Quantification of Tripeptidyl-peptidase II

Storlek: px
Starta visningen från sidan:

Download "Quantification of Tripeptidyl-peptidase II"

Transkript

1 Uppsala Universitet Institutionen för Medicinsk Biokemi och Mikrobiologi Biomedicinska analytikerprogrammet Examensarbete 15hp, vt 2010 Quantification of Tripeptidyl-peptidase II Optimisation and evaluation of 3 assays Sabina Gyllenfjärd Handledare: Birgitta Tomkinson Institutionen för Medicinsk Biokemi och Mikrobiologi Uppsala Universitet 1

2 Abstract Tripeptidyl-peptidase II (TPPII), is present in most eukaryotic cells. It cuts tripeptides from the N- terminus of peptides and is especially important for degrading peptides longer than 15 amino acids. TPPII also tailors long peptides into suitable substrates for the enzymes which transport and produce the peptides that MHC I present. Increased levels of TPPII have also been found in certain cancer cells, thus it is of interest to determine if TPPII could be used as a tumour marker. The aim of this study was to optimise and evaluate 3 different methods for quantifying TPPII. Western blot, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and fluorophore-linked immunosorbent assay (FLISA) protocols were optimised regarding incubation times and antibody dilutions. Sensitivity and linearity were the most important parameters when evaluating the results. The coefficient of determination of western blot was R 2 = within the range of ng TPPII/well and ELISA had a coefficient of determination of R 2 =0.96 within the range of ng TPPII/well. Presently western blot is the only one of these methods to yield reliable results with impure samples, but ELISA is superior regarding sensitivity and throughput. Thus further optimisation of ELISA is interesting to pursue. Keywords protein quantification, odyssey 2.1, tppii, assay, western blot 2

3 Introduktion I levande celler pågår en cykel av syntes och nedbrytning av proteiner där aminosyrorna ständigt återanvänds. TPPII (Tripeptidylpeptidas II) är ett enzym som avskiljer tripeptider från N-terminalen av peptidkedjor. Enzymet får troligen sina substrat från proteosomerna som klyver proteiner till peptider, som peptidaser sedan kan klyva i allt mindre segment tills fria aminosyror återstår. TPPII är speciellt viktigt för nedbrytning av peptidkedjor som har fler än 15 aminosyror eftersom dessa är för långa för att vara substrat för andra peptidaser. Enzymet har också en svag endopeptidasaktivitet, vilket innebär att det klyver vissa peptider längre in i aminosyrasekvensen. Det största substrat som TPPII rapporterats degradera är 41 aminosyror långt [1, 2]. Vid muskelförtvining orsakad av sepsis ses en ökad aktivitet och uttryck av TPPII i muskelcellerna vilket visar sambandet mellan halten TPPII och hastigheten vid degradering av proteiner [3]. TPPII är med sin molekylmassa på ca 6MDa det största kända proteaskomplexet i eukaryota celler [4]. Subenheterna som bygger upp komplexet är på 150kDa hos bananfluga och 138kDa hos människa. Bilder tagna med elektronmikroskopi av TPPII både från bananflugor samt humana röda blodkroppar visar omväxlande hantelformer och båtformer, vilket beror på att komplexen som bildas består av två tuber som vrider sig runt varandra [5, 6]. När enzymet bildar komplex ökar aktiviteten hos TPPII upp till 10 gånger. Aktiviteten ändras utan att mängden enzym i cellen ökas eller minskas och det är därför möjligt att aktiviteten hos TPPII regleras av hur mycket enzym som är fritt gentemot uppbundet i komplex [7]. Elektronmikroskopibilder av TPPII i olika grader av dissociation, tagna för att illustrera hur beroende aktiviteten var av denna komplexbildning, publicerades redan 1987 i Biochemical Journal [6]. En omdiskuterad egenskap hos TPPII är om enzymet är nödvändigt för att producera substrat för antigen som ska presenteras av MHC I. Proteasomerna är det proteas som till största delen klyver 3

4 proteiner intracellulärt, men substraten som bildas är för långa för att binda till MHC I och det är oftast endoplasmatiskt-retikulum-aminopeptidas I som färdigställer de peptider som kan bindas av MHC I. Det som diskussionen gäller är om TPPII behövs för att klyva peptidkedjorna innan de tas om hand av andra aminopeptidas. Kawahara et al. drog vid en studie på knock-out möss 2009 slutsatsen att så inte var fallet eftersom bara presentationen av substrat från ett fåtal, aminosyror långa, peptider påverkades i deras försök. Vid jämförelser mellan knockout-möss med <10% uttryckt TPPII och vanliga möss som immuniserades var immunsvaret likvärdigt trots att något mindre mängd substrat för MHC I producerades av knockout-mössen [8]. TPPII påverkar även fettmetabolismen. McKay et al. visade 2007 hur TPPII-brist inducerad genom RNA-interferens ledde till minskade fettreserver hos Caenorhabditis elegans. Man har också sett hur fettinlagringen i däggdjursceller ökar med mängden TPPII, detta oavsett hur hög aktivitet enzymet har. En intressant upptäckt vid försök på möss är att mer fett lagras in hos individer där mycket TPPII uttrycks i cellerna än hos individer där lite TPPII uttrycks. Detta trots att födointaget är det samma [9]. En tidigare studie har visat att hormonet cholecystokinin 8, som styr mättnadskänslan, bryts ned av membranbundet TPPII [10]. Ökad aktivitet och uttryck av TPPII har uppmätts i vissa tumörceller, främst lymfom. Kännetecken för tumörceller är bland annat genetisk instabilitet, okontrollerat ökad cellproliferation samt skydd mot apoptos. Det senare dels genom nedreglering av MHC I, som gör att de undgår apoptosinducering från T-celler, dels genom överproduktion av antiapoptosproteiner [11]. Det verkar som om enzymet är viktigt både för cellproliferationen och för överlevnad hos maligna celler. Ökad halt TPPII har visat sig skydda tumörceller från apoptos och öka celldelningen [11, 12]. Vid en studie där man manipulerat mängden TPPII i tumörceller genom transfektion visade det sig att celler med högre halt TPPII delade sig fortare och 20-40% hade missformade kärnspolar eller för 4

5 många centrosomer. Det genomsnittliga antalet kromosomer var också högre än normalt. Gentemot tumörceller som transfekterats med tom vektor var variationen i antal kromosomer mer än 3 gånger högre [13]. Förmågan hos TPPII att skydda mot apoptos visas också av att brist på enzymet i normala celler leder till apoptos i flera celltyper inte bara på cellnivå utan även på organismnivå upptäcktes degenerativa effekter av TPPII-brist [4]. I samband med strålbehandling har man sett att inhibering av TPPII ger goda resultat vid låg stråldos vid försök på möss gick tumörerna helt tillbaka och ingen återväxt syntes efter avslutad behandling [14]. Resultaten från dessa studier gör det intressant att undersöka TPPII som tumörmarkör. För att kunna undersöka och jämföra olika egenskaper hos TPPII behöver man en metod som kan mäta enzymets koncentration. Ett sätt att göra detta på är att mäta halten av det mrna som kodar för TPPII, men korrelationen till koncentrationen TPPII i cellerna är osäker eftersom denna påverkas av faktorer som hastigheten av enzymets nedbrytning [15]. Aktiviteten hos enzymet är en faktor som kan mätas [16]. Eftersom komplexbildningen påverkar aktiviteten kan resultatet av denna aktivitetsassay dock inte användas för att bestämma hur mycket TPPII som finns i ett prov utan att man på förhand vet hur hög aktiviteten är per mängd enzym [6, 7]. Syftet med detta projekt var att se vilken metod som bäst kvantifierade mängden uttryckt TPPII. Metoderna, som modifierades genom att optimera antikroppsspädningar, buffertar och inkubationslängder just för detektion av TPPII, var western blot, ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) och FLISA (fluorophore-linked immunosorbent assay). Western blot, eller immunoblot för proteiner, utvecklades i slutet av 1970-talet [17]. Metoden innebär att proteiner först separeras genom gelelektofores och sedan överförs till membran. Antikroppar tillsätts, vanligtvis först en primär antikropp riktad mot proteinet och sedan en sekundär antikropp riktad mot den primära antikroppen. Beroende på önskad detekteringsmetod kan den antikropp som tillsätts sist vara bunden till ett enzym eller en fluorofor. ELISA har använts sedan början av 1970-talet och mäter med hjälp av 5

6 spektrofotometri ett färgomslag. Om det är ett protein man detekterar får detta binda till en mikrotiterplatta varefter primära antikroppar mot proteinet tillsätts. Bundet till de sekundära antikropparna som därefter tillsätts, finns ett enzym som ger ett färgomslag hos det substrat som slutligen tillsätts. Enligt samma princip fungerar FLISA som kom i början på 2000-talet, skillnaden är att istället för ett enzym så är en fluorofor bunden till den sekundära antikroppen och man mäter sedan fluorescensen i en scanner [18]. Hög känslighet och god linearitet var de viktigaste faktorerna vid valet av den bästa metoden att använda. Om dessa faktorer var jämförbara blev tidsåtgång samt mängden material, reagenser och utrustning som krävdes utslagsgivande. Jämförande försök gjordes både inom varje metod och mellan metoderna. Material och metod Material: Till försöken användes TPPII av en koncentration på 0,50µg/mL som förvarats vid -80C <22 år. Enzymet var framrenat från utdaterade röda blodkroppar [19]. Även mätningar på lysat från E. coli-celler transfekterade med TPPII gjordes. Som tvättbuffertar och till spädningar användes, om annat inte nämns, TBS (Tris Buffered Saline, 20mM Tris, 1,37mM NaCl), TBST (TBS med 0,01% Tween-20), PBS (Phosphate Buffered Saline, 1,5mM KH 2 PO 4, 9,8mM Na 2 HPO 4, 1,37mM NaCl, 2,68mM KCl) och PBST (PBS med 0,01% Tween-20). Odyssey Blocking Buffer från Li-Cor Biosciences användes både till blockering av membran och mikrotiterplattor samt till antikroppsspädningar. Vid här ej visade försök konstaterades att funktionen hos Odyssey Blocking Buffer inte försämrades vid spädning 1:5 i PBS varför denna koncentration användes genomgående i de beskrivna försöken. Den primära antikroppen HαTPPII från Immunsystem var framtagen i höns. Som sekundära antikroppar användes HRPαChicken från Sigma, en antikropp riktad mot höns 6

