ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d Gelkort Gelkort

ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d 86431 48 Gelkort 86432 1080 Gelkort GELER TILLVERKADE MED ETT POLYSPECIFIKT ANTI-HUMANT GLOBULIN (POLYKLONALA OCH MONOKLONALA MURINFRAKTIONER) Screening av oregelbundna ak, korstest, direkt antiglobulintest, fenotypning IVD Alla tillverkade och marknadsförda reagens ingår, från mottagande av råmaterial till slutlig marknadsföring av produkten, i ett komplett kvalitetssystem. Varje batch undergår kvalitetskontroll och släpps inte ut på marknaden förrän den följer satta kriterier för acceptans. Dokumentation tillhörande produktion och kontroll av varje enskild batch finns tillgänglig på vårt företag. 61

I - TESTETS ANVÄNDNING OCH PRINCIP Detta kort är avsett att användas i fackmässigt och in vitro-diagnostiskt bruk. Testet är utformat för screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt-antikroppar, korstest, direkt antiglobulintest (direkt Coombs) och fenotypning. I testet kombineras principerna för agglutination och gelfiltrering. Reaktionen erhålls och avläses efter centrifugering av specialtillverkade mikrorör som innehåller gel behandlad med antiglobulinreagens. Erytrocytsuspensionen fördelas i varje mikrorör (med plasma eller serum om det krävs). Mikroröret inkuberas eller centrifugeras direkt, enligt testens applikation. Icke agglutinerade erytrocyter samlas i botten av mikroröret medan agglutinat fastnar högre upp i mikrorörets gel, beroende på agglutinatets storlek. Positionen i mikrorörets gel avgör reaktionens intensitet. - + ++ +++ ++++ Gelens förmåga att separera erytrocyterna från serum eller plasma innebär att det tvättsteg som är obligatoriskt i konventionella metoder kan uteslutas. II - KARAKTERISTIKA FÖR REAGENSER Mikrorören på ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d gelkort innehåller en gel behandlad med polyspecifikt antihumanglobulin (AHG). Anti-IgG-fraktionen har tillverkats av sera från hyperimmuniserad get. Antikomplementfraktionen har tillverkats från en blandning av sera från hyperimmuniserad get och en specifik murinmonoklonal anti-c3d-antikropp framställd av klon 053A714. Dessa reagens innehåller natriumazid (< 0,1 %) som konserveringsmedel. Artikelnummer och antalet gelkort per förpackning anges på förpackningens etikett. III - FÖRVARING OCH HÅLLBARHET IInformation om hållbarhet och förvaring anges på förpackningen. Förvara gelkorten i rumstemperatur (+15 C +25 C). Förvara gelkorten vertikalt och skyddade från värmekällor i ett utrymme med relativt konstant temperatur och fuktighet. IV - VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Resultatens tillförlitlighet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) följs : Använd inte reagens efter det utgångsdatum som anges på etiketten. 62

Använd inte kort som visar tecken på uttorkning, bubblor eller som har en skadad eller delvis borttagen skyddsremsa. Det är viktigt att iaktta försiktighet för att undvika kontaminering mellan mikrorören. Detta gäller speciellt vid distribuering av prov. Använd en ny pipettspets för varje prov och för varje reagens av testerytrocyter. Kontrollera precisionen och den allmänna funktionsdugligheten för pipetter och annan utrustning. Använd handskar och skyddsglasögon vid hantering av reagens och prov. Munpipettera aldrig. Undvik spill och stänk. Vid spill eller stänk, rengör med 12 % klorin utspädd 1/10 och torka med absorberande papper. Allt material som har använts vid rengöring skall placeras i en behållare för riskavfall. Förbrukningsvaror och produkter som har varit i kontakt med prov eller reagens innehållande material av humant ursprung skall destrueras efter dekontaminering. Säkerhetsföreskrifter finns att erhållas vid förfrågan. V - PROVHANTERING Blodprovtagning skall ske aseptiskt i ett rör med eller utan antikoagulantia (EDTA, CPD). För det direkta antiglobulintestet (direkt Coombs) rekommenderas användning av en antikoagulant (EDTA). Analysen skall utföras så snart som möjligt efter provtagningen. Prov som inte kan analyseras snabbt skall förvaras i temperaturen +2 C +8 C och skall analyseras inom 48 timmar. För den direkta antiglobulintesten (direkt Coombs) skall koagulerade prov som har tagits i ett rör utan antikoagulantia inte testas efter kylförvaring. Under inga omständigheter får hemolys vara synlig. Värm inte proverna. VI - METOD Tillhandahållet material ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d gelkort Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material ScanLiss : spädningsreagens för erytrocyter 86441 ScanLiss 100 ml 86442 ScanLiss 500 ml IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi 86745 IH QC 4 x 6 ml Centrifug : ScanGel Centrifuge Inkubator : ScanGel Incubator Automatiska eller semiautomatiska pipetter 63

Pipettspetsar Engångsrör Avfallsbehållare för riskavfall Klorin (eller motsvarande) Latexhandskar Absorberande papper Skyddsglasögon 1. Screening och identifiering av oregelbundna antierytrocytantikroppar Kontroller En autokontroll (plasma eller serum och erytrocyter från patienten) bör köras parallellt med varje test. Positiv kontroll (känt serum innehållande minst en antikropp som kan detekteras med indirekt antiglobulin test) och negativ kontroll (känt serum ej innehållande någon antikropp), IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi. Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material EryScan, ScanCell, ScanPanel : Testerytrocyter färdiga att använda för screening och identifiering av oregelbundna antierytrocyt-antikroppar (indirekt antiglobulintest) 86597 EryScan 2 x 10 ml 86595 ScanCell 3 x 10 ml 86593 ScanPanel 10 x 3 ml Procedur Följ noggrant proceduren. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering serum eller plasma från erytrocyterna i provet. När prov har tagits i rör icke innehållande antikoagulantia skall serumet åter centrifugeras i 1500 g under 10 minuter. a) Bered en suspension erytrocyter om de inte är klara för användning Autokontroll : Överför 1 ml ScanLiss i ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl testerytrocyterna (autokontroll). Blanda. 64

b) Metod 1. Märk gelkortet eller kortets mikrorör (beroende på det antal testerytrocyter som används med provet) med provnamn eller nummer; märk testerytrocyten som ska överföras för varje mikrorör. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje ScanCell eller ScanPanel testerytrocytsuspension eller den erytrocytsuspension som beretts enligt 1- a) i brunnen på respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl plasma eller serum i de mikrorör som korresponderar till det prov som testas. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 4. Inkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. 2. Korstest Kontroller Positiv kontroll (känt serum innehållande minst en antikropp som kan detekteras med indirekt antiglobulintest) och negativ kontroll (känt serum som ei innehållande någon antikropp), IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi. Procedur Följ anvisningarna noggrant. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering serum eller plasma från erytrocyterna i provet. När prov har tagits i rör som icke innehållande antikoagulantia skall serumet åter centrifugeras i 1500 g under 10 minuter. a) Bered en/flera suspensioner från erytrocytdonatorer För varje givare : Överför 1 ml ScanLiss till ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl av erytrocytpelleten (givarerytrocyter). Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. 65

b) Metod 1. Märk gelkortet eller kortets mikrorör med mottagarens namn eller nummer och med korresponderande givares nummer. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje erytrocytsuspension till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl av mottagarens plasma eller serum till respektive mikrorör. Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och plasma eller serum överskrida 10 minuter. 4. nkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. 3. Direkt antiglobulintest (direkt Coombs) Kontroller Positiv kontroll (erytrocyter sensibiliserade med en känd IgG-antikropp och/eller med komplementets C3d-fraktion) och negativ kontroll (icke sensibiliserade erytrocyter). Procedur Följ anvisningarna noggrant. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering serum eller plasma från erytrocyterna i provet. a) Bered en suspension erytrocyter För varje prov : Överför 1 ml ScanLiss till ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl av provets erytrocytpellet. Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Märk gelkortet med provnamn eller nummer. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av erytrocytsuspensionen som ska testas till respektive mikrorör. 3. Centrifugera omedelbart 10 minuter i ScanGel Centrifuge. Tiden mellan slutförandet av pipetteringen och påbörjandet av centrifugeringen får ej överskrida 10 minuter. 4. Avläs reaktionerna. 66

4. Fenotypning Kontroller Positiva och negativa kontroller : erytrocyter kända som positiva och negativa för antigenet testas tillsammans med provet, IH QC : Kontroll av blodgruppsserologi. Provkontroll (endast provets erytrocyter). Övrigt, icke tillhandahållet, nödvändigt material Reagens från Bio-Rad korresponderandet till det studerade antigenet. Procedur Följ noggrant proceduren. Låt reagensen uppnå rumstemperatur före användning. Separera genom centrifugering plasma från erytrocyterna i provet. a) Bered en suspension erytrocyter För varje prov : Överför 1 ml ScanLiss till ett märkt engångsrör. Tillför 10 µl av provets erytrocytpellet. Blanda. Erytrocytsuspensionen är färdig att användas. b) Metod 1. Identifiera för varje prov ett mikrorör med namn eller nummer på det korresponderande provet och ID-nummer för det serumtest som används, samt ett mikrorör med namn eller nummer på kontrollprov. Avlägsna hela aluminiumremsan från kortet. Resuspendera erytrocyterna före användning. 2. Överför 50 µl av varje erytrocytsuspension till respektive mikrorör. 3. Tillsätt omedelbart 25 µl av serumtestet till avsedda mikrorör (med undantag för de mikrorör som används som kontrollprov). Under inga omständigheter får intervallet mellan överföringen av erytrocyter och serumtest överskrida 10 minuter. 4. Inkubera 15 minuter i 37 C i ScanGel Incubator. 5. Centrifugera 10 minuter i ScanGel Centrifuge. 6. Avläs reaktionerna. VII - RESULTAT OCH TOLKNING Närvaro av agglutinat, på ytan av, eller i, gelen, eller hemolys i mikroröret påvisar ett positivt resultat. En pellet av erytrocyter i botten av mikroröret och frånvaron av hemolys påvisar ett negativt resultat. 67

Resultaten kan endast utvärderas om de positiva och negativa kontrollerna ger förväntade resultat. 1- Screening och identifiering av oregelbundna antierytrocytantikroppar Ett negativt resultat (ingen agglutination och ingen hemolys) i varje mikrorör indikerar att det serum eller plasma som testats inte innehåller antikroppar korresponderande till de antigen som finns närvarande på testerytrocyterna och som är detekterbara med den metod som används. Ett positivt resultat (agglutination och/eller hemolys) i minst ett av mikrorören indikerar närvaro av en eller flera antikroppar i det serum eller plasma som testats. Identifiering av antikropparna måste därefter utföras. En positiv reaktion i autokontrollröret kan indikera närvaro av en autoantikropp. Om, i tillägg till den positiva autokontrollen, minst en testerytrocyt visar agglutination skall möjligheten för mixad autoantikropp/alloantikropp tas under övervägande. Enbart de antikroppar som korresponderar till antigen närvarande på testerytrocyterna kan detekteras. Under identifieringen gör den jämförande analysen mellan positiva och negativa reaktioner, som observeras för varje testerytrocyt i den panel som används, det möjligt att karakterisera specificiteten för antikroppen(-arna) närvarande i det testade serumet (eller plasman). Detta kan göras med hjälp av masterlistan som medföljer panelen. 2. Korstest Ett positivt resultat (agglutination och/eller hemolys) påvisar inkompabilitet mellan mottagarens serum eller plasma och givarens erytrocyter. 3. Direkt antiglobulintest (direkt Coombs) Ett negativt resultat indikerar frånvaro av IgG och komplement på de testade erytrocyterna. Ett positivt resultat indikerar närvaro av IgG, komplement eller både och på de testade erytrocyterna. 4. Fenotypning Se bipacksedeln till det serumtest som används. Resultaten är endast giltiga om kontrollprovet är negativt. 68

VIII - PRESTANDA 1. Screening och identifiering av oregelbundna antierytrocytantikroppar Prestandan utvärderades på 2516 prov, 1782 patienter och 734 blodgivare, och visade en bra balans mellan sensitivitet och specificitet. Varje resultat har jämförts med resultat från tekniker i immunoadherens eller gelfiltrering. Applikationen gör det möjligt att detektera en human anti-rh1(d) koncentration motsvarande 20 ng/ml. Specificiteten i en oselekterad patientpopulation var 99,8 %. Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. 2. Korstest Uvärdering av prestanda gav samstämmiga resultat med reagenset som referens. Varje resultat har jämförts med resultat från gelfiltreringsteknik. Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. 3. Direkt antiglobulintest (direkt Coombs) Prestandan utvärderades på 147 prov (från nyfödda och från patienter med misstanke om autoimmun hemolytisk anemi). Varje resultat har jämförts med resultat från tekniker i rör eller gelfiltrering. Resultaten uppvisade ingen skillnad i jämförelse med den gelteknik som användes parallellt. Applikationen uppvisade god reproducerbarhet i både inom serie och mellan serie analyser. 4. Fenotypning Se bipacksedeln till det serumtest som används. BEGRÄNSNINGAR Abnormala resultat kan orsakas av : bakteriell eller kemisk kontaminering av serum, plasma, erytrocyter eller utrustning. medicinering eller sjukdom hos patienten ledande till korsreaktion. användning av en icke rekommenderad suspensionsvätska till de röda erytrocyterna. ofullständig resuspension av erytrocyter. en erytrocytsuspension avvikande från den rekommenderade. hemolys av prov- eller testerytrocyter. närvaro av fibrin (en kompakt pellet av celler i botten av mikroröret 69

tillsammans med ett tunt, rosa band, skapad av erytrocyter som kvarhålls av fibrinrester, på toppen av gelen). kontaminering mellan mikrorören. användning av andra procedurer än den ovan beskrivna. Under licens frå DiaMed SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 70

10 IX - LITERATURE 1. Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974; 26:53-61. 2. Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83:840-844. 3. Rouger Ph, Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson 1981. 4. ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987; 53:241-247. 5. Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol2:74-98. 6. Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988;XXXI,367-376. 7. Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf. Immunohematol. 1988;XXXI,377-380. 8. Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30:109-113. 9. Proceedings of the second international workshop and symposium on monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens. IgG/Complement. Lund. 1990;195-206. 10. Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1:159-161. 11. Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson 1991. 12. Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50:679-685. 13. Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992;35:299-309. 14. Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de 35882 échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36:391-399. 15. International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69:292-300. 16. Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.

Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette - France Tél.: +33 1 47 95 60 00 06/2009 Fax.: +33 1 47 41 91 33 Code: 480006