COALIZA Protein S Free SVENSK - Instick revision 01/2003

Transkript

1 AVSETT ÄNDAMÅL COALIZA Protein S - Free är en enzymimmunoanalys, avsedd för kvantitativ bestämning av fritt protein S-antigen i human plasma, antikoagulerad med citrat. SAMMANFATTNING OCH METODPRINCIP Protein S är ett vitamin K-beroende, antikoagulant plasmaglykoprotein. Protein S har en molekylvikt på ca 70 kda och cirkulerar i plasma vid en koncentration av 25 µg/ml och har en halveringstid på ca två dagar 14. Cirka 40% av protein S är i en fri form, resterande 60% är komplexbundet med C4BP. Endast fritt protein S (FPS) kan fungera som cofaktor vid APC-degradering av FVa och FVIIIa 5,6. Protein S-brist associeras med en ökad trombosrisk Coaliza Protein S Free baseras på en metod beskriven av Dahlbäck med kollegor 12. Brunnarna i mikrotiterplattan är förkopplade med C4BP, som har en hög affinitet för fritt protein S-antigen i plasma. En monoklonal antikropp (HPS 54) konjugerad med pepparotsperoxidas (HRP) tillsätts tillsammans med plasman. Efter att plasman och konjugatet har inkuberats, tvättas icke bundet material bort. Protein S är komplexbundet med C4BP och antikroppskonjugatet. Mängden av dessa komplex bestäms genom tillsatts av ett kromogent substrat. Mängden färg som utvecklas i en brunn är, då det uttrycks i en log-log-skala, direkt proportionellt mot mängden fritt protein S-antigen i plasmaprovet. KITKOMPONENTER 1. Mikrotiterplattor 12 x 8 Brunnarna är kopplade med renad human C4BP. 2. Konjugatkoncentrat 1 x 0,3 ml Monoklonal antikropp mot anti-protein S (HPS 54) konjugerad med peroxidas, innehåller konserveringsmedel och proteinstabilisator. 3. Diluent (för konjugat och prov) 2 x 60 ml Trisbuffert, innehåller tillsatser och konserveringsmedel. 4. Tvättbuffert 2 x 50 ml Fosfatbuffert (10x koncentrat) innehåller Tween 20 (1%) och 2-kloroacetamid. 5. Substratbuffert 2 x 14 ml Citrat-acetatbuffert innehåller väteperoxid. 6. Kromogent TMB 1 x 1,5 ml 3,3,5,5 -Tetrametylbenzidin (TMB) 7. Kalibreringsplasma 2 x 1 ml (frystorkad) Human plasma innehållande en känd koncentration (IU/ml) av fritt Protein S, enligt specifikationen i det bifogade insticket. Koncentrationen av fritt protein S i kalibratorplasman har analyserats mot den 1:a Internationella standarden 93/ Normal Kontrollplasma 1 x 1 ml (frystorkad) Human plasma innehållande ett känt koncentrationsintervall (IU/ml) av fritt Protein S, enligt specifikationen i det bifogade insticket. 9. Stopplösning 1 x 12 ml Svavelsyra (1N H2SO4) 10. Självhäftande plattskydd x 6 Självhäftande skydd för att täcka mikrotiterplattorna under inkubationer. 11. Återslutbar förpackning x 1 För förvaring av oanvända mikrotiterstrippar. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER: Varje givarenhet som använts för preparation av kontroller, kalibratorer och för det humana material som finns i mikrotiterplattorna har testats med för FDA godkända metoder för hepatit B ytantigen, antikroppar mot HIV 1 och 2 samt hepatit C och funnits negativa. Eftersom inget test fullkomligt kan utesluta förekomst av blodburen smitta skall försiktighet iakttagas vid hantering och bortskaffande av reagens innehållande material av humant ursprung 14. Undvik ögon- och hudkontakt (S24/25). Om något reagens kommer i kontakt med ögonen, skölj omedelbart med stora mängder vatten och sök medicinsk rådgivning (S26). Häll inte ut reagensen i avloppet (S29). Använd lämpliga skyddskläder (S36). Om det sker en olycka eller om ni mår dåligt, kontakta omedelbart medicinsk rådgivning (visa om möjligt etiketten på flaskan) (S45). Denna produkt är avsedd för in vitro diagnostik. REAGENSFÖRVARING OCH STABILITET Vid förvaring i 2-8 C är oöppnade reagens hållbara tills utgången av det datum som står tryckt på etiketten. - Mikrotiterplatta: För att undvika kondensation i brunnarna, skall förpackningen som innehåller mikrotiterplattorna rumstemperas innan det öppnas. Förvara oanvända strippar vid 2-8 C i den återslutbara