Molekylär Patologi DNA från vävnad (och celler) Martin Hallbeck Docent. MD. PhD. Klinisk Patologi, Linköping 1970 Lungcancer = DÖD 2 IPASS-studien Probability of PFS 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 Gefitinib EGFR M+ (n=132) Gefitinib EGFR M- (n=91) Carboplatin / paclitaxel EGFR M+ (n=129) Carboplatin / paclitaxel EGFR M- (n=85) EGFR M+ HR (95% CI) 0.48 (0.36, 0.64), p<0.001 EGFR M- HR (95% CI) 2.85 (2.05, 3.98), p<0.001 0.0 0 4 8 12 16 20 24 Months Nature Reviews Cancer 10, 760-774 3 4 2009 361 1
Individualiserad cancerbehandling Målriktade cancerterapier 5 5 6 Basics Morfologi är grunden för all diagnostik Kommer fortsätta vara det Vad patologen kan göra beror på: Tillgängligt material (kvlité / mängd) Frågeställning (remisskvalité) Dialog nödvändig för uppsättande av nya analyser Nature Reviews Cancer 10, 760-774 7 8 2
Vad analyserar vi? (Behandlingsprediktiva markörer) Lungtumörer Hjärntumörer Hur analysera mutationer? Tumörcellernas genom EGFR mutationer Deletioner 1p19q Inte ett rikligt blodprov ALK-EML4 translokalisation Colorektalcancer KRAS mutationer GIST Methylering av MGMT Bröstcancer Erb2 (HER2) status Lymfom / Leukemier Begränsat material = Svårt Tissue is the issue Vem kan man lita på? C-kit och PDGFRA mutationer Sarkom 9 10 Provhantering Kontroll av provkvalité. Tumörcellshalt. Ev. markering av område 11 12 3
Tumörceller Muskel 13 14 Inflammatoriska celler Blodkärl 15 16 4
Lymfkärl 17 18 Användbart material Operationsmaterial Biopsi Multipla? Excisions? (Cytologi) Rikliga nålpassager. TP / Cellpellet Primärtumör / Metastas Förändring över tid 19 20 5
Provhantering DNA extraktion Kontroll av provkvalité. Tumörcellshalt. Ev. markering av område Snittning av vävnad Extraktion av DNA 22 21 22 Provhantering Hur analysera mutationer? Kontroll av DNA kvalité och mängd Direkt Sanger sekvenering PCR + sekvenering Pyrosequencing (Qiagen) ~10-20% StripAssay (ViennaLabs) PCR baserad analys ~5% TheraScreen (Qiagen), kvantitativ RT-PCR ~1-2% Cobas (Roche) Med flera 23 24 6
EGFR wt EGFR muterad (L858R) 25 26 Provhantering Kvalitetssäkring Kontroll av DNA kvalité KVAST dokument Svensk Molekylär Patologi European Society of Pathology, European QA program for KRAS testing PCR baserad analys (TheraScreen, Pyrosequencing, StripAssay) Intern statistik Externt kvalitétsregister Värdering av testresultat i relation till vävnadskvalité, vävnadsmängd, tumörcells halt och DNA utbyte 27 28 7
Framtidens patologi www.liu.se 29 8