ScanGel NEUTRAL Gelkort Gelkort

Transkript

1 ScanGel NEUTRAL Gelkort Gelkort NEUTRAL GEL Omvänd gruppering, screening av oregelbundna Ak, korstest IVD Alla tillverkade och marknadsförda reagens ingår, från mottagande av råmaterial till slutlig marknadsföring av produkten, i ett komplett kvalitetssystem. Varje batch undergår kvalitetskontroll och släpps inte ut på marknaden förrän den följer satta kriterier för acceptans. Dokumentation tillhörande produktion och kontroll av varje enskild batch finns tillgänglig på vårt företag. 63

2 I - TESTETS ANVÄNDNING OCH PRINCIP Detta kort är avsett att användas i fackmässigt och in vitro-diagnostiskt bruk. Testet är utformat för ABO omvänd gruppering,screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt-antikroppar och korstest. I testet kombineras principerna för agglutination och gelfiltrering. Reaktionen erhålls och avläses efter centrifugering av specialtillverkade mikrorör som innehåller neutral gel. Erytrocytsuspensionen och plasma eller serum fördelas i mikrorören som sedan centrifugeras efter inkubering. Icke agglutinerade erytrocyter samlas i botten av mikroröret medan agglutinat fastnar högre upp i mikrorörets gel, beroende på agglutinatets storlek. Positionen i mikrorörets gel avgör reaktionens intensitet II - KARAKTERISTIKA FÖR REAGENSER Mikrorören på ScanGel NEUTRAL gelkort innehåller en neutral gel. Dessa reagens innehåller natriumazid (< 0,1 %) som konserveringsmedel. Artikelnummer och antalet gelkort per förpackning anges på förpackningens etikett. III - FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Information om hållbarhet och förvaring anges på förpackningen. Förvara gelkorten i rumstemperatur (+15 C +25 C). Förvara gelkorten vertikalt och skyddade från värmekällor i ett utrymme med relativt konstant temperatur och fuktighet. IV - VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Resultatens tillförlitlighet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) följs : Använd inte reagens efter det utgångsdatum som anges på etiketten. Använd inte kort som visar tecken på uttorkning, bubblor eller som har en skadad eller delvis borttagen skyddsremsa. Det är viktigt att iaktta försiktighet för att undvika kontaminering mellan mikrorören. Detta gäller speciellt vid distribuering av prov. Använd en ny pipettspets för varje prov och för varje testerytrocyt. Kontrollera precisionen och den allmänna funktionsdugligheten för pipetter och annan utrustning. Använd handskar och skyddsglasögon vid hantering av reagens och prover. 64

3 Munpipettera aldrig. Undvik spill och stänk. Vid spill eller stänk, rengör med 12 % klorin utspädd 1/10 och torka med absorberande papper. Allt material som har använts vid rengöring skall placeras i en behållare för riskavfall. Förbrukningsvaror och produkter som har varit i kontakt med prov eller reagens innehållande material av humant ursprung skall destrueras efter dekontaminering. Säkerhetsföreskrifter finns att erhålla vid förfrågan. V - PROVHANTERING Blodprovtagning skall ske aseptiskt i ett rör med eller utan antikoagulantia (EDTA, CPD). Analysen skall utföras så snart som möjligt efter provtagningen. Prov som inte kan analyseras snabbt skall förvaras i +2 C +8 C och skall analyseras inom 48 timmar. Under inga omständigheter får hemolys vara synlig. Värm inte proven. VI - METOD Tillhandahållet material ScanGel NEUTRAL gelkort Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material Inkubator : ScanGel Incubator IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi IH QC 4 x 6 ml Centrifug : ScanGel Centrifuge Automatiska eller semiautomatiska pipetter Pipettspetsar Engångsrör Avfallsbehållare för riskavfall Klorin (eller motsvarande) Latexhandskar Absorberande papper Skyddsglasögon Kontroller En autokontroll (plasma eller serum och erytrocyter från patienten) bör göras parallellt med varje test för screening och identifiering av oregelbundna antikroppar. Positiv kontroll (känt serum eller plasma innehållande minst en antikropp) och negativ kontroll (känt serum ej innehållande någon antikropp). IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi. 65

4 Procedur Följ noggrant proceduren. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering (2 000 g x 2 minuter) serum eller plasma från erytrocyterna i provet. När prov har tagits i rör inte innehållande antikoagulantia skall serumet åter centrifugeras i g under 10 minuter. 1 - ABO omvänd gruppering Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material ReverScan A1, A2, B och O: Testerytrocyter färdiga att använda för omvänd ABO-gruppering ReverScan A1, B x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O x 5 ml Metod Använd testerytrocyterna ReverScan A1, A2, B eller O. 1. Märk varje gelkort eller kortets mikrorör (beroende på det antal testerytrocyter som används med provet) med provnamn eller nummer; märk testerytrocyten som ska överföras för varje mikrorör. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje testerytrocytsuspension i brunnen på respektive mikrorör. 3. Tillsätt 50 µl plasma eller serum i de mikrorör som korresponderar till det prov som testas. 4. Inkubera i rumstemperatur (+15 C +25 C) i 15 minuter. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. 2 - Oregelbunden antierytrocyt-antikropp-screening med två-stegs enzymteknik. Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material Bio-Rad papain Papain 2 ml ScanSol : spädningsreagens för erytrocyter ScanSol 100ml ScanSol 500ml ScanCell P, ScanPanel P : Testerytrocyter, färdiga att använda, förbehandlade med papain för screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt-antikroppar med två-stegs enzymteknik ScanCell P 3 x 10 ml ScanPanel P 10 x 3 ml 66