7 IgG som är konjugerad med HRP (Horse Radish Peroxidase) och IRDye 800CW Donkey anti- Chicken IgG från Li-Cor Biosciences. En ny antikropp mot TPPII framtagen inom HPR (Human Proteome Research) HPA kaninαtppii från Sigma testades också. Denna var framtagen i kanin och som sekundär antikropp användes då IRDye 680 Donkey anti-rabbit IgG från Li-Cor Biosciences. Western Blot: TPPII seriespäddes 1:2 i provbuffert (10% glycerol, 5% βmerkaptoetanol, 2,3% SDS, 0,0625M Tris-HCl ph 6,8) till 0,3-40ng/12µl. Det spädda proteinet värmdes sedan under 5min vid 95C. 8µl markör, Biorad # , samt 12µl av valda koncentrationer TPPII och 8µl av valda koncentrationer lysat sattes på 8% polyakrylamidgeler. Elektroforesen genomfördes vid 200V under 45min och proteinbanden överfördes sedan till PVDF-membran vid 100V under 60min. Membranen gjordes först mottagliga genom att doppas 30-60sek i metanol. Membran som skulle genomgå ECL (Enhanced chemiluminescence) inkuberades och tvättades med hjälp av vakuum i SNAPid (Millipore) enligt tillverkarens protokoll. Först sögs 0,2% torrmjölk i H 2 O genom membranen, därefter TBST. Inkubationen med HαTPPII (1:200 i TBS) som primär antikropp skedde över natt i rullande kärl vid +4C. Tvätt av membranen skedde sedan i SNAPid med TBST och de inkuberades 10min med HRPαChicken (1:3333 i TBS) som sekundär antikropp. Efter följande tvätt med TBST inkuberades membranen under 1min med framkallningsreagens 1 och 2 (Amersham Biosciences) blandade enligt tillverkarens instruktion. Membranen exponerades på fotografisk film i 30s, 1min och 5min respektive. Resultatet avgjorde önskvärd längd på den sista exponeringen, 15-60min. Membran som skulle avläsas i Li-Cors Odyssey inkuberades med spädd Odyssey Blocking Buffer under 1h i rumstemperatur. Därefter tvättades membranen, vilket varje gång skedde på skak i TBST 4x5min. De inkuberades sedan med den primära antikroppen HαTPPII (1:200 i spädd Odyssey Blocking Buffer med 0,1% Tween-20) i rullande kärl över natt vid +4C. Efter tvätt inkuberades 7

8 membranen med den ljuskänsliga antikroppen IRDye 800CW (1:5000 i spädd Odyssey Blocking Buffer) under 45min i rumstemperatur i ljustät låda. Efter en sista tvätt sköljdes membranen slutligen i TBS och scannades i Odyssey 2.1 på standardinställning, intensitet 5.0 för 700nm och 800nm. Kontrast och ljusstyrka optimerades innan mängden TPPII i banden kvantifierades i mjukvaran för Odyssey 2.1. ELISA: En spädningsserie av TPPII i 50mM natriumkarbonatbuffert, ph 9,6, sattes till brunnarna i en mikrotiterplatta. 100µL av varje prov sattes i duplikat. Som blank sattes 100µL av samma buffert som använts till spädningen. Plattan inkuberades vid +4C över natt och brunnarna tvättades med 2x200µL PBST innan de inkuberades med 200µL spädd Odyssey Blocking Buffer under 1h i rumstemperatur. Efter tvätt med 2x200µL PBST inkuberades brunnarna med 100µL HαTPPII (1:100 i spädd Odyssey Blocking Buffer) under 30min vid +37C. Därefter tvättades brunnarna med 4x200µL PBST innan inkubation med 100µL HRPαChicken (1:3333 i spädd Odyssey Blocking Buffer) under 30min vid +37C. Efter tvätt med 4x200µL PBST tillsattes 50µL TMB (3,3',5,5'- tetramethylbenzidine från Sigma) per brunn som substrat. Reaktionen stoppades efter 30min med hjälp av 50µL 1M fosforsyra och plattan lästes av vid 450nm i plattavläsare. FLISA: Mikrotiterplattan behandlades som vid ELISA ovan, men som sekundär antikropp användes IRDye 800CW (1:5000 i spädd Odyssey Blocking Buffer). Inkubation skedde i ljustät låda under 60min i rumstemperatur. Därefter tvättades brunnarna med 4x200µL PBST och 1x200µL PBS med hjälp av multipipett för att minimera risken av spill mellan brunnarna. Avläsning med avslutande kvantifiering skedde i Odyssey 2.1 med 3mm 'focus offset' vid 700nm och 800nm. 8

9 Resultat Western Blot: Med känsligheten hos ECL för detektion av TPPII som utgångsläge utvecklades en metod att detektera TPPII med IR-antikroppar och scanning i Odyssey 2.1. Målet var minst lika hög känslighet samt enklare hantering och kvantifiering. För att optimera metoden gjordes försök med bland annat olika koncentration antikroppar. I Fig 1 visas vilken kombination av koncentrationer för primära och sekundära antikroppar som gav bäst känslighet med lägst bakgrund. Proverna med lägst halt av TPPII sattes närmast membranets mitt. Hög koncentration av den primära antikroppen gav hög bakgrund utan att öka känsligheten, se Fig 1: A-B. När det gällde den sekundära antikroppen krävdes den högre koncentrationen för att optimera känsligheten, jämför Fig 1:C och D där provet med den svagaste koncentrationen TPPII bara är synlig i D. I fortsatta försök användes därför koncentrationen 1:200 för den primära och 1:5000 för den sekundära antikroppen. Ingen kvantifiering gjordes vid detta försök. Fig 1. Grundläggande försök med western blot för att se vilken kombination av antikroppskoncentrationer som gav bäst känslighet och lägst bakgrund. Jämför antalet synliga band på TPPII nivå med hur grön bakgrunden är. A: primär antikropp HαTPPII 1:100 och sekundär antikropp IRDye 800CW Donkey anti-chicken IgG 1:10000; B: primär antikropp 1:100 och sekundär antikropp 1:5000; C: primär antikropp 1:200 och sekundär antikropp 1:10000; D: primär antikropp 1:200 och sekundär antikropp 1:5000. Straxt under 138kDa som är nivån för banden av TPPII kan man svagt se markörens band för 100kDa. 9

10 För att fastställa om högre koncentration sekundär antikropp skulle öka känsligheten ytterligare gjordes ett kompletterande försök där den bästa kombinationen ur försöket ovan jämfördes med en dubblerad koncentration sekundär antikropp. Höjningen av bakgrunden och styrkan hos banden tog dock ut varandra och i fig 2 ser man att kvantifieringen i Odyssey 2.1 blev i det närmaste identisk. För att försöka sänka bakgrunden gjordes ett senare, här ej visat, försök där 0,1% SDS tillsattes till den sekundära antikroppen, men känsligheten gick då ner. Vad gäller bakgrunden framkom i ännu ett här ej visat försök att metoden att i SNAPid skynda på inkubationstider och blockning för membran som scannades i Odyssey 2.1 gjorde bakgrunden hög Integ. intensity ,1 TPPII ng/brunn Fig 2. Lineariteten efter western blot och kvantifiering i Odyssey 2.1 av 2 membran inkuberade med primär antikropp 1:200. Koncentrationen av den sekundära antikroppen var 1:5000 för membran och trendlinjen hade bestämningskoefficient R 2 =0,98. Antikroppskoncentrationen var 1:2500 för membran och dess trendlinje hade bestämningskoefficient R 2 =0,99. 10

11 Den nya primära antikroppen HPA kaninαtppii(sigma), jämfördes med HαTPPII som användes i övriga försök för att detektera TPPII. Fig 3 visar de scannade membranen från detta försök och lineariteten efter kvantifieringen i Odyssey 2.1. Båda antikropparna är lika känsliga men den nya antikroppen visade ingen korsreaktivitet. Som synes i fig 3 A saknas band i de brunnar L2 och L3 där lysat utan TPPII tillsattes. C 100 Integ. intensity , TPPII/brunn Fig 3. Jämförelse av två primära antikroppar vid western blot. Membran A inkuberades med primär antikropp HPA :200 och sekundär antikropp IRDye 680 Donkey anti-rabbit IgG 1:1000. Membran B inkuberades med primär antikropp HαTPPII 1:200 och sekundär antikropp IRDye 800CW Donkey anti-chicken IgG 1:5000. M: markör de tre starkast framträdande banden uppifrån är 150kDa, 100kDa respektive 75kDa L1: lysat med påvisad aktivitet av TPPII, L2 och L3: olika lysat utan uppmätt aktivitet; T2: 20ng TPPII/brunn, T4: 5ng TPPII/brunn, T6: 1,25ng TPPII/brunn. Trendlinjerna för A ( ) och B ( ) hade bestämningskoefficient R 2 =1 respektive R 2 =0,98. 11

12 Immunoassay: De första försöken med ELISA, enligt standardbetingelser, gav alltför låga absorbanser. Ett försök gjordes då där inkubationstiden för substratet, TMB, ökades. Reaktionen stoppades i 2 rader i taget på mikrotiterplattan med 5min mellanrum. Högst absorbans och bäst linearitet uppnåddes efter 25-30min. Inkubationstid längre än 30min gav, vilket kan ses i fig 4 B, försämrad linearitet. Alla serier visade god linearitet vid Abs 650 vid mätningarnas start då substratet fått verka i 20min. A B 1 1 Abs 450 0,1 Abs 450 0,1 0, , TPPII/brunn TPPII ng/brunn Fig 4. Diagram över jämförelse av stopptid av substratets inkubation vid ELISA. A visar absorbansen hos mätserie och stoppade vid 25min samt mätserie och stoppade vid 30 min. B visar absorbansen hos mätserie och stoppade vid 35min samt mätserie och stoppade vid 40 min. Nämnvärt är att den lägsta punkten som visas i B inte hade lägst koncentration, utan näst lägst, i sin serie (serien var däremot linjär vid avläsning vid 650nm vid försökets början). 12

