Syphilis Total Ab 1 platta - 96 72530 5 plattor - 480 72531

Syphilis Total Ab 1 platta - 96 72530 5 plattor - 480 72531 KIT FÖR KVALITATIV DETEKTION AV ANTIKROPPAR MOT TREPONEMA PALLIDUM I HUMANT SERUM ELLER PLASMA MED ENSYMIMMUNANALYS 883679-2014/11

INNEHÅLLSFÖRTECKNING 1. AVSEDD ANVÄNDNING... 2 2. ÖVERSIKT OCH FÖRKLARING AV TESTET... 2 3. TESTPRINCIP... 2 4. REAGENSER... 3 5. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER... 4 6. PROVER... 5 7. PROCEDUR... 6 8. TESTETS BEGRÄNSNING... 9 9. PRODUKTEGENSKAPER... 9 10. BIBLIOGRAFISKA REFERENSER.... 12 [SE] 1

1. AVSEDD ANVÄNDNING Kiten är avsedda att s av utbildad och kvalificerad personal för kvalitativ detektion av antikroppar mot Treponema pallidum i humant serum och human plasma. Produkten får s för testning av blodgivare och som hjälp vid diagnostisering av patienter med misstänkt syfilisinfektion. 2. ÖVERSIKT OCH FÖRKLARING AV TESTET Syfilis är en kronisk infektion som fortskrider med tydliga stadier: primärt, sekundärt, latent och tertiärt. Dessa stadier ger olika kliniska symtom, som typiskt börjar med sår, s.k. schanker, och därefter syfilitiska utslag som följs av långa latensperioder. Obehandlad infektion kan med tiden leda till kardiovaskulära symtom och neurosyfilis. Infektionen orsakas av spiroketbakterien Treponema pallidum, och överförs vanligen vid sexuell kontakt men sjukdomen kan också överföras vid blodtransfusion med infekterat blod. Infektionen kan även överföras från moder till foster. Det har visat sig vara i det närmaste omöjligt att odla organismen i artificiella medier och diagnosen av infektionen bygger vanligen på antikroppar i blodet som bildas ganska snart efter smittotillfället och som kan finnas kvar i många år. Tester för syfilis kan delas in i fyra kategorier: direktmikroskopi, tester av treponemaantikroppar, tester av icke-trenponemaantikroppar och direkta antigentester. På grund av de långa latensperioderna och de icke specifika egenskaperna hos tester som är ospecifika för treponema har metoder som påvisar specifika treponemaantikroppar i blodprover blivit alltmer populära som screeningverktyg. Syphilis Total Ab är ett sådant test. 3. TESTPRINCIP Syphilis Total Ab använder tre rekombinanta antigener i en sandwichanalys. Antigenerna detekterar T. pallidum-specifikt IgG, IgM och IgA vilket gör att testet kan påvisa antikroppar under infektionens alla stadier. Brunnarna är belagda med en blandning av rekombinanta T. pallidum-antigener på 15kD, 17kD och 47kD. Specifika antikroppar i serum- eller plasmaprover binder till dessa antigener och till samma antigener konjugerade till pepparrotsperoxidas när konjugat tillsätts i en brunn där provet har inkuberats. När material som inte reagerat har tvättats bort, avslöjar förändring av färgen på substrat- /kromogenblandningen förekomsten av bundet enzym, vilket indikerar att provet innehåller antikroppar. Färgstyrkan jämförs med kontrollbrunnarna för att fastställa förekomst eller frånvaro av specifika antikroppar. [SE] 2