5 a) Papainisering och beredning av erytrocytsuspension när denna inte är färdig att användas (autokontroll) Tvätta erytrocyterna 3 gånger med isotonisk koksaltlösning. Tillsätt det rekonstituerade papainet och de packade röda blodkropparna volym för volym. Blanda. Inkubera i 7 minuter i 37 C i vattenbad. Det är viktigt att tiden för kontakt mellan erytrocyterna och papainet inte under- eller överskrids. Tvätta 3 gånger med isotonisk koksaltlösning. Överför 1 ml ScanSol till ett märkt engångsrör. Tillsätt 10 µl av den tvättade papainiserade erytrocytpelleten. Blanda. Erytrocytsuspensionen kan användas i upp till en vecka vid förvaring i +2 till +8 C. b) Metod 1. Märk varje gelkort eller kortets mikrorör (beroende på det antal testerytrocyter som används med provet) med provnamn eller nummer; märk testerytrocyten som ska överföras för varje mikrorör. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje ScanCell P eller ScanPanel P suspension eller testerytrocytsuspensionen beredd enligt 2- a) till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl plasma eller serum till de mikrorör som korresponderar till det prov som testas. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av testerytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 4. Inkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. 3 - Korstest A. Enzymatisk teknik i två steg Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material Bio-Rad papain Papain 2 ml ScanSol : spädningsreagens för erytrocyter ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml 67

6 a) Papainisering och beredning av erytrocytsuspension(er) från givare För varje givare : Tvätta de erytrocyter som ska testas 3 gånger med isotonisk koksaltlösning. Tillsätt det rekonstituerade papainet och de packade givarerytrocyterna volym för volym. Blanda. Inkubera i 7 minuter i 37 C i vattenbad. Det är viktigt att tiden för kontakt mellan erytrocyterna och papainet inte under- eller överskrids. Tvätta 3 gånger med isotonisk koksaltlösning. Överför 1 ml ScanSol till ett märkt engångsrör. Tillsätt 10 µl av den tvättade papainiserade erytrocytpelleten. Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Märk varje gelkort eller kortets mikrorör med mottagarens namn eller nummer och med motsvarande givares nummer. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje erytrocytsuspension beredd enligt 3-A a) till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl av mottagarens plasma eller serum till respektive mikrorör. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 4. Inkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. B. Enzymatisk teknik i ett steg Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material ScanLiss : spädningsreagens för erytrocyter ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanBrom : bromelin färdigt att användas för korstestning ScanBrom 12 ml a) Beredning av erytrocytsuspension från givare För varje givare : Överför 1 ml ScanLiss till ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl givarerytrocytpellet. Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. 68

7 b) Metod 1. Märk varje gelkort eller kortets mikrorör med mottagarens namn eller nummer och med motsvarande givares nummer. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje erytrocytsuspension beredd enligt 3-B a) till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl av mottagarens plasma eller serum till respektive mikrorör. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 4. Tillsätt 25 µl ScanBrom till varje mikrorör. 5. Inkubera omedelbart i 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 6. Centrifugera omedelbart 10 minuter i ScanGel Centrifuge. Under inga som helst omständigheter får intervallet mellan avslutad inkubering och påbörjandet av centrifugeringen överskrida 10 minuter. 7. Avläs reaktionerna. VII - RESULTAT OCH TOLKNING Närvaro av agglutinat, på ytan av eller i gelen, eller hemolys i mikroröret, påvisar ett positivt resultat som indikerar att det testade provet innehåller en eller flera antikroppar korresponderande till antigenen på testerytrocyterna. En kompakt pellet av erytrocyter i botten av mikroröret och frånvaro av hemolys påvisar ett negativt resultat som indikerar att det testade provet inte innehåller någon antikropp korresponderande till antigenen på testerytrocyterna och som är detekterbara med den metod som används. Resultaten kan endast utvärderas om de positiva och negativa kontrollerna ger förväntade resultat. 1 - Omvänd ABO-gruppering En komplett ABO-gruppering kräver att 2 komplementära test utförs: direkttestet utfört med anti-ab01(a), anti-abo2(b) och om nödvändigt anti-abo3 reagens, samt omvänt test utfört med testerytrocyter A1 och B, och om nödvändigt A2 och O. Profilerna för förväntade resultat med anti-abo1(a), anti-abo2(b), anti-abo3(ab) reagens och A1, A2, B, O testerytrocyter och dess tolkning presenteras i nedanstående tabell : GRUPPER DIREKT ABO TEST : REAGENS ABO REVERSE TEST : REAGENS RÖDA BLODKROPPAR Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O

