ABX Pentra HbA1c WB. Klinisk betydelse (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7) Metod (8) Klinisk kemi A11A x 23 ml 1 x 23 ml 1 x 110 ml 2 x 21 ml 1 x 23 ml

Transkript

1 2010/12/06 A93A01052QSV A11A01702 Hemolysate x 110 ml 2 x 21 ml Användningsområde: Diagnostiskt reagens för kvantitativ in vitro-bestämning av procent hemoglobin A1c (%HbA1c) med hjälp av kolorimetri och turbidimetri. Form-0846 Rev.4 Klinisk betydelse (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7) HbA1c har sitt ursprung i den icke-enzymatiska fixeringen av den N-terminala delen av β-kedjan hos hemoglobin A0. HbA1c-nivån är proportionerlig till blodglukosnivån och speglar den genomsnittliga dagliga glukoskoncentrationen under de senaste två månaderna före provtagningstillfället. Nyligen genomförda studier har visat att regelbundna mätningar av HbA1c kan leda till förändringar i behandlingen av diabetes och till förbättrad metabolisk kontroll genom en minskning av HbA1cvärdena. Denna metod för in vitro-diagnostik används således för kvantitativ bestämning av hemoglobin A1c (HbA1c), en markör för diabetes i humant blod. Mätningar som erhålls med denna procedur kan användas för långsiktig diabeteskontroll. Metod (8) HbA1c uttrycks som en procentandel av det totala hemoglobininnehållet. För att kunna bestämma THbkoncentrationer med spektrofotometri, måste de olika formerna av hemoglobin omvandlas till endast en form som har samma absorbansspektrum. De värden för HbA1c och totalt hemoglobin (THb) i µmol som erhålls med testet används för beräkning av HbA1c/ THb-kvoten och de enskilda värdena får inte användas för diagnostisering. Princip (8): Koncentrationerna av HbA1c och totalt hemoglobin mäts och förhållandet anges i procent HbA1c. Fem reagenser används för att bestämma HbA1c i procent: Antibody Reagent (R1) spädd med Diluent I (R5), Agglutinator Reagent (R2), Hemolysis Reagent (R3) och Total Hemoglobin Reagent (R4). Helblodprovet blandas manuellt med Hemolysis Reagent(R3) (1 del prov till 50 delar R3): De röda blodkropparna lyseras och hemoglobinkedjan hydrolyseras genom inverkan av proteas som finns i reagenset. Total Hemoglobin Reagent (R4) används för att bestämma totalt hemoglobin. Metoden baseras på omvandling av alla former av hemoglobin till alkalisk hematin i en alkalisk lösning av icke-jonisk detergent på det sätt som Wolf et al. har beskrivit den ursprungliga proceduren. Reaktionen stoppas genom tillsats av ett blodprov som förbehandlats med Total Hemoglobin Reagent (R4), vilket ger en grönfärgning av lösningen. Omvandlingen av de olika hemoglobintyperna till alkaliskt hematin med ett definierat absorbansspektrum gör det möjligt att beräkna koncentrationen av totalt hemoglobin. Hemoglobinet mäts med en ändpunktsmetod vid 550 nm. Hemoglobinnivåerna är direkt proportionella till en ökning i absorbans. Ett latexagglutinationshämningstest används för att mäta specifikt HbA1c. Ett agglutinin (syntetiskt polymer som innehåller en multipel av den immunreaktiva delen av HbA1c) orsakar agglutination av latexpartiklarna som är klädda med monoklonala (mus)antikroppar som är specifika för HbA1c. Om HbA1c inte förekommer i provet, agglutinerar agglutininet i Agglutinator Reagent (R2) och de med Antibody Reagent (R1) klädda mikropartiklarna. Agglutinationen leder till en ökning av suspensionens absorbans. Förekomst av HbA1c i provet minskar agglutinationshastigheten eftersom HbA1c konkurrerar med Agglutinator Reagent (R2) om mikropartiklarnas antikroppsbindningsställen.

2 Ju större mängd HbA1c som finns i provet, desto lägre blir agglutinationshastigheten. Reaktionen mäts genom absorbans vid 550 nm och agglutinationshastigheten används för beräkning av koncentrationen från en standardkurva. Procent HbA1c beräknas därefter med hjälp av värdena för HbA1c och totalt hemoglobin i µmol. Reagenser är en förpackning som innehåller flera reagenser. Förpackningen innehåller: Reagens 1: Antibody Reagent Reagens 2: Agglutinator Reagent Reagens 3: Hemolysis Reagent Reagens 4: Total Hemoglobin Reagent Reagens 5: Diluent I 1 x 110 ml 2 x 23 ml Antibody Reagent (R1) innehåller: partiklar klädda med antikroppar (mus) mot HbA1c, bovint serumalbumin, buffert, ytaktiva ämnen, konserveringsmedel. Agglutinator Reagent (R2) innehåller: kovalent polymerbindande hapten, bovint serumalbumin, buffert, konserveringsmedel, ytaktivt ämne. Hemolysis Reagent (R3) innehåller: pepsin från svin, buffert, konserveringsmedel. Detta reagens säljs även separat med referensnumret A11A Total Hemoglobin Reagent (R4) innehåller: natriumhydroxid, ytaktivt ämne. Diluent I (R5) innehåller: konserveringsmedel, NaCl. ska användas i enlighet med denna reagensbipacksedel. Om anvisningarna inte följs kan tillverkaren inte garantera prestandan. Hantering 1. Blanda 1 del Antibody Reagent (R1) med 1 del Diluent I (R5) i en MBU-flaska om 100 ml, ref. A11A01759, och häll i en reagensflaska om 15, 10 eller 4 ml. 2. Blanda försiktigt Agglutinator Reagent (R2) genom att vända det och häll det sedan i en reagensflaska om 10 eller 4 ml. 3. Blanda försiktigt Total Hemoglobin Reagent (R4) genom att vända det och häll det sedan i en reagensflaska om 15, 10 eller 4 ml. 4. Placera flaskorna i ett av de tillgängliga områdena. Använd något av följande: en reagensflaska (15 ml) en reagensflaska (10 ml) + en specifik adapter en reagensflaska (4 ml) + en specifik adapter R 4 R 2 R 1 (utspädd) 5. Använd en plastpipett för att avlägsna eventuellt skum. 6. Placera reagensracket kylfacket i Låt reagenserna stabiliseras i det kylda reagensfacket i en timme före användning. Obs! Använd endast den erforderliga mängden och sätt tillbaka reagenserna i förslutna flaskor i kylskåpet omedelbart efter användning. Både prover och kontroller måste spädas 1:51 med Hemolysis Reagent (R3). Blanda försiktigt (undvik skumbildning) och låt stå i fem minuter i rumstemperatur innan testet utförs i instrumentet. Exempel på spädning: 10 µl prov/kontroll µl R3 Proverna måste vara ordentligt homogeniserade före provdragning. Använd omvänd pipettering för prover av helblod. Resultaten från de enskilda metoderna (totalt hemoglobin och HbA1c) ska inte användas separat: endast kvoten HbA1c/THb ska användas. Analyser måste beställas med hjälp av kvoten. HbA1coch THb-analyserna kan inte beställas separat. Kvotformeln måste skapas med hjälp av NGSP-kvoten (se användarmanualen till 400). Kalibrator För kalibrering, använd: Cal, ref. A11A01703 (medföljer ej) 1 x 8 ml + 5 x 2 ml

