ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH Gelkort Gelkort

Transkript

1 ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH Gelkort Gelkort GELER TILLVERKADE MED MONOKLONALA REAGENS AV MURINT ELLER HUMANT URSPRUNG Direkt ABO test. Påvisande av RH1 Ag IVD Alla tillverkade och marknadsförda reagens ingår, från mottagande av råmaterial till slutlig marknadsföring av produkten, i ett komplett kvalitetssystem. Varje batch undergår kvalitetskontroll och släpps inte ut på marknaden förrän den följer satta kriterier för acceptans. Dokumentation tillhörande produktion och kontroll av varje enskild batch finns tillgänglig på vårt företag. 49

2 I - TESTETS ANVÄNDNING OCH PRINCIP Detta kort är avsett att användas i fackmässigt och in vitro diagnostiskt bruk. Utformat för direkt ABO test och påvisande av RH1(D) antigen, testet kombinerar principerna för agglutination och gelfiltrering. Reaktionen erhålls och avläses efter centrifugering av specialtillverkade mikrorör innehållande gel behandlad med det reagens som är specifikt för det erytrocyt-antigen som skall påvisas. Suspensionen av röda blodkroppar fördelas i varje mikrorör varefter gelkortet omedelbart centrifugeras. Icke agglutinerade erytrocyter samlas i botten av mikroröret medan agglutinat fastnar högre upp i mikrorörets gel, beroende på agglutinatets storlek. Positionen i mikrorörets gel avgör reaktionens intensitet II - KARAKTERISTIKA FÖR REAGENSEN De första tre mikrorören på ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 gelkort innehåller en gel behandlad med murint monoklonalt reagens specifikt för anti-ab01 (A), anti-abo2 (B) respektive anti-ab03 (AB).Dessa antikroppar produceras från följande kloner : anti-ab01 (A) : 15750F7 anti-ab02 (B) : X9 anti-abo3 (AB) : AB5-63A5A2/X9 Det fjärde mikroröret innehåller en gel behandlad med human monoklonal reagens specifikt för anti-rh1 (D), en IgM-antikropp producerad från klon B9A4-B2A6A6A1A1. Detta anti-rh1 (D) reagens tillåter inte detektion av fenotyp RH1 partialkategorin VI (DVI). Det femte mikroröret innehåller ett gel behandlad med ett annat monoklonalt reagens specifikt för anti-rh1(d); detta reagens är en blandning av humana IgG och IgM monoklonala antikroppar; IgM fraktionen produceras från klon T3D2F6 och IgG fraktionen från klon MS26. Blandningen av de båda antikropparna ger ett brett spektrum för detektion av RH1(D) antigen, RH1(D) varianter inklusive fenotyp RH1 partialkategorin VI (DVI) och de flesta RHW1 (svaga D) antigen. Det sjätte mikroröret är ett kontrollrör (Ctl). Dessa reagens innehåller natriumazid (< 0,1 %) som konserveringsmedel. Artikelnummer och antalet gelkort per förpackning anges på förpackningens etikett. 50

3 III - FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Information om hållbarhet och förvaring anges på förpackningen. Förvara gelkorten i rumstemperatur (+15 C C). Lagra gelkorten vertikalt och skyddade från värmekällor i ett utrymme med relativt konstant temperatur och fuktighet. IV - VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Resultatens tillförlitlighet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) följs : Använd inte reagens efter utgångsdatum angivet på etiketten. Använd inte kort som visar tecken på uttorkning, bubblor eller skadad skyddsremsa. Då reagensen ingående i mikrorören är olika är det viktigt att iaktta försiktighet för att undvika kontaminering mellan rören. Detta gäller speciellt vid avlägsnandet av den skyddande aluminiumremsan samt vid distribuering av prov. Använd en ny pipettspets för varje prov. Kontrollera precisionen och den allmänna funktionsdugligheten för pipetter och annan utrustning. Använd handskar och skyddsglasögon vid hantering av reagens och prov Munpipettera aldrig Undvik spill och stänk. Vid spill eller stänk, rengör med 12 % Klorin utspädd 1/10 och torka med absorberande papper. Allt material använt vid rengöring skall placeras i en behållare för riskavfall. Förbrukningsvaror och produkter som har varit i kontakt med prov eller reagens innehållande material av humant ursprung skall destrueras efter dekontaminering. Säkerhetsföreskrifter finns att erhålla vid förfrågan. V - PROVHANTERING Blodprovtagning skall ske aseptiskt i ett rör med eller utan antikoagulantia (EDTA, CPD). Analysen skall utföras så snart som möjligt efter provtagningen. Prov som inte kan analyseras snabbt skall förvaras i en temperatur på +2 C - +8 C och skall analyseras inom 48 timmar. Under inga omständigheter får hemolys vara synlig. Värm inte proven. VI - METOD Tillhandahållet materiel ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 gelkort 51