4. REAGENSER R1 R2 R3 R4 R6 4.1. Beskrivning Identifiering på etikett Microplate Concentrated Washing Solution (20X) Negative control Positive control Conjugate Beskrivning Mikroplatta 12 remsor med vardera 8 brunnar, belagda med rekombinanta T. pallidum-antigener (rag) Specifikt ID-nummer = 97 Koncentrerad tvättlösning (20X) Tris NaCl-buffert ph 7,4 Konserveringsmedel: ProClin 300 (0,04 %) Negativ kontroll Tris-buffert som innehåller BSA (bovint serumalbumin) Konserveringsmedel: ProClin 300 (0,1 %) Positiv kontroll (human) Humant serum innehåller antikroppar mot T.pallidum negativt for HIV1/2, HBsAg och HCV utspätt i en Tris-buffert som innehåller BSA (bovint serumalbumin) Konserveringsmedel: ProClin 300 (0,1 %) Konjugat T.pallidum rag/peroxidas Konserveringsmedel: ProClin 300 (0,05 %) Presentation/ förberedelse 72530 1 platta 70 ml Späds ut 2,1 ml 1,6 ml 8 ml Presentation/ förberedelse 72531 5 plattor 235 ml Späds ut 2,1 ml 1,6 ml 30 ml R8 Substrate buffer Substratbuffert Citronsyra- och natriumacetatlösning ph 4,0 som innehåller H 2 O 2 (0,015 %) och DMSO (4 %) 60 ml Ska rekonstitueras 60 ml Ska rekonstitueras R9 R10 Chromogen: TMB solution (11X) Stopping solution Kromogen: TMB-lösning (rosa) Lösningen innehåller 3,3, 5,5 tetrametylbensidin (TMB) Stopplösning Svavelsyralösning (H 2 SO 4 1N) 5 ml Späds ut 28 ml 5 ml Späds ut 28 ml 4.1. Förvaring och hantering Kitet ska förvaras vid +2-8 C. Alla delar i kitet som förvaras vid +2-8 C kan s fram till utgångsdatumet på förpackningen (om inget annat anges). När det öppnats och om det inte kontamineras kan reagenserna R3, R4, R6, R8, R9 och R10 s fram till utgångsdatumet på etiketten om de förvaras vid +2-8 C. [SE] 3

Identifiering R1 R2 R8+R9 Förvaring När den vakuumförslutna påsen har öppnats kan mikrobrunnsremsorna som förvaras vid +2-8 C s i 1 månad om originalpåsen försluts väl. Den utspädda tvättlösningen kan förvaras vid +2-30 C i 2 veckor. Den koncentrerade tvättlösningen (R2) kan förvaras i +2-30 C. Efter rekonstituering är reagenserna stabila i 6 timmar om de förvaras mörkt i rumstemperatur (18-30 C). 5. VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER För in vitro-diagnostiskt bruk. För användning av utbildad sjukvårdspersonal. 5.1. Försiktighetsåtgärder för hälsa och säkerhet: Detta testkit ska endast hanteras av behörig personal som är utbildad i laboratoriearbete och som känner till de potentiella riskerna. Bär lämpliga skyddskläder, handskar och ögon- /ansiktsskydd och hantera korrekt enligt enligt erforderlig god laboratoriesed. Testkitet innehåller humana blodkomponenter. Material av humant ursprung som använts vid framställningen av reagenserna har kontrollerats och befunnits icke-reaktivt för hepatit B- ytantigen (HBsAg) och antikroppar mot humant immunbristvirus (HIV-1 och HIV-2) samt antikroppar mot hepatit C-virus (HCV). Ingen känd testmetod kan fullständigt garantera frånvaro av smittämnen. Därför ska alla produkter framställda av humant blod, reagenser och prover från människor hanteras som potentiellt smittförande. Följ alla rekommenderade lokala, regionala och nationella försiktighetsåtgärder för blodburna patogener. Biologiskt spill: Spill av material av humant ursprung ska betraktas som potentiellt smittförande. Spill som inte innehåller syror ska omedelbart dekontamineras med lämpligt kemiskt desinfektionsmedel som är effektivt mot de potentiella biologiska risker som proverna utgör. Vanligen betyder det att spillområdet, material och eventuella kontaminerade ytor eller utrustningsdelar torkas av med en 1:10 blandning av natriumhypoklorit, 70 80 % etanol eller isopropanol, en jodofor (t.ex. 0,5 % Wescodyne Plus) och sedan torkas torra. Spill som innehåller syra ska absorberas (torkas upp) eller neutraliseras, området spolas med vatten och torkas. Material som används för att absorbera spill bör hanteras som biologiskt riskavfall. Området ska sedan dekontamineras med ett kemiskt desinfektionsmedel. OBS! Placera inte lösningar som innehåller natriumhypoklorit i autoklaven! Kassera alla prover och material som används för att utföra testet som om de var smittförande. Laboratorieavfall, kemiskt avfall eller biologiskt riskavfall måste hanteras och kasseras i enlighet med alla lokala, regionala och nationella bestämmelser. För risk- och skyddsrekommendationer i samband med vissa kemikaliekomponenter i denna testsats, se de bildsymboler som anges på etiketterna och informationen som tillhandahålls i slutet av bruksanvisningen. Säkerhetsdatabladet finns på www.bio-rad.com. [SE] 4

