Användarmöte Stockholm November 2012 Gertrud Naess Quality Assurance Manager Produktansvarig ID-Systemets produkter
Spädningslösningar till ID-systemet
ID-Diluent-1 Enzymlösning, Bromelin ID-Diluent-2 Liss-lösning ID-CellStab, ID-CellStab W.A Liss-lösning, förvaringslösning för erytrocyter
Enzym ID-Diluent-1 Enzymlösning, Bromelin Hållbarhet öppnad flaska: 6 månader
Enzym Sensitiv teknik med lägre specificitet än IAT Förhöjer sensitiviteten för vissa ag-ak reaktioner. Rh-systemet Förstör vissa antigen Fya, Fyb M, N, S, s
Användning av Enzym i Skandinavien Antikroppsundersökningar Papain är att föredra som enzym Bromelin används endast vid speciallaboratorium
Användning av Enzym i Skandinavien Antigenundersökningar För att åstadkomma agglutination i de fall vi inte har tillgång till IgM-antikroppar Förstärka reaktioner när vi söker svaga antigen Fya, Fyb, M, N, S och s kan inte typas Viktigt med Ctl-brunn.
Falskt positiva reaktioner i Enzymteknik DAT + Neoantigen (Anti-T) Köldantikroppar (Anti-HI) Kemisk påverkan på celler (Silicon)
DAT+ falskt positiva i Enzym
Ctl innehåller samma sak som övriga brunnar utom antikroppar
Ctl vid ABO/RhD-gruppering Polyklonala antikroppar och ID-Diluent-1 Använd alltid kort med ctl-brunn Falskt positiv reaktion kan leda till felgruppering
Ex Patient A RhD Neg med svaga isoagglutininer (Anti-B) Ej Tolkningsbar ctl pos AB RhD pos
Ctl fenotypningar Patienter Kort med ctl bör användas för att säkerställa rätt resultat Ex Rh-feno+K+Ctl Blodgivare Typas för att hitta negativa Sällan DAT+ Ctl kan uteslutas
Fallbeskrivning Jka-typning EQUALIS-prov testat manuellt Jka + (2+) Svar från EQUALIS Jka: neg Prov omsatt i ID-GelStation Neg Prov omsatt manuellt med susp i glasrör 2+ Prov omsatt manuellt med susp i plaströr neg Silikonet i glasröret Har setts med olika fabrikat av rör
Ctl och bruk av monoklonala antikroppar och ID-Diluent-2 Ej Falskt positiva vid DAT+ Ej Anti-T i antiserat. Enda teoretiskt tänkbara orsaken till falskt positiva reaktioner Ospec. köldantikroppar
VARNING Kontaminering från en brunn till en annan kan ge falskt positiva reaktioner Detta fångas inte i ctl om det inte är just den brunnen som drabbats
LISS ID-Diluent-2 ID-CellStab ID-CellStab W.A Hållbarhet öppnad flaska: Utgångsdatum
Niss-miljö
Innehåll NaCl med låg jonstyrka Albumin EDTA Antibiotika Trimethoprim Sulfamethoxazol
Falskt positiva reaktioner Antikroppar mot co-trimoxazole Antikroppar mot EDTA Neoantigen
Fallbeskrivning Antikroppar mot co-trimoxazole Pat Anti-E+K Morgon: MG-test neg med E-, K- Erytrocyter
Fallbeskrivning Antikroppar mot co-trimoxazole Nytt prov EM Pos mot samtliga testade erytrocyter (MG-test, Screeningceller, panelceller och egna) Test i rör med AABB-LISS Negativ mot E-K- erytrocyter Möjlig förklaring Pat insatt på antibiotika mellan provtagningarna
Antikroppar mot Co-trimoxasole Reagerar i IAT med testerytrocyterspädda i ID-CellStab, ID-CellStab WA eller ID-Diluent-2 Ger falskt positiv DAT om cellerna späds i ID-CellStab, ID-CellStab WA eller ID-Diluent-2 Ingen klinisk betydelse hos patienter Transfusion Volume 52, April 2012 844-848
Neoantigen Kan blottas vid påverkan på cellerna Bakteriepåverkan Diskmedel Klister från etiketter
Fallbeskrivning Neoantigen ID-GelStation Screen pos 2+ en eller flera celler ~ 20% av alla testade prov Reproducerbart med celler från samma flaska Negativa reaktioner med celler från förvaringsrör
Fallbeskrivning Neoantigen Något i flaskorna påverkar cellerna så de reagerar med en antikropp som ca 20% av befolkningen har Flaskorna diskas Blötläggs för att lösa etikett Klisterrester förorenar insidan av flaskan Klistret påverkar cellytan så att något neoantigen blottas.
