ScanGel DIRECT COOMBS gelkort

Transkript

1 ScanGel DIRECT COOMBS gelkort GELER TILLVERKADE MED MONOSPECIFIKT ANTIHUMANGLOBULIN (POLYKLONALT ELLER MONOKLONALT FRÅN MURINT URSPRUNG) Direkt antiglobulintest IVD Alla tillverkade och marknadsförda reagens ingår, från mottagande av råmaterial till slutlig marknadsföring av produkten, i ett komplett kvalitetssystem. Varje batch undergår kvalitetskontroll och släpps inte ut på marknaden förrän den följer satta kriterier för acceptans. Dokumentation tillhörande produktion och kontroll av varje enskild batch finns tillgänglig på vårt företag. 37

2 I - TESTETS ANVÄNDNING OCH PRINCIP Detta kort är avsett att användas i fackmässigt och in vitro-diagnostiskt bruk. Testet är utformat för direkt antiglobulintest (direkt Coombs) och används för att påvisa IgG-antikroppar och/eller C 3 d som är bundna till erytrocyter in vivo. I testet kombineras principerna för agglutination och gelfiltrering. ScanGel DIRECT COOMBS gelkort tillåter 2 prov att analyseras. 3 mikrorör ska användas för varje prov : IgG, C 3 d, Ctl. Reaktionen erhålls och avläses efter centrifugering av specialtillverkade mikrorör som innehåller gel behandlad med antiglobulinreagens. Erytrocytsuspensionen fördelas i varje mikrorör varefter gelkortet omedelbart centrifugeras. Icke agglutinerade erytrocyter samlas i botten av mikroröret medan agglutinat fastnar högre upp i mikrorörets gel, beroende på agglutinatets storlek. Positionen i mikrorörets gel avgör reaktionens intensitet Gelets förmåga att separera erytrocyterna från serum innebär att det tvättsteg, som är obligatoriskt i direkt antiglobulintestning med konventionella metoder, kan uteslutas. II - KARAKTERISTIKA FÖR REAGENS Det första och det fjärde mikroröret innehåller en gel behandlad med anti-igg antiglobulin reagens. Anti-IgG-fraktionen har tillverkats av sera från hyperimmuniserad get. Det andra och det femte mikroröret innehåller en gel behandlad med anti-c 3 d antiglobulinreagens. Anti-C 3 d-fraktionen är en murin monoklonal antikropp som är tillverkad av klon-053a714. Det tredje och det sjätte mikroröret innehåller gel utan specifikt reagens. De motsvarar kontrollen (Ctl). Dessa reagens innehåller natriumazid (< 0,1 %) som konserveringsmedel. Artikelnummer och antalet gelkort per förpackning anges på förpackningens etikett. III - FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Information om hållbarhet och förvaring anges på förpackningen. Förvara gelkorten i rumstemperatur (+15 C C). Förvara gelkorten vertikalt och skyddade från värmekällor i ett utrymme med relativt konstant temperatur och fuktighet. 38

3 IV - VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Resultatens tillförlitlighet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) följs : Använd inte reagens efter det utgångsdatum som anges på etiketten. Använd inte kort som visar tecken på uttorkning, bubblor eller som har en skadad eller delvis borttagen skyddsremsa. Då reagenserna i mikrorören är olika är det viktigt att iaktta försiktighet för att undvika kontaminering mellan rören. Detta gäller speciellt vid avlägsnandet av den skyddande aluminiumremsan samt vid distribuering av prov. Använd en ny pipettspets för varje prov. Kontrollera precisionen och den allmänna funktionsdugligheten för pipetter och annan utrustning. Använd handskar och skyddsglasögon vid hantering av reagenser och prov. Munpipettera aldrig. Undvik spill och stänk. Vid spill eller stänk, rengör med 12 % klorin utspädd 1/10 och torka med absorberande papper. Allt material som har använts vid rengöring ska placeras i en behållare för riskavfall. Förbrukningsvaror och produkter som har varit i kontakt med prov eller reagens innehållande material av humant ursprung ska destrueras efter dekontaminering. Säkerhetsföreskrifter finns att erhålla vid förfrågan. V - PROVHANTERING Blodprovtagning skall ske aseptiskt i ett rör med eller utan antikoagulantia (EDTA). Analysen skall utföras så snart som möjligt efter provtagningen. Prov som inte kan analyseras snabbt ska förvaras i temperaturen +2 C - +8 C och ska analyseras inom 48 timmar. Koagulerade blodprov måste testas innan de placeras i kylskåp. Under inga omständigheter får hemolys vara synlig. Värm inte proven. VI - METOD Tillhandahållet material ScanGel DIRECT COOMBS gelkort Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material ScanLiss : suspensionsmedium för erytrocyter ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml Centrifug : ScanGel Centrifuge Automatiska eller semiautomatiska pipetter 39