3 Totalt hemoglobin kalibreras med HbA1c WB Cal (CAL 1) med hjälp av ett målvärde för totalt hemoglobin. Kalibratorer och reagenser är inte satsberoende och de genomgår en intern kvalitetskontroll vid ABX HORIBA Medical. Kalibrering av HbA1c-metoden utförs med hjälp av ABX Pentra Cal, som innehåller sex kalibratornivåer för HbA1c. Dessa kalibreringsprocedurer överensstämmer med NGSP/DCCT-certifieringen. Kalibratorernas placering i kalibratorprovracket: Kalibrator: Cal, ref. A11A01703 Kontroll: Control, ref. A11A01704 Hemolysis Reagent, ref. A11A01730, 1 x 110 ml MBU-flaska, 100 ml, ref. A11A01759 Vanlig laboratorieutrustning. Prov (9) Helblod i EDTA. Stabilitet (10): Vid C: 3 dagar Vid 2 8 C: 8 dagar Vid -20 C: 60 dagar Position 1 : CAL 1 (200 µl) för THb Position 2 : CAL 1 (200 µl) för HbA1c Position 3 : CAL 2 (150 µl) Position 4 : CAL 3 (150 µl) Position 5 : CAL 4 (150 µl) Position 6 : CAL 5 (150 µl) Position 7 : CAL 6 (150 µl) Obs! Placeringen av CAL 1 i position 1 är bara ett exempel, CAL 1 kan också placeras i position 8, 9 eller 10. Kontroll För intern kvalitetskontroll, använd: Control, ref. A11A01704 (medföljer ej) Normal kontroll: 2 x 0,25 ml (frystorkat material) Patologisk kontroll: 2 x 0,25 ml (frystorkat material) Varje kontroll ska analyseras dagligen och/eller efter varje kalibrering. Kontrollfrekvensen och konfidensintervallen bör motsvara riktlinjerna för laboratorier och landspecifika föreskrifter. Resultaten måste ligga inom intervallet för de definierade konfidensgränserna. Varje laboratorium bör upprätta en metod som ska följas om resultaten överskrider dessa konfidensgränser. Material som behövs men ej medföljer Frusna prover ska tinas i rumstemperatur och sedan blandas försiktigt före användning. Blanda blodprover försiktigt omedelbart innan analysen utförs så att reproducerbara THb-resultat säkerställs. Referensintervall (4, 11, 12, 13, 14, 15) Varje laboratorium bör fastställa sina egna referensintervall. Värdena som anges här ska endast betraktas som vägledande. Varje laboratorium ska verifiera att dess standardvärden överensstämmer med NGSP-referensvärdena. Denna teknik har NGSP-certifierats med 4 till 6 % HbA1c som ett standardvärde hos icke-diabetiker med det terapeutiska målet att erhålla värden < 7 %, enligt rekommendationer från ADA (American Diabetes Association). Alla patientresultat ska tolkas mot bakgrund av de kliniska undersökningarna av patienten. Metodens begränsningar (11): De flesta patienter har hemoglobinnivåer på mellan 4,4 mmol/l och 14,4 mmol/l. Specialistpublikationer har emellertid visat att hemoglobinnivåerna för patienter med svår anemi kan underskrida 4,4 mmol/l och att hemoglobinnivåerna för patienter med polycytemi kan överskrida 14,4 mmol/l. Prover från patienter som har dessa symtom måste testas med en annan metod om deras hemoglobinvärden ligger utanför mätområdet. Automatiskt kliniskt-kemiskt analysinstrument: ABX Pentra 400