4 Övrigt, icke tillhandhållet, nödvändigt material Spädningsreagens för erytrocyter ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi IH QC 4 x 6 ml Centrifug : ScanGel Centrifuge Automatiska eller semiautomatiska pipetter Pipettspetsar Engångsrör Avfallsbehållare för riskavfall Klorin (eller motsvarande) Latexhandskar Absorberande papper Skyddsglasögon Kontroller Positiva och negativa kontroller : kända positiva och negativa erytrocyter för de antigen som testas, analyseras parallellt med patientproven för att validera reagensens funktion. IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi. Procedur Följ noggrant proceduren Tillåt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering serum eller plasma från erytrocyterna i provet. VI.1 - Suspension i ScanLiss a) Bered en suspension av 1% erytrocyter direkt före analys i ScanLiss Överför 1 ml ScanLiss i ett märkt engångsrör. Tillför 10 μl av erytrocytpelleten. Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Märk gelkortet med provnamn eller nummer. För att undvika kontaminering mellan gelkortets mikrorör ska aluminiumremsan försiktigt avlägsnas från gelkortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Pipettera 50 μl erytrocytsuspension i varje mikrorör på gelkortet. 3. Centrifugera sedan i 10 minuter i ScanGel-centrifugen. 4. Avläs reaktionerna. 52

5 VI.2 - Suspension i ScanSol a) Bered en suspension av 5% erytrocyter i ScanSol direkt före analys Överför 0,5 ml ScanSol i ett märkt engångsrör. Tillför 25 μl av erytrocytpelleten Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Märk gelkortet med provnamn eller nummer. För att undvika kontaminering mellan gelkortets mikrorör skall aluminiumremsan försiktigt avlägsnas från gelkortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Pipettera 10 μl erytrocytsuspension till varje mikrorör i gelkortet. 3. Centrifugera omedelbart 10 minuter i en ScanGel Centrifuge. Tiden mellan lutförandet av pipetteringen och påbörjandet av centrifugeringen får ej överskrida 10 minuter. 4. Avläs reaktionerna. VII - RÉSULTAT OCH TOLKNING Närvaro av agglutinat på ytan av, eller i, gelen påvisar ett positivt resultat som indikerar närvaro av motsvarande erytrocytantigen. En pellet av röda blodkroppar i botten på mikroröret påvisar ett negativt resultat som indikerar att motsvarande erytrocytantigen inte har detekterats. En positiv reaktion i ett av mikrorören kan endast utvärderas om kontrollröret (Ctl) ger en negativ reaktion. Om kontrollröret ger en positiv reaktion : Tvätta erytrocyterna i en isotonisk saltlösning (NaCl 0,9%). Upprepa förfaringssättet som beskrivits i VI.1 eller VI.2. Om kontrollröret (Ctl) fortfarande visar en positiv reaktion så kan de reaktioner som erhölls med ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 gelkort inte tolkas. Gör om testet med ScanGel Monoclonal ABO/RH gelkort. Om kontrollröret (Ctl) ger en negativ reaktion tolkas de övriga mikrorören påföljande sätt : Positivt resultat Svagt positivt resultat Negativt resultat till Resultaten kan endast utvärderas om de positiva och negativakontrollerna ger förväntade resultat. 53