förpackningen, tillsammans med silikagelkudden som medföljer i förpackningen. - Tvättbuffert: Spädd tvättbuffert är stabil i 14 dagar vid 2-8 C. - Konjugat: Spätt konjugat är stabilt i 14 dagar vid 2-8 C. - Kromogen: Förvara kromogenen skyddad från ljus. Då substrat-kromogentmb-lösningen inte är stabil efter blandning, skall instruktionerna följas noga. - Kalibratorn och normal kontrollplasma: kan efter rekonstituering alikvoteras och förvaras i 4 månader vid -20 C. Återfrys inte. Blanda noggrant alla spädningar av plasman. NÖDVÄNDIGT MATERIAL SOM EJ MEDFÖLJER KITET - Sterilt destillerat eller avjoniserat vatten eller NCCLS Typ II vatten 15 - Multikanalpipetter som kan leverera 100 µl och 200 µl - Mikropipetter för pipettering av volymerna 10 µl, 500 µl och 1000 µl - Mätglas i glas eller plast för blandning av tvättbuffert - Manuellt, semi-automatiskt eller automatiskt tvättsystem för mikrotiterplattor - Avläsare för mikrotiterplattor med 450 nm (det är önskvärt med ett 620 nm / 630 nm referensfilter) - Provrör/behållare för preparation av spädningar av kalibratorer, kontroller, prover samt arbetslösningar för konjugat och substrat. - Vortex-mixer. PROVTAGNING OCH PROVHANTERING Nio delar färskt venöst blod samlas i en del trinatriumcitrat. Centrifugera omedelbart vid 2000 g i minst 10 minuter. Hänvisa till NCCLS dokumentet H21-A3 för ytterliga instruktioner avseende provtagning, provhantering och provförvaring 16. Prover som innehåller partiklar skall klaras genom centrifugering innan analys. ANVÄND INTE VÄRME-INAKTIVERADE PLASMAPROVER. KVALITETSKONTROLL Normalkontrollen som medföljer kitet är avsedd att kontrollera att alla steg och delar av analysmetoden fungerar. Resultatet av fritt protein S-analysen av kontrollen skall vara inom det intervall som anges i det bifogade insticket. Om en andra kontrollpunkt behövs, späd normalkontrollen 1:2 (1+1) enligt beskrivningen under REAGENSFÖRBEREDELSER. Mängden fritt protein S-antigen som uppmäts i den spädda kontrollen skall motsvara ett värde inom de halverade gränsvärdena. Både normal och abnormal kontroll rekommenderas för ett komplett kvalitetsprogram 17. Varje laboratorium skall etablera sina egna kontrollmedelvärden och standardavvikelser och skall etablera ett kvalitetsprogram för övervakning av laboratorieanalyser. Kontroller skall analyseras på varje mikrotiterplatta. Hänvisa till Westgard et al. för identifiering och hantering av okontrollerade situationer 18. SPÅRBARHET FÖR KALIBRATORER OCH KONTROLLMATERIAL De angivna halterna av fritt protein S i kalibrator och kontroll är spårbara till den Internationella standarden för protein S från NIBSC (National Institute for Biological Standards and Controls) enligt WHOs rekommendationer. Denna Internationella standard används för att ansätta ett värde på en kalibratorplasma som används som husstandard. Denna husstandard används i sin tur vid kalibrering av kalibratorer och kontroller. METODBESKRIVNING (Se också SAMMANFATTNING AV METODBESKRIVNING) Viktigt - Låt reagensen rumstempereras (18-25 C) innan analys. - Kromogent TMB innehåller DMSO, vars smältpunkt är 18 C. Låt det tempereras till C, tills allt är i lösning. Blanda noga innan användning. NOTERA: Det är normalt att kromogent TMB har en gulaktig färg. - Blanda alla lösningar försiktigt innan användning. - Alla spädningar av kalibreringsplasma, normalkontrollplasma och prover, måste göras precis före analysen. - För att utföra analysen så effektivt som möjligt, använd provrör för spädning av kalibratorer, kontroller och prover. - Använd en multikanalpipett som kan applicera i 8 brunnar samtidigt, då uppnås jämnare inkubations- och reaktionstider i brunnarna. - Applicera samtliga kalibratorer och plasmaprover inom 5 minuter. - Starta inkubationen omedelbart efter applicering av den första tillsatsen av kalibrator/kontroll/prov eller reagens. - Använd inte kitkomponenter efter utgångsdatumet. - Blanda inte reagens från kit med olika lotnummer.

2 REAGENSFÖRBEREDELSER 1. Spädning av tvättbuffert (stabil i 14 dagar vid 2-8 C): Späd den koncentrerade tvättbufferten 1:10 (1+9) med sterilt, destillerat eller avjoniserat vatten eller NCCLS Typ II vatten 15. Om hela mikrotiterplattan skall användas, blanda 50 ml koncentrerad buffert med 450 ml vatten. Om endast en del av brunnarna på mikrotiterplattan skall användas, förbered en proportionerlig volym av tvättlösningen. 2. Konjugatspädning (stabilt i 14 dagar vid 2-8 C) Späd konjugatkoncentratet 1:51 (1+50) med diluenten enligt tabell 1 nedan. Blanda noga. Tabel 1: Konjugatspädning Antal strippar som används Diluent-konjugat och prov (ml) Konjugatkoncentrat (ml) Kalibreringsplasma och normalkontrollplasma: Rekonstituera varje flaska med kalibratorplasma respektive kontrollplasma med 1 ml sterilt vatten eller avjoniserat vatten eller NCCLS typ II vatten 10. Låt plasman vila i 30 minuter. Rotera försiktigt före användning. Rekonstituerad plasma är stabil i 4 månader vid -20 C. 4. Spädningar av kalibratorplasma (använd omedelbart; stabila 30 minuter vid C): Förbered fyra proportionerliga spädningar av kalibratorplasma enligt tabell 2 nedan. Kal1, den med högsta halten, har en fritt protein S-halt motsvarande det värde som finns i det bifogade insticket (ca 1,0 IU/ml). Tabell 2: Spädningar av kalibratorplasman Kal1 1,0 IU/ml fritt PS 10 µl av Kal. Plasma 1000 µl Diluent Kal2 0,5 IU/ ml fritt PS 500 µl Kal µl Diluent Kal3 0,25 IU/ml fritt PS 500 µl Kal µl Diluent Kal4 0,125 IU/ml fritt PS 500 µl Kal µl Diluent NOTERA: Det exakta värdet för varje kalibratorspädning (kal1, kal2, kal3, kal4) erhålls genom av dividera det värde som är åsatt kalibratorn i det bifogade insticket, med 1, 2, 4 och 8 respektive. 5. Spädningar av normalkontrollen (använd omedelbart; stabil i 30 minuter vid C): Späd kontrollplasman 1:101 genom att tillsätta 10 µl kontrollplasma till 1 ml Diluent. Blanda noga. För att erhålla en andra kontrollpunkt, gör en ytterligare spädning 1:2 (1+1) genom att blanda 500 µl av den förspädda normalkontrollen med 500 µl Diluent. Blanda genom långsam rotation. 6. Substrat-Kromogen TMB-spädning (förbered under de sista 5-10 minuterna av inkubationen mellan konjugat och prov). - NOTERA: Slutlösningen skall var färglös. Om lösningen blir blå, använd den inte. Förbered Substrat-Kromogen TMB-spädningen precis innan den skall användas: - Om hela mikrotiterplattan skall användas, kombinera de två 14 ml flaskorna med substratbuffert och tillsätt 560 µl Kromogen TMB. Blanda noga. - Om endast delar av mikrotiterplattan skall användas, följ instruktionerna i tabell 3 nedan. Tabell 3: Substrat-Kromogen TMB-spädning Antal strippar som används Substrat (ml) Kromogen TMB (µl) ANALYSMETOD 1. Späd proverna 1:101 (1+100) genom att tillsätta 10 µl plasma till 1 ml Diluent. Blanda noga. 2. Använd endast det antal strippar som behövs för analysen. Ta bort återstående strippar från hållaren och förvara dem i sin förpackning med silikagelkudden. 3. Reservera 6 brunnar för blank (A1), 4 nivåer av kalibratorspädningar och normalkontrollen. NOTERA: Om en andra kontroll används, reservera 7 brunnar. 4. Tillsätt 100 µl konjugatspädning till respektive brunn utom blanken (A1). 5. Lämna brunnen som ska användas som blank (A1) tom, pipettera över 100 µl av de olika färskt tillredda kalibratorspädningarna, kontrollen(erna) och proverna till respektive brunn. 6. Täck plattan med en självhäftande film. Blanda genom några försiktiga slag och inkubera i 45 (± 5) minuter vid rumstemperatur (18-25 C). 7. Under de sista 5-10 minuterna av konjugat/prov-inkubationen, förbered Substrat-Kromogen TMB-spädningen enligt beskrivningen under sektionen REAGENSFÖRBEREDELSER ovan. 8. Ta bort och släng den självhäftande filmen efter inkubationens slut. 9. Sug upp hela innehållet i brunnarna och fyll dem helt (ca 300 µl) med den utspädda tvättbufferten. 10. Upprepa processen av uppsugning och tvätt ytterligare tre gånger. 11. Efter den sista tvätten, tryck mikrotiterplattan mot ett absorberande papper för att avlägsna överskottet av vätska i och runt brunnarna. 12. Tillsätt 200 µl färskt tillredd substrat-kromogen TMB-spädning till varje brunn, inklusive till blanken. 13. Inkubera mikrotiterplattan, utan skyddsfilm, vid rumstemperatur (18-25 C) i 10 minuter. 14. Stoppa reaktionen genom att tillsätta 100 µl stopplösning, i samma sekvens och intervall som vid tillsatts av Substrat-Kromogen TMB-spädningen. 15. Avläs absorbanserna vid 450 nm med en avläsare för mikrotiterplattor. Om avläsaren kan läsa vid dubbla våglängder, skall man använda referensvåglängden 620 nm / 630 nm. Avläs absorbansen för respektive brunn. RESULTAT - Plotta kalibratorhalterna av fritt protein S-antigen på abscissan (x-axeln) i en Log-Log-skala och dess korresponderande absorbans på ordinatan (y-axeln). Drag den bäst anpassade räta linjen. - Bestäm koncentrationen av fritt protein S-antigen (IU/ml) på prover och kontroller från grafen, eller om ett datasystem eller en miniräknare används, beräkna dem med log-log-regression. - Ett exempel på en typisk standardkurva vid 23 C visas nedan.

3 Sammanfattning av metodbeskrivning Pipettera konjugat (100 µl/brunn) Pipettera förspädda kalibratorer, kontroll(er) och prover: 100 µl/brunn Inkubera: 45 min vid RT Tvätt 4x Pipettera Substrat 200 µl/brunn Inkubera: 10 min vid RT Pipettera Stopplösning 100 µl/brunn Avläs vid 450 nm

4 Problemlösningsguide Problem Möjliga orsaker Problemlösning 1. Kontrollvärdena är utanför angivet 1a. Felaktig temperatur, tidtagning eller pipettering. Kontrollera metoden. intervall. 1b. Felaktiga reagensförberedelser, Kontrollera metoden. spädningsfel, reagensen ej tillräckligt blandade. 1c. Fel filter vid absorbansavläsningen. Kontrollera att filtrets våglängd motsvarar 450 nm. Om ingen referensabsorbans används, ökar absorbanserna med ca 0,050. 1d. Interferens i den optiska strålvägen. Kontrollera avläsaren. Rengör eller torka botten på mikrotiterplattan. Titta efter luftbubblor. Upprepa avläsningen. 1e. Använt komponenter från olika kitloter. Använd inte komponenter från olika kitloter. Reagensen i kiten har kombinerats specifikt för varje frisläppt lot. 1f. Utdaterade reagens. Kontrollera utgångsdatumet. Använd kitlot som inte passerat utgångsdatumet. inte passerat utgångsdatumet. 2. Ingen eller liten färgutveckling i 2a. Ett eller flera av reagensen är inte tillsatta Kontrollera metoden. brunnarna. eller tillsatta i fel ordning. 2b. Inaktivt konjugat: felaktig förvaring. Är reagenset kontaminerat. Kontrollera den använda metoden. 2c. Inaktiv mikrotiterplatta: felaktig förvaring. Förvara alltid oanvända strippar i den tillslutningsbara plastförpackningen. Stäng noga och behåll torkmedelskudden i förpackningen. 2d. Inaktivt substrat: Felaktig förvaring eller spädning, Använd alltid nytillredd blandning av kontamination med stoppbuffert. substrat, buffert ochtmb. Kontrollera analysmetoden. 3. För mycket färgutveckling i 3a. Kontaminerat, oxiderat eller felaktigt förberett Kontrollera att substratet är färglöst, brunnarna. substrat. släng om det är blått. Tillse att TMB är fullständigt upplöst innan användning. Tillse att TMB är väl blandat i Substratbuffert. Använd syratvättade eller engångs behållare. 