13 För att se om det gick att få högre känslighet med ELISA än med western blot sattes 0,03-125ng per brunn. Figur 5 visar trendlinjen för serien i duplikat. 1,00 Abs 450nm 0,10 0,01 0,00 0,01 0, TPPII ng/brunn Fig 5. Lineariteten vid ELISA för medelvärdet av dubbelprov med koncentration 0,03-125ng/brunn, spädningsserie 1:4. Trendlinjen har bestämningskoefficient R 2 =0,96. FLISA jämfördes med ELISA för att se vilken av metoderna som var känsligast och gav bäst underlag för standardkurvor. Resultatet av det första testet ses i fig 6A-B nedan. Den lägsta mängden TPPII som användes var ~4ng/brunn. B 10 Integ. intensity ,1 TPPII ng/brunn Fig 6. Resultat av FLISA: A visar del av mikrotiterplatta scannad i Odyssey 2.1. Kolumn 2: Blank, därefter TPPII i spädningsserie 1:2 från 250ng/brunn. Bestämningskoefficienten av trendlinjen efter kvantifiering i Odyssey 2.1 som visas i B var R 2 =0,88. 13

14 Därefter jämfördes olika blockningsbuffertar och antikroppsspädningar. Figur 7 A visar hela mikrotiterplattan där man tydligt kan se dels effekten av val av buffert dels svårigheten att tvätta bort obunden IR-antikropp. Man ser också tydligt återskenet från brunnarnas väggar. I figur 7 B visas trendlinjen baserad på kolumn 7 och 8 där Odyssey Blocking Buffer och sekundär antikropp IRDye 800CW Donkey anti-chicken IgG 1:2500 använts. B Integ. intensity TPPII ng/brunn Fig 7. Resultat av FLISA. A: Mikrotiterplatta scannad i Odyssey 2.1; A1-10: Blank, B-H: Spädningsserie av TPPII 1:2 från 250ng/brunn i rad H till ~4 i rad B. För kolumn 9-10 användes en spädningsserie som förvarats i -20C i 48h. Blockningsbuffert i kolumn 1-4 och 9 var POT (1% ovalbumin, 0.5% Tween-20 i PBS ph 7.4). Blockningsbuffert i kolumn 5-8 och 10 var spädd Odyssey Blocking Buffer. Primär antikropp var HαTPPII 1:100. Den sekundära antikroppen IRDye 800CW Donkey anti-chicken IgG var spädd 1:5000 i kolumn 1-2 och 5-6. I kolumn 3-4, 7-8 och 9-10 späddes den 1:2500. B: Trendlinje baserad på kolumn 7-8. Bestämningskoefficienten var R 2 =0,97. För att se hur prover innehållande fler proteiner än TPPII förhåller sig till standardkurvor baserade på rent TPPII gjordes ett försök både med ELISA och FLISA. Två spädningsserier av TPPII gjordes med samma koncentrationer, varav den ena med tillsats av 50µl lysat som saknade TPPII. Serierna sattes som duplikat på mikrotiterplattor för ELISA respektive FLISA. Båda metoderna visade en 14

15 tydlig skillnad i lutning på trendlinjerna (Fig 8), varför prover som inte är rena kommer att ge ett för högt resultat vid låga halter och ett för lågt resultat vid höga halter. A 1 B Abs 450 raw intensity 0, TPPII ng/brunn TPPII ng/brunn Fig 8. Hur standardkurvor av rent TPPII förhåller sig till prov med innehåll av andra proteiner. A visar trendlinjerna efter ELISA för en spädningsserie av rent TPPII i duplikat: med bestämningskoefficient R 2 =0,97 och med bestämningskoefficient R 2 =0,98, samt där 50µl lysat som saknade TPPII tillsatts: med bestämningskoefficient R 2 =0,91 och med bestämningskoefficient R 2 =0,84. B visar trendlinjerna efter FLISA för samma spädningsserier: med bestämningskoefficient R 2 =0,94 och med bestämningskoefficient R 2 =0,91 samt med bestämningskoefficient R 2 =0,38 och med bestämningskoefficient R 2 =0,86. 15

16 Diskussion Specifika proteiner kan kvantifieras med många olika metoder, alla med sina fördelar och nackdelar. Färgningarna i vissa metoder kan interagera på ett ofördelaktigt sätt med de buffertar som man använder eller också behöver man en metod som ger goda resultat för vissa provmängder eller koncentrationsintervall [20]. Vissa metoder, som till exempel Bradfordmetoden, mäter bara den totala mängden protein vilket gör metoden oanvändbar i ett prov som innehåller fler sorters protein än det man söker. Immunologiska metoder, där antikroppar binder specifikt till det aktuella proteinet, är då lämpligare att använda. Western blot och ELISA, som använts i detta projekt, fungerade båda väl för prover med rent TPPII. FLISA däremot behöver förbättras för att man ska kunna utnyttja det större antal prover som kan analyseras samtidigt i en mikrotiterplatta jämfört med genom western blot. Western blot var den enda metod som gav goda resultat för prover som förutom TPPII innehöll andra proteiner vilket även skulle vara fallet med prover från framtida försök för att undersöka TPPII som tumörmarkör. Western blot med IR-antikroppar och scanning i Odyssey 2.1, som var den första metoden som jämfördes med ECL, var redan före optimering lika känslig som ECL. Lineariteten var mycket god och här visade försök hade en bestämningskoefficient på R 2 =0,98-1 vid koncentrationer mellan ~1-20ng TPPII/brunn. Andra fördelar med western blot var att man efter scanningen genom bildbehandling kunde ändra intensitet och bakgrund samt kvantifiera proteinet direkt i dator, dessutom undveks hela mörkrumsarbetet som ingår i ECL och resultatet består över tid. Nackdelar med den nya metoden var att den tidsbesparande vakuumhanteringen av membran i SNAPid gav högre bakgrund och därför måste uteslutas samt att IR-antikropparna ska skyddas från ljus. För att se effekten av att utsätta antikropparna för ljus inkuberades ett membran som redan scannats i Odyssey 2.1 i fullt dagsljus i TBS under 90min och scannades sedan ännu en gång. Resultaten gick inte att skilja åt varför slutsatsen blev att trots att det är viktigt att skydda antikroppsbehållaren från 16

17 ljus i mesta möjliga mån kan man hantera membranen i laboratoriebelysning när de flyttas mellan olika tvättar utan att påverka resultatet negativt. Initialt gav ELISA, där HRP-konjugerade antikroppar fick reagera med TMB och sedan skapa färgomslag med 1M fosforsyra, alltför låga absorbanser. Gentemot rekommenderad inkubationstid för TMB på 10min krävdes en ökning upp till 25-30min innan utslaget blev tillfredställande för TPPII med de testade antikropparna. Den lägsta koncentration TPPII som testades var 0,03ng/brunn, bestämningskoefficienten blev då R 2 =0,96. Bara ett försök med prov i duplikat gjordes med dessa låga koncentrationer. Det vore intressant att se resultatet av ett utvidgat försök. Även med ELISA testades IR-antikroppar och scanning i Odyssey 2.1, så kallad FLISA. Det första försöket som bara omfattade 8 brunnar var mycket lovande och resultatet efter kvantifiering blev en bestämningskoefficient på R 2 =0,96. Den lägsta koncentrationen TPPII var då ~4ng/brunn. Vidare större försök visade dock på svårigheten att tvätta bort överskottet av obunden IR-antikropp samt risken att stöta i någon av brunnarna med multipipettens spetsar vilket kunde resultera både i fläckvis mer eller mindre bunden IR-antikropp. Tidsåtgången för att använda vanlig pipett för en hel mikrotiterplatta är dock alltför stor. Det vore intressant att se hur resultatet skulle bli i en automatisk plattvätt. Ett annat outforskat alternativ är att använda svarta mikrotiterplattor där bara bottnarna är genomskinliga. Enligt Li-Cors rekommendationer kan detta i stor utsträckning eliminera återskenet från brunnarnas väggar. Detta återsken ger annars en bakgrund som kan störa kvantifieringen. Både ELISA och western blot utförs över två dagar. Western blot har dock flera timmar längre tidsåtgång under den första dagen. I jämförelse med ELISA behövs mindre mängd prov när man utför en western blot, däremot är åtgången på övrigt material som buffertar och antikroppar mycket högre vid western blot. Per brunn används ungefär 10 gånger mer prov vid ELISA än vid western blot. Tittar man däremot på mängden tvättbuffert som går åt till en hel 96-hålsplatta är det knappt 20mL/tvätt för ett membran med 10 brunnar vid western blot kan det beroende på tvättkärl gå åt 17

18 50-200mL/tvätt. När det gäller antikroppar går det åt knappt 10mL antikroppslösning för 96 brunnar vid ELISA och 5mL för 10 brunnar vid western blot. En fördel med western blot gentemot ELISA är att man inte bara kvantifierar proteinet utan också ser vilken storlek det har. Genom att jämföra proteinbandets läge på membranet med storleksmarkören kan man vara säker på att det är rätt protein som mäts. Det låga antal prover som kan sättas på varje gel är den största nackdelen med western blot och en av anledningarna till att fortsätta utveckla främst ELISA. Nya antikroppar med mindre risk för korsreaktioner skulle kunna ge resultat där okända prover kan kvantifieras mot en standardkurva oavsett vilka proteiner som proverna innehåller utöver TPPII. Om inte de nya antikropparna ger tillräckligt bra resultat i en traditionell ELISA så är det möjligt att de kan användas för att utveckla en sandwich-elisa. Tyvärr har detta inte varit möjligt med de antikroppar som idag används. Vid en sandwich-elisa får först en antikropp specifik för antigenet binda till mikrotiterplattan, sedan antigenet och slutligen ännu en antikropp som är specifik för en annan del av antigenet. Den sista antikroppen kan konjugeras med exempelvis HRP eller biotin för att ge ett färgomslag när streptravidin med alkaliskt fosfatas tillsätts. En sandwich-elisa av detta slag framtagen för keratansulfat visade sig tillräckligt känslig för att kunna kvantifiera halter på 10ng/mL i serum och synovialvätska [21]. Om en sandwich- ELISA optimerad för TPPII skulle ha samma känslighet som den för keratansulfat motsvarar detta den känslighet som i denna studie uppnåddes för western blot. Eftersom känsligheten vid ELISA för TPPII gjorde det möjligt att detektera halter ner till 0,3ng/mL för rent TPPII drar jag slutsatsen att det med en välutvecklad sandwich-elisa skulle gå att få högre känslighet och snabbare hantering av en större mängd prover än med western blot. Hög känslighet och god linearitet var de viktigaste parametrarna för detta projekt. En ny metod som presenterades i maj 2010 som kallas digital-elisa visade mycket goda resultat för båda dessa parametrar [22]. Vid metoden mäts varje molekyl av proteinet för sig. Proteinet binds till kulor som inte har plats för mer än en molekyl och utfallet blir därför antingen positivt eller negativt därav 18