4 Tillstånd som påverkar de röda blodkropparnas livscykel (som till exempel hemolytisk anemi eller andra hemolytiska sjukdomar, graviditet eller betydande blodförlust etc.) leder till en minskning i exponeringen av dessa celler för glukos och följaktligen till en nedgång i de procentuella nivåerna glykerat hemoglobin (Ghb). Ghb %-resultat är inte tillförlitliga för patienter som lider av kronisk blodförlust och därmed av skiftande erytrocytlivscykler. Prover som innehåller hemoglobin C och S kan leda till en ökning av det förväntade HbA1c-värdet. Prover som innehåller höga nivåer av hemoglobin F (> 15 %) kan dessutom ge HbA1c-resultat som är lägre än de förväntade. Det föreligger ingen interferens med karbamylerat och acetylerat hemoglobin. Det här testet är inte tillförlitligt när det gäller diagnostisering av diabetes (16, 14). Det här testet är inte användbart när det gäller bedömning av daglig glukoskontroll och ska inte användas för att ersätta daglig kontroll av blodglukos (14). Förvaring och stabilitet Skyddas mot extrem värme, ljus och frost. Reagenser i öppnade eller oöppnade förpackningar är stabila fram till det utgångsdatum som anges på etiketten under förutsättning att de förvaras väl förslutna i sina originalförpackningar vid 2-8 C och skyddas mot kontamination. Stabilitet för arbetande reagens (R1+R5): se Prestanda för 400. Analysmetod Testanvisningar för andra automatiska instrument än ABX Pentra 400 kan erhållas på begäran (ej tillgänglig i USA). Skadad förpackning Använd inte reagenset om förpackningen är skadad eftersom det kan påverka produktens prestanda. Avfallshantering Följ gällande föreskrifter. Allmänna försiktighetsåtgärder Detta reagens är endast avsett för yrkesmässig in vitrodiagnostik. Antibody Reagent (R1): Varning: Material av humant ursprung. Behandlas som potentiellt infektiöst. Varje enhet från plasmadonatorer som har använts vid beredningen av denna produkt har testats med en FDA-godkänd metod och befunnits negativ för närvaro av HBsAg, HCV och antikroppar mot HIV 1/2. Eftersom det inte finns någon testmetod som fullständigt kan garantera att hepatit B-virus, humant immunbristvirus (HIV) eller andra infektiösa agenser inte förekommer, ska reagenset, liksom patientproverna, hanteras som potentiellt infektiösa och med vederbörlig försiktighet i enlighet med god laboratoriesed (17, 18). IRRITERANDE ÄMNE. S24: Undvik kontakt med huden. S37: Använd lämpliga skyddshandskar. R43: Kan ge allergi vid hudkontakt. Agglutinator Reagent (R2): IRRITERANDE ÄMNE. S24: Undvik kontakt med huden. S37: Använd lämpliga skyddshandskar. R43: Kan ge allergi vid hudkontakt. Antibody Reagent (R1), Agglutinator Reagent (R2), Hemolysis Reagent (R3), Total Hemoglobin Reagent (R4): Undvik kontakt med ögon, hud och kläder. Tvätta händerna noga med vatten efter hantering av produkten. Får inte förtäras. Diluent I (R5): IRRITERANDE ÄMNE. R36/38: Irriterar ögonen och huden. R43: Kan ge allergi vid hudkontakt. Reagensflaskorna ska endast användas en gång och ska avfallshanteras enligt gällande lokala föreskrifter. Ytterligare information finns i det varuinformationsblad som hör till reagenset. Använd inte produkten om det finns synliga tecken på biologisk, kemisk eller fysisk skada. Prestanda för 400 De prestandadata som anges nedan har fastställts i analysinstrumentet 400. Antal test: 381 tester Stabilitet för arbetande reagens under (R1+R5): Stabiliteten för arbetande reagenser (R1+R5) är 60 dagar om de förvaras i MBU-flaska vid 2 till 8 C efter rekonstituering. Provvolym (efter behandling): Hb: 25 µl/test