5.2. Försiktighetsåtgärder i samband med proceduren 5.2.1. Förberedelse Resultatens kvalitet är beroende av att god laboratoriesed (GLP) tillämpas: Använd inte utgångna reagenser. Blanda inte reagenser från olika partier inom en analysomgång. Innan reagenserna används ska de stabiliseras vid rumstemperatur (18 30 C) i 30 minuter. Namnet på testet och testets specifika ID-nummer finns på ramen på varje mikroplatta. Det specifika ID-numret anges också på varje remsa. Syphilis Total Ab: Specifikt ID-nummer = 97 Kontrollera det specifika ID-numret före användning. Om ID-numret saknas eller om det skiljer sig från det angivna numret för den analys som ska utföras ska remsan inte s. KOMMENTAR: För tvättlösningen (R2, ID på etiketten: 20X grönfärgad), peroxidassubstratbuffert (R8, ID på etiketten: TMB-buffert blåfärgad), kromogen (R9, ID på etiketten: TMB 11x lilafärgad) och stopplösning (R10 ID på etiketten: 1N rödfärgad) kan du andra partier än de som ingår i testet om samma parti används inom en bestämd testkörning. Dessa reagenser kan s tillsammans med vissa andra produkter från vårt företag. Kontakta vår avdelning för teknisk service om du vill ha mer information. Rekonstituera reagenserna noggrant och undvik all förorening. Använd glasvaror som noggrant har diskats och sköljts med avjoniserat vatten, eller helst engångsmaterial. Se till att mikroplattan inte hinner torka efter tvättningen innan reagenset har hällts i. Den enzymatiska reaktionen är mycket känslig för metalljoner. Därför får ingen metall komma i kontakt med de olika konjugat- eller substratlösningarna. Framkallningslösningen (substratbuffert och kromogen) måste vara rosafärgad. Om den rosa färgen förändras några minuter efter rekonstitueringen är detta en indikation på att reagenset inte kan s och måste bytas ut. Framkallningslösningen kan beredas i rena engångstråg av plast eller i glasbehållare som först har förtvättats med 1N HCl och därefter sköljts noggrant med destillerat vatten och torkats. Detta reagens måste förvaras i mörker. Använd aldrig samma behållare för fördelning av konjugat- och framkallningslösning. 5.2.1. Bearbetning Ändra inte testproceduren. Utför inte testet i närvaro av reaktiva ångor (syraångor, alkaliska ångor, aldehydångor) eller damm som skulle kunna påverka konjugatets enzymaktivitet. Använd en ny pipettspets för varje prov. Tvättningen av brunnarna är ett viktigt steg i proceduren: Följ det rekommenderade antalet tvättcykler och se till att alla brunnar fylls helt och därefter töms helt. Felaktig tvättning kan leda till felaktiga resultat. Följ noggrant den beskrivna tvättproceduren för att få bästa möjliga testresultat. För vissa instrument kan det vara nödvändigt att optimera tvättproceduren (öka antalet tvättcykler och/eller volymen av tvättbuffert för varje cykel) för att uppnå en godtagbar bakgrundsnivå för det negativa provets optiska densitet. 6. PROVER 5.2.2. Kontakta oss för anpassningar och specialmetoder. Ta blodprov enligt sedvanlig praxis. Testet ska utföras på outspätt serum eller plasma (insamlat i EDTA, natriumcitrat, natriumheparin eller ACD) Prover som innehåller aggregat måste klarnas genom centrifugering före testet. Proverna bör förvaras vid +2 8 C om testet utförs inom 7 dagar, eller djupfrysas vid 20 C. Proverna får inte frysas och tinas fler än 5 gånger. Prover som har värmebehandlats vid 56 C i 1/2 timme kan s. [SE] 5