3b. Kontaminerade eller felaktigt förberedda reagens. Undersök om reagensen är kontaminerade: Turbida aspekter. Kontrollera spädningar. 3c. Kontaminerad tvättbuffert (1x). Kontrollera kvaliteten på det destillerade eller avjoniserade vatten som används för spädning. 3d. Otillräcklig tvättning eller inkonsistent tvättning: Kontrollera tvättutrustningen. Fyll brunnarna Fyllnadsvolym och/eller aspiration otillräcklig eller Med tvättlösning, nästan så att de fylls helt. inkonsistent. Otillräckligt antal tvättcykler, kontaminerad utrustning. Aspirera fullständigt. Öka antalet tvättcykler. Efter tvätt, tryck den upp- och nervända mikrotiterplattan mot absorberande papper. 3e. Felaktig spädning av prover. Kontrollera analysmetoden. 4. Dålig reproducerbarhet 4a. Tvättproblem. Se 3c, 3d, 3e. 4b. Okalibrerade pipetter och eller dåligt sittande spetsar. Använd endast kalibrerade pipetter, med Felaktig pipettering. avpassade spetsar och pipettera försiktigt, utan bubblor och stänk. 4c. Reagens och plasma är inte rumstemperade Ekvilibrera reagensen till rumstemperatur eller inte tillräckligt blandade innan analys. och blanda noga innan användning. 4d. Luftströmmar över mikrotiterplattan under inkubationen. Skydda mikrotiterplattorna från luftströmmar. 4e. Tillsatts av prover och/eller reagens var för långsam. Använd konsistent och jämn pipetteringsteknik Undvik inkonsistenta tidsintervall och luftbubblor. 4f. Interferens i den optiska strålvägen. Se 1d.

5 Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia / Bibliografia / Litteratur / Litteraturförteckning / 1. DiScipio RG, Hermodson RA, Yates SG, Davie EW. A comparison of human prothrombin, factor IX (Christmas factor), factor X (Stuart factor) and protein S. Biochemistry 16, (1977). 2. DiScipio RG, Davie EW. Characterization of protein S, a g-carboxy-glutamic acid containing protein from bovine and human plasma. Biochemistry 18, (1979). 3. Stenflo J, Jönsson M. Protein S, a new vitamin K-dependent protein from bovine plasma. FEBS Lett 101, (1979). 4. Bertina RM. Hereditary protein S deficiency. Haemostasis 15, (1985). 5. Dahlbäck B, Stenflo J. High molecular weight complex in human plasma between vitamin K-dependent protein S and complement component C4b-binding protein. Proc Natl Acad Sci 78, (1981). 6. Dahlbäck B. Protein S and C4b-binding protein: Components involved in the regulation of the protein C anticoagulant system. Thromb Haemost 66, (1991). 7. Lane DA, Mannucci PM, Bauer KA, Bertina RM, Bochkov NP, Boulyjenkov V, Chandy M, Dahlbäck B, Ginter EK, Miletich JP, Rosendaal FR, Seligsohn U. Inherited Thrombophilia*: part 1. Thromb Haemost 76, (1996) 8. Faioni EM, Valsecchi C, Palla A, Taioli E, Razzari C, Mannucci PM. Free protein S deficiency is a risk factor for venous thrombosis. Thromb Haemost 78, (1997). 9. Mateo J, Oliver A, Borrell M, Sala N, Fontcuberta J. Increased risk of venous thrombosis in carriers of natural anticoagulant deficiencies. Results of the family studies of the Spanish Study on Thrombophilia (EMET study). Blood Coag Fibrinol 9, (1998). 10. Sanson B-J, Simioni P, Tormene D, Moia M, Friederich PW, Huisman MV, Prandoni P, Bura A, Rejtö L, Wells P, Mannucci PM, Girolami A, Büller HR, Prins MH. The incidence of venous thromboembolism in asymptomatic carriers of a deficiency of antithrombin, protein C, or protein S: a prospective study. Blood 94, (1999). 11. Simmonds RE, Ireland H, Lane D, Zöller B, de Frutos PG, Dahlbäck B. Clarification of the risk for venous thrombosis associated with hereditary protein S deficiency by investigation of a large kindred with a characterised gene defect. Ann Intern Med 128, 8-14 (1998). 12. Giri TS, Hillarp A, Härdig Y, Zöller B, Dahlbäck B. A new direct, fast and quantitative enzyme-linked ligand sorbent assay for measurement of free protein S antigen. Thromb Haemost 79, (1998). 13. Hubbard AR. Standardisation of protein S in plasma: Calibration of the 1 st international standard. Thromb Haemost 78, (1997). 14. Richardson JH and Backley WE. Eds. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. US. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, HHS Publication No (CDC) , Washington, D.C. (1993). 15. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Specifications for reagent water used in the clinical laboratory, NCCLS Approved Standard: C3-A National Committee for Clinical Laboratory Standards. Collection, transport and processing of blood specimens for coagulation testing and general performance of coagulation assays, Third Edition, NCCLS Document H21-A3; Vol. 18 No Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation and Quality Control specimens for coagulation. Am J Clin Pathol 53, (1970). 18. Westgard JO, Barry PL. Cost-effective quality control: Managing the quality and productivity of analytical process. AACC press (1988). 19. Malm J, Laurell M, Dahlbäck B. Changes in the plasma levels of vitamin K-dependent protein C and S and of C4b-binding protein during pregnancy and oral contraception. Br J Haematol 68, (1988). 20. Fernández JA, Estelles A, Gilabert J, España F, Aznar J, Functional and immunologic protein S in normal pregnant women and in full-term newborns. Thromb Haemost 61, (1989). Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados / Anvendte symboler / Använda Symboler / In Vitro Diagnostic Medical Device In Vitro Diagnostikum Dispositif medical de diagnostique in vitro Producto sanitario para diagnóstico in vitro Dispositivo medico-diagnostico in vitro Dispositivo médico para utilização em diagnóstico in vitro Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik In vitro diagnostisk medicinsk produkt In vitro Use by Verwendbar bis Fecha de caducidad Utiliser jusque Utilizzare entro Data límite de utilização Anvendelsesdato Användning Temperature limitation Zulässiger Temperaturebereich Limite de temperatura Limites de température Limite di temperatura Límite de temperatura Temperaturbegrænsning Temperatur gräns Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulte las instrucciones de uso Consulter les instructions d utilisation Consultare le istruzioni per l uso Consultar as instruções de utilização Se instruktion før brug Ta del av instruktionen före användning Batch code Chargenbezeichnung Codigo de lote Code du lot Codice del lotto Número de lote Batchkoden Tillverkningskod Biological risks Biologisches Risiko Riesgo biológico Risque biologique Rischio biologico Risco biológico Biologisk fare Biologiska risker Manufacturer Hersteller Fabricante Fabricant Fabbricante Fabricado por Producent Tillverkare Authorised Representative in the European Community Bevollmächtigter in der Europäischen Gemeinschaft Representante autorizado en la Comunidad Europea Mandataire dans la Communauté européenne Mandatario nella Comunità Europea Representante autorizado Repræsentant i det Europaeiske Faellesskab Auktoriserad representant Instrumentation Laboratory Company - Lexington, MA (USA) Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza Milano (Italy) Distributed by: Instrumentation Laboratory Made in Spain