemin). BD IsoVitaleX-berikning är ett definierat tillägg vilket tillhandahåller V-faktor (nikotinamidadenindinukleotid, NAD) och vitaminer, aminosyror, koenzymer, glukos, järnjoner och andra faktorer vilka förbättrar växten av patogena Neisseria och andra kräsna (svårodlade) organismer. Pyridoxal och specifika tillväxtfaktorer har adderats för att förbättra tillväxten av grampositiva bakterier och pyridoxal har adderats för att stimulera tillväxt av Granulicatella och Abiotrophia species (=näringsvariant av streptokocker). 6-9 Chokladagar (blodagar, bas nr 2) är ett alternativt medium för isoleringen av svårodlade organismer från kliniska prover. 7 BD chokladagar (blodagar, bas nr 2) innehåller proteospepton, spjälkning av lever och jästextrakt som källor för kväve och vitaminer. Natriumklorid bibehåller den osmotiska stabiliteten. Upphettat (värmedenaturerat) hästblod tillför både X-faktor (järn) och, eftersom, det inte innehåller NADas, V-faktor (nikotinamidadenindinukleotid, NAD) nödvändiga för tillväxten av Haemophilus influenzae och tillför ytterligare näring. REAGENSER Sammansättningar* per liter aqua purif BD chokladagar (GC II-agar med BD chokladagar (blodagar, bas nr 2) IsoVitaleX) Pankreatisk spjälkning av 7,5 g Proteospepton nr 3 15,0 g kasein Utvald köttpepton 7,5 Leverspjälkning 2,5 Majsstärkelse 1,0 Jästextrakt 5,0 Dikaliumfosfat 4,0 Natriumklorid 5,0 Monokaliumfosfat 1,0 Hästblod (uppvärmt) 7 % Natriumklorid 5,0 ph 7,4 +/- 0,2 Agar 12,0 Hemoglobin 10,0 IsoVitaleX-berikning 12,0 ml Pyridoxal 0,01 g Tillväxtfaktorer 0,5 ph 7,2 +/- 0,2 *Justerad och/eller kompletterad efter behov för att uppfylla prestandakriterierna. PA

2 BD IsoVitalex-berikning innehåller de följande tillväxtfaktorer (sammansättning* per liter renat vatten): Vitamin B 12 0,01 g L-glutamin 10,0 Adenin 1,0 Guaninhydroklorid 0,03 p-aminobenzoesyra 0,013 Nikotinamidadenindinukleotid (NAD) 0,25 Tiaminpyrofosfat 0,1 Järnnitrat 0,02 Tiaminhydroklorid 0,003 Cysteinhydroklorid 25,9 L-cystin 1,1 Glukos 100,0 *Justerad och/eller kompletterad efter behov för att uppfylla prestandakriterierna. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER. Endast för professionellt bruk. Plattorna får inte användas om de visar tecken på mikrobiell kontamination, missfärgning, uttorkning, sprickbildning eller annan försämring. Se skriften ALLMÄN BRUKSANVISNING för information om aseptiska förfaranden vid hantering, biorisker och bortskaffning av använd produkt. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Förvara plattorna mörkt vid 2 till 8 C i originalomslaget efter mottagandet fram till dess de skall användas. Överhettning och nedfrysning skall undvikas. Plattorna kan inokuleras fram till utgångsdatum (se etiketten på förpackningen) och inkuberas under rekommenderad inkubationsperiod. Plattor från öppnade 10-plattförpackningar kan användas i en vecka vid förvaring i ren miljö vid 2 till 8 C. KVALITETSKONTROLL UTFÖRD AV ANVÄNDAREN Inokulera representativa prover med följande stammar (för ytterligare information hänvisas till skriften ALLMÄN BRUKSANVISNING). Inkubera plattorna vid 35 ± 2 C i en aerob miljö kompletterad med koldioxid. Avläs plattorna efter 18 till 24 respektive 42 till 48 h inkubation. Stammar* Haemophilus influenzae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria meningitidis ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Ej inokulerad BD chokladagar (GC II-agar med IsoVitaleX) och BD chokladagar (blodagar, bas nr 2) Ansenlig till utmärkt växt Chokladbrun, opak, kan vara något oenhetlig * Dessutom kan, BD chokladagar (GC II-agar med IsoVitaleX) testas med Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 yppa växt ab näringsvariant av streptokocker. 8,9 FÖRFARANDE Tillhandahållet material BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) eller BD chokladagar (blodagar, bas nr 2), båda tillhandahållna som 90 mm Stacker-plattor. Mikrobiologiskt kontrollerade. Material som ej medföljer Extra odlingsmedier, reagenser och laboratorieutrustning efter behov. PA

3 Provtyper Dessa media kan principiellt användas för alla typer av prover från misstänkta infektioner orsakade av svårodlade organismer, speciellt men inte endast från prover från primärt sterila kroppsställen (t.ex. cerebrospinalvätska, abscesser). Deras huvudsakliga användning är för icke-selektiv isolering av Neisseria, Haemophilus och andra bakterier som inte kan växa på rutinmässig blodagarmedia såsom Columbiaagar med 5 % fårblod. Dessutom kan BD chokladagar (GC II-agar med IsoVitaleX) användas för isoleringen av Abiotrophia och Globicatella species (=näringsvariant av streptokocker). 8,9 Mediet används också som subkultiveringsmedia från blododlingar. (se också KLINISKA PRESTANDA OCH METODENS BEGRÄNSNINGAR). Provtagning och transport Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus och andra svårodlade organismer är känsliga för negativa miljöförhållanden. Följaktligen måste lämplig transportmedia användas för alla prover. Proverna måste skickas till laboratoriet så fort som möjligt och får inte vara äldre än 24 h, även om transportmedia används. Den optimala transporttemperaturen är 20 to 25 C. Får inte kylskåpsförvaras! 10,11 Testförfarande Stryk provet så snart som möjligt efter det att det kommit till laboratoriet på BD chokladagar (GC II-agar med IsoVitaleX) eller BD chokladagar (blodagar, bas nr 2). Den strukna plattan används primärt för isolering av renkulturer från prover med blandflora. Vid odling direkt från provtagningspinne rullas istället pinnen över ett litet ytområde nära kanten varefter plattan stryks från det inokulerade området. Om provet har tagits från ett kroppsställe med normalflora, bör det inokuleras på lämpliga selektiva media beroende på det patogena agens som ska isoleras. För Neisseria gonorrhoeae, bör en BD Martin-Lewis-agar, modifierad eller en BD GC-Lect-agar-platta användas och för Haemophilus, en BD chokladagar med IsoVitaleX och bacitracin-platta inkluderas. Inkubera plattorna vid 35 ± 2 C i en aerob miljö kompletterad med koldioxid. Avläs plattorna efter 18 till 24 respektive 42 till 48 h inkubation. Resultat Typisk kolonimorfologi är som följer: Organismer Haemophilus influenzae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Streptococcus pneumoniae Granulicatella (Abiotrophia) adiacens* BD chokladagar (GC II-agar med IsoVitaleX) och BD chokladagar (blodagar, bas nr 2) Små (1 mm), fuktiga, pärlliknande med en karakteristisk råttliknande odör Små, gråaktiga-vita till färglösa, mukoida Medium till stora, blågråa, mukoida Små, platta eller stora mukoida, grönaktiga kolonier, mediet runt kolonierna kan vara grönaktigt Små grågrönaktiga kolonier, medium runt kolonierna kan vara grönaktigt KLINISKA PRESTANDA OCH METODENS BEGRÄNSNINGAR BD chokladagar (GC II-agar med IsoVitaleX) och BD chokladagar (blodagar, bas nr 2) är berikade icke-selektiva media på vilken svårodlade och icke-svårodlade bakterier, inkluderande normalflora, kan växa. Följaktligen rekommenderas det att inokulera prover från kroppsställen med normalflora på lämpliga selektiva media. Termen kräsna bakterier (svårodlade) relaterar till bakterier som inte växer eller som inte växer bra på normalt använda primära isoleringsmedia innehållande fårblod, t.ex. Haemophilus, patogena Neisseria och flera andra organismer. För detaljerade beskrivningar av provtyper som måste inokuleras på dessa media och olika organismer för vilka dessa media används för isolering, se referenserna. 8,9,11,12 PA

4 Antalet och typer av bakteriella species uppträdande som infektiösa agens är mycket stort. Följdaktligen måste dessa medias lämplighet först testas av användaren genom kultivering av rena kulturer innan de används rutinmässigt vid sällan isolerade eller nyligen beskrivna mikroorganismer. BD chokladagar (blodagar, bas nr 2) har inte testats avseende stimulering av tillväxten för Abiotrophia species och andra näringsvarianter av streptokocker. För diskussion avseende näringsvarianter av streptokocker, se referenserna. 6,8,9,13 REFERENSER 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Ruoff, L.R Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous DIFCO Manual, 11th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14: Collins, M.D., and P.A. Lawson The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. FÖRPACKNINGAR/TILLGÄNGLIGHET BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Kat.nr Färdiga odlingsplattor, 20 st. per förpackning Kat.nr Färdiga odlingsplattor, 120 st. per förpackning BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Kat.nr Färdiga odlingsplattor, 20 st. per förpackning Kat.nr Färdiga odlingsplattor, 120 st. per förpackning PA

5 YTTERLIGARE INFORMATION Kontakta närmaste BD-representant för ytterligare information. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA