En resa genom den hematologiska laboratoriediagnostiken då och nu

Transkript

1 EQUALIS Användarmöte 2010 En resa genom den hematologiska laboratoriediagnostiken då och nu Birgitta Swolin Klinisk Kemi Sahlgrenska Universitetssjukhuset Göteborg

2 Byggde mikroskop 1674 beskrev han erytrocyter B.Swolin 2010

3 EQUALIS Användarmöte 2010 Från Nikon Birgitta Swolin

4 Equalis användarmöte Rudolf Virchow beskrev ett fall med abnorma vita blodkroppar 1847 föreslog han termen leukemia Terminologi diskussion Rudolf Virchow Bennet ansåg leukocythemia 1879 Gowers därefter faställdes leukemia 1877 Paul Ehrlich färgning av blodutstryk B.Swolin

5 EQUALIS Användarmöte 2010 Progressive Perniciös Anemi beskrev A. Biermer G.Whipple blodtappade hundar bättre av leverdiet G. Minot, W. Murphy gav patienter t rå ålever- fick retikulocytos 1934 Whipple, Minot, Murphy fick Nobelpris 1955 D. Crowfoot-Hodgkin, molekylära strukturen på B12- Nobelpris Morfologi blev och är viktig tal analys av B12 med grönalg geuglena gracilis RIA R-bindarproteiner Idag analys av metaboliter S-metylmalonat och homocystein Birgitta Swolin

6 EQUALIS Användarmöte 2010 UTVECKLING Benign och malign hematologi Metoder Instrument Reagens Dator program Birgitta Swolin

7 EQUALIS Användarmöte 2010 METODER - Cellräkning - Morfologi cytokemi - Immunofenotypning Järnfärgning - Cytogenetik FISH - Molekylärbiologiska - In vitro odling - Kemiska analyser Birgitta Swolin

8 EQUALIS Användarmöte 2010 INSTRUMENT -Mikroskop Foto, Fluorescense -Cellräkning Burkerkammare, k Flödescytometrar -FACS -Karyotypering -PCR - Microarray - Datorbearbetning b Birgitta Swolin

9 Birgitta Swolin

10 EQUALIS användarmöte 2010 Differentialräkning pågår med Diffmaster Birgitta Swolin

11 EQUALIS Användarmöte 2010 Cellräkning - Mikroskop Hemocytometer (Bürkers) kammare Price Jones kurva varje cellslag infärgas - Centrifug EVF tal Impedance mätning Wallace Coulter - Ljusspridning - Technicon International, Hemalog tal Ljusspridning + enzymcytokemi, Technicon H6000, Leukocyt- differentialräkning, Myeloperoxidasbrist - Laserstråle, Ortho Instruments Flödescytometri idag ca 20 parametrar Birgitta Swolin

12 EQUALIS Användarmöte 2010 HEMOLYS Hemoglobinopathier idag ca 1300 varianter Beta-globin vanligast Erytrocyt-enzymbrister bi alla erytrocyt enzymer Ernst Beutler Erytrocytmembran-defekter y Immunologiska orsaker Sir Dacie Birgitta Swolin

13 EQUALIS Användarmöte 2010 REAGENS Kommersiellt tillgängliga - Antikroppar för immunofenotypning - Prober för FISH analyser Birgitta Swolin

14 EQUALIS Användarmöte 2010 French, American and British Cooperative Group FAB klassifikation start 1976,-1986 Morfologi - Cytokemi Leukemi > 30% blaster WHO klassifikation 2001, 2008 Leukemi >20% blaster Birgitta Swolin

15 2001, 2008 WHO klassifikation KRAV Klinik Morfologi- Cytokemi Immunofenotypning Cytogenetik B.Swolin 2010

16 EQUALIS Användarmöte 2010 Immunofenotypning Immunocytokemi på benmärgsglas en antikropp - mikroskopi k i Flödescytometri < >celler olika fluorokromer upp till 6 färger Birgitta Swolin

17 EQUALIS Användarmöte 2010 Immunofenotypning Från WHO 2008 Birgitta Swolin

18 EQUALIS användarmöte 2010 Bandningsteknik ikgav varje Kromosom unikt mönster Q-band L. Zech och T Caspersson Kromosom 5 Birgitta Swolin

19

20 Promyelocytleukemi PML-RARa fusion t(15;17) Krav på snabb diagnos och behandling Risk för DIC B.Swolin 2006

21 B.Swolin 2006

22 EQUALIS användarmöte 2010 WHO 2008 Akut myeloisk leukemi - Med specifika kromosomavvikelser t(8;21) RUNX1-RUNX1T1 5% inv(16) t(16;16) CBFB-MYH11 5-8% t(15;17) PML-RARA 5-8% t(9;11) MLLT3-MLL 2% vuxna 9-12% barn t(6;9) DEK-NUP214 0,7-1,8% inv(3) t(3;3) RPN1-EVI1 1-2% t(1;22) RBM15-MKL1 MKL1 <1% - Gen mutationer KIT, FLT3-ITD, NPM1, WT1, ERG - AML med Myelodysplasi relaterade förändringar bl a kromosom 5 och 7 avvikelser - Terapi relaterad - AML med minimal differentiering - AML med mognad - Akut myelomonocytleukemi >20% monocytära celler - Akut monoblast leukemi - Akut monocytleukemi - Akut erytroleukemi >50% erytroblaster >20% av icke erytroida - Akut megakaryoblastleukemi - Akut basofil- leukemi - Akut panmyelosis me myelofibros -Myeloid sarkom B.Swolin

23 EQUALIS Användarmöte 2010 Akut myeloisk leukemi Från WHO 2008 Birgitta Swolin

24

25 CMPD In vitro koloni odling Clonogen assay 3 veckors odling 37 o C Methylcellulosa Tillväxtfaktorer 5% CO 2 Antal kolonier räknas BFU-E =Burst forming unit- Erytroida CFU-GM= Colony forming units - Granulocyte- Macrophage B.Swolin 2004

26 Hematopoetiska kolonier Granulocytkoloni Erytrocytkoloni Makrofagkoloni Identifiera faktorer som stimulerar eller inhiberar stamcellernas funktion Ex.Navelsträngsblod, bedöma stamcellernas funktion före transplantation B.Swolin

27 EQUALIS användarmöte 2010 Case NO L G 5- årig pojke Vid inkomsten: trött, Hb 84 g/l; LPK 154 x10 9 /L; TPK 78 x10 9 /L Benmärg : blaster 91%, Immunofenotypning: CD2+, CD7+, CD3-, Aberrant CD13+ DNAIndex 0,99 Karyotyp incl. SKY 46,XY,del(6)(q12q22),der(9)t(9;13)(p24;q21.3)[25] 22) d (9) (9 13)( )[25] /47,idem,+mar[2] /46,XY [5] FISH påvisade förlust av en CDKN2A/p16 signal i 50% av interfasceller Single Nucleotid Polymorphism SNP-array del(6q)(q12q22) och del(9p)( p24p21)

28 Bone marrow

29 CD2+, CD7+, Aberrant CD13+ T-ALL

30 NO p16 förlust 2G1O 50% 46,XY,del(6)(q12q22),der(9)t(9;13)(p24;q21.3)

31 NO SKY: 46,XY,del(6)(q12q22),der(9)t(9;13)(p24;q21.3)

32 NO del(6)(q12q22) del(9)(p24p21) p )

33 Chiaretti S. et al Blood 2004, 103;

34 EQUALIS Användarmöte 2010 Kvalitetsarbete- Standardisering 1963 IX Congress of European Society of Hematology Symposium Erythrocytic methods and their Standardization 1966 bildades ICSH International Council for Standardization di ti in hematology 1968 NCCLS National Committee for Clinical Laboratory Standards har ersatts av 2005ca CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute EQALM European Committee for External Quality Assurance in Laboratory Medicine EQUALIS Birgitta Swolin

35 EQUALIS Användarmöte 2010 EQUALIS hematologiska kvalitetsprogram Material för blod kvantitativ Hb, cellantal Jämförelse cellräknare Rekommendation av antikoagulantia i blodrör Rekommendation att poly-mono räkning utgår Blodutstryk för leukocytdifferentiering och bedömning Rekommenderad diff standard Nomenklatur ex. lymfocyter variantformer EQUATOR internetbaserat harmonisera morfologi Användarmöten med tema Morfologisk Examination för harmonisering Nordiskt samarbete NORIP, Postanalytisk bedömning Birgitta Swolin

36 B Erytrocyter t NORIP +/- 2% B-Erytrocyter 2004 Instrument B-Erytrocyter 2005 Instrument 4 4 Avvikelse% ,0 4,0 5,0 6,0 Utskicksmedelvärde (x 10^9/L) ABX Micros CRP Advia 120 Cell-Dyn Cell-Dyn 4000 Coulter Micros/Advia Sw elab Sysmex Avvikelse% ,0 4,0 5,0 6,0 Utskicksmedelvärde (x 10^9/L) ABX Micros CRP ADVIA 120 Cell-Dyn Cell-Dyn 4000 Coulter Micros/Advia Sw elab Sysmex

37 Målsättning för CellAtlas Equator projekt 1. För personal vid laboratoriet Säkra och förbättra kompetensen 2. Standardisering av proceduren i bruk gemensamt system av nomenklatur och väl definierade termer tolkningar gjorda av BManalytiker och läkare

38

39 EQUALIS Användarmöte 2010 FRAMTIDEN -Morfologin en hörnsten, fortfarande lång tid Fortsatt metod-instrument utveckling -Klasser av Leukemier och MDS, detaljrikare - Minimal Residual Disease, högre krav - Genkartläggning g förbättras - Stamcellskunskap förbättras - Mikromiljöns betydelse, ökad förståelse - Terapi inkl Transplantation, mer specifik Telemedicin, utökad tillämpning Birgitta Swolin

40 Claude Monet: Impressions, Sunrise 1872 Le Havre harbor, France