6 a) Tolkning av mikrorören ABO1(A), ABO2 (B) och ABO3(AB) En komplett ABO blodgruppering kräver att två komplementära test utförs: direkttest utfört med anti-ab01(a), anti-abo2(b) och om nödvändigt anti-abo3(ab) reagens, samt omvänt test utfört med testerytrocyter A, B, och om nödvändigt A2 och O. Profilerna av de förväntade resultaten med anti-abo1(a), anti-abo2(b), anti-abo3(ab) reagens och A1, A2, B, O testerytrocyter och dess tolkning presenteras i nedanstående tabell : GRUPPER ABO REVERSE TEST : REAGENS DIREKT ABO TEST : REAGENS RÖDA BLODKROPPAR Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O Det direkta och det omvända testets resultat måste vara samstämmiga. Avvikelser mellan dessa två test måste kontrolleras och lösas innan fastställande av resultatet för ABO-grupperingen. När resultaten mellan erytrocyt- och serumtesten avviker skall komplementerande tester med lämpliga kontrollprov utföras. b) Tolkning av mikrorör RH1 (D) Ett positivt resultat i minst ett av mikrorören RH1(D) påvisar närvaro av antigen RH1 (D) på erytrocyternas yta. Ett negativt resultat i ett av RH1 (D) mikrorören och ett positivt resultat i det andra kan indikera närvaro av ett RHW1 (svaga D) antigen. Ett negativt resultat i det första RH1 (D) mikroröret och ett positivt resultat i det andra kan indikera närvaro av en fenotyp RH1 partialkategori VI (DVI). När detektion av alla RHW1 (svaga D) antigen krävs måste alla prov funna negativa bekräftas med ScanGel Monoclonal Anti-RH1(D)/RHW1 reagens tillsammans med ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d gelkort. VIII - PRESTANDA a) Specifika prestanda för anti-abo1(a), ABO2 (B) och anti-abo3(ab) reagens Anti-ABO1(A), anti-abo2(b) och anti-abo3(ab) reagens på ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 gelkort har evaluerats med en panel bestående av 1641 oselekterade prov från 1150 blodgivare, 332 patienter och 159 nyfödda, samt med en panel beståendeav utvalda prov (svaga eller varianter av antigen). 54

7 Varje resultat har jämförts med resultat från tekniker i slides, rör, mikroplatta och gelfiltrering. De 1641 proven gav alla resultat i överensstämmelse med förväntade resultat. I panelen bestående av 17 utvalda prov (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB, A3B, Abf) detekterades alla prov med en reaktivitet på 1+ till 3+. De testade förvärvade B-antigenen detekterades ej med anti- ABO2 (B) på ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 gelkort. Anti-ABO1(A), anti-abo2 (B) och anti-abo3 (AB) reagens på ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 gelkort visade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serieanalyser. b) Specifica prestanda för anti-rh1 (D) reagens Anti-RH1 (D) reagens, från klon B9A4, utvärderades med en panel bestående av 1641 oselekterade prov från 1150 blodgivare, 332 patienten och 159 nyfödda, samt med en panel bestående av 24 utvalda prov (svaga antigen, varianter, och speciella fenotyper). Varje resultat har jämförts med resultat från tekniker i slides, rör, mikroplatta och gelfiltrering. De 1641 proven gav alla resultat i överensstämmelse med förväntade resultat. 94% av de testade RHW1 (svaga D) antigenen detekterades. Alla varianter och speciella fenotyper, förutom ett prov av fenotyp RH1 partiell kategori VI(DVI), detekterades. Anti-RH1 (D) reagens, från klonerna T3D2F6 och MS26, utvärderades med en panel bestående av 1707 oselekterade prov från 1549 blodgivare, 122 patienter och 36 nyfödda, samt med en panel av 41 RHW1 (svaga D) antigen och 18 RH1 antigenvarianter. Varje resultat har jämförts med resultat från tekniker i slides, rör, mikroplatta och gelfiltrering. De 1707 proven gav alla resultat i överensstämmelse med förväntade resultat. 93% av de testade RHW1 (svaga D) antigenen detekterades. Alla testade RH1(D) antigenvarianter (18 prov inklusive 8 fenotyp RH1 partialkategorin VI (DVI)) detekterades. Anti-RH1(D) reagens på ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 gelkort visade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serieanalyser. BEGRÄNSNINGAR Abnormala resultat kan orsakas av : bakteriell eller kemisk kontaminering av serum, plasma, erytrocyter eller utrustning. medicinering eller sjukdom hos patienten ledande till korsreaktion. användning av en icke rekommenderad suspensionsvätska till de röda blodkropparna. 55

8 en erytrocytkoncentration avvikande från den rekommenderade. närvaro av fibrin (en kompakt pellet av celler i botten av mikroröret tillsammans med ett tunt, rosa band, skapad av erytrocyter som kvarhålls av fibrinrester, på toppen av gelen). kontaminering mellan mikrorören. användning av andra procedurer än den ovan beskrivna. Under licens frå DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 56

9 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2008 Fax.: Code: