/11 1. ANVÄNDNINGSOMRÅDE

Platelia Rubella IgM 1 platta 96 72851 KVALITATIV DETEKTION AV IgM-ANTIKROPPAR MOT RUBELLAVIRUS I HUMANT SERUM ELLER HUMAN PLASMA GENOM IMMUNOLOGISK ENZYMANALYS 881142 2013/11 1. ANVÄNDNINGSOMRÅDE Platelia Rubella IgM är en immunologisk analys för kvalitativ detektion av IgM-antikroppar mot rubellavirus i humant serum eller human plasma. 2. KLINISK BETYDELSE Rubella, som även kallas "röda hund", är en virussjukdom som är spridd över hela världen. Rubellainfektion är oftast en godartad, knappt märkbar sjukdom hos barn och vuxna. De kliniska symtomen inkluderar måttlig feber, huvudvärk, halsont och hudutslag över hela kroppen. Rubellainfektion under graviditet är dock allvarligare, med väldokumenterade multipla medfödda komplikationer som dövhet, starr, psykisk utvecklingsstörning, samt fosterdöd. Aktiv immunisering av barn i skolåldern har kraftigt minskat förekomsten av rubellaepidemier, men det finns fortfarande ett behov av noggrann kontroll av immunstatus, särskilt för kvinnor i fertil ålder. Förekomsten av rubella IgG-antikroppar hos kvinnor före konception säkerställer att fostret är skyddat mot en eventuell rubellavirusinfektion under graviditeten. Vaccinationseffekten kan också bestämmas genom detektion av rubella IgG-antikroppar i serum efter immunisering. Sedan rubellaviruset först isolerades 1962 har detektion av specifika antikroppar mot rubella varit av största intresse på grund av den teratogena risken. De första testerna för att upptäcka antikroppar var neutraliseringstestet, komplementbindning och immunofluorescens. Analyserna är antingen svåra att utföra i rutinlaboratoriemiljö eller är svåra att reproducera. På senare tid har hemagglutination-hämningstekniker möjliggjort en snabb diagnos av både den akuta infektionsstatusen och patientens immunstatus. Engvall och Perlmann beskrev det första enzymatiska immunoanalystestet 1971. Utvecklingen av metoden har bidragit till en förbättrad specificitet och känslighet för detektion av en rad antigener och antikroppar. Utvärdering av på varandra följande serologiska test som påvisar närvaro av IgM, förekomst eller en avsevärd ökning av IgG-antikroppstiter (dubblering av titern) i två serumprover som erhållits med ett minimiintervall på tre veckor, skall ses som bevis på exponering för rubellavirus även om kliniska patognomona tecken på den här infektionen inte finns. 3. PRINCIP Platelia Rubella IgM är ett kvalitativt test för detektion av IgM-antikroppar mot rubellavirus i humant serum eller human plasma genom immunologisk enzymanalys med insamling av IgM på den fasta fasen. Den fasta fasen (mikroplattans brunnar) bestryks med antihumana µ-kedjeantikroppar. En blandning av rubellaantigen och monoklonala anti-rubella-antigen-antikroppar märkta med peroxidas används som konjugat. Testet består av följande steg: Steg 1 Patientprover, kalibratorer och kontroller späds 1/21 och fördelas sedan i mikroplattans brunnar. Under inkuberingen, en timme i 37 C, binds de IgM-antikroppar som finns i provet till mikroplattans brunnar belagda med anti-µ-antikroppar. Efter inkuberingen tas IgG och serumproteiner bort genom tvättning.

