ScanGel Anti-IgG Gelkort Gelkort

Transkript

1 ScanGel Anti-IgG Gelkort Gelkort GELER TILLVERKADE MED ETT POLYKLONALT ANTI-IgG ANTIHUMAN GLOBULIN Screening av oregelbundna ak, korstest, fenotypning IVD Alla tillverkade och marknadsförda reagens ingår, från mottagande av råmaterial till slutlig marknadsföring av produkten, i ett komplett kvalitetssystem. Varje batch undergår kvalitetskontroll och släpps inte ut på marknaden förrän den följer satta kriterier för acceptans. Dokumentation tillhörande produktion och kontroll av varje enskild batch finns tillgänglig på vårt företag. 61

2 I - TESTETS ANVÄNDNING OCH PRINCIP Detta kort är avsett att användas i fackmässigt och in vitro-diagnostiskt bruk. Testet är utformat för screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt-antikroppar, korstest och fenotypning. I testet kombineras principerna för agglutination och gelfiltrering. Reaktionen erhålls och avläses efter centrifugering av specialtillverkade mikrorör innehållande gel behandlad med antiglobulinreagens. Erytrocytsuspensionen och plasma eller serum fördelas i mikrorören varefter gelkortet centrifugeras efter inkubering. Icke agglutinerade erytrocyter samlas i botten av mikroröret medan agglutinat fastnar högre upp i mikrorörets gel, beroende på agglutinatets storlek. Positionen i mikrorörets gel avgör reaktionens intensitet Gelens förmåga att separera erytrocyterna från serum eller plasma innebär att det tvättsteg som är obligatoriskt i konventionella metoder kan uteslutas. II - KARAKTERISTIKA FÖR REAGENSET Mikrorören på ScanGel Anti-IgG gelkort innehåller en gel behandlad med Anti-IgG antihumanglobulin. Denna Anti-IgG-fraktion har tillverkats av sera från hyperimmuniserad get. Reagenset innehåller natriumazid (< 0,1 %) som konserveringsmedel. Artikelnummer och förpackningsstorlek anges på förpackningens etikett. III - FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Information om hållbarhet och förvaring anges på förpackningen. Förvara gelkorten i rumstemperatur (+15 C C). Förvara gelkorten vertikalt och skyddade från värmekällor i ett utrymme med relativt konstant temperatur och fuktighet. IV - VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Resultatens tillförlitlighet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) följs : Använd inte reagens efter det utgångsdatum som anges på etiketten. Använd inte kort som visar tecken på uttorkning, bubblor eller som har en skadad eller delvis borttagen skyddsremsa. Det är viktigt att iaktta försiktighet för att undvika kontaminering mellan mikrorören. Detta gäller speciellt vid distribuering av prov. Använd en ny pipettspets för varje prov, för varje reagens och för testerytrocyterna. 62

3 Kontrollera precisionen och den allmänna funktionsdugligheten för pipetter och annan utrustning. Använd handskar och skyddsglasögon vid hantering av reagens och prov. Munpipettera aldrig. Undvik spill och stänk. Vid spill eller stänk, rengör med 12 % klorin utspädd 1/10 och torka med absorberande papper. Allt material som har använts vid rengöring skall placeras i en behållare för riskavfall. Förbrukningsvaror och produkter som har varit i kontakt med prov eller reagens innehållande material av humant ursprung skall destrueras efter dekontaminering. Säkerhetsföreskrifter finns att erhållas vid förfrågan. V - PROVHANTERING Blodprovtagning skall ske aseptiskt i ett rör med eller utan antikoagulantia (EDTA, CPD). Analysen skall utföras så snart som möjligt efter provtagningen. Prov som inte kan analyseras snabbt skall förvaras i temperaturen +2 C - +8 C och skall analyseras inom 48 timmar. Under inga omständigheter får hemolys vara synlig. Värm inte proverna. VI - METOD Tillhandahållet material ScanGel Anti-IgG gelkort Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material ScanLiss : spädningsreagens för erytrocyter ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi IH QC 4 x 6 ml Centrifug : ScanGel Centrifuge Inkubator : ScanGel Incubator Automatiska eller semiautomatiska pipetter Pipettspetsar Engångsrör Avfallsbehållare för riskavfall Klorin (eller motsvarande) Latexhandskar Absorberande papper Skyddsglasögon 63

4 1. Screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt- antikroppar Kontroller En autokontroll (plasma eller serum och erytrocyter från patienten) bör köras parallellt med varje test. Positiv kontroll (känt serum innehållande minst en antikropp som kan detekteras med indirekt antiglobulin teknik) och negativ kontroll (känt serum ej innehållande någon antikropp), IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi. Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material EryScan, ScanCell, ScanPanel : Testerytrocyter, färdiga att användas, för screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt-antikroppar (indirekt antiglobulintest) EryScan 2 x 10 ml ScanCell 3 x 10 ml ScanPanel 10 x 3 ml Procedur Följ noggrant proceduren. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering serum eller plasma från erytrocyterna i provet. När prov har tagits i rör icke innehållande antikoagulantia skall serumet åter centrifugeras i 1500 g under 10 minuter. a) Bered en suspension erytrocyter om de inte är klara för användning Autokontroll : Överför 1 ml ScanLiss i ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl av provets erytrocyter (autokontroll). Blanda. b) Metod 1. Märk gelkortet eller kortets mikrorör (beroende på det antal testerytrocyter som används med provet) med provnamn eller nummer; märk testerytrocyten som ska överföras för varje mikrorör. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje Eryscan eller ScanCell eller ScanPanel erytrocytsuspension eller den erytrocytsuspension som beretts enligt 1- a) till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl plasma eller serum till de mikrorör som korresponderar till det prov som testas. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 64

5 4. Inkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. 2. Korstest Kontroller Positiv kontroll (känt serum innehållande minst en antikropp som kan detekteras med Coombs teknik) och negativ kontroll (känt serum som ei innehållande någon antikropp), IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi. Procedur Följ noggrant proceduren. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering serum eller plasma från erytrocyterna i provet. När prov har tagits i rör som icke innehållande antikoagulantia skall serumet åter centrifugeras i 1500 g under 10 minuter. a) Bered en/flera suspensioner från erytrocytdonatorer För varje givare : Överför 1 ml ScanLiss till ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl av erytrocytpelleten (givarerytrocyter). Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Märk gelkortet eller kortets mikrorör med mottagarens namn eller nummer och med korresponderande givares nummer. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje erytrocytsuspension till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl av mottagarens plasma eller serum till respektive mikrorör. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 4. Inkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. 3. Fenotypning Kontroller Positiva och negativa kontroller: erytrocyter kända som positiva och negativa för det antigen som testas tillsammans med provet. 65

6 IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi Provkontroll (endast provets erytrocyter). Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material Reagens från Bio-Rad korresponderandet till det studerade antigenet. Procedur Följ noggrant proceduren. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering (2 000 g x 2 minuter) plasma från erytrocyterna i provet. a) Bered en suspension erytrocyter För varje prov : Överför 1 ml ScanLiss till ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl av provets erytrocytpellet. Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Identifiera för varje prov ett mikrorör med namn eller nummer på det korresponderande provet och ID-nummer för det serumtest som används, samt ett mikrorör med namn eller nummer på kontrollprov. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje erytrocytsuspension till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl av serumtestet till avsedda mikrorör (med undantag för de mikrorör som används som kontrollprov). Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och serumtest överskrida 10 minuter. 4. Inkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. VII - RESULTAT OCH TOLKNING Närvaro av agglutinat, på ytan av, eller i, gelen, eller hemolys i mikroröret påvisar ett positivt resultat. En pellet av erytrocyter i botten av mikroröret och frånvaron av hemolys påvisar ett negativt resultat. Resultaten kan endast utvärderas om de kontrollerna ger förväntade resultat. 66

7 1. Screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt- antikroppar Ett negativt resultat (ingen agglutination och ingen hemolys) i varje mikrorör indikerar att det serum eller plasma som testats inte innehåller antikroppar korresponderande till de antigen som finns närvarande på testerytrocyterna och som är detekterbara med den metod som används. Ett positivt resultat (agglutination och/eller hemolys) i minst ett av mikrorören indikerar närvaro av en eller flera antikroppar i det serum eller plasma som testats. Identifiering av antikropparna måste därefter utföras. En positiv reaktion i autokontrollröret kan indikera närvaro av en autoantikropp. Om, i tillägg till den positiva autokontrollen, minst en testerytrocyt visar agglutination skall möjligheten för mixad autoantikropp/alloantikropp tas under övervägande. Enbart de antikroppar som korresponderar till antigen närvarande på testerytrocyterna kan detekteras. Under identifieringen gör den jämförande analysen mellan positiva och negativa reaktioner, som observeras för varje testerytrocyt i den panel som används, det möjligt att karakterisera specificiteten för antikroppen(-arna) närvarande i det testade serumet (eller plasman). Detta kan göras med hjälp av masterlistan som medföljer panelen. 2. Korstest Ett positivt resultat (agglutination och/eller hemolys) påvisar inkompabilitet mellan mottagarens serum eller plasma och givarens erytrocyter. 3. Fenotypning Se bipacksedeln till det serumtest som används. Resultaten är endast giltiga om kontrollprovet är negativt. VIII - PRESTANDA 1. Screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt- antikroppar Prestandan utvärderades på 1086 patienter och visade en bra balans mellan sensitivitet och specificitet. Varje resultat har jämförts med resultat från immunoadherens- eller gelfiltreringstekniker. Applikationen gör det möjligt att detektera en human anti-rh1(d) koncentration motsvarande 20 ng/ml. Specificiteten i en oselekterad patientpopulation var 99,6 %. Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. 67

8 2. Korstest Resultatutvärderingen gav värden överensstämmande med den gelfiltreringsteknik som användes som referens Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. 3. Fenotypning Se bipacksedeln till det serumtest som används. BEGRÄNSNINGAR Abnormala resultat kan orsakas av : bakteriell eller kemisk kontaminering av serum, plasma, erytrocyter eller utrustning. medicinering eller sjukdom hos patienten ledande till korsreaktion. användning av en icke rekommenderad suspensionsvätska till de röda erytrocyterna. ofullständig resuspension av erytrocyter. en erytrocytsuspension avvikande från den rekommenderade. hemolys av prov- eller testerytrocyter. närvaro av fibrin (en kompakt pellet av celler i botten av mikroröret tillsammans med ett tunt, rosa band, skapad av erytrocyter som kvarhålls av fibrinrester, på toppen av gelen). kontaminering mellan mikrorören. användning av andra procedurer än den ovan beskrivna. Under licens frå DiaMed SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 68

9 IX - LITERATURE 1. Löw B., Messeter L. : Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974;26: Kankura T., Kurashina S., Nakao M. : A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974;83: Rouger Ph., Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Engelfriet C.P., Overbeeke M.A.M., Voak D. : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol2: Lapierre Y., Rigal D., Adam J. et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Bromilov I.M., Adams K.E., Hope J., Eggington J.A. and Duguid J.K.M. : Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch., Cartron J.P., Rouger Ph. : Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C., Quillet P., Baufine-Ducroq H. : Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50: Burin des Rosiers N., Nasr O. : Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69: Issitt PD. : Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.

10 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2009 Fax.: Code: