TROMBOCYT-ORIENTERAD INHIBITION AV NY TIA OCH MINDRE ISCHEMISK STROKE (PLATELET-ORIENTED INHIBITION IN NEW TIA AND MINOR ISCHEMIC STROKE) PROTOKOLL FÖR BIOMARKÖRUNDERSTUDIE BLODPROVSTAGNING OUS-protokoll DNA och plasma
INNEHÅLLSFÖRTECKNING I. DNA OCH PLASMA PROVPROTOKOLL... 2 1. KLINIKKRAV för PROVINSAMLING av DNA och PLASMA... 2 2. PROVTAGNINGSSATSER FÖR DNA OCH PLASMA... 2 3. PROVTAGNING OCH BEARBETNING AV DNA och PLASMA... 3 4. CENTRIFUGERING... 5 5. PROVFÖRVARING AV DNA och PLASMA... 6 6. FÖRPACKNING OCH TRANSPORT AV DNA och PLASMA Se LabCorps laboratoriehandbok för ytterligare information.... 6 II. VANLIGA PROBLEM/FEL... 7 III. LABCORPS ADRESS FÖR TRANSPORT AV PROVER... 7 IV. MAYO CLINICS ADRESS FÖR FÖRVARING AV PROVER... 7 V. BILAGOR... 8 Bilaga A: 10 ML EDTA-BLODPROVSRÖR MED LILA LOCK... 9 Bilaga B: 10 ML KRYORÖR för ÖVERBLIVNA BLODKROPPAR och BUFFY COAT... 10 Bilaga C: DIAGRAM ÖVER BLODPROV EFTER CENTRIFUGERING... 11 Bilaga D: 2 ML KRYORÖR FÖR PLASMA... 12 Sida 1
I. DNA OCH PLASMA PROVPROTOKOLL 1. KLINIKKRAV för PROVINSAMLING av DNA och PLASMA För korrekt bearbetning och förvaring av prover krävs tillgång till följande artiklar: Föredragen (krävs ej) En centrifug som drivs vid 1000 g och 4 C. Krävs En centrifug som drivs vid 1000 g. Föredragen (krävs ej) En frys som håller -70 C till -90 C. Prover kan lagras i upp till 3 månader före transport. Proverna kommer att transporteras på torris. Krävs En frys som håller -20 C, -30 C eller -40 C. Vid användning av en frys som håller -20 C, -30 C eller -40 C, måste proverna transporteras på torris inom 4 dagar. Torris som är tillgänglig för transport av alla prover. (Se din LabCorp laboratoriehandbok för torriskällor). 2. PROVTAGNINGSSATSER FÖR DNA OCH PLASMA LabCorp Clinical Trials kommer att tillhandahålla provtagningssatser som monteras hos LabCorp och skickas direkt till klinikerna i en återanvändbar behållare. Denna behållare kan användas för att skicka tillbaka proverna till LabCorp. Varje provtagningssats för DNA och plasma innehåller de material som behövs för att samla in, preparera och returnera proverna till LabCorp Clinical Trials. (Ytterligare bulkmaterial kommer att levereras till kliniken för att komplettera provtagningssatserna om de går sönder eller skadas.) Varje provtagningssats för DNA och plasma innehåller följande: ARTIKEL ANTAL FORMULÄR Rekvisitionsformulär för laboratorietester med streckkod 1 ] TILLBEHÖR FÖR BLODPROVSTAGNING Insamling av blod: 1 a. 1 st 10 ml EDTA-rör med lila lock (vacutainer) och streckkod b. 1 st 10 ml kryorör för buffy coat och överblivna blodkroppar, med streckkod c. 6 st 2 ml kryorör för plasma, med streckkod d. 1 st alkoholtork e. 1 st nål f. 1 st tourniquet g. 1 st kompress h. 1 st bandage i. 1 st icke-sterila pipetter Sida 2
Påse för bioriskavfall 1 TRANSPORTMATERIAL Satslåda (transportlåda) 1 Förbetald och förtryckt flygfraktsedel 1 Transportbehållare av polystyren 1 Transportetikett för torris OBS! Klinikerna måste erhålla torris för transport av prover se LabCorps användarhandbok för källor för torris. Laboratorierekvisitionsformuläret (se LabCorps användarhandbok) och streckkodsmärkta artiklar, som finns i varje provtagningssatsförpackning, är förtryckta och innehåller samma streckkodsnummer. Överför inte innehållet mellan provtagningssatserna. OMBESTÄLLNING AV MATERIAL 1. Se Anvisningar för ombeställning av satser och material i LabCorps laboratoriehandbok, för ombeställning av material. Minst 5 till 7 arbetsdagar behövs vid ombeställning av material, för