Difco Neisseria Meningitidis Antisera

Transkript

1 Difco Neisseria Meningitidis Antisera /10 Svenska AVSEDD ANVÄNDNING Difco Neisseria Meningitidis-antisera rekommenderas för användning vid agglutinationstester på objektglas, för serotypning av Neisseria meningitidis. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING Neisseria meningitidis, också känt som meningokock, påträffas i orofarynx och nasofarynx på människor. Eftersom organismen inte överlever särskilt väl i miljön är människan den primära bäraren. Hos asymtomatiska personer räcker inkubationstiden olika länge, vanligtvis i flera veckor. Mikroorganismen överförs från person till person genom direktkontakt med luftvägssekret eller luftburna droppar. 1,2 Typiska humana prover för isolering av organismen är: cerebrospinalvätska (CSF), blod, hudlesioner (i fall där petekier förekommer) och nasofaryngeala utstryk. N meningitidis förekommer i cervix och vagina på kvinnor och kan förorsaka allvarlig underlivssjukdom. Andra ställen inbegriper analkanalen och på män och uretra. N. meningitidis delas in i serologiska grupper beroende på förekomst av antingen kapsulära- eller yttre membranproteinantigener. Bland de för närvarande erkända grupperna finns A, B, C, D, 29E, H, I, K, L, X, Y, Z, Z och W135. Grupperna A, B, C, Y och W135 är oftast orsaken till systemisk sjukdom. 3 Andra serogrupper isoleras sporadiskt från bärare och patienter med sjukdom. N. meningitidis är gramnegativa kocker som vanligtvis förekommer i par som kallas diplokocker. Dessa är strängt aeroba och producerar enzymet cytokromoxidas. Tillväxt av N. meningitidis förstärks av en CO 2 -berikad atmosfär. PRINCIPER FÖR METODEN Identifiering av N. meningitidis innefattar isolering av mikroorganismen, biokemisk identifiering och serologisk verifiering. Serologisk verifiering involverar den reaktion vid vilken mikroorganismen (antigenet) reagerar med sin motsvarande antikropp. Vid denna in vitroreaktion uppstår en makroskopiskt synlig sammanklumpning, som kallas agglutination. Den avsedda homologa reaktionen är snabb, dissocierar inte (hög aviditet) och har täta bindningar (hög affinitet). Eftersom en mikroorganism (antigenet) kan agglutinera med en antikropp som producerats via reaktion mot något annat species kan heterologa reaktioner förekomma. Dessa karakteriseras av att de har svaga bindningar och bildas långsamt. Sådana oväntade och eventuellt oförutsägbara reaktioner kan orsaka en viss förvirring vid den serologiska identifieringen. En positiv homolog agglutinationsreaktion bör därför stödja den morfologiska och biokemiska identifieringen av mikroorganismen. Homologa reaktioner sker snabbt och har starka bindningar. Heterologa reaktioner uppstår sakta och har svaga bindningar. REAGENSER Difco Neisseria Meninitidis-antisera består av stabila, frystorkade, polyklonala antisera från kanin som innehåller cirka 0,1% natriumazid som konserveringsmedel. Difco Neisseria Meningitidis-antisera detekterar följande antigengrupper: Antiserum Detekterad antigengrupp Poly A, B, C, D Poly X, Y, Z* W135 W135* A A* B B* C C* D D X X* Y Y* Z Z* Z Z, Z * *Absorberas inte för grupp D, vilken sällan isoleras.

