Konfirmation av HIV och HTLV Sören Andersson Professor, prefekt, överläkare Institutionen för medicinska vetenskaper Örebro universitet & Laboratoriemedicin, Region Örebro län
Diagnostiska principer HIV & HTLV Screening Enkel, storskalig, billig [Enzyme Immunoassay (EIA, ELISA etc)] Konfirmation Avancerad, detaljerad, kostsam [Western blot, Line immunoassay, PCR]
Screeningmetoder HIV kombination antikropp/antigen HTLV endast antikroppar
HIV-1 Western blot
Inno-LIA HIV I/II score
Resultat Inno-LIA HTLV Synliga band Resultat Inga synliga band Negativt för HTLV-antikroppar Ett synligt band ( +/-) - p19 I/II eller p24 I/II eller gp46 I/II Negativt för HTLV-antikroppar - gp 21 I/II Indeterminant Två synliga band ( +/-) - Exklusive gp21 Indeterminant - Inklusive gp21 Positivt för HTLV-antikroppar Tre eller fler band ( +/-) Positivt för HTLV-antikroppar
HIV konfirmering 2015 Av 12 lab knutna till Equalis använder 10 Inno-LIA och 2 Geenius
Geenius HIV 1/2 confirmatory system (BIO RAD 2015). 9 HIV-2 (2 dubbelinfektion HIV-1 och HIV-2) alla korrekt detekterade, men relativt hög korsreaktivitet med HIV-1?
Geenius HIV-1/2 confirmatory assay Konfirmering och differentiering mellan HIV-1 och HIV-2 Rekomb & syntetiska peptider 20-30 minuter Serum, plasma, helblod
WHO rekommendationer för HIVkonfirmering Prevalens <5% - tre sekventiella tester, helst kombotest (ag/ak) först Prevalens >5% - två sekventiella tester Testerna ska helst ha olika principiell uppbyggnad olika antigener Consolidated Guidelines on HIV Testing Services. WHO 2015
WHO rekommenderad HIV-teststrategi för lågprevalenta områden (<5%) WHO 2015
HIV kombotest Antigen vs antikroppar måste utredas - Antigentest - PCR (NAT)
AmpliSens HCV/HBV/HIV-FRT realtime PCR Multiplex Kvalitativ detektion av blodburna virus Vävnadsdonation, t ex bendonatorer SoS föreskrift om 180 dagars karantän Nationellt initiativ
Analysens känslighet (Amplisens multiplex) IU/mL Ct HBV-DNA 263 000 11,77 Sp 1/10 26 300 15,04 1/100 2630 18,11 1/1000 263 22,01 1/10 000 26,3 24,02 1/10 5 2,6 27,71 1/10 6 0,26 29,71 1/10 7 0,026 Neg 1/10 8 0,0026 Neg c/ml ct HIV-RNA 1 500 000 Sp 1/10 150 000 20,4 1/100 15 000 23,67 1/1000 1 500 26,26 1/10 000 150 29,07 1/10 5 15 30,53 1/10 6 1,5 31,45 1/10 7 0,15 Neg IU/mL Ct 453000 HCV-RNA 0 Sp 1/10 453000 14,92 1/100 45300 18,77 1/1000 4530 21,41 1/10000 453 24,33 1/10 5 45,3 27,28 1/10 6 4,53 29,05 1/10 7 0,453 Neg
HCV NIBSC 06/102 Dilution Quantity IU/mL Ct 1/10 1 26 000 19.25 1/10 2 2600 22.42 1/10 3 260 25.75 1/10 4 26 27.98 1/10 5 2,6 30.78 1/10 6 0,26 Negative HBV NIBSC 10/264 Dilution Quantity IU/mL Ct 1/10 1 85 000 18.80 1/10 2 8500 22.83 1/10 3 850 25.43 1/10 4 85 28.83 1/10 5 8,5 29.62 1/10 6 0,85 31.05 NIBSC WHOstandards HIV NIBSC 10/152 Dilution Quantity IU/mL Ct 1/10 1 18 500 23.95 1/10 2 1850 26.27 1/10 3 185 29.56 1/10 4 18,5 31.04 1/10 5 1,85 Negative 1/10 6 0,185 Negative
Analysen infördes sept 2013 EDTA-plasma, minst 2 ml plasma. Skickas inom 48 timmar, vanlig post. Om provet centrifugeras och plasma avskiljes kan det stå i kyl upp till 5 dygn, skickas med vanlig post. Om längre förvaring fryses plasman i -70 C, skickas fryst. Analys utförs c:a 1 gång per vecka (vanligen onsdag) Svaras Negativ om samtliga agens är ej detekterbara, Positiv, med uppgift om agens om reaktiv. Papperssvar. Remiss finns att hämta: http://www.orebroll.se/filessv/uso/kliniker_enheter/laboratoriemedicin/provtagningsanvisningar /Remisser/AnabestSpecialus.pdf Rör märkes med personnummer, gärna streckkod.
DxN VERIS System (Beckman Coulter) Helautomatisk PCR för kvantitativ bestämning av HIV RNA HCV RNA HBV DNA CMV DNA Kan stå på bana Utvärderas nu i Örebro
Hologic Panther Gen-Probe GC HPV Chlamydia HIV
Referensdiagnostik för HLTV i Örebro 2012-15 Totalt antal prover 440 Negativa 291 Positiva 72 HTLV-1 60 HTLV-2 8 Ej typbara 4 Ej bedömbara (ID) 136
Ej bedömbara (indeterminanta) HTLV som följts upp Minst ett nytt prov 1 mån - > 1 år 27 individer Alla testade serologiskt, 15 med PCR Ingen blev positiv Oförändrat serologiskt PCR 10 negativa Negativa serologiskt Endast serologi 4 PCR + serologi (neg) 5 18 individer 9 individer
Prestanda i HTLV-diagnostiken Antal testade per år (ca) Nya blodgivare 40 000 IVF-utredningar 10 000 Klinik, övr 5 000 Totalt 55 000
Prestanda i HTLV-diagnostiken Ca 100 st ej bedömbara per år av ca 55 000 testade Specificitet 99,8% Positivt prediktivt värde 17% (andelen sant positiva av de som testats positivt i screening)
HTLV ej bedömbara Av prover skickade för konfirmering till Universitetssjukhuset, Örebro 80 70 60 50 40 30 End gp21 Alla med gp21 Tot ej bedömbara 20 10 0 2012 2013 2014 2015 Totalt
Samtliga ej bedömbara HTLV-prover 2012-15 Endast Alla med Ogiltiga gp46 + Gp46 + gp46 + gp21 + p19 + Summa ej gp21 gp21 Buffertband kontrollband gp21 p24 p19 p19 gp46 p24 bedömbara 2012 5 7 2 2 16 2013 9 10 2 2 1 1 1 26 2014 15 17 1 1 2 36 2015 22 26 3 2 4 1 58 Totalt 2012-15 51 60 4 4 2 2 4 7 1 1 136 Utreds vidare i ett studentprojekt vt 2016
HTLV PCR Internationellt referenslab: Imperial College at S:t Mary s Hospital, London (Prof Graham Taylor) Filterpapper Kvalitativ och kvantitativ Typning (HTLV-1 resp 2) I Örebro satt upp en PCR på digital droplet PCR plattform 2015 Kvantitativ (och kvalitativ) Typning Kvantifiering utan standardkurva Utbyte London/Örebro för kvalitetssäkring
Sammanfattning Enklare robusta metoder Automation Multiplex