montering och leverans av materialen. Flera 3. PROVTAGNING OCH BEARBETNING AV DNA och PLASMA Blodprover kommer att tas vid inskrivning i studien. Optimalt kommer proverna att tas vid tidpunkten för randomisering, efter att laddningsdosen har administrerats till patienten. Proverna kan emellertid tas upp till 12 timmar efter randomisering, om detta inte är möjligt. Ett provtagningslaboratorium på sjukhuset kan användas om studiesamordnaren inte kan ta proverna, men samordnaren ansvarar för transporten av blodprovet till laboratoriet för centrifugering, samt för att förpacka och transportera alla prover till LabCorp. INNAN PROVTAGNINGEN 1. Bekräfta att informerat samtycke för biomarkörstudien erhållits. 2. Se till att du har valt korrekt provtagningssats för provtagning av DNA och plasma. 3. Kontrollera utgångsdatumet för den provtagningssats du har valt. (Följ lokala riktlinjer för att förstöra provtagningssatser som gått ut.) 4. Kontrollera LabCorps kalender i LabCorps laboratoriehandbok för eventuella stängningstider på grund av allmänna helgdagar. Sida 3
PROVINSAMLING OCH BEARBETNING 1. Använd vanlig steriliseringsteknik för venpunktion. 2. Använd den motsatta armen om dropp satts in. Om dropp sats in i båda armarna ska blod samlas in från en ven distalt om droppet. 3. Fyll EDTA-röret med lila lock helt (Bilaga A) som medföljer provtagningssatsen. 4. Vänd försiktigt upp och ned på röret minst 6 8 gånger, omedelbart efter insamling, för att undvika koagulering. Undvik exponering för extremt varma eller kalla temperaturer. Märk röret med POINT-patientens ID-nummer och randomiseringsnummer (randomiseringsnumret är studieläkemedelsflaskans nummer). OBS! Använd en vattentät penna eller kulspetspenna när du fyller i alla provetiketter och laboratorierekvisitionsformuläret. 5. Separera plasman från blodkropparna genom centrifugering, omedelbart eller inom 30 minuter till 1 timme efter insamling (se LabCorps laboratoriehandbok, avsnittet Centrifugering). Håll rören upprätt före centrifugering. Om du behöver ytterligare hjälp med centrifugering, se LabCorps laboratoriehandbok för kontaktinformation till din projektmonitor på LabCorp. 6. Om du inte ser ett tydligt skikt mellan blodkropparna, buffy coat och plasma efter centrifugeringen, ska du centrifugera provet en andra gång. Se Bilaga C för ett diagram över ett blodprov efter centrifugering, som visar buffy coat. 7. Använd en pipett som medföljer provtagningssatsen för att överföra 0,7 ml plasma från EDTA-röret med lila lock till vart och ett av de sex 2 ml kryorören. Fyll till 0,7 ml-linjen på de 2 ml kryorören. (Bilaga D) OBS! Var försiktig så att du inte stör buffy coat-skiktet mellan blodkropparna och plasman. Du bör se ett tydligt skikt mellan plasman och blodkropparna, som kallas buffy coat. 8. Säkerställ att buffy coat INTE pipetteras med plasman. Om en del av buffy coat dras upp med plasman, ska du notera detta nederst på laboratorierekvisitionsformuläret. 9. Sätt locken på kryorören med plasma. 10. Märk etiketterna för de sex 2 ml kryorören med POINT-patientens ID-nummer och randomiseringsnummer (randomiseringsnumret är studieläkemedelsflaskans nummer). OBS! Använd en vattentät penna eller kulspetspenna när du fyller i alla provetiketter och laboratorierekvisitionsformuläret. 11. Använd den andra pipetten som medföljer provtagningssatsen för att överföra de överblivna blodkropparna och buffy coat från 10 ml EDTA-röret till 10 ml kryoröret. Sida 4