2 Vid korrekt utförd rehydrering och användning enligt anvisningarna (se avsnittet Förfarande) räcker varje flaska Difco Neisseria Meningitidisantiserum till 20 agglutinationstester. Varningar och försiktighetsbeaktanden: Avsedd för in vitro-diagnostik. Förpackningen till denna produkt innehåller torrt naturgummi. Iakttag aseptisk teknik och vedertagna infektionsförebyggande försiktighetsåtgärder under samtliga förfaranden. Efter användning och innan de kasseras skall alla prover, behållare, objektglas, provrör och annat kontaminerat material steriliseras i autoklav. Följ bruksanvisningen noga. VARNING! Denna produkt innehåller natriumazid, som är toxiskt vid inhalation, hudkontakt och förtäring. Vid kontakt med syra frigörs mycket giftig gas. Vid kontakt med huden skall huden omedelbart tvättas av med rikligt med vatten. Natriumazid kan reagera med bly- och kopparledningar och bilda höggradigt explosiva metallazider. Vid bortskaffning ska produkten spolas ut med stora mängder vatten för att förhindra ansamling av azid. Förvaring Förvara frystorkade och rehydrerade Difco Neisseria Meningitidis-antisera vid 2 8 C. Långvarig exponering för andra temperaturer än de specificerade skadar reagenserna. Utgångsdatum gäller för produkt i intakt behållare vid förvaring enligt anvisningarna. Använd inte produkten om den är sammanklumpad, missfärgad eller visar andra tecken på försämring. PROVTAGNING OCH -FÖRBEREDELSE N. meningitidis kan påvisas på blodagar eller chokladagar. Se tillämpliga referenser avseende specifika rekommendationer. 4,5 Kontrollera att en renkultur av mikroorganismen har erhållits och att reaktionerna vid biokemiska tester är förenliga med identifiering av organismen såsom N. meningitidis. Efter att dessa kriterier har uppfyllts kan serologisk identifiering utföras. FÖRFARANDE Tillhandahållet material: Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Poly Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Poly 2 Difco Neisseria Meningitidis Antiserum A Difco Neisseria Meningitidis Antiserum B Difco Neisseria Meningitidis Antiserum C Difco Neisseria Meningitidis Antiserum D Difco Neisseria Meningitidis Antiserum X Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Y Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Z Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Z Difco Neisseria Meningitidis Antiserum W135 Material som krävs men ej medföljer: Objektglas för agglutination Appliceringspinnar Sterilt aqua purif Steril 0,85-procentig koksaltlösning Bakteriologisk ögla Reagensberedning Rehydrera Difco Neisseria Meningitidis-antisera genom att tillsätta 1 ml sterilt aqua purif och vicka försiktigt tills innehållet lösts helt. Vänta tills samtliga material uppnått rumstemperatur innan testerna utförs. Se till att alla glasföremål och pipetter är rena och fria från rester av rengöringsmedel och andra ämnen. Kvalitetskontroll utförd av användaren Vid användningstillfället skall både positiva och negativa kontrollkulturer testas för att kontrollera funktionen hos antisera, använda tekniker och metodologi. Kvalitetskontroll måste utföras i enlighet med gällande bestämmelser eller ackrediteringskrav samt laboratoriets etablerade procedurer för kvalitetskontroll. Det rekommenderas att användaren konsulterar tillämpliga CLSI (tidigare NCCLS)-riktlinjer och CLIA-föreskrifter för lämpliga kvalitetskontrollförfaranden. Testa isolatet för autoagglutination 1. Överför en ögla full med bakteriekultur från chokladagar till en droppe steril 0,85-procentig koksaltlösning på ett rent objektglas och slamma upp organismen. 2

3 2. Vicka runt objektglaset i en minut och avläs sedan för agglutination. 3. Om agglutination (autoagglutination) uppstår, är kulturen ojämn och kan inte testas. Renodla på chokladagar, inkubera och testa organismen igen enligt anvisningarna i steg 1 och Om ingen agglutination uppstår, fortsätt med testningen av organismen. Val av antiserum Testa organismen först med Difco Neisseria Meningitidis Antisera Poly, Poly 2, grupp Z och grupp W135. Fortsätt att testa enligt a, b eller c nedan, beroende på reaktionen. a. Om agglutination inträffar med Difco Neisseria Meningitidis Antisera Poly eller Poly 2 skall organismen testas med de monospecifika antisera som anges: Om reaktionen är positiv Omtesta med med detta antiserum: dessa antisera: Poly A, B, C, och D Poly 2 X, Y, och Z b. Om agglutination inträffar med Difco Neisseria Meningitidis Antisera grupp Z skall organismen testas med monospecifikt Difco Neisseria Meningitidis Antiserum grupp Z. Kulturer från N. meningitidis grupp Z kommer inte att agglutinera Difco Neisseria Meningitidis Antiserum grupp Z. Kulturer från N. meningitidis grupp Z kommer dock att agglutinera Difco Neisseria Meningitidis Antiserum grupp Z. Följande agglutinationsmönster kan förväntas: Neisseria Meningitidis Omtesta med Organism Antiserum grupp Z antiserum grupp Z N. meningitidis grupp Z 3+ N. meningitidis grupp Z + 3+ c. Om agglutination inträffar med Difco Neisseria Meningitidis Antiserum W135 behövs ingen vidare testning. Förfarande steg för steg 1. Dispensera 1 droppe av det Difco Neisseria Meningitidis-antiserum som skall testas på ett objektglas för agglutination. 2. Överför en ögla full med testorganism till droppen av antiserum och blanda noga. 3. Vicka runt objektglaset i en minut och avläs för agglutination. 4. Upprepa steg 1 3 med kända positiva och negativa bakteriekulturer. RESULTAT 1. Avläs och anteckna resultaten enligt följande: % agglutination (klar till något suddig bakgrund) % agglutination (bakgrunden lätt grumlig) % agglutination (bakgrunden måttligt grumlig) % agglutination (bakgrunden helt grumlig) Ingen agglutination 2. Den positiva kontrollen bör uppvisa agglutination av grad 3+ eller högre. 3. Den negativa kontrollen bör inte uppvisa någon agglutination. 4. Positivt resultat för testisolat utgörs av agglutination av grad 3+ eller högre inom en minut. METODENS BEGRÄNSNINGAR 1. Korrekt tolkning av de serologiska reaktionerna är avhängiga en ren kultur och morfologiska karakteristika samt biokemiska reaktioner förenliga med identifiering av mikroorganismen såsom N. meningitidis. 2. Enbart serologiska metoder är inte tillräckliga för identifiering av isolatet som N. meningitidis. Organismer som inte är besläktade med Neisseria, men ändå kan orsaka meningit, och andra species av Neisseria kan korsreagera med meningokockantisera. 3. Kraftig värme från externa källor (heta odlingsöglor, lågor, ljuskällor, m.m.) kan förhindra bildning av en jämn suspension av mikroorganismen eller orsaka avdunstning av eller fällning i testblandningen. Falskt positiva reaktioner kan förekomma. 4. Ojämna kulturisolat kan förekomma. Dessa agglutinerar spontant och orsakar agglutination av de negativa kontrollerna (autoagglutination). Vid serologiska tester bör släta kolonier väljas och testas. 5. N. meningitidis grupp A och grupp C kan korsreagera pga. av förekomst av kapsulära polysackarider. 6. Grupp Z meningokocker kan agglutinera grupp Z antiserum. Grupp Z meningokocker kommer inte att agglutinera grupp Z antiserum. 7. Difco Neisseria Meningitidis-antisera har testats med användning av outspädda bakteriekulturer hämtade från agarmedier. Dessa antisera har 3

4 inte testats med antigensuspensioner i fysiologisk koksaltlösning eller andra spädningsmedier. Om användaren gör ändringar i de rekommenderade stegen (se avsnittet Förfarande) måste varje parti antiserum testas med kända kontrollkulturer för att verifiera att förväntade reaktioner kommer att erhållas vid det modifierade förfarandet. 8. Rehydrerat Difco Neisseria Meningitidis-antisera som är grumliga eller innehåller fällning under användningsperioden skall kasseras. 9. Bekräftande analys av de ovanliga serogrupperna X, W135, Y, Z och 29E rekommenderas. KLINISKA PRESTANDA 6 Prestandan hos Difco Neisseria Meningitidis-antisera, tillverkade av Difco Laboratories, jämfördes med två andra kommersiellt tillgängliga tester för serologisk gruppindelning av meningokocker i en studie utförd av van der Ende, Schuurman, Hopman, Fijen och Dankert. 6 En kommersiell produkt använde antikroppar från kanin och mus vid agglutinationstester med objektglas. Övriga kommersiella produkter använde antikroppar från kanin och mus i latexagglutinationstester. Sjuttiotvå (72) referensstammar användes i denna studie. 6 I tabellen nedan finns en anges antalet korrekt identifierade isolat som erhölls för varje testsystem. Agglutination på objektglas Kommersiell Serogrupp Antal med Difco agglutinationstest Kommersiell prover Neisseria på objektglas latextest Meningitis- Antisera A B C X * Y Z * W E (Z ) 2 2 * * Andra serogrupper och ej inkapslade stammar som bör vara negativa med testen. Totalt /15 61/72 15/17 67/72 23/27 67/72 * Övriga 2 kommersiella satser innehåller inte antisera för detektion av N. meningitidis grupp X, Z och/eller 29E. Latextesten kan inte särskilja mellan N. meningitidis serogrupper Y och W135. Serogrupp 29E och serogrupper X, Z och 29E inkluderas också för kommersiell objektglastest respektive latexttest. I denna studie var sensitiviteten hos Difco Neisseria Meningitidis-antisera 92 % och specificiteten var 67 %. 6 När endast antisera mot de vanliga serogrupperna A, B, C användes för serologisk gruppindelning var sensitiviteten 93 % och specificiteten 98 %. 6 TILLGÄNGLIGHET Kat. nr. Beskrivning Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Poly, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Poly 2, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp A, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp B, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp C, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp D, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp X, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp Y, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp Z, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp Z, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp W135, 1 ml Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp A, 1 ml, Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp C, 1 ml, Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp W135, 1 ml, Difco Neisseria Meningitidis Antiserum Gp Y, 1 ml, 100 4

5 REFERENSER 1. Given, K.F., B.W. Thomas, and A.G. Johnston Isolation of Neisseria meningitidis from the urethra, cervix, and anal canal: further observations. Br. J. Vener. Dis. 53: Janda, W.M., M. Bohnhoff, J.A. Morello, and S.A. Lerner Prevalence and site pathogen studies of Neisseria meningitidis and N. gonorrhoeae in homosexual men. JAMA 244: Zollinger, W.D., B.L. Brandt, and E.C. Tramont Immune response to Neisseria meningitidis, p In N. R. Rose, H. Friedman, and J.L. Fahey (ed.), Manual of clinical laboratory immunology, 3rd ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Pezzlo, M Aerobic bacteriology, p In H.D. Isenberg, (ed.), Clinical microbiology procedures handbook, vol.1. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Knapp, J.S., and E.H. Koumans Neisseria and Branhamella, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. van der Ende, A., I.G.A. Schuurman, Ch.P. Hopman, C.A.P. Fijen and J. Dankert Comparison of commercial diagnostic tests for the identification of serogroup antigens of Neisseria meningitidis. J. Clin. Microbiol. 33:

6 6

7 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: Difco is a trademark of Difco Laboratories, Inc., a subsidiary of Becton, Dickinson and Company. BD and BD Logo are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.