Steg 2 Konjugatet (blandningen av rubellaantigen och monoklonala anti-rubella-antikroppar märkta med peroxidas) tillsätts i mikroplattans brunnar. Under inkuberingen, en timme i 37 C, binds konjugatet till de specifika IgM anti-rubella-antikropparna som samlades in på mikroplattan. Obundet konjugat avlägsnas genom tvättning när inkuberingsperioden är slut. Steg 3 Förekomsten av immunkomplex (antihumana µ-kedjor/igm anti-rubella/rubellaantigen/peroxidasmärkta monoklonala anti-rubella-antikroppar) påvisas genom tillsats av en enzymatisk framkallningslösning i varje brunn. Steg 4 Efter inkubering i rumstemperatur (+18-30 C) avbryts den enzymatiska reaktionen genom att 1 N svavelsyralösning tillsätts. Den optiska densiteten, som avläses med hjälp av en spektrofotometer inställd på 450/620 nm, är proportionell mot mängden IgM-antikroppar mot rubella i provet. 4. PRODUKTINFORMATION Den tillhandahållna mängden reagens är beräknad för 96 test. Alla reagenser är enbart avsedda för in vitrodiagnostik. Märkning Typ av reagens Innehåll R1 R2 R3 R4 R5 R6a R6b R7 Microplate Concentrated Washing Solution (20x) Negative Control Calibrator Positive Control Antigen Conjugate (101x) Diluent Mikroplatta (färdig att användas) 12 remsor med vardera 8 brytbara brunnar, bestrukna med antihumana µ-kedjor. Koncentrerad tvättlösning (20x) TRIS-NaCl-buffert (ph 7,4), 2 % Tween 20 Konserveringsmedel: 0,04% ProClin 300 Negativ kontroll Humant serum negativt för IgM-antikroppar mot rubella samt negativt för HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 och anti-hcv. Konserveringsmedel: 0,1% ProClin 300 Kalibrator Humant serum reaktivt för IgM-antikroppar mot rubella samt negativt för HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 och anti-hcv. Konserveringsmedel: 0,1% ProClin 300 Positiv kontroll Humant serum reaktivt för IgM-antikroppar mot rubella samt negativt för HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 och anti-hcv. Konserveringsmedel: 0,1% ProClin 300 Rubellaantigen Frystorkad rubella-antigen Konserveringsmedel: 0,36% ProClin 300 Konjugat (101x) Murin monoklonal antikropp mot rubella märkt med peroxidas Konserveringsmedel: 0,16% ProClin 300 Spädningsmedel för prover och konjugat (färdigt att användas) Tris-NaCl-buffert (ph 7,6), bovint serumalbumin, 0,1% Tween 20, fenolröd Konserveringsmedel: 0,15% ProClin 300 1 1 x 70 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 4 x qsp. 8,0 ml 1 x 0,4 ml 1 x 80 ml

R9 Chromogen TMB R10 Stopping Solution Kromogen (färdig att användas) 3,3,5,5 tetrametylbenzidin (< 0,1%), H 2 O 2 (< 1%) Stopplösning (färdig att användas) 1 N svavelsyralösning 1 x 28 ml 1 x 28 ml Mer information om förvaringsvillkoren och sista förbrukningsdag finns på förpackningen. 5. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Resultatens tillförlitlighet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) tillämpas: Använd inte reagenser vars bäst-före-datum har passerat. Blanda inte reagenser från olika partier inom en bestämd analysomgång. KOMMENTAR: För tvättlösningen (R2, märknings-id: 20x grönfärgad), kromogen (R9, märknings-id: TMB turkosfärgad) och stopplösning (R10 märknings-id: 1 N rödfärgad) kan du använda andra partier än de som ingår i testet om dessa reagenser är helt likvärdiga och om samma parti används inom en bestämd analysomgång. KOMMENTAR: Dessutom kan tvättlösningen (R2, etikett-märkning : 20X grönfärgad) blandas med de 2 andra tvättlösningarna som ingår i olika Bio-Rad-reagens-satser (R2, etikettmärkningar : 10X blåeller 10X orangefärgad) vid korrekt blandning, förutsatt att endast en blandning används vid en given testkörning. Vänta 30 minuter så att reagenserna uppnår rumstemperatur (+18-30 C) innan du använder dem. Rekonstituera eller späd noggrant reagenserna och undvik all kontaminering. Utför inte testet i närvaro av reaktiva ångor (syraångor, alkaliska ångor, aldehydångor) eller damm som skulle kunna ändra konjugatets enzymatiska aktivitet. Använd glasvaror som noggrant har diskats och sköljts med avjoniserat vatten, eller ännu hellre engångsmaterial. Tvättningen av mikroplattan är ett kritiskt steg. Följ det rekommenderade antalet tvättcykler och se till att alla brunnar är helt fyllda och därefter helt tömda. Felaktig tvättning kan leda till felaktiga resultat. Se till att mikroplattan inte hinner torka efter tvättproceduren och innan reagenset har hällts i. Använd aldrig samma behållare till att fördela konjugatet och framkallningslösningen. Den enzymatiska reaktionen är mycket känslig för metaller och metalljoner. Därför får ingen metall komma i kontakt med de olika lösningar som innehåller konjugatet eller kromogenen. Kromogenlösningen (R9) ska vara färglös. Om den är blåfärgad är detta en indikation på att reagenset inte kan användas utan måste ersättas. Använd en ny pipettspets för varje prov. Kontrollera precisionen för pipetterna och annan utrustning och att de fungerar korrekt. Hälso- och säkerhetsanvisningar Material av humant ursprung som använts vid beredning av reagenserna har testats och befunnits vara ickereaktivt för hepatit B-ytantigen (HBsAg), antikroppar mot hepatit C-virus (anti-hcv) och antikroppar mot humant immunbristvirus (anti-hiv1 och anti-hiv2). Eftersom ingen testmetod med säkerhet kan garantera frånvaron av smittsamma ämnen, ska reagenser av humant ursprung och patientprover hanteras som potentiellt smittsamma. Betrakta allt material, däribland tvättlösningar, som kommer i direkt kontakt med prover och reagenser som innehåller material av humant ursprung som potentiellt smittsamt. Använd engångshandskar vid hantering av prover och reagenser. Pipettera inte med munnen. Undvik att spilla prover eller lösningar som innehåller prover. Spill måste sköljas bort med blekmedel som spätts till 10%. Vid spill av syra måste den först neutraliseras med natriumbikarbonat och därefter rengöras med blekmedel som spätts till 10%, och torkas upp med absorberande papper. Materialet som används för rengöring måste kastas i en behållare för smittfarligt avfall.

Patientprover, reagenser som innehåller material av humant ursprung, liksom smittfarligt material och smittfarliga produkter får endast kastas efter dekontaminering på följande sätt: - antingen genom att sänkas ned i blekmedel vid en slutlig koncentration på 5% natriumhypoklorit i 30 minuter, - eller genom att autoklaveras i 121 C i minst 2 timmar. VARNING! Ställ inte in lösningar som innehåller natriumhypoklorit i autoklaven Undvik all hud- och slemhinnekontakt med reagenser, inklusive dem som ej klassas som farliga. Kemiskt och biologiskt avfall måste hanteras och avlägsnas enligt rutiner för god laboratoriesed (GLP). Alla reagenser som ingår i testet är enbart avsedda för in vitro-diagnostik. Mer information om risk- och försiktighetsinformation för vissa kemiska komponenter i testkitet hittar du på etiketterna och i den information som finns sist i bruksanvisningen. Säkerhetsdatabladet (SDS) finns tillgängligt på www.bio-rad.com. 6. PROVER 1. Serum och plasma (EDTA, heparin eller citrat) är rekommenderade provtyper. 