12. Sätt locket på 10 ml kryoröret. 13. Placera de sex 2 ml kryorören med plasma och 10 ml kryoröret med överblivna blodkroppar och buffy coat i Aqui-Pak (rörhållare med 6 platser, med absorberande material). 14. Placera Aqui-Pak inuti det största facket i bioriskprovpåsen och försegla. Infoga en kopia av laboratorierekvisitionsformuläret i provpåsens yttre ficka (behåll en kopia för arkivering). 15. PLACERA OMEDELBART PROVPÅSEN I FRYSEN I UPPRÄTT LÄGE. 16. Proverna måste vara kvar i frysen tills de är FRYSTA innan de kan transporteras. När de väl är frysta måste proverna transporteras frysta på torris. Följ förpacknings- och transportanvisningarna i LabCorps laboratoriehandbok och transportera 10 ml kryoröret och de sex 2 ml kryorören tillsammans på torris. 17. Om de överblivna blodkropparna och plasman fryses ned i en frys som håller -20 C, -30 C eller -40 C, måste proverna transporteras på torris inom 4 dagar. Om proverna förvaras i en frys som håller -70 C till -90 C, kan de förvaras i upp till tre månader innan de transporteras på torris. PROBLEM MED PROVINSAMLING OCH BEARBETNING Om en artikel i provtagningssatsen är trasig eller förbrukad ska den ersättas med en artikel från bulkmaterialen. Det finns extra streckkodade etiketter i varje provtagningssats. Fäst en av de extra streckkodade etiketterna på ett sådant sätt att den lätt kan skannas (t.ex. längsgående på ett rör). Se till att streckkoden med "Utgångsdatum för parti" inte är övertäckt. Fyll i den information som krävs på etiketten. 4. CENTRIFUGERING För att förbereda cellfri plasma, måste blodproverna centrifugeras. Använd nomogrammet i LabCorps laboratoriehandbok för att beräkna hastigheten (RPM eller varv per minut) för centrifugering av provet. För att beräkna hastigheten måste du veta radien (avståndet från mitten av centrifugen du använder, till mitten av röret som centrifugeras), och RCF (relative centrifugal force (relativ centrifugalkraft), som även kallas g i denna studie, g = 1000). Hastigheten eller RPM måste beräknas en gång för alla enskilda centrifuger. När hastigheten väl fastställts ska 10 ml EDTA-röret centrifugeras vid 1 000 g i 15 minuter. Detta separerar plasman från blodkropparna. Du bör se ett tydligt skikt mellan plasman och blodkropparna, som kallas buffy coat. Var försiktig så att du inte stör buffy coat. Det är mycket viktigt att buffy coat är kvar med de överblivna blodkropparna, för användning i den DNA-extraktion som Sida 5
äger rum hos LabCorp. Om du inte ser tydliga skikt mellan blodkropparna, buffy coat och plasman, ska du centrifugera provet en gång till. OBS! Kontakta din projektmonitor på LabCorp om du behöver ytterligare hjälp (se LabCorps laboratoriehandbok). 5. PROVFÖRVARING AV DNA och PLASMA De återstående överblivna blodkropparna och plasmaproverna måste frysas på kliniken före transport. Proverna ska förvaras i frys vid -70 C till -90 C, ELLER -20 C, -30 C eller -40 tills de ska transporteras. Vid användning av en frys som håller -20 C, -30 C eller -40 C, måste proverna transporteras på torris inom 4 dagar. Om en frys som håller -70 C till -90 C används, kan proverna förvaras i 3 månader innan de transporteras på torris. Under frysförvaring ska proverna vara kvar i bioriskprovpåsen i upprätt läge. OBS! Både de återstående blodkropparna och den extraherade plasman kommer att transporteras tillsammans på torris. FÖRE TRANSPORT 1. Verifiera att vart och ett av de sex 2 ml kryorören och 10 ml kryoröret är märkt. 2. Verifiera att alla etiketter på 2 ml kryorören har märkts med POINT-patientens ID-nummer och randomiseringsnummer (studieläkemedelsflaskans nummer). 