Prover som innehåller upp till 120 g/l albumin, 200 mg/l bilirubin, 33 g/l triolein eller 2 g/l hemoglobin påverkar inte resultaten. Prover med hyperlipemiskt eller hyperhemolyserat serum eller plasma bör dock inte s. Proverna ska tinas och blandas väl innan de testas. Om proverna ska transporteras, ska de förpackas enligt gällande regler för transport av etiologiska ämnen och lest transporteras i nedfryst skicka. 7. PROCEDUR 7.1. Nödvändigt material som inte ingår Destillerat vatten Natriumhypoklorit (blekmedel) och natriumbikarbonat Absorberande papper Engångshandskar Skyddsglasögon Engångsrör Automatiska eller halvautomatiska, justerbara eller förinställda pipetter eller multipipetter för mätning och fördelning av 50 μl, 1 ml och 10 ml Mätcylindrar som rymmer 100 ml och 1 l Automatiskt, halvautomatiskt eller manuellt tvättsystem för mikroplattorna (*) Inkubator för mikroplattor, inställd via termostat på 37 C ±1 C (*) Behållare för biologiskt riskavfall Plattläsare med 450 nm, 490 nm och 620-700 nm filter (*) (*) Kontakta oss för mer information om den utrustning som vår tekniska avdelning rekommenderar. 7.2. Reagensberedning 7.2.1. Reagenser färdiga att Reagens 1 (R1): Mikroplatta Varje stödram innehållande 12 remsor är förpackad i en försluten foliepåse. Klipp upp påsen med en sax eller skär upp den med en skalpell 0,5 till 1 cm ovanför förseglingen. Öppna påsen och ta ut ramen. Lägg tillbaka o remsor i påsen. Förslut påsen noga och förvara den i +2 8 C. Reagens 3 (R3): Negativ kontroll Reagens 4 (R4): Positiv kontroll Reagens 6 (R6): Konjugat Homogenisera före användning. Reagens 10 (R10): Stopplösning 7.2.2. Reagenser för rekonstituering Reagens 2 (R2): Koncentrerad tvättlösning (20X) Späd 1:20 med destillerat vatten för att få en färdig tvättlösning. Bered 800 ml för en platta med 12 remsor. Reagens 8 (R8) + reagens 9 (R9): Enzymatisk framkallningslösning Späd kromogenet (R9) 1:11 i substratbufferten (dvs. 1 ml reagens R9 + 10 ml R8 reagens) eftersom 10 ml behövs och räcker till 12 remsor. Homogenisera. [SE] 6

7.3. Analys Följ noggrant följande procedur. Använd negativt och positivt kontrollserum för varje test för att validera testkvaliteten. Tillämpa god laboratoriesed enligt följande: 1) Fastställ planen för fördelning och identifiering av proverna noggrant. 2) Bered utspädd tvättlösning (R2). 3) Ta ut stödramen och det antal remsor (R1) som behövs ur skyddsförpackningen. Stoppa tillbaka o remsor i förpackningen. Förslut förpackningen noga och förvara den i +2 8 C. 4) Fördela i brunnen i följande ordning (rekommenderad plattfördelning): 50 µl negativ kontroll (R3) i A1, B1, C1 50 µl positiv kontroll (R4) i D1, E1 50 µl outspätt prov i varje brunn F1, G1 etc. 50 µl konjugat (R6) i varje brunn Beroende på systemet som används kan man ändra kontrollernas position eller ordningsföljden för fördelningen. Homogenisera reaktionsblandningen med minst 3 aspirationer eller genom att skaka mikroplattan i 5 sekunder. KOMMENTAR: I denna fas kan fördelningen av prover och kontroller kontrolleras visuellt. Det finns en tydlig färgskillnad mellan tomma brunnar och brunnar med prov. Fördela konjugatet inom 5 minuter efter fördelningen av prov. Det finns en tydlig färgskillnad mellan tomma brunnar och brunnar med den röda konjugatlösningen (R6) (se avsnitt 7.7) 5) Täck om möjligt över plattan med ny självhäftande folie. 6) Inkubera mikroplattan i 30 35 minuter i 37 C ± 1 C. 7) Ta bort den självhäftande folien om det behövs. Aspirera innehållet i alla brunnarna till en behållare för flytande avfall och tillsätt minst 370 µl tvättlösning i varje brunn. Aspirera igen och upprepa tvättningen minst 4 gånger (totalt 5 tvättcykler). Den återstående volymen måste vara mindre än 10 µl (om det behövs kan du torka remsorna genom att vända dem upp och ned på ett absorberande papper). Gör på samma sätt om du har en automatisk tvättanordning. KOMMENTAR: Fortsätt med tvättsteget inom 20 minuter. 8) Bered framkallningslösningen (reagens R8 + R9). 9) Fördela snabbt i varje brunn 50 µl av framkallningslösningen (R8+R9) som beretts strax före användningen. Låt reaktionen fortgå i mörker under 25 35 minuter i rumstemperatur (18 30 C). Använd ingen självhäftande folie under denna inkubering. KOMMENTAR: Fördelningen av framkallningslösningen, som är rosa, kan kontrolleras visuellt i denna fas av hanteringen. Det finns en tydlig färgskillnad mellan tomma brunnar och brunnar med den rosafärgade substratlösningen. (Se avsnitt 7.7). 10) Tillsätt 50 µl av stopplösningen (R10). Använd samma ordningsföljd och fördelningshastighet som för substratlösningen. Homogenisera reaktionsblandningen. KOMMENTAR: Fördelningen av den färglösa stopplösningen kan kontrolleras i det här steget. Substratets färg, rosa (negativa prov) eller blå (positiva prov), bleknar i brunnarna, som blir helt färglösa (negativa prov) eller gula (positiva prov) när stopplösningen tillsätts. 11) Torka noggrant av mikroplattans botten. Vänta minst 4 minuter efter tillsatsen av stopplösningen innan avläsning görs. Läs av den optiska densiteten vid 450/620-690 nm med hjälp av en plattläsare inom 30 minuter efter att reaktionen har avbrutits. 12) Kontrollera alla resultat med avseende på överensstämmelse mellan de spektrofotometriska och visuella avläsningarna och planen för fördelning och identifiering av proverna för plattan. [SE] 7