2. Följ nedanstående anvisningar för hantering, bearbetning och förvaring av blodprover: Ta alla blodprover med venpunktion och vidta vanliga försiktighetsåtgärder. Låt serumproverna koagulera fullständigt före centrifugering. Rören ska alltid vara förslutna. Separera serum eller plasma från koaglet eller erytrocyterna och förvara i väl förslutet rör efter centrifugering. Proverna kan förvaras i +2-8 C om testet genomförs inom 7 dagar. Om testet inte kommer att slutföras inom 7 dagar, eller om proverna ska skickas iväg, ska proverna frysas ned till -20 C eller kallare. Använd inte prover som tinats mer än fem gånger. Prover som har varit frysta ska blandas ordentligt (vortex) efter upptining innan testet utförs. 3. Prover som innehåller upp till 90 g/l albumin eller 100 mg/l okonjugerat bilirubin, lipemiska prover som innehåller upp till motsvarande 36 g/l triolein (triglycerid) och hemolyserade prover som innehåller upp till 10 g/l hemoglobin påverkar inte resultaten. 4. Värm inte proverna. 7. TESTFÖRFARANDE 7.1 Nödvändigt men ej bifogat material Vortexmixer. Avläsare för mikroplattor med filter på 450 nm och 620 nm (*). Inkubator för mikroplattor, termostatstyrd till 37±1 C (*). Automatisk, halvautomatisk eller manuell tvättanordning för mikroplattor (*). Sterilt destillerat eller avjoniserat vatten. Engångshandskar. Skyddsglasögon. Absorberande papper. Automatiska eller halvautomatiska, justerbara eller förinställda pipetter eller multipipetter för mätning och fördelning av 10 µl till 1 000 µl respektive 1 ml, 2 ml och 10 ml. Mätcylindrar med volymerna 25 ml, 50 ml, 100 ml och 1 000 ml. Natriumhypoklorit (blekmedel) och natriumbikarbonat. Behållare för smittförande avfall. Engångsrör. (*) Begär gärna mer information om den rekommenderade utrustningen från vår tekniska avdelning.

7.2 Reagensrekonstituering R1: Låt påsen stå 30 minuter i rumstemperatur (+18-30 C) innan den öppnas. Ta ut brickan och lägg omedelbart tillbaka oanvända remsor i påsen samt kontrollera att det finns torkmedel. Återförslut påsen noggrant och förvara den i +2-8 C. R2: Späd tvättlösningen R2 1/20 med destillerat vatten, till exempel 50 ml R2 och 950 ml destillerat vatten till en tvättlösning som är färdig att användas. Bered 350 ml utspädd tvättlösning för en platta med 12 remsor om tvättningen sker manuellt. R3, R4, R5: Späd 1/21 med spädningsmedel (R7) (exempel: 300 µl R7 + 15 µl kalibrator eller kontroll). R6a: Rubellaantigen är lyofiliserat. För att köra 3 remsor, rekonstituera en ampull lyofiliserat antigen genom att tillsätta 8 ml spädningsmedel (R7). Blanda väl. Efter spädning måste den antigena lösningen (R6a+R7) vara helt klar. R6 (R6a+R6b) Konjugatarbetslösning: Tillsätt därefter 80 µl konjugat (R6b) i varje ampull med rekonstituerat Rubellaantigen (spädd R6a). Blanda väl. Konjugatarbetslösningen måste rekonstitueras minst 1 timme före användning. 7.3 Förvaring av och validitet hos öppnade och/eller rekonstituerade reagenser Testet måste förvaras i +2-8 C. När testet förvarats i +2-8 C innan det öppnas kan varje komponent användas till det bäst-före-datum som anges på testets yttre etikett. R1: Efter öppnandet är remsorna stabila i upp till 8 veckor vid förvaring i +2-8 C i samma väl förslutna påse (kontrollera att påsen innehåller torkmedel). R2: Så snart tvättlösningen är spädd kan den förvaras i 2 veckor i +2-30 C. När den koncentrerade tvättlösningen öppnats är den stabil till det bäst-före-datum som anges på etiketten om den förvaras i +2-30 C utan att utsättas för kontaminering. R3, R4, R5, R6b, R7: Öppnade reagenser som förvaras i +2-8 C utan att utsättas för kontaminering är stabila i 8 veckor. R6 (R6a+R6b): När konjugatarbetslösningen är rekonstituerad är den stabil i 8 timmar om den förvaras i rumstemperatur (+18-30 C) och 2 veckor i +2-8 C. R9: Om det öppnade reagenset förvaras i +2-8 C utan att utsättas för kontaminering är det stabilt i upp till 8 veckor. R10: Om det öppnade reagenset förvaras i +2-8 C utan att utsättas för kontaminering är det stabilt till det bäst-före-datum som anges på etiketten. 7.4 Metod Följ beskrivningen av testförfarandet och god laboratoriesed noggrant. Låt reagenserna uppnå rumstemperatur (+18-30 C) före användning. Användandet av brytbara brunnar erfordrar särskild uppmärksamhet vid hantering. Använd kalibrator och kontroller vid varje analysomgång för validering av testresultaten. 1. Fastställ fördelnings- och identifieringsplanen noggrant för kalibrator, kontroller och patientprover. 2. Bered den utspädda tvättlösningen (R2) [se avsnitt 7.2]. 3. Ta ut brickan och remsorna (R1) ur skyddsförpackningen [se avsnitt 7.2]. 4. Bered konjugatarbetslösningen R6 (R6a+R6b) [se avsnitt 7.2]. 5. Kalibrator och kontroller (R3, R4, R5) och patientproverna (S1, S2 ) ska spädas i individuellt identifierade provrör med spädningsmedel (R7) så att spädningen blir 1/21: 300 µl spädningsmedel (R7) och 15 µl prov. Blanda de utspädda proverna med vortexmixern. 6. Följ den angivna ordningsföljden nedan noggrant och fördela i varje brunn 200 µl av den utspädda kalibratorn och de utspädda kontrollerna och patientproverna: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A R3 S5 S13 B R4 S6 C D R4 R5 S7 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12

7. Täck mikroplattan med självhäftande plattförslutare. Tryck sedan till ordentligt på plattan så att förslutningen sluter tätt. Inkubera mikroplattan direkt i ett termostatkontrollerat vattenbad eller i en torr inkubator i 37±1 C i 1 timme ± 5 minuter. 8. Ta bort den självhäftande plattförslutaren när den första inkuberingsperioden är slut. Aspirera samtliga brunnars innehåll till en behållare för smittfarligt avfall (innehållande natriumhypoklorit). Tvätta mikroplattan 4 gånger med 350 µl tvättlösning (R2). Vänd mikroplattan upp och ned och slå med lätta slag mot det absorberande papperet så att resterande vätska försvinner. 9. Fördela 200 µl av konjugatarbetslösningen (R6) i alla brunnar. Lösningen måste skakas varsamt före användning. 10. Täck mikroplattan med självhäftande plattförslutare. Tryck sedan till ordentligt på plattan så att förslutningen sluter tätt. Inkubera mikroplattan direkt i ett termostatkontrollerat vattenbad eller i en torr inkubator i 37±1 C i 1 timme ± 5 minuter. 11. Ta bort den självhäftande plattförslutaren när den andra inkuberingsperioden är slut. Aspirera samtliga brunnars innehåll till en behållare för smittfarligt avfall (innehållande natriumhypoklorit). Tvätta mikroplattan 4 gånger med 350 µl tvättlösning (R2). Vänd mikroplattan upp och ned och slå med lätta slag mot det absorberande papperet så att resterande vätska försvinner. 