4 Pipettspetsar Engångsrör Avfallsbehållare för riskavfall Klorin (eller motsvarande) Latexhandskar Absorberande papper Skyddsglasögon Kontroller Positiv kontroll (erytrocyter sensibiliserade med en känd IgG-antikropp och/eller med komplementets C 3 d-fraktion) och negativ kontroll (icke sensibiliserade erytrocyter). Procedur Följ noggrant proceduren. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering serum eller plasma från erytrocyterna i provet. a) Bered en suspension erytrocyter För varje prov : Överför 1 ml ScanLiss till ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl av erytrocytpelleten från provet. Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Märk gelkortet med provnamn eller nummer. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av erytrocytsuspensionen som ska testas till respektive mikrorör. 3. Centrifugera omedelbart 10 minuter i ScanGel Centrifuge. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 4. Avläs reaktionerna. Avläsningen måste göras inom en timme efter det att centrifugeringen avslutats. 40

5 VII - RESULTAT OCH TOLKNING Närvaro av agglutinat, på ytan av, eller i, gelen, påvisar ett positivt resultat. En kompakt pellet av erytrocyter i botten av mikroröret påvisar ett negativt resultat. En positiv reaktion i ett av mikrorören kan endast utvärderas om kontrollröret (Ctl) ger en negativ reaktion. Om kontrollröret ger en positiv reaktion : Tvätta erytrocyterna i fysiologisk koksaltlösning (NaCl 0,9 %). Upprepa förfaringssättet som beskrivits i VI.a och VI.b. Om mikroröret Ctl fortfarande visar en positiv reaktion skall testet göras om med en annan teknik än gelfiltrering. Ett positivt resultat i IgG-mikroröret indikerar förekomst av IgG på erytrocyterna. Ett positivt resultat i C 3 d-mikroröret indikerar förekomst av C 3 dpå erytrocyterna. Resultaten kan endast utvärderas om de positiva och negativa kontrollerna ger förväntade resultat. VIII - PRESTANDA Prestandan utvärderades på 677 prov (346 blodgivare, 108 patienter, och 223 nyfödda). Varje resultat har jämförts med resultat från tekniker i rör eller gelfiltrering. Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. BEGRÄNSNINGAR Abnormala resultat kan orsakas av : bakteriell eller kemisk kontaminering av serum, plasma, erytrocyter eller utrustning. medicinering eller sjukdom hos patienten som leder till korsreaktion. användning av en icke rekommenderad suspensionsvätska till de röda erytrocyterna. ofullständig resuspension av erytrocyter. en erytrocytberedning som avviker från den rekommenderade. hemolys av prov. närvaro av fibrin (en kompakt pellet av celler i botten av mikroröret tillsammans med ett tunt, rosa band, skapad av erytrocyter som kvarhålls av fibrinrester, på toppen av gelen). kontaminering mellan mikrorören. användning av andra procedurer än den ovan beskrivna. 41

6 IX - LITERATURE 1. Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974; 26: Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83: Rouger Ph, Salmon Ch. : La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987; 53: Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol2: Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988; XXXI, Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf. Immunohematol. 1988;XXXI, Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990; 30: Proceedings of the second international workshop and symposium on monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens. IgG/Complement. Lund. 1990; Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992; 50: Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992; 35: Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993; 36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995; 69: Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, Under license from DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Switzerland

7 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2008 Fax.: Code: