Centrifugering av lipemiska prover Filtrering av prover för kreatininoch ammoniumjonmätning vid höga bilirubinhalter Teresia Langvad, Sjukhuskemist Klinisk kemi, Labmedicin i Region Skåne 2018-11-16 1 Klinisk kemi i Region Skåne 2 1
Klinisk kemi i Region Skåne 3 Interferens av lipider (0,5 1% av alla prover) Interferens av bilirubin (sällsynt) 4 2
Lipidinterferens (Roche) analyser som lipidcentrifugeras Analys L-indexgräns ALAT 150 ALP 2000 ASAT 150 Bilirubin 1000 Bilirubin, konjugerat 1000 Ca 1000 CK 1000 CKMB 1500 Fosfat 800/1250 1 Glukos 1000 GT 700/1500 1 Järn 1500 Kreatinin 2000 LD 900 Natrium, Kalium, Klorid 2000 Pankreasamylas 600/1500 1 Urat 1500 Urea 1000 1) c701/c501 5 6 3
Klinisk nytta och svarsrutin Frekvens Oktober 2018: 80 prover centrifugerade (1 miljon) Svarsrutin Resultat plus kommentar Provet har behandlats pga hög lipidhalt 7 Filtrering vid bilirubininterferens 8 4
Bilirubinkänsliga analyser P-Kreatinin (I-index <15) P-Ammoniumjon (I-index <10) 9 P-Kreatinin Filtrering av kreatininprover med hög bilirubinhalt har tillämpats sedan 2014 Frekvens 2017: 1055 prover centrifugerade (1,1 miljon) Svarsrutin Resultat plus kommentar Plasma ultrafiltrerad pga hög bilirubinhalt 10 5
P-Ammoniumjon Ammoniak bildas vid nedbrytningen av kvävehaltiga substanser, främst aminosyror Produktion sker i magtarmkanalen och elimineras via ureabildning i levern Överskott av ammoniumjon är giftigt för CNS Indikation: Hos barn där man misstänker defekter i omsättningen av urea och aminosyror, nedärvda eller som följd av leverskada Vid misstanke om leverencefalopati, hos vuxna med långt gångna leversjukdomar Levercirros 11 P-Ammoniumjon Antal analyser 2017: 1153 Hemolys 1 % Ikteri 4 % Lipemi 4 % Övrig interferens 1 % 12 6
P-Ammoniumjon studie Målsättning: Att kunna besvara ammoniumjonprover med hög bilirubinhalt 13 P-Ammoniumjon studie 1: Undersöka om filtrering påverkar ammoniumjonnivån i provet. Jämförelse av resultat före och efter filtrering av prover. Prover med såväl normala som patologiska nivåer av ammoniumjon. 14 7
Försök 1: Före och efter filtrering Resultaten från analys före och efter filtrering visar god överensstämmelse. Något lägre resultat efter filtrering. Kunde notera att några prover med Abs-larm kunde analyseras efter filtrering. Prov Ammoniumjon före UF Ammoniumjon efter UF 1 37 40 2 34 28 3 35 33 4 28 26 5 36 31 6 Abs-larm 42 7 31 40 8 44 44 9 49 42 10 47 43 11 Abs-larm 296 12 450 439 13 Abs-larm 418 14 426 411 15 443 432 16 296 286 17 337 321 18 291 279 19 439 422 20 381 370 15 P-Ammoniumjon studie 2: Undersöka om hög nivå av bilirubin påverkar filtreringsförfarandet. Jämförelse av resultat före och efter filtrering av prover med tillsats av bilirubin. 16 8
Tillsats av bilirubin Ammoniumjonhalten före och efter bilirubintillsats och filtrering Provberedning: 1. Bilirubinlösning (till 10 prover): a. Löste 6 mg bilirubin i 100 µl dimetylsulfoxid b.tillsatte 200 µl 0,1 M natriumkarbonatlösning 2. EDTA-rör (7 ml), 5 patientprover tagna samma dag och 5 prover som var tagna dagen innan. Detta gav prover med normala respektive förhöjda ammoniumjonhalter. 3. Rören centrifugerades och plasman skiljdes av. Vardera av de 10 plasmaproverna delades i två alikvoter (1 och 2). 4. Från varje alikvot 1 överfördes 950 µl till ett nytt rör. Till varje rör sattes 30 µl av bilirubinlösningen (blandades väl). Därefter tillsattes 20 µl 0,1 M HCl till varje rör och lösningen blandades. Alikvot 2 lämnas obehandlad. Korrigering för utspädningseffekten görs i efterhand. 5. Analyserade ammoniumjon, bilirubin, konjugerat bilirubin samt index. 17 Försök 2: Före och efter tillsats av bilirubin och filtrering Resultaten från analys före och efter filtrering visar god överensstämmelse. Något lägre resultat efter filtrering av prover med normala bilirubinhalter. Efter filtrering av prover med bilirubintillsats ses däremot högre nivåer jämfört med före filtrering. Alikvoter utan tillsats Alikvoter med tillsats av bilirubin Före filtrering Efter filtrering Före filtrering Efter filtrering Prov AMM BIL KBIL I-index AMM BIL AMM BIL KBIL I-index AMM BIL 1 67 4 4 1 62 0 >Abs 765 >Abs 59 84 0 2 67 3 3 0 65 0 >Abs 754 >Abs 55 91 0 3 62 15 6 1 57 0 >Abs 821 >Abs 61 72 0 4 55 48 3 1 60 0 >Abs 785 >Abs 57 87 0 5 103 5 4 1 95 0 >Abs 818 >Abs 58 114 0 6 95 3 3 0 89 0 >Abs 793 >Abs 56 108 0 7 203 19 14 1 181 0 >Abs 798 >Abs 55 219 0 8 102 10 7 1 98 0 >Abs 835 >Abs 61 119 0 9 76 7 5 1 80 0 >Abs 843 >Abs 61 104 0 18 9
Slutsats studie P-Ammoniumjon Resultaten blir något lägre efter filtrering jämfört med före. Överensstämmelsen bedöms vara god. Efter filtrering av prover med bilirubintillsats ses däremot högre nivåer jämfört med före filtrering. Överensstämmelsen bedöms vara tillräckligt god för att kunna lämna ett svar i form av en kommentar med det uppmätta värdet angivet i kommentarstexten: Plasma ultrafiltrerad p g a hög bilirubinhalt vilket medför att resultatet har större osäkerhet än normalt. Det uppmätta värdet: X µmol/l. Ny provtagning rekommenderas. Hantering med ultrafiltrering av ikteriska prover samt föreslagen svarshantering infördes i rutin i februari (180215). Liknande utvärdering som denna ska göras för lipemiska prover 19 P-Ammoniumjon efter införande av filtrering Mar - okt 2018: 25 prover filtrerade av 680 (4%) För dessa användes den nya svarsrutinen 20 10
Frågor på detta 21 11