12. Fördela snabbt, i skydd från ljus, 200 µl kromogenlösning (R9) i alla brunnar. Låt reaktionen fortgå i mörker i 30 ± 5 minuter i rumstemperatur (+18-30 C). Använd inte självhäftande plattförslutare under denna inkubering. 13. Stoppa den enzymatiska reaktionen genom att tillsätta 100 µl stopplösning (R10) i varje brunn. Använd samma ordningsföljd och samma fördelningshastighet som för framkallningslösningen. 14. Torka noggrant av mikroplattans botten. Avläs den optiska densiteten vid 450/620 nm med hjälp av mikroplattans avläsare inom 30 minuter efter det att reaktionen har avbrutits. Remsorna måste alltid skyddas mot ljus innan de läses av. 15. Kontrollera överensstämmelsen mellan avläsningarna och fördelningsplanen för plattan och proverna innan du rapporterar resultaten. 8 TOLKNING AV RESULTATEN 8.1 Beräkning av gränsvärdet (CO) Gränsvärdet (CO) utgör medelvärdet av de optiska densitetsvärdena (OD) hos de dubbla kalibratorerna (R4): CO = medelvärdet av OD R4 8.2 Beräkning av provkvot Provresultat uttrycks som en kvot med hjälp av följande formel: Provkvot = provets OD/CO 8.3 Kvalitetskontroll Inkludera kalibratorn och kontrollerna för varje mikroplatta vid varje analysomgång och analysera de erhållna resultaten. För att analysen ska kunna valideras måste följande villkor uppfyllas: Värden för optisk densitet: - CO 0,300-0,80 x CO < OD R4 replikat 1 < 1,20 x CO - 0,80 x CO < OD R4 replikat 2 < 1,20 x CO (Individuella OD för varje replikat av kalibratorn (R4) får inte avvika med mer än 20% av CO-värdet). Kvoter för optisk densitet: - R3-kvot (OD R3 / CO) 0,30 - R5-kvot (OD R5 / CO) 1,50 Om kvalitetskontrollkriterierna inte är uppfyllda ska testet göras om.

8.4 Utvärdering av resultaten Provkvot Resultat Utvärdering Kvot < 0,80 Negativt 0,80 kvot < 1,00 Tveksamt Kvot 1,00 Positivt Provet anses vara icke-reaktivt med avseende på förekomsten av IgM-antikroppar mot rubella. Provet anses vara tveksamt med avseende på förekomsten av IgM-antikroppar mot rubella. Resultatet måste bekräftas med ett nytt test som ska göras på ett andra prov taget minst 3 veckor efter det första provet. Provet anses vara reaktivt med avseende på förekomsten av IgM-antikroppar mot rubella. 8.5 Ofta förekommande problem Icke validerade eller icke repeterbara reaktioner orsakas ofta av följande: Otillräcklig tvättning av mikroplattan. Kontaminering av negativa prover med serum eller plasma med en hög antikroppstiter. Kontaminering av framkallningslösningen med kemiska oxidationsmedel (blekmedel, metalljoner ). Kontaminering av stopplösningen. 9 PRESTANDA 9.1 Prevalens Prevalensen av anti-rubella IgM-antikroppar med användning av Platelia Rubella IgM (72851) beräknades på en panel bestående av 347 prover från gravida kvinnor. 2 prover var positiva för anti-rubella IgMantikroppar. Prevalensen uppmättes med analysen Platelia Rubella IgM och fastställdes till 0,6% (2/347). Prestandan för Platelia Rubella IgM utvärderades på 2 platser med totalt 809 prover från gravida kvinnor och blodgivare. På den ena platsen utfördes en jämförande undersökning med Platelia Rubella IgM TMB (72922). På den andra platsen utvärderades prestandan för Platelia Rubella IgM mot en kommersiell EIAanalys. 