19 namnet digital-elisa. Den tumörmarkör som undersöktes var PSA och vid kvantifiering var bestämningskoefficienten R 2 =0,997 vid halter på 14fg/L. Om framtida försök visar att TPPII är en tumörmarkör som är signifikant redan vid låga halter så kanske detta kan vara en metod som blir aktuell på lång sikt. Referenser 1. Tripeptidyl-peptidase II: a multi-purpose peptidase, Tomkinson B, Lindås AC. Int J Biochem Cell Biol Oct;37(10): A major role for TPPII in trimming proteasomal degradation products for MHC class I antigen presentation, Reits E, Neijssen J, Herberts C, Benckhuijsen W, Janssen L, Drijfhout JW, Neefjes J. Immunity Apr;20(4): Tripeptidyl-peptidase II expression and activity are increased in skeletal muscle during sepsis, Wray CJ, Tomkinson B, Robb BW, Hasselgren PO, Biochem Biophys Res Commun Aug 9;296(1): Activation of cellular death programs associated with immunosenescence-like phenotype in TPPII knockout mice, Huai J, Firat E, Nil A, Million D, Gaedicke S, Kanzler B, Freudenberg M, van Endert P, Kohler G, Pahl HL, Aichele P, Eichmann K, Niedermann G, Proc Natl Acad Sci U S A Apr 1;105(13): A giant protease with a twist: the TPP II complex from Drosophila studied by electron microscopy, Rockel B, Peters J, Kühlmorgen B, Glaeser RM, Baumeister W, EMBO J Nov 15;21(22): Supramolecular structure of tripeptidyl peptidase II from human erythrocytes as studied by electron microscopy, and its correlation to enzyme activity, Macpherson E, Tomkinson B, Bålöw RM, Höglund S, Zetterqvist O, Biochem J Nov 15;248(1): Association and dissociation of the tripeptidyl-peptidase II complex as a way of regulating the enzyme activity, Tomkinson B, Arch Biochem Biophys Apr 15;376(2): Analysis of the role of tripeptidyl peptidase II in MHC class I antigen presentation in vivo.kawahara M, York IA, Hearn A, Farfan D, Rock KL, J Immunol Nov 15;183(10):

20 9. Tripeptidyl peptidase II promotes fat formation in a conserved fashion, McKay RM, McKay JP, Suh JM, Avery L, Graff JM, EMBO Rep Dec;8(12): Characterization and inhibition of a cholecystokinin-inactivating serine peptidase, Rose C, Vargas F, Facchinetti P, Bourgeat P, Bambal RB, Bishop PB, Chan SM, Moore AN, Ganellin CR, Schwartz JC, Nature Apr 4;380(6573): TPPII promotes genetic instability by allowing the escape from apoptosis of cells with activated mitotic checkpoints, Stavropoulou V, Vasquez V, Cereser B, Freda E, Masucci MG, Biochem Biophys Res Commun Jul 28;346(2): Tumors acquire inhibitor of apoptosis protein (IAP)-mediated apoptosis resistance through altered specificity of cytosolic proteolysis, Hong X, Lei L, Glas R, J Exp Med Jun 16;197(12): Mitotic infidelity and centrosome duplication errors in cells overexpressing tripeptidylpeptidase II, Stavropoulou V, Xie J, Henriksson M, Tomkinson B, Imreh S, Masucci MG, Cancer Res Feb 15;65(4): Tripeptidyl-peptidase II controls DNA damage responses and in vivo gamma-irradiation resistance of tumors, Hong X, Lei L, Künert B, Naredla R, Applequist SE, Grandien A, Glas R. Cancer Res Aug 1;67(15): Overlapping regional distribution of CCK and TPPII mrnas in Cynomolgus monkey brain and correlated levels in human cerebral cortex (BA 10), Radu D, Tomkinson B, Zachrisson O, Weber G, de Belleroche J, Hirsch S, Lindefors N, Brain Res Aug 9;1104(1): Association and dissociation of the tripeptidyl-peptidase II complex as a way of regulating the enzyme activity, Tomkinson B. Arch Biochem Biophys Apr 15;376(2): Transfer of proteins from gels to diazobenzyloxymethyl-paper and detection with antisera: a method for studying antibody specificity and antigen structure, Renart J, Reiser J, Stark GR, Proc Natl Acad Sci U S A Jul;76(7): Fluorochrome-linked immunoassay for functional analysis of the mannose binding lectin complement pathway to the level of C3 cleavage, Walsh MC, Shaffer LA, Guikema BJ, Body SC, Shernan SK, Fox AA, Collard CD, Fung M, Taylor RP, Stahl GL, J Immunol Methods Jun 30;323(2): Purification, substrate specificity, and classification of tripeptidyl peptidase II, Bålöw RM, Tomkinson B, Ragnarsson U, Zetterqvist O, J Biol Chem Feb 15;261(5): Quantitation of protein, Noble JE, Bailey MJ, Methods Enzymol. 2009;463:

21 21. A new sandwich-elisa method for the determination of keratan sulphate peptides in biological fluids employing a monoclonal antibody and labelled avidin biotin technique, Kongtawelert P, Ghosh P, Clin Chim Acta Dec 31;195(1-2): Single-molecule enzyme-linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations, Rissin DM, Kan CW, Campbell TG, Howes SC, Fournier DR, Song L, Piech T, Patel PP, Chang L, Rivnak AJ, Ferrell EP, Randall JD, Provuncher GK, Walt DR, Duffy DC, Nat Biotechnol May 23. (ej i tryck ännu) 21

Detektion av Borrelia burgdorferi IgG. med hjälp av ELISA

Detektion av Borrelia burgdorferi IgG. med hjälp av ELISA Umeå Universitet Biomedicinska analytikerprogrammet Detektion av Borrelia burgdorferi IgG med hjälp av ELISA Årskull: Laborationsrapport i immunologi termin 3 Laborationsdatum: Inlämnad: Godkänd: Handledare:

Läs mer

Immunteknologi, en introduktion. Hur man använder antikroppar för att mäta eller detektera biologiska händelser.

Immunteknologi, en introduktion. Hur man använder antikroppar för att mäta eller detektera biologiska händelser. Immunteknologi, en introduktion Hur man använder antikroppar för att mäta eller detektera biologiska händelser. Antikroppar genereras av b-lymphocyter, som är en del av de vita blodkropparna Varje ursprunglig

Läs mer

AbD Serotec Focus Immunohistokemi. Sydsvenska Immunogruppens möte, Malmlö 22/3 2007

AbD Serotec Focus Immunohistokemi. Sydsvenska Immunogruppens möte, Malmlö 22/3 2007 AbD Serotec Focus Immunohistokemi Sydsvenska Immunogruppens möte, Malmlö 22/3 2007 10 minuters presentation om ô Om oss ô CD3 ô CD19 ô Cd4 ô S-100 och ER-beta ô HISTAR Vilka är AbD Serotec? É Serotec É

Läs mer

Tentamen i Immunteknologi 28 maj 2003, 8-13

Tentamen i Immunteknologi 28 maj 2003, 8-13 Tentamen i Immunteknologi 28 maj 2003, 8-13 1 Varje fråga ger maximalt 5 p. 2 SKRIV NAMN OCH PERSONNUMMER PÅ ALLA SIDOR! 3 Glöm inte att lämna in KURSUTVÄRDERINGEN! Observera att i kursutvärderingen för

Läs mer

Institutionen för laboratoriemedicin Bilaga 2 Biomedicinska analytikerprogrammet Analytisk Kemi och Biokemisk metodik Ht 2010, Termin 3

Institutionen för laboratoriemedicin Bilaga 2 Biomedicinska analytikerprogrammet Analytisk Kemi och Biokemisk metodik Ht 2010, Termin 3 Institutionen för laboratoriemedicin Bilaga 2 Biomedicinska analytikerprogrammet Analytisk Kemi och Biokemisk metodik Ht 2010, Termin 3 Laborationsdatum: 17 22 november 2010 Grupp: 2 Projekt: Rening och

Läs mer

Riskbedömning ELISA med HRP detektion

Riskbedömning ELISA med HRP detektion Sida 1( 5) Riskbedömning ELISA med HRP detektion Utförd 2014-08-27 Av Rune Nilsson på Bo Baldetorps grupp. Andrad senast 2014-09-18 Av Lars Ekblad Slutlig bedömning av hela metoden 1. Acceptabel risk 1.

Läs mer

Preparation och spektroskopisk karakterisering av Myoglobin

Preparation och spektroskopisk karakterisering av Myoglobin Datum på laborationen: 2010-11-16 Handledare: Alexander Engström Preparation och spektroskopisk karakterisering av Myoglobin Namn/Laborant: Jacob Blomkvist Medlaborant: Emmi Lindgren Antonia Alfredsson

Läs mer

DiviTum V2. Bruksanvisning IVD. Denna bruksanvisning avser endast DiviTum V2. Ref. 932, rev. SV 1

DiviTum V2. Bruksanvisning IVD. Denna bruksanvisning avser endast DiviTum V2. Ref. 932, rev. SV 1 DiviTum V2 Bruksanvisning Denna bruksanvisning avser endast DiviTum V2 IVD 40 Ref. 932, rev. SV 1 1 Innehåll 1. Introduktion... 3 Avsedd användning... 3 Bakgrund... 3 Analysprincipen för DiviTum V2...

Läs mer

Immunologi. Laboration; Epstein Barr Virus (EBV) serologi. Oxblodshemolysat test (OCH) Epstein Barr Virus ELISA (EBNA)

Immunologi. Laboration; Epstein Barr Virus (EBV) serologi. Oxblodshemolysat test (OCH) Epstein Barr Virus ELISA (EBNA) Immunologi Laboration; Epstein Barr Virus (EBV) serologi. Oxblodshemolysat test (OCH) Epstein Barr Virus ELISA (EBNA) 1 OCH Referenser. Jawas et al: Medical Microbiology. Delves, Martin, Burton and Roitt:

Läs mer

18-19 december 2006 Christina Fjæraa Doktorand, avd för kemi och biomedicinsk vetenskap Karlstads Universitet

18-19 december 2006 Christina Fjæraa Doktorand, avd för kemi och biomedicinsk vetenskap Karlstads Universitet 18-19 december 2006 Christina Fjæraa Doktorand, avd för kemi och biomedicinsk vetenskap Karlstads Universitet Christina.fjaeraa@kau.se 054-7001687 Immunologi Laboration; Epstein Barr Virus (EBV) serologi.

Läs mer

) / (c l) -A R ) = (A L. -ε R. Δε = (ε L. Tentamen i Biomätteknik (TFKE37), 9 januari Uppgift 1 (10p)

) / (c l) -A R ) = (A L. -ε R. Δε = (ε L. Tentamen i Biomätteknik (TFKE37), 9 januari Uppgift 1 (10p) Tentamen i Biomätteknik (TFKE37), 9 januari 2014. Uppgift 1 (10p) För akronymerna FT- IR, AUC, AFM, UV och MALDI: a) Skriv ut förkortningen! b) Föreslå för varje metod två egenskaper hos biomolekyler som

Läs mer

Laboration DNA. Datum:16/11 20/ Labgrupp: 11 Laboranter: Johanna Olsson & Kent Johansson

Laboration DNA. Datum:16/11 20/ Labgrupp: 11 Laboranter: Johanna Olsson & Kent Johansson Laboration DNA Datum:16/11 20/11 2015 Labgrupp: 11 Laboranter: Johanna Olsson & Kent Johansson Material och metod Materiallista hänvisas till labhandledning s.3 (BIMA15 ht 2015, Lab III: DNA.) Uppsamling

Läs mer

Elektron-absorbtionspektroskopi för biomolekyler i UV-VIS-området

Elektron-absorbtionspektroskopi för biomolekyler i UV-VIS-området Elektron-absorbtionspektroskopi för biomolekyler i UV-VIS-området Principer Koncentrationsmätning Detektion Kromoforer, kolorimetriska assays DNA Komparativ analys Proteinrening Jonbindning Peptidgruppens

Läs mer

Koncentrationsbestämning med hjälp av spädningsteknik och spektrofotometri

Koncentrationsbestämning med hjälp av spädningsteknik och spektrofotometri Umeå universitet Biomedicinska Analytikerprogrammet Koncentrationsbestämning med hjälp av spädningsteknik och spektrofotometri Årskull: Laborationsrapport i Grundläggande laboratorievetenskap, termin 1

Läs mer

Elektron-absorbtionspektroskopi för biomolekyler i UV-VIS-området

Elektron-absorbtionspektroskopi för biomolekyler i UV-VIS-området Elektron-absorbtionspektroskopi för biomolekyler i UV-VIS-området Principer Koncentrationsmätning Detektion Kromoforer, kolorimetriska assays DNA Komparativ analys Jonbindning Spektroskopisk analys av

Läs mer

Bestämning av fluoridhalt i tandkräm

Bestämning av fluoridhalt i tandkräm Bestämning av fluoridhalt i tandkräm Laborationsrapport Ida Henriksson, Simon Pedersen, Carl-Johan Pålsson 2012-10-15 Analytisk Kemi, KAM010, HT 2012 Handledare Carina Olsson Institutionen för Kemi och

Läs mer

Tentamen i Immunteknologi 29 maj 2002, 8-13

Tentamen i Immunteknologi 29 maj 2002, 8-13 Tentamen i Immunteknologi 29 maj 2002, 8-13 1 Varje fråga ger maximalt 5 p. 2 SKRIV NAMN OCH PERSONNUMMER PÅ ALLA SIDOR! 3 Glöm inte att lämna in KURSUTVÄRDERINGEN! Observera att i kursutvärderingen för

Läs mer

Absorbansmätningar XXXXXX och YYYYYY

Absorbansmätningar XXXXXX och YYYYYY Umeå Universitet Biomedicinska analytikerprogrammet Absorbansmätningar XXXXXX och YYYYYY Årskull: Laborationsrapport Laborationsdatum: Inlämnad Godkänd Handledare: Moment I: Ljusabsorption i kyvetter 1)

Läs mer

Detektion av aktin och cyklin D1 med hjälp av western blot

Detektion av aktin och cyklin D1 med hjälp av western blot Umeå Universitet Biomedicinska analytikerprogrammet Detektion av aktin och cyklin D1 med hjälp av western blot XXXX XXXXX YYYY YYYYY Årskull: BMA-09 Laborationsrapport i Klinisk laboratoriemetodik 2, termin

Läs mer

Western blot. BMA-09, VT-11, Termin 4. Ylva Hedberg Fransson

Western blot. BMA-09, VT-11, Termin 4. Ylva Hedberg Fransson Western blot BMA-09, VT-11, Termin 4 Ylva Hedberg Fransson Laborationer I denna laboration ingår tre laborativa moment; 1) lösningsberedning 2) elektrofores med SDS-PAGE och transfer 3) immunodetektion

Läs mer

DNA-labb / Plasmidlabb

DNA-labb / Plasmidlabb Översikt DNA-labb Plasmidlabb Preparation och analys av -DNA från Escherichia coli Varför är vi här idag? Kort introduktion till biokemi och rekombinant DNA- teknologi Vad skall vi göra idag? Genomgång

Läs mer

Övningstentafrågor i Biokemi, Basåret VT 2012

Övningstentafrågor i Biokemi, Basåret VT 2012 Övningstentafrågor i Biokemi, Basåret VT 2012 1. Förklara kortfattat följande ord/begrepp. (4p) - gen - genom - proteom - mutation - kofaktor - prostetisk grupp - ATP - replikation Celler: 2. Rita en eukaryot

Läs mer

Isolering och rening av proteinet tiopurinmetyltransferas

Isolering och rening av proteinet tiopurinmetyltransferas Isolering och rening av proteinet tiopurinmetyltransferas Inledning och syfte Proteinet tiopurinmetyltransferas (TPMT) är ett humant enzym vars naturliga funktion ännu är okänd. Proteinet katalyserar överföring

Läs mer

Riskbedömning Western blot

Riskbedömning Western blot Sida 1( 6) Riskbedömning Western blot Utförd 2014-05-20 Av Lars Ekblad på Bo Baldetorps grupp. Andrad senast 2014-08-18 Av Lars Ekblad Slutlig bedömning av hela metoden 1. Acceptabel risk 1. Ange vilka

Läs mer

Lite basalt om enzymer

Lite basalt om enzymer Enzymer: reaktioner, kinetik och inhibering Biokatalysatorer Reaktion: substrat omvandlas till produkt(er) Påverkar reaktionen så att jämvikten ställer in sig snabbare, dvs hastigheten ökar Reaktionen

Läs mer

Fysisk aktivitet och hjärnan

Fysisk aktivitet och hjärnan 1 Fysisk aktivitet och hjärnan Professor Ingibjörg H. Jónsdóttir Hälsan och stressmedicin, VGR Institutionen för kost och idrottsvetenskap Göteborgs Universitet Kvinnlig simultankapacitet troligen en myt

Läs mer

Tentamen i Immunteknologi 23 maj 2007, 8-13

Tentamen i Immunteknologi 23 maj 2007, 8-13 Tentamen i Immunteknologi 23 maj 2007, 8-13 1 Varje fråga ger maximalt 5 p, totalt 10 frågor. 2 SKRIV NMN OCH PERSONNUMMER PÅ LL SIDOR! (inklusive tentamensomslaget) 3 nvänd ett NYTT papper för varje fråga!

Läs mer

Kursbok: The immune system Peter Parham. Kapitel 5 Hela skall läsas och kunnas utom: Kapitel 5.5; Fig. 5.9 Kapitel 5.11 och 5.12

Kursbok: The immune system Peter Parham. Kapitel 5 Hela skall läsas och kunnas utom: Kapitel 5.5; Fig. 5.9 Kapitel 5.11 och 5.12 T-cellsutveckling. Kursbok: The immune system Peter Parham Kapitel 5 Hela skall läsas och kunnas utom: Kapitel 5.5; Fig. 5.9 Kapitel 5.11 och 5.12 Några viktiga punkter för att börja med: T celler: thymus

Läs mer

Quantiferon-TB Gold Plus

Quantiferon-TB Gold Plus Quantiferon-TB Gold Plus Verifiering av metoden, svarsrutiner, problem och fallgropar Torbjörn Kjerstadius 2017-03-14 Vad är Quantiferon-TB Gold Plus? Quantiferon TB-Gold Plus (QFT) är en Interferon Gamma

Läs mer

Laboratoriemetod för att manuellt rena DNA från ett prov på 0,5 ml

Laboratoriemetod för att manuellt rena DNA från ett prov på 0,5 ml Laboratoriemetod för att manuellt rena DNA från ett prov på 0,5 ml För att rena genomiskt DNA från insamlingssatser tillhörande Oragene och ORAcollect -familjerna. Besök vår hemsida, www.dnagenotek.com,

Läs mer

BIOMARKERS MEDIATORS SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS

BIOMARKERS MEDIATORS SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS BIOMARKERS AND MEDIATORS IN SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS IFNα versus the CRP response, and evalua8on of supar and an8- dsdna an8body assays Helena Enocsson Linköpings Universitet, Ins8tu8onen för klinisk

Läs mer

Cellskada och manipulering av cellers känslighet för stress

Cellskada och manipulering av cellers känslighet för stress Cellskada och manipulering av cellers känslighet för stress Bakgrund En cellskada kan uppstå på många olika sätt, till exempel exponering för kemikalier, värme, kyla, hypoxi, ischemi eller strålning. Hur

Läs mer

Laboration: cellskada/celldöd

Laboration: cellskada/celldöd Laboration: cellskada/celldöd Läkarprogrammet termin 3 Basgrupp 2 Therese Enenge Amanda Amanda Karlsson Erik Andersson Johansson Niklas Åkesson Ebba Gabrielson Emil Saghamre Salik Hamid 2014-02-06 1 Inledning;

Läs mer

Kod K4002: Följande är tillräckligt för 150 vävnadssnitt, baserat på 100 µl per snitt:

Kod K4002: Följande är tillräckligt för 150 vävnadssnitt, baserat på 100 µl per snitt: Dako EnVision+ System- HRP Labelled Polymer Anti-Rabbit Kod K4002 15 ml Kod K4003 110 ml Avsedd användning För in vitro-diagnostik. Dessa instruktioner gäller för Dako EnVision +, Peroxidase (DC EnVision+

Läs mer

IGFBP-3 på IDS isys (NPU28268)

IGFBP-3 på IDS isys (NPU28268) 2018-11-15 17 1(6) IGFBP-3 på IDS isys (NPU28268) Bakgrund, indikation och tolkning Insulinlik tillväxtfaktorbindare 3 (IGFBP-3) är ett glykoprotein som består av 264 aminosyror. Molekylvikten är ca 46

Läs mer

Evaluation of Correlation between mrna and Protein. Expression of Tripeptidyl-Peptidase II: Possible Future Use as a Biomarker for Cancer?

Evaluation of Correlation between mrna and Protein. Expression of Tripeptidyl-Peptidase II: Possible Future Use as a Biomarker for Cancer? UPPSALA UNIVERSITET Institutionen för kvinnors och barns hälsa Biomedicinska analytikerprogrammet Examensarbete 15hp Evaluation of Correlation between mrna and Protein Expression of Tripeptidyl-Peptidase

Läs mer

Aktivering av signalen via TCR involverar många steg som måste stämma:

Aktivering av signalen via TCR involverar många steg som måste stämma: Aktivering av signalen via TCR involverar många steg som måste stämma: 1) TCR-MHC kontakt 2) Protein Tyrosin kinaser fosforilerar 10 ITAMs på CD3 och speciellt ζ. 3) Protein tyrosin kinas ZAP-70 binder

Läs mer

Kombinerad träning kan muskeln bli snabb, stark och uthållig på samma gång?

Kombinerad träning kan muskeln bli snabb, stark och uthållig på samma gång? OMT/FYIM Kongress/Årsmöte 20-21 mars 2015 Kombinerad träning kan muskeln bli snabb, stark och uthållig på samma gång? Tommy Lundberg Karolinska Institutet Acknowledgements Inst. för hälsovetenskap, Mittuniversitetet

Läs mer

Expression and Purification of Murine Tripeptidyl Peptidase II

Expression and Purification of Murine Tripeptidyl Peptidase II Institutionen för medicinsk biokemi och mikrobiologi Biomedicinska analytikerprogrammet Examensarbete 15 hp, vt 2012 Expression and Purification of Murine Tripeptidyl Peptidase II Sofia Gustafsson Handledare:

Läs mer

LAB 12. Preparation och analys av plasmid-dna från E.coli

LAB 12. Preparation och analys av plasmid-dna från E.coli Institutionen för biokemi och biofysik LAB 12 Preparation och analys av plasmid-dna från E.coli Basåret 2012 (finns på basårshemsida: www.kemi.su.se, välj Basår) INTRODUKTION I denna laboration ska vi

Läs mer

SeroCP IgM. Enzym -Länkad Immunsorbent Assay (ELISA) för bestämning av specifika IgM antikroppar mot. Chlamydia pneumoniae i humanserum.

SeroCP IgM. Enzym -Länkad Immunsorbent Assay (ELISA) för bestämning av specifika IgM antikroppar mot. Chlamydia pneumoniae i humanserum. SeroCP IgM Enzym -Länkad Immunsorbent Assay (ELISA) för bestämning av specifika IgM mot Chlamydia pneumoniae i humanserum Bruksanvisning Test kit för 96 bestämningar (Artikel Nr A192-01M) Test kit för

Läs mer

SeroCP IgG. Enzym -Länkad Immunsorbent Assay (ELISA) för bestämning av specifika IgG antikroppar mot Chlamydia pneumoniae i humanserum.

SeroCP IgG. Enzym -Länkad Immunsorbent Assay (ELISA) för bestämning av specifika IgG antikroppar mot Chlamydia pneumoniae i humanserum. SeroCP IgG Enzym -Länkad Immunsorbent Assay (ELISA) för bestämning av specifika IgG mot Chlamydia pneumoniae i humanserum Bruksanvisning Test kit för 96 bestämningar (Artikel Nr A191-01M) Test kit för

Läs mer

SUPPLEMENTARY INFORMATION

SUPPLEMENTARY INFORMATION SUPPLEMENTARY INFORMATION SUPPLEMENTARY METHODS Preparation of the cells for transmission electron microscopy - Cells grown on coverslips were fixed for 45 minutes with 2.5% glutaraldehyde (50 mm cacodylate

Läs mer

Expression, produktion och rening av Fatty acid binding protein (FABP) från ökenmyran Cataglyphis fortis

Expression, produktion och rening av Fatty acid binding protein (FABP) från ökenmyran Cataglyphis fortis UNIVERSITETET I LINKÖPING Proteinkemi Kemiavdelningen 2011-02-04 Expression, produktion och rening av Fatty acid binding protein (FABP) från ökenmyran Cataglyphis fortis Produktion av FABP i E. coli bakterier

Läs mer

APOPTOS Programmerad celldöd

APOPTOS Programmerad celldöd APOPTOS Programmerad celldöd Håkan Billig 2014 hakan.billig@fysiologi.gu.se 1 APOPTOS 1. Exempel på celldöd under normalt liv Grodyngel Fosterutveckling Anpassa cellantal Nerv-målcells interaktion hormon-målcells

Läs mer

Tillämpning av olika molekylärbiologiska verktyg för kloning av en gen

Tillämpning av olika molekylärbiologiska verktyg för kloning av en gen IFM/Kemi Linköpings Universitet September 2011/LGM Projektlaboration i genteknik Tillämpning av olika molekylärbiologiska verktyg för kloning av en gen Innehållsförteckning Inledning... 3 Amplifiering

Läs mer

ELISA-test för att diagnosticera diabetes typ 1. Niklas Dahrén

ELISA-test för att diagnosticera diabetes typ 1. Niklas Dahrén ELISA-test för att diagnosticera diabetes typ 1 Niklas Dahrén Vad är syftet med ELISA-test? ü Sy$et med ELISA är a0 ta reda på om provet (t.ex. e, serumprov från en pa3ent) innehåller en specifik an3kropp

Läs mer

NF-light (Neurofilament light) ELISA

NF-light (Neurofilament light) ELISA NF-light (Neurofilament light) ELISA SVENSKA Bruksanvisning NF-light (Neurofilament light) ELISA Kvantitativ immunoassay för bestämning av humant neurofilament light (NF-L) protein i cerebrospinalvätska.

Läs mer

Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800)

Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800) Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800) Kursens namn: BMLVA II 22,5 högskolepoäng Kurskod: BL1004 Kursansvarig: Charlotte Sahlberg Bang Datum: 14 januari -2012 Skrivtid: 240 min Totalpoäng:

Läs mer

Sören Andersson. Professor, prefekt, överläkare. Institutionen för medicinska vetenskaper Örebro universitet & Laboratoriemedicin, Region Örebro län

Sören Andersson. Professor, prefekt, överläkare. Institutionen för medicinska vetenskaper Örebro universitet & Laboratoriemedicin, Region Örebro län Konfirmation av HIV och HTLV Sören Andersson Professor, prefekt, överläkare Institutionen för medicinska vetenskaper Örebro universitet & Laboratoriemedicin, Region Örebro län Diagnostiska principer HIV

Läs mer

S-IGF1, isys, IDS Malmö

S-IGF1, isys, IDS Malmö 1(7) S-IGF1, isys, IDS Malmö Bakgrund, indikation och tolkning IGF-1 är en proinsulinliknande molekyl som består av en peptidkedja om 70 aminosyror med 3 disulfidbryggor. Molekylvikten är 7 649 Da. IGF-1

Läs mer

Vad är MHC? MHC och TCR struktur. Antigen processering och presentation. Kursbok: The immune system Peter Parham

Vad är MHC? MHC och TCR struktur. Antigen processering och presentation. Kursbok: The immune system Peter Parham Vad är MHC? MHC och TCR struktur. Antigen processering och presentation. Kursbok: The immune system Peter Parham Kapitel 3; hela Lite Historia: 1953: George Snell upptäcker en grupp av gener som bestämmer

Läs mer

Coatest SP Factor VIII 82 4086 63 Swedish revision 12/2004

Coatest SP Factor VIII 82 4086 63 Swedish revision 12/2004 AVSETT ÄNDAMÅL Kitet är avsett för fotometrisk bestämning av faktor VIII-aktivitet i plasma, antikoagulerad med citrat vid diagnostisering av FVIII-brist eller för monotorering av patienter i substitutionsterapi

Läs mer

Polymerase Chain Reaction

Polymerase Chain Reaction Polymerase Chain Reaction The Polymerase Chain Reaction Molekylärbiologisk metodik T3 ht 11 Märit Karls Kunskapsmål för detta avsnitt Från kursplan: Studenten skall kunna: förklara grundläggande principer

Läs mer

Internationella erfarenheter: Publicerade resultat kring cut off- värden för jordnöt

Internationella erfarenheter: Publicerade resultat kring cut off- värden för jordnöt Internationella erfarenheter: Publicerade resultat kring cut off- värden för jordnöt Jenny van Odijk Leg. Dietist, Med dr. Sahlgrenska Universitetssjukhuset Referenser Codreanu F et al. A novel immunoassay

Läs mer

DUGGA Molekylärbiologi T2 / VT p (G = 25 p)

DUGGA Molekylärbiologi T2 / VT p (G = 25 p) KORTSVARSFRÅGOR 1. Restriktionsenzymet BamHI klyver sekvensen 5 -G*GATCC-3 och lämnar 4 basers 5' överhäng. Rita upp det längsta DNA-fragmentet som bildas efter klyvning av nedanstående given sekvens med

Läs mer

Uppsala november 6, 2013 Anne-Charlotte Aronsson, CEO

Uppsala november 6, 2013 Anne-Charlotte Aronsson, CEO Uppsala november 6, 2013 Anne-Charlotte Aronsson, CEO AroCell AB Affärsidé AroCell utvecklar, producerar och kommersialiserar tester för bestämning av celltillväxt, vilka kan användas för uppföljning och

Läs mer

Cirkulerande cellfritt DNA

Cirkulerande cellfritt DNA Cirkulerande cellfritt DNA - en introduktion Anne Ricksten Equalismöte 2016-11-14 Vad är cirkulerande fritt DNA (cfdna)? Extracellulärt DNA som finns i cirkulationen Fragmenterat DNA, medelstorlek på ca

Läs mer

ELISA för kvantitativ mätning av läkemedelskoncentrationer av infliximab Ab BUF CAL CONJ HRP Antikroppar mot Buffert Kalibrator Konjugat HRP

ELISA för kvantitativ mätning av läkemedelskoncentrationer av infliximab Ab BUF CAL CONJ HRP Antikroppar mot Buffert Kalibrator Konjugat HRP Instructions for use Sanquin Reagents B.V. Plesmanlaan 125 1066 CX Amsterdam The Netherlands Phone: +31 20 5123599 Fax: +31 20 5123570 biologics@sanquin.nl www.sanquin.org/biologics MabTrack level infliximab

Läs mer

Sammanställning över alternativ till etidiumbromid

Sammanställning över alternativ till etidiumbromid 1 (6) Sammanställning över alternativ till etidiumbromid I nedanstående tabeller har leverantörerna VWR, Invitrogen och Sigma-Aldrich lämnat uppgifter om produkter/n de saluför som alternativ till etidiumbromid.

Läs mer

Projektmodell med kunskapshantering anpassad för Svenska Mässan Koncernen

Projektmodell med kunskapshantering anpassad för Svenska Mässan Koncernen Examensarbete Projektmodell med kunskapshantering anpassad för Svenska Mässan Koncernen Malin Carlström, Sandra Mårtensson 2010-05-21 Ämne: Informationslogistik Nivå: Kandidat Kurskod: 2IL00E Projektmodell

Läs mer

GENETIK - Läran om arvet

GENETIK - Läran om arvet GENETIK - Läran om arvet Kroppens minsta levande enheter är cellerna I cellkärnorna finns vår arvsmassa - DNA (DNA - Deoxiribonukleinsyra) Proteiner Transportproteiner Strukturproteiner Enzymer Reglerande

Läs mer

Bruksanvisning. EULISA dsdna IgG. Avsedd användning. Enzymimmunoanalys för detektering av autoantikroppar IgG mot dsdna

Bruksanvisning. EULISA dsdna IgG. Avsedd användning. Enzymimmunoanalys för detektering av autoantikroppar IgG mot dsdna Bruksanvisning EULISA dsdna IgG Avsedd användning Enzymimmunoanalys för detektering av autoantikroppar IgG mot dsdna Mikrotitrering, 96 brunnar Förvara kitet vid +28 C Endast för in vitrodiagnostik. Dokument

Läs mer

c) Hur förskjuts jämvikten av en tryckförändring? Motivera svaret. (2) Jämvikten förskjuts åt vänster om trycket ökar:

c) Hur förskjuts jämvikten av en tryckförändring? Motivera svaret. (2) Jämvikten förskjuts åt vänster om trycket ökar: 1. Dikvävetetraoxid sönderfaller vid upphettning till kvävedioxid. Temperaturen förutsätts vara så hög att alla ämnen i reaktionen är gasformiga. Reaktionen är endotermisk och går till jämvikt. a) Formulera

Läs mer

Uttryck av kloratreduktas och kloritdismutas i Ideonella dechloratans odlade i aerob miljö med tillsatt klorat

Uttryck av kloratreduktas och kloritdismutas i Ideonella dechloratans odlade i aerob miljö med tillsatt klorat Karlstads Universitet Fakulteten för teknik- och naturvetenskap Avdelningen för kemi Uttryck av kloratreduktas och kloritdismutas i Ideonella dechloratans odlade i aerob miljö med tillsatt klorat Laboranter

Läs mer

Preparation av hemoglobin med hjälp av gelfiltrering

Preparation av hemoglobin med hjälp av gelfiltrering Preparation av hemoglobin med hjälp av gelfiltrering Teori Vid preparation av ett protein används en rad olika metoder för att specifikt rena fram det önskade proteinet. I vårt fall ska hemoglobin från

Läs mer

CHANGE WITH THE BRAIN IN MIND. Frukostseminarium 11 oktober 2018

CHANGE WITH THE BRAIN IN MIND. Frukostseminarium 11 oktober 2018 CHANGE WITH THE BRAIN IN MIND Frukostseminarium 11 oktober 2018 EGNA FÖRÄNDRINGAR ü Fundera på ett par förändringar du drivit eller varit del av ü De som gått bra och det som gått dåligt. Vi pratar om

Läs mer

OBS! Under rubriken lärares namn på gröna omslaget ange istället skrivningsområde, ex Lösningsberedning. Totalt ska ni använda 9 gröna omslag.

OBS! Under rubriken lärares namn på gröna omslaget ange istället skrivningsområde, ex Lösningsberedning. Totalt ska ni använda 9 gröna omslag. BL1015, BMLV A, biomedicinsk laboratoriemetodik, 7,5hp. Prov 0101, H14. Kursansvarig: Siw Lunander Datum: 2014-11-22 Skrivtid: 4 timmar Totalpoäng: 51 p Lösningsberedning, 15 poäng Spektrofotometri, 5

Läs mer

SUPPLEMENTARY FIGURE LEGENDS

SUPPLEMENTARY FIGURE LEGENDS SUPPLEMETARY FIGURE LEGEDS Supplementary Fig. 1. Flow cytometric analysis of wildtype, mutant and chimeric protein surface expression. Cells transduced with the individual constructs indicated were stained

Läs mer

STOCKHOLMS UNIVERSITET INSTITUTIONEN FÖR BIOLOGISK GRUNDUTBILDNING

STOCKHOLMS UNIVERSITET INSTITUTIONEN FÖR BIOLOGISK GRUNDUTBILDNING STOCKHOLMS UNIVERSITET INSTITUTIONEN FÖR BIOLOGISK GRUNDUTBILDNING TENTAMEN Kurs: Prokaryot cell- och molekylärbiologi (PCMB) Datum: 2007-06-19 kl. 10-13 Visat betald terminsräkning och legitimation _

Läs mer

Labokha AA et al. xlnup214 FG-like-1 xlnup214 FG-like-2 xlnup214 FG FGFG FGFG FGFG FGFG xtnup153 FG FGFG xtnup153 FG xlnup62 FG xlnup54 FG FGFG

Labokha AA et al. xlnup214 FG-like-1 xlnup214 FG-like-2 xlnup214 FG FGFG FGFG FGFG FGFG xtnup153 FG FGFG xtnup153 FG xlnup62 FG xlnup54 FG FGFG xlnup214 FG-like-1 (aa 443-69) TSVSAPAPPASAAPRSAAPPPYPFGLSTASSGAPTPVLNPPASLAPAATPTKTTSQPAAAATSIFQPAGPAAGSLQPPSLPAFSFSSANNAANASAPSSFPFGA AMVSSNTAKVSAPPAMSFQPAMGTRPFSLATPVTVQAATAPGFTPTPSTVKVNLKDKFNASDTPPPATISSAAALSFTPTSKPNATVPVKSQPTVIPSQASVQP

Läs mer

Realtids-PCR. icycler BioRad, mikrotiterplattor. LightCycler Roche, kapillärer. ABI Prism 7000 Applied Biosystem mikrotiterplattor

Realtids-PCR. icycler BioRad, mikrotiterplattor. LightCycler Roche, kapillärer. ABI Prism 7000 Applied Biosystem mikrotiterplattor Realtids-PCR icycler BioRad, mikrotiterplattor LightCycler Roche, kapillärer ABI Prism 7000 Applied Biosystem mikrotiterplattor Molekylärbiologisk metodik T3 ht 2011 Märit Karls Kunskapsmål för detta avsnitt

Läs mer

Laboration Enzymer. Labföreläsning. Introduktion, enzymer. Kinetik. Första ordningens kinetik. Michaelis-Menten-kinetik

Laboration Enzymer. Labföreläsning. Introduktion, enzymer. Kinetik. Första ordningens kinetik. Michaelis-Menten-kinetik Labföreläsning Maria Svärd maria.svard@ki.se Molekylär Strukturbiologi, MBB, KI Introduktion, er och kinetik Första ordningens kinetik Michaelis-Menten-kinetik K M, v max och k cat Lineweaver-Burk-plot

Läs mer

Rekommendationer för inläsning av läroboken Erlanson-Albertsson C och Gullberg U: Cellbiologi, Studentlitteratur 2007

Rekommendationer för inläsning av läroboken Erlanson-Albertsson C och Gullberg U: Cellbiologi, Studentlitteratur 2007 Välkommen! Målen med kursen Biovetenskap och teknik, 7,5 hp, bland annat är att Du skall förvärva kunskap om eukaryota cellers struktur, funktion och hur celler påverkas av sin omgivning. Kursen är upplagd

Läs mer

LAB 11 STUDIER AV TEMPERATUR OCH

LAB 11 STUDIER AV TEMPERATUR OCH Institutionen för biokemi och biofysik LAB 11 STUDIER AV TEMPERATUR OCH ph-beroende HOS ENZYMET AMYLAS Basåret 2011 (finns på basårshemsida: www.kemi.su.se, välj basår) Introduktion Enzymet α-amylas som

Läs mer

BASÅRET KEMI B BIOKEMI VT 2012. PROTEINER OCH ENZYMER 174-190 (sid. 140-156)

BASÅRET KEMI B BIOKEMI VT 2012. PROTEINER OCH ENZYMER 174-190 (sid. 140-156) BASÅRET KEMI B BIOKEMI PROTEINER OCH ENZYMER 174-190 (sid. 140-156) Hur lätt blir det fel i strukturen? ganska stora skillnader i sekvens - ganska lika strukturer proteinerna är bara identiska i 27 av

Läs mer

S-IGF BP 3, Malmö Immulite2000XPi

S-IGF BP 3, Malmö Immulite2000XPi Klinisk kemi Sid 1(5) Immulite2000XPi Bakgrund, indikation och tolkning Insulinlik tillväxtfaktorbindare 3 (IGFBP-3) är ett glykoprotein som består av 264 aminosyror. Molekylvikten är ca 46 000. IGFBP-3

Läs mer

ELISA för kvantitativ mätning av läkemedelskoncentrationer av adalimumab Ab ADL BUF CAL CONJ Antikroppar mot Adalimumab Buffert Kalibrator Konjugat