8 Det direkta och det omvända testets resultat måste vara samstämmiga. Avvikelser mellan dessa två test måste kontrolleras och lösas före fastställande av resultatet för ABO-grupperingen. När resultaten mellan erytrocyt- och serumtesten avviker skall komplementerande tester med lämpliga kontrollprov utföras. 2 - Oregelbunden antierytrocyt-antikropp-screening med två-stegs enzymteknik Ett negativt resultat (ingen agglutination och ingen hemolys) i varje AHG-mikrorör indikerar att det serum eller plasma som testats inte innehåller antikroppar korresponderande till de antigen som finns närvarande på testerytrocyterna och som är detekterbara med den metod som används. Ett positivt resultat (agglutination och/eller hemolys) i minst ett av AHG-mikrorören indikerar närvaro av en eller flera antikroppar i det serum eller plasma som testats. Identifiering av antikropparna måste därefter utföras. En positiv reaktion i autokontrollröret kan indikera närvaro av en autoantikropp. Om, i tillägg till den positiva autokontrollen, minst en testerytrocyt visar agglutination skall möjligheten för mixad autoantikropp/alloantikropp tas under övervägande. Enbart de antikroppar som korresponderar till antigen närvarande på testerytrocyterna kan detekteras. Under identifieringen gör den jämförande analysen mellan positiva och negativa reaktioner, som observeras för varje testerytrocyt i den panel som används, det möjligt att karakterisera specificiteten för antikroppen(-arna) närvarande i det testade serumet (eller plasman). Detta kan göras med hjälp av masterlistan som medföljer panelen. 3 - Korstest Ett positivt resultat (agglutination och/eller hemolys) påvisar inkompabilitet mellan mottagarens serum eller plasma och givarens erytrocyter. VIII - PRESTANDA 1 - Omvänd ABO-gruppering ReverScan (A1, A2, B, O) testerytrocyter har utvärderats på en panel bestående av prover. Varje resultat har jämförts med resultat från tekniker i slides, rör, mikroplatta och gelfiltrering. Av de prov som testades gav prov förväntade resultat medan två prov var icke-överensstämmande med en av jämförelsemetodernas. Vid jämförelse mot ABO direkttest visade även dessa två prov överensstämmande resultat. 70

9 För vilket prov som än testats visar ReverScan testreytrocyter, använda med ScanGel NEUTRAL gelkort, god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. 2 - Oregelbunden antierytrocyt-antikropp-screening med två-stegs enzymteknik Prestandan utvärderades på prov, patienter och 734 blodgivare, och visade en bra balans mellan sensitivitet och specificitet. Varje resultat har jämförts med resultat från immunoadherens eller gelfiltreringstekniker. Andelen av oselekterade prov funna positiva i oregelbunden antikropp-screening (där positiv screening resulterar i identifiering av en eller flera allo- och/eller autoantikroppar) är 3,8 %. Specificiteten i en oselekterad patientpopulation var 98,8 %. Vissa antigen, t.ex. MNS1 (M), MNS2 (N), MNS3 (S), FY1 (Fy a ), FY2 (Fy b ) och XG1 (Xg a ), förstörs eller förändras när erytrocyter behandlas med proteolytiskt enzym. Därför kan enzymatisk teknik inte användas som enda teknik för screening av oregelbundna antierytrocyt-antikroppar. Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. 3 - Korstest Uvärdering av prestanda gav samstämmiga resultat med reagenset som referens. Varje resultat har jämförts med resultat från gelfiltreringsteknik. Vissa inkompatibiliteter framträdde inte med enbart detta test men framträdde med det indirekta antiglobulintestet utfört med ScanGel-teknik. Dessutom förstörs eller förändras vissa antigen, t.ex. MNS1 (M), MNS2 (N), MNS3 (S), FY1 (Fy a ), FY2 (Fy b ) och XG1 (Xg a ), när erytrocyter behandlas med proteolytiskt enzym. Därför kan enzymatisk teknik inte användas som enda teknik vid korstestning. Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. BEGRÄNSNINGAR Abnormala resultat kan orsakas av : bakteriell eller kemisk kontaminering av serum, plasma, erytrocyter eller utrustning. medicinering eller sjukdom hos patienten ledande till korsreaktion. användning av en icke rekommenderad suspensionsvätska till erytrocyterna. ofullständig resuspension av erytrocyter. 71

10 en erytrocytsuspension avvikande från den rekommenderade. hemolys i prov- eller testerytrocyter. närvaro av fibrin (en kompakt pellet av celler i botten av mikroröret tillsammans med ett tunt, rosa band, skapad av erytrocyter som kvarhålls av fibrinrester, på toppen av gelen). nedbrytning av enzymaktivitet, orsakad av bromelin eller papain för enzymatiska tekniker (överensstämmer ej med hållbarhetsanvisningarna). kontaminering mellan mikrorören. användning av andra procedurer än den ovan beskrivna. Under licens frå DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 72

11 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code: