FLÖDESCYTOMETRISK ANALYS AV MYELOM MRD MOT ÖKAD KÄNSLIGHET OCH STANDARDISERING

Transkript

1 FLÖDESCYTOMETRISK ANALYS AV MYELOM MRD MOT ÖKAD KÄNSLIGHET OCH STANDARDISERING Jennie Wallander, Kvalitetsansvarig, PhD Sahlgrenska Universitetssjukhuset Klinisk Kemi/Flödescytometri

2 MYELOM PATOGENES *Incidens i Sverige: 600 nya fall / år *Ålder vid diagnos: 72 år (median) *Kronisk sjukdom karakteriserad av okontrollerad, klonal proliferation av plasmaceller i benmärgen. *Obalans i produktionen av immunoglobuliner förändrat Kappa/Lambda ratio. *Expansionen av myelom-celler orsakar: Suppression av övrig hematopoies anemi Hämning av normal immunoglobulin-produktion ökad infektionskänslighet Njursvikt, till följd av ackumulering av cirkulerande, toxiska lätta kedjor

3 MYELOM BEHOV AV FÖRDJUPAD DIAGNOSTIK * Effektivare behandlingar innebär att majoriteten av dagens myelom-patienter uppnår en högre grad av tillfrisknande. * International Myeloma Working Group har definierat patientgrupperna Complete Respons samt Stringent Complete Respons, baserat på behandlingssvar. Complete Respons : 5% plasmaceller i benmärgsaspirat oavsett klonalitet, negativ immunofixering, avsaknad av plasmacytom i mjukvävnad Stringent Complete Respons : Inga klonala plasmaceller i benmärgsbiopsi, normaliserat kappa/lambda ratio * De flesta patienter som uppnått complete response får ändå ett återfall. Behandlingsresistenta, klonala myelom-celler undgår upptäckt med dagens diagnostik. Diagnostik med högre känslighet avseende residual sjukdom, Measurable Residual Disease (MRD).

4 FLÖDESCYTOMETRISK ANALYS AV MYELOM MRD KLINISK RELEVANS..patients in whom at least 30% of gated PCs had a normal phenotype had a significantly longer PFS than patients with less than 30% N-PCs. Patients with detectable neoplastic plasma cells had a median progression-free survival of 20 months...the group of patients with no neoplastic plasma cells have progressed with a median 34.5 months follow-up.

5 FLÖDESCYTOMETRISK ANALYS AV MYELOM MRD MRD - EN PROGNOSTISK MARKÖR Median PFS for those patients who were MRD positive after ASCT was 15.5 months versus 28.6 months in MRD-negative patients. A significant OS advantage was also demonstrable, with a median OS of 59.0 months in MRDpositive patients versus 80.6 months in MRD-negative patients.

6 FLÖDESCYTOMETRISK ANALYS AV MYELOM MRD MOT ÖKAD KÄNSLIGHET OCH STANDARDISERING Riktlinjer Antal Fluorokromer Antal benmärgsceller Känslighet Standardisering 2008 First Generation Flow 2016 IMWG 2017 Next Generation Flow x x /10 4 NEJ 8 5 x /10 5 JA x /10 6 JA

7 FLÖDESCYTOMETRISK ANALYS AV MYELOM MRD HEMMA PÅ FACSlab *ANALYSPROTOKOLL Bulklysering (EUROFLOW MRD SOP) EUROFLOW Myelom MRD 8-färgspanel Minimum 2 x 10 6 analyserade benmärgsceller FACSLyric BV421 BV510 FITC PE PC7 PerCP-Cy5.5 APC APCC750 CD138 CD27 CD56 CD19 CD117 CD81 CD138 CD27 CD56 CD19 cyigκ cyigλ FACSLyric

8 MYELOM MRD GATINGSTRATEGI SINGLETS (FSC & SSC) EXKLUDERA DEBRIS (FSC/SSC) DEFINIERA PLASMACELLER (+CD138high+) DEFINIERA ABERRANTA PLASMACELLER

9 GATINGSTRATEGI (MYELOM MRD-NEGATIV) Tube 1 FSC-H SSC-H FSC-A SSC-A SSC FSC CD138 CD117+ dim CD19dim CD56 CD56+ CD81 CD81dim dim CD27dim CD19 CD117 CD27

10 GATINGSTRATEGI (MYELOM MRD-NEGATIV) Tube 2 CD56 FSC-H SSC-H FSC-A SSC-A SSC FSC CD138 dim CD19dim CD56+ cyigl KLONAL?? Kappa eller Lambda restriktiv? CD19 cyigk (Bilden visar en polyklonal)

11 Patient 1 MYELOM MRD-POSITIV Gejtat på plasmaceller (+CD138high+) Tube 1 CD56 CD56+ CD81 CD117+ CD27dim CD19dim CD19 CD117 CD27 Tube 2 LAMBDAKLONALA CD19dim CD56 CD56 CD56+ cyigl CD19 cyigk

12 Patient 2 MYELOM MRD-POSITIV Gejtat på plasmaceller (+CD138high+) Tube 1 dim CD19dim CD56 CD56+ CD81 CD81dim CD117+ CD19 CD117 CD27 Tube 2 dim CD19dim CD56 CD56+ cyigl KAPPAKLONAL CD19 cyigk

13 FRÅGETECKEN *Standardisering för vår nya flödescytometer FACSLyric? Euroflow har inte etablerat nya SOP:ar för inställning av FACSLyric, d.v.s. den nya typen av flödescytometer som på sikt skall ersätta alla våra FACSCanto II. Preliminär konsekvens: In-house inställning av FACSLyric baserat på Rainbow-beads.

14 LABB-AKTUELLT! VALIDERING AV VÅR MYELOM MRD ANALYS *Känslighet Säkerställa att vi kan detektera extremt låga nivåer av aberranta plasmaceller (20 events) *Specificitet Säkerställa att analysen inte ger falska MRD-positiva eller MRD-negativa resultat.