5 HbA1c: 3 µl/test Detektionsgräns: Detektionsgränsen har bestämts enligt CLSI (NCCLS), EP17-A-protokollet (19) och uppgår till 1,61 µmol/l (0,42 g/dl). Minsta tolkningsgräns: Minsta tolkningsgräns (MIL) för HbA1c fastställs med hjälp av flera bestämningar av låga provkoncentrationer och uppgår till 0,17 µmol/l (0,05 g/dl). Noggrannhet och precision: Repeterbarhet (precision inom körning) 3 prover med låg, medelhög och hög koncentration och 2 kontroller analyseras 20 gånger enligt rekommendationerna i Valtec-protokollet (20). Medelvärde % HbA1c Variationskoefficient % Kontrollprov 1 4,94 0,88 Kontrollprov 2 10,24 1,33 Prov 1 5,14 0,64 Prov 2 6,97 1,06 Prov 3 9,32 1,16 Reproducerbarhet (total precision) 3 prover med låg, medelhög och hög koncentration och 2 kontroller analyseras med dubbelprover i 20 dagar (2 serier per dag) i enlighet med rekommendationerna i CLSI (NCCLS), EP5-A2-protokollet (21). Medelvärde % HbA1c Variationskoefficient % Kontrollprov 1 4,90 1,79 Kontrollprov 2 9,83 2,23 Prov 1 4,76 1,37 Prov 2 6,75 1,90 Prov 3 9,15 1,44 Mätintervall för metoderna för totalt hemoglobin och HbA1c: Reagenslinjäriteten fastställs i enlighet med rekommendationerna i CLSI (NCCLS), EP6-A-protokollet (22). Låg linjäritet: för totalt hemoglobin: för HbA1c: Hög linjäritet: för totalt hemoglobin: för HbA1c: 1,60 µmol/l (0,42 g/dl) 0,17 µmol/l (0,05 g/dl) 85,00 µmol/l (22,41 g/dl) 10,80 µmol/l (2,85 g/dl) Intervallet för metoden för totalt hemoglobin, i vilken %HbA1c är korrekt, ligger mellan 17,5 till 85,0 µmol/l (4,61 till 22,41 g/dl). Analysen bekräftade ett mätintervall på 4,44 till 16,68 %HbA1c. Proverna ska inte spädas när HbA1c-koncentrationen är högre än den högsta kalibreringspunkten på 10,80 µmol/l (2,85 g/dl). I de fall då HbA1c-koncentrationen är högre än den högsta kalibreringspunkten ska proverna inte spädas. Det är dock möjligt att beräkna lägsta %HbA1c-värde i provet med hjälp av den erhållna THb-koncentrationen, vilket genererar resultatet: Högre än...xxx. Exempel: Om THb-koncentration är 44,0 µmol/l (11,6 g/ dl) är det lägsta %HbA1c-värdet för metoden: - I µmol/l: (10,80)/44,00 x 100 = 20,00 %HbA1c (applicera NGSP korrigeringsfaktor på resultatet = 15,9%). - I g/dl: (2,85)/11,6 x 100 = 24,6 %HbA1c (applicera NGSP korrigeringsfaktor på resultatet = 15,9%). Resultatet för %HbA1c i det här provet är: högre än 15,9%". Korrelation: 120 patientprover (helblod) korreleras med ett kommersiellt reagens som referens i enlighet med rekommendationerna i CLSI (NCCLS), EP9-A2-protokollet (23). Värdena låg mellan 4,51 till 12,56 % av HbA1c. Ekvationen för den allometriska linje som erhölls med proceduren för Passing-Bablock-regression (24) är: Y = 1,10 X - 0,58 (%HbA1c) med korrelationskoefficienten r 2 = 0,9944. Interferenser: Triglycerider: Ingen betydande påverkan har observerats upp till 7 mmol/l (612,5 mg/dl) (som Intralipid, representativ för lipemi). Totalt bilirubin: Ingen betydande påverkan har observerats upp till 561 µmol/l (32,8 mg/dl). Direkt bilirubin: Ingen betydande påverkan har observerats upp till 587 µmol/l (34,3 mg/dl).

