Molekylärgenetisk diagnostik inom malign hematologi Linda Fogelstrand Specialistläkare, Docent Klinisk kemi, Sahlgrenska Universitetssjukhuset
Molekylärgenetisk diagnostik inom malign hematologi Diagnostik Prognosbedömning Behandlingsuppföljning Behandlingsstyrande Behandlingsintensitet Riktad behandling
Molekylärgenetisk diagnostik inom hematopatologi Enkel provtagning (benmärg/blod) Oftast celler i lösning Många metoder Ständig utveckling Imatinib BCR-ABL1 mrna standardiserad kvantifiering
Molekylärgenetiska metoder (Cytogenetik (karyotypering) screening klonal avvikelse?) FISH numeriska & strukturella kromosomförändringar, fusioner Allelspecifik PCR återkommande punktmutationer PCR med fragmentanalys insertioner/deletioner klonalitetsassay IG/TCR Sangersekvensering olika mutationer i begränsat område Kvantitativ PCR (DNA/RNA) kvantifiering vid uppföljning NGS mutationsscreening kvantifiering vid uppföljning ddpcr alt till allelspecifik PCR & kvantifiering
Prognosbedömning Risk för återfall Risk för död Nytta av kostsam / riskfylld / riktad behandling Vuxna: Nationella riktlinjer, Svensk Förening för hematologi Barn: Vårdprogram/studieprotokoll, Nordic Organisation for Pediatric Hematology & Oncology (NOPHO) Val av behandling (intensitet > riktad)
Behandlingsuppföljning Detektion av leukemi-/lymfomceller i benmärg/blod 100 Leukemic cells (%) 10 1 0,1 0,01 0,001 MRD-analys Minimal Residual Disease 0,0001 0 50 100 150 200 Time from diagnosis (days)
MRD-analys bygger på att leukemicellerna skiljer sig från normala celler PCR av TCR/Ig oligonukleotider Djupsekvensering / ddpcr av mutationer RT-qPCR av fusionstranskript / muterat NPM1-translript Flödescytometri avseende aberranta antigenuttryck
MRD-analys för behandlingsbeslut Behandlingsrespons behandlingsintensitet Före allogen hematopoetisk stamcellstransplantation prognostisk info; meningsfullt? förebyggande immunmodulering? Monitorering efter allo-hct immunmodulering? Monitorering efter avslutad behandling förhindra morfologiskt recidiv
Molekylärgenetik vid akut myeloisk leukemi (AML) Diagnos (Cytogenetik) FISH (CBFB-MYH, RARA, KMT2A, TP53) Mutation i NPM1, CEBPA? (PCR m. fragmentanalys) Mutation i RUNX1? (NGS) Riskklassificering Ovanstående Mutation FLT3-ITD? (PCR m. fragmentanalys) Behandlingsuppföljning RT-qPCR vid fusionstranskript RT-qPCR/qPCR vid mutation i NPM1 NGS/ddPCR av leukemi-specifika mutationer Cyt Cyt Cyt Allo- HCT FLT3/ IDH inhib?
Molekylärgenetiska markörer vid AML Review on MRD analysis in AML - Grimwade & Freeman, Blood 2014
Stor betydelse av MRD under behandling vid AML: RT-qPCR The AML17 trial - Ivey A et al, N Engl J Med 2016
MRD-vägledd behandling vid AML med t(8;21) Hong-Hu Zhu et al. Blood 2013
Utmaningar med molekylärgenetisk MRD-analys vid AML Väletablerade metoder från Europe against cancer : RT-qPCR RUNX1-RUNX1T1, CBFB-MYH11 Konsensus avseende provhantering, metodval och resultatrapportering saknas Kontrollprogram för kvantifiering saknas endast kvalitativa finns Ett fåtal markörer introduceras i Nationellt VP (RUNX1- RUNX1T1, CBFB-MYH11, NPM1) BCR-ABL1 & JAK2V617F föregångare
Behandlingsvägledning med NGS Myeloida maligniter Amplikonbaserad panel Mutationsscreening >50 gener
Behandlingsvägledning med NGS Akut myeloisk leukemi Diagnos enligt WHO 2016 AML med mutation i RUNX1 Riskklassificering enligt ELN2017 och nästa vårdprogram Högriskmarkörer: TP53, RUNX1, ASXL1 Identifiering av mutationer för skräddarsydd MRD-analys Myeloproliferativ neoplasi (MPN) Myelodysplastiskt syndrom (MDS) Prognos SF3B1 god prognos TP53, EZH2, ETV6, RUNX1, NRAS, ASXL1 dålig prognos MDS/MPN
Sammanfattning Molekylärgenetisk diagnostik nödvändig inom malign hematologi Område under ständig utveckling NGS används som komplement till många andra metoder Genomic Medicine Sweden