7.4. Kvalitetskontroll Använd negativa (R3) och positiva (R4) kontroller för varje körning för att validera testresultaten. (Se avsnitt 7.5). 7.5. Testvalideringsvillkor Testet är validerat om nedanstående villkor uppfylls: 1) För den negativa kontrollen R3: OD R3 0.080 Om ett kontrollvärde överskrider detta värde ska det ignoreras och beräkningen göras med de två andra negativa kontrollvärdena. 2) För den positiva kontrollen R4: OD R4 0.700 7.6. Beräkning/utvärdering av resultaten Gränsvärden fastställs med den negativa kontrollen R3: Beräkna medelvärdet för uppmätt absorbans för den negativa kontrollen R3 och beräkna gränsvärdet (COV) enligt följande: COV = medelvärde för OD R3 + 0.100 Prover med OD under COV anses vara negativa av Syphilis Total Ab. Resultat som ligger precis under gränsvärdet (COV -10 % < OD < COV) bör dock tolkas med försiktighet. Vi rekommenderar att motsvarande prover testas på nytt med duplikatprover om de systemen och laboratorierutinerna medger detta. Prover med OD som överskrider eller är lika med COV anses vara positiva av Syphilis Total Ab och ska testas igen med duplikatprover innan de tolkas slutgiltigt. Omtestade prover som överskrider COV i minst ett duplikatprov anses vara positiva och ska undersökas närmare. Prover under gränsvärdet i båda duplikatproverna anses vara negativa. Om den optiska densiteten för de testade proverna är mycket låg (negativt OD) och förekomsten av prov och reagens i brunnen har kontrollerats kan resultaten tolkas som negativa. Vi rekommenderar att positiva prov bekräftas i enlighet med aktuella nationella rekommendationer och algoritmer. 7.7. Spektrofotometrisk verifiering av prov- och konjugatpipettering (tillval) Prover och kontroller Förekomsten av prov och kontroll i brunnen kan verifieras med automatisk avläsning vid 450/620 nm. En brunn med tillsatt prov har OD mellan 0,050 och 1,100. Konjugat Konjugatet är rödfärgat. Förekomsten av konjugat i brunnarna kan verifieras med automatisk avläsning vid 450/620 nm. En brunn med prov har OD 1,200. Verifiering av pipettering av framkallningslösning Förekomsten av rosa framkallningslösning i brunnen kan verifieras genom en automatisk avläsning vid 492 nm. En brunn med framkallningslösning måste ha en optisk densitet > 0,100 (ett lägre OD-värde indikerar bristfällig fördelning av framkallningslösning). [SE] 8

8. TESTETS BEGRÄNSNING Som med alla serologiska tester av syfilis måste de resultat som erhålls med Syphilis Total Ab EIAanalysen tolkas i kombination med patientens kliniska symtom, sjukhistoria och andra laboratoriefynd för att få en samlad klinisk diagnos. Det finns inget särskilt test eller någon definitiv referensstandard för sjukdomens alla stadier. Diagnostisering av syfilis bygger till stor del på serologisk testning som kräver resultat både från icketreponema- och treponemametoder. Inga diagnostiska tester kan med säkerhet fastställa att ett prov inte innehåller sådana låga halter av antikroppar mot T. pallium som föreligger i ett mycket tidigt stadium av sjukdomen. Ett negativt resultat utesluter därför inte att man har smittats av syfilis. ELISA-tekniken kan ge falskt positiva reaktioner. Vi rekommenderar att specificiteten hos reaktionen i prover som befunnits positiva flera gånger kontrolleras enligt tolkningskriterierna för kitet Syphilis Total Ab med en lämplig metod: Treponema pallidum hemagglutinationsanalys. Alla resultat av treponematester tenderar att förbli reaktiva efter treponemainfektion och därför ska de inte s för att utvärdera svaret på en behandling. Eftersom reaktiviteten kvarstår bör inte treponematester s för att fastställa om patienten fått återfall eller en ny infektion. Vi rekommenderar att andra analyser används i detta fall: Syphilis IgM EIA, RPR och TPHA. Den spektrofotometriska metoden för verifiering av fördelning av prov, konjugat och framkallningslösning kan inte s till att verifiera att korrekt volym av prover och konjugat har fördelats. Denna metod visar bara förekomsten av prov och konjugat. Felfrekvensen med denna metod är nära kopplad till noggrannheten hos det system som används (en kumulerad variationskoefficient för fördelning och avläsning på över 10 % minskar verifieringens kvalitet signifikant). 9. PRODUKTEGENSKAPER 9.1. Precisionsmätning Repeterbarheten och den intermediära precisionen fastställdes med prover som innehöll olika koncentrationer av syfilisantikroppar. Proverna testades 30 gånger under samma testserie för att fastställa repeterbarheten. Proverna testades även i duplikatprover i 20 dagar med en frekvens på 2 tester per dag. Kvotmedelvärden, standardavvikelser och variationskoefficienter (CV) beräknades. 9.1.1. Repeterbarhet: Prover N Medelvärde av kvoterna Standardavvikelse CV % Svagt negativa 30 0,14 0,014 9,5% Starkt negativa 30 0,68 0,051 7,5% Svagt positiva för syfilisantikroppar Positiva för syfilisantikroppar CV för de positiva proverna ligger under 10 %. 30 1,90 0,070 3,7% 30 3,76 0,130 3,5% [SE] 9

9.1.2. Intermediär precision Prover N Kvot- medel- -värde Inom analys Mellan test/re Dag till dag Total reproducerbarhet SD CV % SD CV % SD Svagt negativa 80 0,15 0,035 22,5% 0,023 14,7% 0,017 10,9% 0,045 29,0% Starkt negativa 80 0,74 0,038 5,1% 0,074 10,0% 0,006 0,8% 0,084 11,2% Svagt positiva för syfilisantikroppar Positiva för syfilisantikroppar 80 2,30 0,112 4,9% 0,312 13,5% 0,099 4,3% 0,346 15,0% 80 4,13 0,180 4,3% 0,543 13,1% 0,195 4,7% 0,604 14,6% CV för de positiva proverna ligger under eller är lika med 15 %. 9.2. Klinisk prestanda Den kliniska prestandan hos analysen Syphilis Total Ab har fastställts genom testning av prover från prospektiva och retrospektiva studier: Prospektiv studie: - 5195 prover från olika blodgivare - 460 prover från patienter med misstänkt syfilis Retrospektiv studie: - 350 positiva från patienter med sexuellt överförda sjukdomar. Studierna gjordes på två blodgivarcentraler, vid en mottagning för veneriska sjukdomar och hos Bio- Rad. 9.2.1. Diagnostisk specificitet Studien gjordes på prover med serum och EDTA-plasma från två blodbanker med blod från olika givare i Frankrike. En specificitetstudie gjordes även på prover från patienter. Alla resultat jämfördes med dem från andra CE-märkta syfilistester. Tabell 1: Specificitetstest (IR = initialt reaktiva; RR= upprepat reaktiva) Population Ställe Provtyp Blodgivare #1 + #2 Totalt antal prover Initialt reaktiva (IR) Upprepat reaktiva (RR) RRspecificitet (%) Serum SST 3127 2 2* 3125/3125 Plasma EDTA K2 2068 2 2* 2066/2066 Totalt 5195 4 4* Patienter #3 Serum 351 1 1 100% 5191/5191 99,72% 350/351 95 % CI (%) 99,93% - 100% 98,42 100% * Upprepat reaktiva prover som var positiva med andra CE-märkta EIA-syfilisanalyser uteslöts vid beräkningen av diagnostisk specificitet [SE] 10