9.2 Jämförande undersökning (Plats 1) Prestandan för Platelia Rubella IgM utvärderades på en panel bestående av 399 prover med följande fördelning: 172 serumprover från blodgivare 151 serumprover från gravida kvinnor 76 serumprover från kommersiella paneler positiva för anti-rubella IgM Platelia Rubella IgM TMB (72922) Platelia Rubella IgM (72851) Negativt Tveksamt Positivt Totalt Negativt 319 0 1 320 Tveksamt 2 0 0 2 Positivt 0 0 77 77 Totalt 321 0 78 399 Global överensstämmelse 396/399 99,25% [KI 95% = 97,82% - 99,84%] Relativ specificitet 319/321 99,38%* [KI 95% = 97,77% - 99,92%] Relativ känslighet 77/78 98,72% [KI 95% = 93,06% - 99,97%] *Tveksamma resultat antogs vara positiva [KI 95 %] = 95% konfidensintervall

Dessutom utvärderades 60 serumprover från 7 vaccinationsuppföljningar (utförda med två typer av vaccin) med de två kiten: förekomsten av IgM anti-rubella följer samma mönster för dessa 2 kit. 9.3 Prestanda (Plats 2) Prestandan för Platelia Rubella IgM utvärderades på en panel bestående av 350 prover: 47 barn upp till 15 år (27 flickor och 20 pojkar) 299 vuxna (298 kvinnor gravida eller nyförlösta och 1 man) 1 serumprov från den franska nationella kvalitetskontrollundersökningen Testresultaten jämfördes med en EIA-analys, som köptes in som referens. Annan EIA-analys Platelia Rubella IgM (72851) Negativt Tveksamt Positivt Totalt Negativt 344 0 0 344 Tveksamt 1 0 0 1 Positivt 0 1 4 5 Totalt 345 1 4 350 Relativ specificitet 344/345 99,71%* [KI 95% = 98,40% - 99,99%] *Tveksamma resultat antogs vara positiva [KI 95 %] = 95% konfidensintervall Av de 5 positiva serumproverna: var de 4 överensstämmande positiva proverna tagna från samma person vid olika tidpunkter, bekräftades det positiva icke-överensstämmande serumprovet vara positivt med en tredje kommersiell EIA-analys och var i enighet med provresultat, som var tagna 4 månader efter vaccination. 9.4 Korsreaktivitet En panel bestående av 212 prover inklusive 164 positiva prover för toxoplasmos, CMV, EBV, HSV, VZV, påssjuka, mässling och HIV och 48 positiva prover för reumatoid faktor, autoantikroppar och heterofila antikroppar och myelomprover testades med Platelia Rubella IgM (72851) och Platelia Rubella IgM TMB (72922). Av dessa prover befanns 1 CMV IgM-prov vara icke-överensstämmande positivt och 6 prover med reumatoid faktor befanns vara positiva eller tveksamma med båda analyserna. Fyra av dessa sex prover konfirmerades som negativa med en annan kommersiell EIA-analys. 9.5 Precision Precision inom samma analysomgång (repeterbarhet): För utvärdering av repeterbarheten inom samma analysomgång testades ett negativt och tre positiva prover 30 gånger i samma analysomgång. Kvoten (prov-od/gränsvärde) bestämdes för varje prov. Medelkvoten, standardavvikelsen (SD) och variationskoefficienten (CV %) för alla proverna redovisas i tabellen nedan. Precision inom samma analysomgång (repeterbarhet) N=30 Negativt prov Lågt positivt prov Positivt prov Högt positivt prov Kvot (prov-od/gränsvärde) Medelvärde 0,07 1,73 2,51 4,06 SD 0,002 0,03 0,06 0,11 CV % 2,73 1,81 2,48 2,68 Precision mellan analysomgångar (reproducerbarhet): För utvärdering av reproducerbarheten mellan analysomgångar testades alla fyra proverna (ett negativt och tre positiva prover) i duplikat, i två omgångar per dag under en tjugodagarsperiod. Kvoten (prov- OD/gränsvärde) bestämdes för varje prov. Medelkvoten, standardavvikelsen (SD) och variationskoefficienten (CV %) för alla proverna redovisas i tabellen nedan.

