Basofil allergenstimulering- CD-sens Anna Nopp, Docent Institutionen för medicin Solna Enheten för klinisk immunologi och allergi Karolinska Institutet Nopp 1
Nopp 2
Sensibilisering Först sedan man kommit i kontakt med ett allergen flera gånger kan man bli sensibiliserad, dvs man får IgE-antikroppar i blod och slemhinnor riktade mot allergenet. Nopp 3
i Sensibilisering Allergen Cytokiner Dendritisk cell Naiv T-cell Th2-cell B-cell IgE-antikroppar Plasmacell Mastceller och basofiler Nopp 4
Epitel Lunga Blod Allergen Kontraktion av glatt muskulatur Vascular permeabilitet Mucus produktion Klåda Tidig fas (vascular) Benmärg Mastceller lymfocyter Sen fas (cellular) Leukocyter Nopp 5
Mastceller Basofiler Nopp 6
Basofiler Basofilerna mognar i benmärgen, cirkulerar i blodbanan och rekryteras ut till vävnaden. Överlever ca 1-2 dygn. Har IgE-receptorer. Aktiveras av allergen. Frisätter histamin, heparin, leukotriener, cytokiner (IL-4) mm. Nopp 7
Vilande basofil Aktiverad basofil IgE-antikropp Histamin CD203c CD63 Nopp 8
Analys av allergenkänsligheten Natriumheparin som antikaogulantia Analys inom 24 timmar Förvaras i kylskåp Transport kan ske i rumstemperatur Nopp 9
100 l blod+100 l allergen/stimuli Inkubering 20 min i +37 o C Placera rören på is i 5 min Tillsätt antikroppar: CD203c-PE CD63-FITC - basofilspecifik markör - aktivitets markör Inkubering i 25 min i +4 o C i mörker Hemolysering av erytrocyter, tvätt och anlays i flödescytometer Nopp 10
Vilande basofil Aktiverad basofil (Uttryck av CD63) Allergen koncentration (SQU/ml) 30 100 300 1000 10000 Nopp 11
% aktiverade basofiler Reaktionsmönster 0 Allergenkoncentration Nopp 12
% CD63-positiva basofiler Basofil allergenkänslighet 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0,1 1 10 100 1000 LC50 = 4,5 SQU/ml 80 % 40 % Allergenkoncentration Nopp 13
CD-sens Ett sätt att ange allergenkänsligheten LC50 inverterat och multiplicerat med 100 (100/LC50) Ju högre CD-sens, desto högre allergenkänslighet Nopp 14
Reproducerbarhet Intra assay CV: 13% Inter assay CV: 5,5% Nopp et al. Allergy 2006;61:298-302 Biologisk variation: 25% Dahlén et al. CEA 2011;41:1091-1097 Glaumann et al, Allergy 2012;67:242-247 Nopp 15
Non responders /Low responders Non-responder: < 5% positiva basofiler ( -Fc RI) - Provet kan inte bedömas Low-responder: 5-16% positiva basofiler ( -Fc RI) - Provet bedöms som pos/neg men CD-sens beräknas inte Nopp 16
Diagnostik Nopp 17
Allergen testade i CD-sens Luftvägsallergen Björk, timotej, katt, hund, häst, kvalster Födoämnen Mjölk, ägg, vete, jordnöt, hasselnöt, kardemumma Läkemedel mm Penicilin, patent blå, fluorescein, NMBA, hexvix, propofol, povidon Övrigt SAE, aspergillus, latex, bi och geting Nopp 18
CD-sens hos allergiker Allergen Antal patienter Geom. medel Björk 37 1 Katt 16 5 Timotej 27 16 Nopp 19
CD-sens CD-sens Korrelation mellan CD-sens och serum IgE-antikroppar 1000 300 100 30 1000 300 100 30 10 3 1 0.3 0.1 0.1 0.3 1 3 10 30 100 300 1000 Absolute IgE ab. conc. (ku A /l) Non significant 10 3 1 0.3 0.1 0.1 0.3 1 3 10 30 100 300 1000 Relative IgE ab. conc. (%) r=0.72, p<0.001 Nopp et al,, Allergy 2006;61:298-302 Nopp 20
Komplement till provokationer Varför? Nopp 21
Utförs på ett fåtal sjukhus lång väntetid Tidskrävande Svåra att urvärdera - påverkas ex. av patientens förväntningar, rädsla, stress Kan ge svåra allergiska reaktioner Nopp 22
Korrelation mellan CD-sens och allergenkänsligheten i målorganet SPT-titrering Nasalprovokation Bronkialprovokation (PD20Ag) Dubbel-blind placebo kontrollerad födoämnesprovokation (jordnöt) Nopp 23
CD-sens och bronkialprovokation 10000 Allergen PD 20 1000 100 10 0.001 0.01 0.1 1 10 Inverted CD-sens r=0.41, p<0.05 Dahlén, CEA 2011;41:1091 03/04/2014 Nopp 24
CD-sens hos astmatiker med hög (A) respektive låg (B) bronkiell hyperreaktivitet A. B. 10000 10000 Allergen PD 20 1000 100 Allergen PD 20 1000 100 10 0.001 0.01 0.1 1 10 Inverted CD-sens r=0,38; p=0,26, n=13 (r=0.88; P<0.0001) 10 0.001 0.01 0.1 1 10 Inverted CD-sens r=0,88; p=0,0001, n=13 (r=0.38; P=0.3) Dahlén, CEA 2011;41:1091 Nopp 25
Jämförelse mellan nasalprovokation och CD-sens CD-sens PNIF <80% 15 minuter Positiv Negativ Positiv 19 2 Negativ 0 5 Glaumann et al, Allergy 2012;67:242-247 Nopp 26
Jämförelse mellan DBPCFC och CD-sens hos jordnötsallergiska barn Positiv DBPCFC Negativ CD-sens Positiv CD-sens Negativ 22 3 0 11 Glaumann et al, Allergy 2012;67:242-247 03/04/2014 Nopp 27
ASIT (allergen specifik immunoterapi) Nopp 28
ASIT Nopp 29
CD-sens och IgG4-antikroppar mot timotej under ASIT Före Underhållsdos Före pollensäsong CD-sens 39 4,2 3,9 IgG4-ab (mg/l) 3,5 44 193 Nopp et al., Allergy 2009;64:811-814 Nopp 30
Xolair (anti-ige) Nopp 31
Humaniserad monoklonal anti-ige antikropp: omalizumab (Xolair) IgE C 3 region Omalizumab Nopp 32
Korsbindning av cellbundet IgE Allergen IgE C 3 Binding site Fc RI receptor Mast cell Nopp 33
%CD63 positive basophils %CD63 positive basophils ASIT Xolair Sample 1 Sample 2 Sample 1 Sample 2 Timothy SQU/ml Cat SQU/ml Nopp 34
CD-sens -lactalbumin Xolair CD-sens casein Xolair Ökad Xolairdos resulterade i negativ CD-sens och inga symtom 1000 10 100 1 10 1 0.1 0.1 0 0.01 0 0 5 10 0 5 10 Months Months Nopp 35
Användningsområden Diagnostik Komplement till provokationer Följa ett förlopp över tid Nopp 36
Tack till alla medarbetare!!! S.G.O. Johansson Caroline Nilsson Gunnar Lilja Susanne Glaumann Lars-Olaf Cardell Barbro Dahlén Jaro Ankerst Reidar Grönneberg Gunilla Hedlin Jon Konradsen m.fl. Nopp 37