6 Askorbinsyra: Ingen betydande påverkan har observerats upp till 3,40 mmol/l (59,8 mg/dl). Labilt Inga interferenser med labilt hemoglobin: hemoglobin. Andra begränsningar anges av Young i form av en lista över läkemedel och preanalytiska variabler som är kända för att interferera med denna metod (25, 26). Kalibreringsstabilitet: Reagenset kalibreras dag 0. Kalibreringsstabiliteten kontrolleras genom analys av 2 kontrollprover. Kalibreringsstabiliteten är 30 dagar. Obs! En ny kalibrering rekommenderas vid byte av reagenssats eller när resultatet av kvalitetskontrollen ligger utanför det intervall som fastställts. NGSP-kvot a : Y = (51800*X )/1000 (%HbA1c) Obs! X = HbA1c/HbT. Resultaten i %HbA1c är baserade på referensmetoden Diabetes Control and Complications Trial (DCCT) och tillämpar följande ekvation vid manuell hemolysmetod: Y = 0,518*(HbA1c/HbT)% +1,824 Denna formel måste introduceras i analysinstrumentet med hjälp av kvotbladet. Mer information om detta finns i analysinstrumentets användarmanual. Programvaruversion: för HbA1c-analys (A1c-H): 5.xx för analys av totalt hemoglobin (THb-H): 5.xx Varning Användaren är skyldig att kontrollera att detta dokument är tillämpligt för det reagens som används. Referenser 1. Mayer TK, Freedman ZR. Protein glycosylation in diabetes mellitus: A review of laboratory measurements and of their clinical utility. Clin. Chim. Acta (1983) 127: Baynes JW, Bunn HF, Goldstein D, Harris M, Martin DB, Peterson C, Winterhalter K. National Diabetes Group; Report of the expert committee on glycosylated hemoglobin. Diabetes Care (1984) 7: Koenig RJ, Peterson CM, Kilo C, Cerami A, Williamson JR. Hemoglobin A1c as an indicator of the degree of glucose intolerance in diabetes. Diabetes (1976) 25: Nathan DM, Singer DE, Hurxthal K, and Goodson JD. The clinical information value of the glycosylated hemoglobin assay. NE J. Med. (1984) 310: McCarren M. DCCT; and it works: Intensive therapy reduces the risk of diabetic eye, kidney, and nerve disease. Diabetes Forecast (1993): Larsen ML, Horder M, and Mogensen EF. Effect of long-term monitoring of glycosylated hemoglobin levels in insulindependent diabetes mellitus. NE. J. Med. (1990) 323: Nathan DM. Hemoglobin A 1c. Infatuation or the real thing? NE. J. Med. (1990) 323: Wolf HU, Lang W, and Zander R. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemoglobin method. Clin. Chim. Acta. (1984) 136: Guder WG, Zawta B. The quality of diagnostics samples. Samples: from the patient to the laboratory. 1 st ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B, (WHILEY- VCH, Darmstadt, Germany), (2001): HORIBA Medical Internal studies. 11. Knowles BJ, Haigh WB, and Michaud GC. A monoclonal antibodybased immunoassay for hemoglobin A 1c. Diabetes (1986) 35 (Supplement: 94A). 12. Sacks DB, Carbohydrates, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE (Elseviers Saunders eds., St Louis, USA), (2006): Goldstein DE, Little RR, Wiedmeyer HM, England JD, McKenzie EM. Glycated hemoglobin: Methodologies and clinical applications Clin. Chem. (1986) 32 (10 Suppl): Burtis CA and Ashwood ER, eds: Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2 nd edition, WB Saunders Company, Philadelphia, PA. (1994): Diabetes Care (2002) 25 (suppl. 1): Ellis G, Diamandis EP, Giesbrecht EE, Daneman D, Allen LC. An automated «high pressure» liquid chromatographic assay for hemoglobin A1c. Clin. Chem. (1984) 30: Occupational Safety and Health Standards: bloodborne pathogens. (29 CFR ). Federal Register July 1, 1998; 6: Council Directive (2000/54/EC). Official Journal of the European Communities. No. L262 from October 17, 2000: a Modifiering från index P till Q: modifiering av kvot enligt den nya NGSP-certifieringen.

7 19. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 20. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Method. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2 (2004) 24 (25). 22. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 23. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 24. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3:

8