9.2.2. Diagnostisk känslighet Retrospektiv studie: Studien gjordes på 350 frysta prover varav 2 förklarades negativa och 348 bekräftades som positiva med de CE-märkta syfilisanalyserna. Av de 348 positiva proverna var 7 från patienter i ett tidigt stadium av infektionen. Alla 348 prover befanns vara positiva med Bio-Rads analys Syphilis Total Ab. Prospektiv studie: Totalt 460 färska prover utvärderades med Bio-Rads analys Syphilis Total Ab och jämfördes med CEmärkta syfilistester. 348 var negativa med både Bio-Rads test och referenstesterna (två prover var falskt positiva med referens-eia-test) 109 var positiva med båda testerna. 3 prover visade avvikande resultat (efter omtest med Bio-Rads analys): 1 prov var positivt med Bio-Rads analys och starkt negativt med referenstesterna. Provet med låg syfiliskvot låg vid gränsvärdet för båda EIA-testerna: 1 prov var positivt med referenstesterna men negativt med Bio-Rads analys (från 1 patient utan symtom) 1 prov var positivt med referenstesterna, var initialt negativt men positivt när det testades om med Bio-Rads analys, Retrospektiva och prospektiva studier: Den globala diagnostiska känsligheten är lika med 99,56 % (457/459) med ett 95 % konfidensintervall på [98,44 % 99,95 %]. Klinisk känslighet Den kliniska känsligheten undersöktes på 3 kommersiella paneler och 1 serokonversionspanel. Bio- Rads analys Syphilis Total Ab jämfördes med en CE-märkt syfilisanalys. Detektionen av varje prov i panelerna var samma för Bio-Rads analys och referensanalysen. 9.3. Analytisk känslighet Den analytiska känsligheten utvärderades med 2 NIBSC-standarder och beräknades vid gränsvärdet med regression: 1. Gränsen för detektion för IgG/IgM utvärderades på 3 partier med Syphilis Total Ab och uppskattades till 0,53 mie/ml med CI 95 % [0,10 mie/ml 1,30 mie/ml] enligt WHO-standard IgM/IgG (NIBSC-kod: 05/132). 2. Gränsen för detektion för IgG utvärderades på 1 parti med Syphilis Total Ab och uppskattades till 0,11 mie/ml med CI 95 % [0,02 mie/ml 0,27 mie/ml] enligt WHO-standard IgG (NIBSCkod: 05/122). 9.4. Studie av analytisk specificitet/korsreaktivitet Totalt 125 potentiellt interfererande prover som innehöll antikroppar mot patogener som kan orsaka infektionssjukdomar (borrelia, toxoplasmos, EBV, leptospiros, SLE (lupus), hepatit A-antikropp, hepatit B-antikropp, hepatit C-antikropp, HTLV I/II och HIV), prover från patienter i riskgrupper (gravida kvinnor och kvinnor som fött fler än ett barn) eller prover från patienter med nedsatt immunförsvar (reumatoid faktor) testades med Syphilis Total Ab. Av de 125 testade proverna var 1 upprepat positivt med Syphilis Total Ab; detta prov verifierades som sant positivt med andra CE-märkta syfilis-eia och bekräftande analyser. Specificiteten som observerades för målgruppen är 100 % (124/124) med ett 95 % konfidensintervall på [97,1 % 100,0 %]. [SE] 11

9.5. Hookeffekt Eventuell förekomst av hookeffekt undersöktes genom att 6 syfilispositiva högtiterprover testades med olika spädningar. Överensstämmelsen som observerades mellan resultaten av outspädda prover och utspädda prover visar att det inte fanns någon hookeffekt i de testade proverna. 10. BIBLIOGRAFISKA REFERENSER. 1. Levinson SS. The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. J. Clin. Immunoassay 15: 108-115,1992. 2. Norris S.J. Plypeptides of Treponema pallidum: Progress toward understanding their structural, functional and immunological role. Microbiological Reviews, Setpt. 1993 Vol 57. 3. Larsen SA, Steiner BM, and Rudolph AH. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis. Clin Microbiol Rev. 1995 Jan; 8(1):1 21. 4. Zrein M, Maure I, Boursier F, Soufflet L. Recombinant antigen-based enzyme immunoassay for screening of Treponema pallidum antibodies in blood bank routine. J Clin Microbol. 1995 Mar; 33(3):525 7. 5. Singh AE and Romanowski. Syphilis: Review with emphasis on clinical, epidemiological, and some biologic features. Clin Microbiol Rev. 1999 Apr; 12(2):187 209. 6. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank. Clin Chem Lab Med. 2009. 47:596-606. 7. International Journal of STD & AIDS 2009; 20: 300 309. 8. Screening donated Blood for Transfusion-Transmissible infections. World Health Organization. 2009 9. M. J. Loeffelholz, and M. J. Binnicker, It Is Time to Use Treponema-Specific Antibody Screening Tests for Diagnosis of Syphilis, J Clin Microbiol, 50 (2012), 2-6. [SE] 12

[SE] 13

[SE] 14

[SE] 15

[SE] 16

Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax: +33 (0) 1 47 41 91 33 2014/11 www.bio-rad.com 883679 [SE] 17