3. Verifiera att etiketten på 10 ml kryoröret har märkts med POINT-patientens IDnummer och randomiseringsnummer. 6. FÖRPACKNING OCH TRANSPORT AV DNA och PLASMA Se LabCorps laboratoriehandbok för ytterligare information. 1. Sammansätt transportmaterialen. 2. Fyll halva transportlådan med torris. 3. Placera provpåsen på torrisen i upprätt läge och fyll resten av transportlådan med torris. OBS! Prover från flera patienter kan transporteras i en behållare men måste vara kvar i sina individuella prov- påsar, tillsammans med motsvarande laboratorierekvisitionsformulär. 4. Stäng och förslut transportlådan. 5. Se LabCorps laboratoriehandbok för den kurir som valts för ditt land och specifik information om hur man fyller i flygfraktsedeln. Fyll i dina flygfraktsedlar fullständigt; flygfraktsedeln är förtryckt med klinikens namn och LabCorps information. Sida 6
6. Behåll en kopia för arkivering. 7. Se LabCorps laboratoriehandbok för att fastställa om en torrisetikett redan är fäst på din transportlåda eller om du måste fästa en medföljande torristransportetikett på transportlådan. 9. Skicka provet till LabCorp Clinical Trials. Om du behöver prata med någon om transport, kontakta din kontaktperson för LabCorp-laboratoriet som anges i LabCorps laboratoriehandbok. PÅMINNELSE: Prover kan endast skickas till LabCorp Clinical Trials MÅNDAG TILL OCH MED TORSDAG II. VANLIGA PROBLEM/FEL Att buffy coat-skiktet dras upp när plasman extraheras Om du oavsiktligt drar upp en del av buffy coat-skiktet i en av pipetterna, ska du notera detta på laboratorierekvisitionsformuläret. Detta kan påverka biomarkörnivåernas noggrannhet. Otillräcklig separation av blodkroppar, buffy coat- och plasmaskikt Centrifugera provet en gång till. Otillräckligt med torris Detta kan göra att proverna tinar och påverkar biomarkörnivåernas noggrannhet. III. IV. LABCORPS ADRESS FÖR TRANSPORT AV PROVER Se LabCorps laboratoriehandbok MAYO CLINICS ADRESS FÖR FÖRVARING AV PROVER Mayo Clinic ansvarar för långvarig förvaring av DNA och plasma. SKICKA INTE PROVERNA DIREKT TILL MAYO CLINIC. Mayo Clinic ATTN: Owen Ross, PhD 4500 San Pablo Road Birdsall Room 225 Jacksonville, FL 32224, USA Tel.: +1 904 953 6280 Sida 7
V. BILAGOR Sida 8
Bilaga A 10 ML EDTA-BLODPROVSRÖR MED LILA LOCK Sida 9
Bilaga B 10 ML KRYORÖR för ÖVERBLIVNA BLODKROPPAR och BUFFY COAT Förtryckt streckkod Var försiktig så att du inte täcker över streckkoden Fyll i den vidfästa etiketten med: POINT-patientens ID-nummer (SubjID) Randomiseringsnummer (Randomiseringsnr) Vidfäst DNA-extraktionsetikett Förtryckt streckkod Var försiktig så att du inte täcker över streckkoden Fyll i den vidfästa etiketten med: POINT-patientens ID-nummer (SubjID) Randomiseringsnummer (Randomiseringsnr) Vidfäst DNA-extraktionsetikett Sida 10
Bilaga C DIAGRAM ÖVER BLODPROV EFTER CENTRIFUGERING OBS! Var försiktig så att du inte stör buffy coat-skiktet mellan blodkropparna och plasman. Sida 11
Bilaga D 2 ML KRYORÖR FÖR PLASMA Använd en pipett som medföljer provtagningssatsen för att överföra 0,7 ml plasma från EDTA-röret med lila lock till vart och ett av de sex 2 ml kryorören för plasma. Fyll till 0,7 ml-linjen på kryorören för plasma. OBS! Var försiktig så att du inte stör buffy coat-skiktet mellan blodkropparna och plasman. Om en del av buffy coat dras upp med plasman, ska detta noteras nederst på laboratorierekvisitionsformuläret. Se Bilaga C för ett diagram över ett blodprov efter centrifugering, som visar buffy coat. Sida 12