Vilket spädningsmedium ska man använda? LÄS METODANVISNINGEN!!!
Fallbeskrivning P1 typning EQUALIS-prov Vid typning P1 neg Svar från EQUALIS P1 positiv Omsättning P1 neg Kontakt med support på Labex Felsökning Fel spädningslösning
Vilken metod bör man välja vid antigentypning Mitt förslag Så långt som möjligt kort med monoklonala antikroppar och ID-Diluent-2 Mindre risk för strulreaktioner Ctl-brunnen kan i de flesta fall uteslutas Ingen inkubering krävs
Fallbeskrivning Fyx 3 prov typat tidigare till Fyb pos. Vid validering av IH-1000 Fyb neg Dessa var Fyx svagt Fyb-antigen variant Fyb Kan skiljas ut i genotypning (DNA) Frekvens ca 7% i en Skandinavisk befolkning
Fallbeskrivning Fyx klinisk relevans Typning av blodgivare till transfusion: Fyx har inte beskrivits ge transfusions-komplikationer till individer med Anti-Fyb Typning av testcellsgivare för screening: FyaFyx kan typas felaktigt till Homozygot Fya Svagt anti-fya hos patienter kan missas
Fallbeskrivning DAT DAT Gelstation Liss/Coombs kort 2+ DC-Screening II (IgG-C3d-ctl) neg DAT+ celler sfäriska tyngre än de icke sfäriska cellerna
Fallbeskrivning DAT Vid centrifugering av prov hamnar de tunga cellerna i botten av röret och de lättar överst. Instrument tar alltid cellerna från botten av röret. Vid manuell sättning tas celler från toppen av erytrocytskiktet. Motsvarande har setts vid ABO/RhD-typning av transfunderad patient med microcytär anemi. Pat blodgrupp B Givare blodgrupp O
Anti-A kloner i gelkort LA-2: A5: ABD-confirmation for patients ABD-confirmation for donors ABO/D for Newborn BAS-test AHG(Svenskt kort) BAS-test IgG(Svenskt kort) Alla övriga kort innehållande Anti-A
Fallbeskrivning 1 AB ABO/D+Rew A5 4+ G½ 4+ ABD-conf, BAS-test LA-2 2+ LB-2 4+
Fallbeskrivning 1 AB Händer ofta i vissa Batcher Rapporterades från flera olika blodcentraler Analys av logglistor från ID-GelStation gjordes
Fallbeskrivning 1 AB ABO/D+Rev 50741 1002 st AB resultat kontrollerade av dessa var 27 st (2,69%) <2+ eller dp ABO-confirmation for donors 1197 st AB resultat kontrollerade av dessa var 130 st (10,86%) <2+ eller dp
Fallbeskrivning 1 AB Prov som strulat skickades till Bio-Rad Vissa förändringar gjordes i brunnarna med dessa prov som standard Andelen icke godkända grupperingar med LA- 2klonen är nu låg.
Fallbeskrivning 2 AB ABO/D+Rew Anti-A A5 1+ Anti-B G½ 4+ ABD-conf Anti-A LA-2 - Anti-B LB-2 4+ Rör-teknik Seraclone Anti-A A003 3/m.f och DiaClon Anti-A A5 1/m.f
Fallbeskrivning 2 AB Har setts vid flera tillfälle DNA-typning: A2B För svagt Anti-A? Ett prov skickades till BioRad Utreddes i Bern
Fallbeskrivning 2AB Serologiska fynd bekräftas H-typning neg vilket talar mot A2B Bern svarar: fel i A-transferas Mycket ovanligt Nytt prov kommer skickas till Bio-Rad men även utredas i Lund
Fallbeskrivning Missat Anti-A1 Nationell serologisk kontroll i Norge Prov svagt A med Anti-A1 ID-systemet missat Anti-A1, grupp utsvarad NI Alla tekniker olika bra på olika typer av antikroppar Gel-tekniken (collon-teknikerna) är inte optimal för IgM-antikroppar Troligtvis beroende på sämre blandning av ag-ak.
Reaktioner med Anti-A och Anti-B A1, A2, A1B och A2B Ske ge 3+ reaktion för godkänt resultat Reaktioner 2+ eller dp ska verifieras
Test av A3 (Universitetskliniken i Innsbruck) 14 A3B 9 A3 A5: 22 av 23 detekterade LA-2: 22 av 23 detekterade
Test av Ax (French National Centre for Scientific Research) 16 Ax A5: 9 av 16 detekterade LA-2: 10 av 16 detekterade
Anti-A,B i rutintester? Vid bruk av humana antisera Anti-A reagerar sämre med svaga A jämfört med monoklonaler Anti-AB producerad av en 0-individ Denna antikropp reagerar bättre med svaga A-antigen än Anti-A
Anti-AB Monoklonala reagens Mix av: Anti-A Birma-1 Anti-B ES-4 Anti-AB ES-131
Anti-A,B i rutintester? Vid bruk av monoklonala antisera Anti-A reagerar bättre med svaga A än humana antisera. Anti-A,B är en mix av Anti-A, Anti-B och Anti-A,B Reaktionerna med svaga A anses inte markant starkare än med Anti-A AweakB positiv reaktion med Anti-B
Vad händer om felgruppering sker Grupperas Aweak till 0 eller AweakB till B Blodmottagare Förenligt blod transfunderas Blodgivare Oförenligt blod kan transfunderas
Blodgivare Aweak eller AweakB som inte reagerar med Anti-A De flesta A3 och Ax fångas med de Anti-A som finns i Gelkorten Fångas normal i diskrepans i plasmakontrollen Om provet är Aweak och innehåller Anti-A1 eller annan irreguljär IgM-antikropp kan det felgrupperas till grupp 0
Blodgivare Aweak eller AweakB som inte reagerar med Anti-A Anti-A1 och övriga irreguljära IgM-antikroppar reagerar dåligt i geltekniken. Antikroppen ska vara mycket stark för att ge reaktion, detta hör till ovanligheterna. Svagare A än A3 och Ax ger oftast negativa reaktioner med Anti-A i samtliga tekniker men även här fångas detta i plasmakontrollen. För att så säkert som möjligt gruppera Aweak och AweakB bör plasmakontroll utföras mot A1-A2-B-0 celler.
Varför plasma-kontroll med endast A1 och B celler? I Skandinavien har det i geltekniken under ca 10 års tid grupperats väldigt många prover och många av dessa har varit blodgivargrupperingar Inget fall av felgruppering eller transfusionskomplikation rapporterat beroende på missat svagt A-antigen hos blodgivare
Kliniska aspekter för missade IgM-antikroppar Blodmottagare: Anti -A1 -H -P1 -Le M m.m. Kalla antikroppar saknar i de flesta fall klinisk betydelse Anses vara en fördel att inte hitta Inget fall beskrivet av missade kliniskt viktiga IgM-antikroppar ex. Anti-Tja, Vel MG-test: Data förenlighetstest Om MG-test utförs för att hitta ABO-oförenlighet bör man överväga teknik med bättre sensitivitet.
Kort med AntiHumanGlobulin Liss-Coombs Anti-IgG (polyklonal, kanin) (Kan reagera med lätta kedjan i IgM och IgA) Anti-C3d (Reagerar även med C3b och osplittat C3) Coombs IgG Anti-IgG (polyklonal, kanin) (Kan reagera med lätta kedjan i IgM och IgA) Monospecifik IgG Anti-IgG (polyklonal, kanin) (Reagerar endast med IgG)
Antikroppar
Liss-Coombs Coombs IgG IAT Fånga Ag-Ak-reaktion in vitro Om man använder serum och Liss utan EDTA kan man få en komplementaktivering invitro med C3d mantling och fånga den reaktionen i ett Liss-Coombskort Vi använder EDTA-rör och Liss med EDTA Komplementaktiveringen inhiberad Osplittat C3 kan ospecifikt mantla på erytrocyter (PEG +?) och ge falskt positiva reaktioner
Liss-Coombs Coombs IgG DAT Ska spegla det som skett In Vivo Prov ska tas så inget händer in Vitro - EDTA-rör Viktigt att fånga in Vivo komplementaktivering Rekommenderas Liss-Coombs kort
Anti-D i QC-Basic 10ng/ml (0,05 IU/ml) Council of Europe: Minigräns för en godkänd IAT Ger i de flesta fall 2+ med R1R1 och R2R2 Monoklonal antikropp Ej förväntad förstärkning i enzymteknik (papain)
Certificate of Quality Assurance
Certificate of Quality Assurance Finns nu på LABEX hemsida att ladda ner Fr.o.m. 1 december skickas inga papperskopior Fil med CQA kommer sparas hos Labex i 10 år
Certificate of Quality Assurance Informationsbrev skickas vecka 48 till reagensansvariga