ELISA för kvantitativ mätning av läkemedelskoncentrationer av adalimumab Ab ADL BUF CAL CONJ Antikroppar mot Adalimumab Buffert Kalibrator Konjugat Instructions for use Sanquin Reagents B.V. Plesmanlaan 125 1066 CX Amsterdam The Netherlands Phone: +31 20 5123599 Fax: +31 20 5123570 biologics@sanquin.nl www.sanquin.org/biologics MabTrack level adalimumab

Läs mer

Matematikcentrum 1(4) Matematisk Statistik Lunds Universitet MASB11 HT10. Laboration. Regressionsanalys (Sambandsanalys)

Matematikcentrum 1(4) Matematisk Statistik Lunds Universitet MASB11 HT10. Laboration. Regressionsanalys (Sambandsanalys) Matematikcentrum 1(4) Matematisk Statistik Lunds Universitet MASB11 HT10 Laboration Regressionsanalys (Sambandsanalys) Grupp A: 2010-11-24, 13.15 15.00 Grupp B: 2010-11-24, 15.15 17.00 Grupp C: 2010-11-25,

Läs mer

Analys av antistreptolysin-o i patientserum

Analys av antistreptolysin-o i patientserum Umeå Universitet Biomedicinska analytikerprogrammet Analys av antistreptolysin-o i patientserum Årskull: Laborationsrapport i Klinisk Laboratoriemetodik II Laborationsdatum: Inlämnad: Godkänd: Handledare:

Läs mer

QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA 708790 För In Vitro Diagnostisk användning CLIA Komplexity: Hög

QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA 708790 För In Vitro Diagnostisk användning CLIA Komplexity: Hög QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA 708790 För In Vitro Diagnostisk användning CLIA Komplexity: Hög Avsedd användning QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA är en semi-kvantitativ enzyme-länkad immunosorbent assay för

Läs mer

Förmågan hos Purified Protein Derivate, Phytohemagglutinin och Enterotoxin B att stimulera lymfocyter till prolifiering

Förmågan hos Purified Protein Derivate, Phytohemagglutinin och Enterotoxin B att stimulera lymfocyter till prolifiering Umeå Universitet Biomedicinska analytikerprogrammet Förmågan hos Purified Protein Derivate, Phytohemagglutinin och Enterotoxin B att stimulera lymfocyter till prolifiering XXXX och YYYY Årskull: BMA-07

Läs mer

1. a) Markera polära och icke-polära delar i nedanstående molekyl. Vilken typ av ämne är det, och vad heter molekylen? (2p)

1. a) Markera polära och icke-polära delar i nedanstående molekyl. Vilken typ av ämne är det, och vad heter molekylen? (2p) Tentamen med svarsmallar Biokemi BI0968, 8:e jan 2009, 09 15-14 00. Max poäng = 100 p. Slutliga gränser: 3 = 50%; 4 = 70%; 5 = 82%. 1. a) Markera polära och icke-polära delar i nedanstående molekyl. Vilken

Läs mer

Rening av proteiner: hur och varför?

Rening av proteiner: hur och varför? Rening av proteiner: hur och varför? (och lite biologiska grunder) Joakim Norbeck! norbeck@chalmers.se! Grunder! Plasmider! Protein-rening! Detektion!!!!! Mest relevanta sidor i "Cell" är 510-518 & 532-552!

Läs mer

Att mäta och förbättra dialysvården över tid

Att mäta och förbättra dialysvården över tid Att mäta och förbättra dialysvården över tid Exempel från dialysenheten på Länssjukhuset Ryhov, Jönköping Dan Enell, Mark Splaine, Johan Thor 13 maj, 2013 Syften 1. Att visa hur man kan använda mätningar

Läs mer

Provet kommer att räknas igenom under vt16 på torsdag eftermiddagar ca Meddelande om sal och exakt tid anslås på min kontorsdörr (rum419).

Provet kommer att räknas igenom under vt16 på torsdag eftermiddagar ca Meddelande om sal och exakt tid anslås på min kontorsdörr (rum419). Ke2. Komvux, Lund. Prov 2. Övning. Provet kommer att räknas igenom under vt16 på torsdag eftermiddagar ca 1330-1500. Meddelande om sal och exakt tid anslås på min kontorsdörr (rum419). Övningsprovet innehåller

Läs mer

Syra/bas och Energi Kurskod 1BA001

Syra/bas och Energi Kurskod 1BA001 Institutionen för Laboratoriemedicin Biomedicinsk analytikerutbildningen Termin 2 Syra/bas och Energi Kurskod 1BA001 Laboration: Reduktion av pyruvat med NADH Ulla Andersson Ulla.K.Andersson@ki.se 1 Arbetsplan

Läs mer

Tunga metaller / Heavy metals ICH Q3d & Farmakope. Rolf Arndt Cambrex Karlskoga

Tunga metaller / Heavy metals ICH Q3d & Farmakope. Rolf Arndt Cambrex Karlskoga Tunga metaller / Heavy metals ICH Q3d & Farmakope Rolf Arndt Cambrex Karlskoga Tunga metaller / Heavy metals Rolf Arndt -Quality Assurance Cambrex Karlskoga - Svenska Farmakopekommitten / Working Party

Läs mer

Mercodia MPO ELISA. Bruksanvisning 10-1176-01 REAGENSER FÖR 96 BESTÄMNINGAR. För in vitro diagnostiskt bruk. Tillverkad av

Mercodia MPO ELISA. Bruksanvisning 10-1176-01 REAGENSER FÖR 96 BESTÄMNINGAR. För in vitro diagnostiskt bruk. Tillverkad av Mercodia MPO ELISA Bruksanvisning 10-1176-01 REAGENSER FÖR 96 BESTÄMNINGAR För in vitro diagnostiskt bruk Tillverkad av Mercodia AB Sylveniusgatan 8A SE-754 50 Uppsala Sverige FÖRKLARING AV SYMBOLER SOM

Läs mer

SeroMP IgG. Bruksanvisning. Test kit för 96 bestämningar (Artikel Nr A261-01M) Test kit för 192 bestämningar (Artikel Nr B261-01M)

SeroMP IgG. Bruksanvisning. Test kit för 96 bestämningar (Artikel Nr A261-01M) Test kit för 192 bestämningar (Artikel Nr B261-01M) SeroMP IgG Enzym -Länkad Immunsorbent Assay (ELISA) för semi kvantitativ bestämning av specifika IgG antikroppar mot Mycoplasma pneumoniae i humanserum Bruksanvisning Test kit för 96 bestämningar (Artikel

Läs mer

Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800)

Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800) Tentamen i Biomedicinsk laboratoriemetodik 2, 7 hp (kod 0800) Kursens namn: BMLVA II 22,5 högskolepoäng Kurskod: BL1004 Kursansvarig: Rolf Pettersson, Charlotte Sahlberg Bang Datum: 2/5-2011 Skrivtid:

Läs mer

Laboration v.40 Detektion av Legionella pneumophilia med nestad PCR

Laboration v.40 Detektion av Legionella pneumophilia med nestad PCR Avdelningen för kemi och biomedicin Karlstads universitet Laboration v.40 Detektion av Legionella pneumophilia med nestad PCR Frågeställning: Vattenlednings system med tillväxt av Legionella pneumophilia

Läs mer

Mutationer. Typer av mutationer

Mutationer. Typer av mutationer Mutationer Mutationer är förändringar i den genetiska sekvensen. De är en huvudorsak till mångfalden bland organismer och de är väsentliga för evolutionen. De här förändringarna sker på många olika nivåer

Läs mer

BIMA15 HT Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer 1

BIMA15 HT Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer 1 BIMA15 HT 2015. Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer 1 Innehåll: 1. Säkerhet på labbet 2. Övning: spädning och spektrofotometer 3. Övning: att väga och ställa ph 4. Labrapport Laborationerna

Läs mer

Tentamen i KEMI del B för Basåret GU (NBAK10) kl Institutionen för kemi, Göteborgs universitet

Tentamen i KEMI del B för Basåret GU (NBAK10) kl Institutionen för kemi, Göteborgs universitet Tentamen i KEMI del B för Basåret GU (NBAK10) 2007-03-23 kl. 08.30-13.30 Institutionen för kemi, Göteborgs universitet Lokal: örsalslängan A1, B1, B4 jälpmedel: Räknare valfri Ansvarig lärare: Leif olmlid

Läs mer

Forskning om diagnos och behandling vid Alzheimers sjukdom

Forskning om diagnos och behandling vid Alzheimers sjukdom Forskning om diagnos och behandling vid Alzheimers sjukdom Erik Portelius Sahlgrenska Universitetssjukhuset, PhD Institutionen för neurovetenskap och fysiologi vid Göteborgs Universitet Kompetensutveckling

Läs mer

2016, Arbetslösa samt arbetslösa i program i GR i åldrarna år

2016, Arbetslösa samt arbetslösa i program i GR i åldrarna år 216, Arbetslösa samt arbetslösa i program i GR i åldrarna 16-64 år Öppet arbetslösa i GR (16-64år) Göteborg Totalt Göteborg Totalt jan 328 514 13 351 418 743 372 351 169 762 422 31 155 93 17 988 jan 342

Läs mer

Lycka till! Omtentamen. Kursens namn: Medicin C, Tumörbiologi Kursens kod: MC1728 Kursansvarig: Anna Göthlin Eremo

Lycka till! Omtentamen. Kursens namn: Medicin C, Tumörbiologi Kursens kod: MC1728 Kursansvarig: Anna Göthlin Eremo Omtentamen Kursens namn: Medicin C, Tumörbiologi Kursens kod: MC1728 Kursansvarig: Anna Göthlin Eremo Datum: 2012-11-24 Skrivtid: 4 timmar Poängfördelning: Karin Franzén Sabina Davidsson Pia Wegman Marike

Läs mer

Epigenetikens biokemi, eller Kemisk modifiering av DNA och histonproteiner för att styra genuttryck

Epigenetikens biokemi, eller Kemisk modifiering av DNA och histonproteiner för att styra genuttryck Epigenetikens biokemi, eller Kemisk modifiering av DNA och histonproteiner för att styra genuttryck Astrid Gräslund Inst. för biokemi och biofysik Stockholms Universitet Föreläsning, Värnamo, 131016 Epigenetik

Läs mer