Kliniskt forskningscentrum Laborativ verksamhet
Vid Kliniskt forskningscentrum (KFC) finns möjlighet att få laborativ hjälp i olika forskningsprojekt samt möjlighet för egen laborativ verksamhet. Laboratoriet på KFC är en resurs för all forskning i Örebro läns landsting dit alla idéer om nya forskningsprojekt välkomnas. Vi försöker tillgodose alla projekt som kan tänkas utföras på ett kliniskt forskningslaboratorium med inriktning mot biokemi, cellodling, flödescytometri, histologi, immunologi, mikrobiologi, molekylärbiologi och morfologi. Jan Källman Forskningschef
Molekylärbiologi Polymerase Chain Reaction (PCR) är en användbar teknik för att framställa stora mängder av den speciella DNA-sekvens man är intresserad av. Mikroarraytekniken har utvecklats under senare år. Metoden använder en glasyta försedd med tusentals små DNA-bitar som representerar gener från människa eller andra organismer. Uttrycket av alla dessa gener i cell- eller vävnadsprover kan analyseras samtidigt. Tekniken har stor potential för att bland annat identifiera gener involverade i olika sjukdomsprocesser. Pyrosekvensatorn är en teknik för att sekvensera DNA från många prover samtidigt. Tekniken kan utföra automatiserad bestämning av mutationer och kombinationer av mutationer. För närvarande används pyrosekvensatorn både i forskning och diagnostik på universitetssjukhuset. Exempel på detta är molekylärgenetisk diagnostik av laktatbrist och analys av muta- tioner i K-ras genen vid pankreastumörer.
Flödescytometri Flödescytometri är en teknik som gör det möjligt att studera cellers storlek, komplexitet och uttryck av olika proteiner. Med en hastighet av 15 000 celler/sekund ger tekniken även möjlighet att sortera ut celler med god viabilitet och renhet. I ett omfattande forskningsprojekt kring akut leukemi studeras cancerceller som överlever cellgiftsbehandling och utvecklar recidiv som är mycket svåra att bota. För att kunna studera de överlevande cancercellernas egenskaper sorteras dessa ut med hjälp av flödescytometri. Målsättningen är att skapa effektivare behandlingsmetoder. Ett stort antal patienter har under några somrar smittats med tularemibakterien, harpest. De diagnostiska tester som finns tillgängliga är inte helt tillförlitliga. KFC har gjort lyckade pilotförsök med hjälp av flödescytometriska metoder där man kan analysera upp till sex olika signalproteiner vid samma analystillfälle.
Mikroskopi Konfokalmikroskopet ger mycket hög upplösning och är speciellt användbart vid studier av tjocka preparat där det är svårt att urskilja en skarp bild. I och med att bilderna kan samlas direkt i datorn är det möjligt att ta en serie bilder på olika nivåer i preparatet och sedan bygga ihop det till en 3-dimensionell bild som är skarp på alla plan. Konfokalmikroskopet används bland annat för att identifiera var olika proteiner finns i cellen. Det går att studera levande celler och se hur proteiner förflyttas inom en cell vid till exempel insulinstimulering. Med hjälp av en laserkniv kan man skära ut särskilt identifierade celler för vidare analys med molekylärgenetiska metoder som till exempel polymerase chain reaction (PCR). Fluorescensmikroskopen är försedda med digitala kameror och används bland annat vid ett flertal studier av tumörceller. Möjligheter finns också att exempelvis utföra kvantitativ immunohistokemi. Genom att studera vävnadsprover från bihålan försöker forskare hos oss hitta orsaker till kronisk bihåleinflammation.
Cellodling Cellodling används i flera projekt på KFC. I en studie kring infektioner hos för tidigt födda barn odlas olika sorters lungceller. Dessa utsätts för bakterier isolerade från för tidigt födda barn som fått blodförgiftning. Sedan analyseras cellernas produktion av olika ämnen som ingår i immunförsvaret för att utreda hur olika bakterietyper kan ge upphov till olika sjukdomsförlopp. För att studera sårläkning har vi satt upp en laboratoriemodell där olika hudceller odlas tillsammans. Genom att analysera cellerna med olika metoder hoppas vi bland annat på nya kunskaper om hur kroppen själv kan minska den svåra ärrbildning som ses vid brännskador. Mikroskopisk kolit är en tarmsjukdom som ökar bland befolkningen. För att förstå denna sjukdom bättre odlar vi bindvävsceller från tarm som drabbats av mikroskopisk kolit. Syftet är att med mikroarrayteknik jämföra celler från sjukdomen med normala bindvävsceller. Detta avser att leda till en ökad kunskap om orsakerna till sjukdomen.
Övriga metoder Bioanalyzer är en apparatur som kan kvantifiera samt kvalitetsbestämma RNA, DNA och proteiner. Fördelen med denna teknik är att man endast behöver mycket små mängder material. Ett flertal tekniker, till exempel mikroarrayer, kräver god RNAkvalité varför denna kvalitetsbestämning med bioanalyzer ofta är nödvändig. ELISA-analyser används exempelvis för att mäta antikropps- och proteinnivåer i serum/plasma eller i cellsuspensioner. Avläsning av resultaten sker med hjälp av absorbans- eller fluorescensläsare. Western blot är en metod som identifierar mängden av ett visst protein som finns i ett prov. Även proteinets storlek bestäms. Metoden används till exempel för att undersöka hur mycket av ett protein som produceras av odlade celler. Innan analysen har cellerna manipulerats på olika sätt i syfte att studera hur dessa fungerar.
Läs mer på www.orebroll.se/kfc/lab Du kan också kontakta KFC om du har en projektidé som du vill diskutera eller testa. Tel 019-602 66 63