Precision mellan analysomgångar (reproducerbarhet) N=80 Negativt prov Lågt positivt prov Positivt prov Högt positivt prov Kvot (prov-od/gränsvärde) Medelvärde 0,04 1,19 2,24 3,60 SD 0,005 0,03 0,06 0,10 CV % 12,7 2,8 2,6 2,8 10 TESTETS BEGRÄNSNINGAR Diagnos av rubellainfektion kan endast fastställas utifrån en kombination av kliniska och biologiska data. Resultatet från ett enda test för titrering av anti-rubella IgM-antikroppar utgör inte tillräckligt med bevis för diagnosen av nylig infektion av rubellavirus. Diagnos av en nylig infektion kan endast fastställas med fullständig patientinformation inklusive kliniska och biologiska data (markant ökning av anti-rubella IgG-antikroppar hos 2 patientserumprover tappade med 3 veckors intervall och testade i samma analysomgång, förekomst av anti-rubella IgM vid en signifikant nivå, demonstration av låg IgG-aviditet). Förekomst av anti-rubella IgM-antikroppar utgör inte tillräckligt bevis för att bekräfta en nylig infektion då IgM kan leva kvar flera månader eller till och med år efter infektion. När IgM detekteras ska en kvantitativ bestämning av anti-rubella IgG-antikroppar utföras, samt en uppföljning av utvecklingen av anti-rubellaantikroppar under minst ett andra serumprov som tagits tre veckor senare. Om ett prov testas för tidigt under en nylig första infektion kan det hända att anti-rubella IgM-antikroppar inte har bildats än. Om misstanke föreligger ska ett andra prov tappas ungefär 3 veckor senare och IgMtest ska åter utföras. Prover med förekomster av reumatoid faktor kan ge falskt positiva resultat. 11 TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL Alla tillverkade reagenser bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagandet av råmaterial till kommersialiseringen av den slutgiltiga produkten. Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och lanseras på marknaden endast om det överensstämmer med fördefinierade acceptanskriterier. Handlingar som beskriver produktion och kontroller av varje enskilt parti sparas hos Bio-Rad. 12 REFERENSER 1. COOPER, L.Z., BUIMOVICI-KLEIN, E. 1985. : Rubella. In Virology: 1005-1020. Edited by Fields, B.N., et al. New York, New York: Raven Press. 2. DORSETT, P.H., MILLER, D.C., GREEN, K., BYRD, F. 1985. : Structure and function of the Rubella virus proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 150-S 156. 3. FORSGREN, M. 1985. : Standardization of techniques and reagents for the study of Rubella antibody. Rev. Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 129-S 132. 4. KALKKINEN, N., OKER-BLOM, C., AND PETTERSSON, R.F. 1984. : Three genes code for Rubella virus structural proteins El. E2a, E2b, and C. J. Gen. Virol, 65: 1549-1557. 5. LUCAS, G., et al. April 17-20, 1989. : Serological diagnosis of IgG immunoglobulins ant-rubella by immunoenzymatic assay in a commercially available kit. Nice: 4th European Congress of Clinical Microbiology. 308/PP20. 6. MAURIN, J. 1985. : Le virus de la rubéole. Bulletin de l Institut Pasteur 1969, 67, 483-502. Virologie médicale, chap. 34, 586-604. Flammarion Médecine Sciences. 7. NCCLS Document I/LA6-T Tentative Guideline December 1992 : Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test and Product intended for the Detection and Quantitation of Rubella IgG Test Products. 8. PETTERSSON, R., et al. 1985. : Molecular and antigenic characteristics and synthesis of Rubella virus structural proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 140-S 149. 9. WOLINSKY J.S. : Rubella. In Virology, 1990, 2nd Ed. 815-38. Edited by Fields, B.N., and al. New York: Raven Press, Ltd.

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare 92430 Marnes-la-Coquette - France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 2013/11 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 881142 www.bio-rad.com